一種復(fù)配生物保鮮劑及其應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種復(fù)配生物保鮮劑及其應(yīng)用。復(fù)配生物保鮮劑由格氏乳球菌素、菊芋葉醇提物、水溶性殼聚糖組成。所述格氏乳球菌素(Lactococcus garvieae)由格氏乳球菌SY?1經(jīng)發(fā)酵后再提取制備而成，該菌株保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物菌種保藏中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC No.9485，保藏日期2014年7月28。所述菊芋葉醇提物采用超聲提取法制備而成。該保鮮劑應(yīng)用于小漿果保鮮，可在果實(shí)表面形成一層安全、無(wú)毒、可食的透明薄膜，結(jié)合常規(guī)冷庫(kù)保鮮，可有效保持果品的色澤和營(yíng)養(yǎng)成分、顯著延長(zhǎng)各種小漿果貨架期。CGMCC No.948520140728
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種復(fù)配生物保鮮劑及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明具體涉及一種復(fù)配生物保鮮劑及其應(yīng)用于小漿果保鮮的方法，屬于農(nóng)產(chǎn)品 貯藏保鮮技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 小漿果泛指果實(shí)較小、多汁的一類(lèi)果樹(shù)樹(shù)種，主要包括藍(lán)莓、樹(shù)莓、黑加侖、紅加 侖、蔓越橘、黑莓、楊梅、無(wú)花果等。其果實(shí)鮮亮、果肉多汁、風(fēng)味獨(dú)特，芳香濃郁、甜酸爽口， 富含多種維生素和鈣、磷、鋅等微量元素、有機(jī)酸、花青素、類(lèi)黃酮等活性物質(zhì)，具有抗氧化、 抗衰老、保護(hù)心血管、抗癌、健脾和胃、潤(rùn)肺生津、滋養(yǎng)補(bǔ)血、促進(jìn)消化、增強(qiáng)免疫力等多種藥 理保健功效，可有效預(yù)防貧血、高血壓、高血脂、癌癥、心臟病等多種疾病的發(fā)生、發(fā)展。可廣 泛應(yīng)用于食品、藥品、保健品等領(lǐng)域，在國(guó)際市場(chǎng)上供不應(yīng)求。但由于小漿果果皮薄、組織柔 軟、不耐儲(chǔ)運(yùn)、易發(fā)生腐爛變質(zhì)，常常導(dǎo)致果實(shí)產(chǎn)銷(xiāo)嚴(yán)重脫節(jié)，大量果實(shí)爛在田頭、攤位，往 往給果農(nóng)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。
[0003] 通常采后呼吸作用、水分蒸騰作用、細(xì)菌霉菌入侵是導(dǎo)致小漿果發(fā)生腐爛變質(zhì)的 主要原因。目前國(guó)內(nèi)外小漿果保鮮方法有低溫保鮮、氣調(diào)保鮮、化學(xué)防腐保鮮、涂膜保鮮等。 其中化學(xué)防腐保鮮與低溫箱結(jié)合的手段使用方便、適應(yīng)性強(qiáng)、應(yīng)用廣泛，但是化學(xué)保鮮劑的 殘留往往會(huì)引發(fā)環(huán)境污染、食品安全、致癌致畸等嚴(yán)重后果，而涂膜保鮮可通過(guò)殼聚糖等多 糖類(lèi)物質(zhì)在果實(shí)表面可形成保護(hù)膜的特性，增強(qiáng)果實(shí)表皮的保護(hù)作用，抑制氣孔呼吸作用 和水分蒸發(fā)、抑制微生物入侵、從而達(dá)到保鮮目的。但是目前市場(chǎng)上可食性涂膜劑普遍存在 抗菌效果差、被膜不穩(wěn)定、使用成本高等缺點(diǎn)、因此，開(kāi)發(fā)更加適合的、安全、高效、可食性復(fù) 配生物保鮮劑是果品保鮮領(lǐng)域的主要研究方向。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，其目的在于提供一種復(fù)配生物保鮮 劑，該保鮮劑應(yīng)用于水果后可在水果表面形成保護(hù)膜，且安全、無(wú)毒、可食用，同時(shí)保鮮效果 好，可顯著延長(zhǎng)水果特別是小漿果的貨架期。
[0005] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0006] -種復(fù)配生物保鮮劑，包括格氏乳球菌素、菊芋葉醇提物和水溶性殼聚糖。
[0007] 所述格氏乳球菌素、菊芋葉醇提物和水溶性殼聚糖的質(zhì)量比為100:2~5:45~65。
[0008] 所述的復(fù)配生物保鮮劑可以含有或不含有溶劑。
[0009] 所述的復(fù)配生物保鮮劑含有溶劑時(shí)，溶劑可以為水，菊芋葉醇提物的濃度為2~ 5g/L，水溶性殼聚糖的濃度為45~65g/L。
[0010] 所述的格氏乳球菌素由格氏乳球菌發(fā)酵后提取制得，所述的格氏乳球菌為格氏乳 球菌SY-1，該菌株由本申請(qǐng)發(fā)明人從山藥表皮分離獲得，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理 委員會(huì)普通微生物菌種保藏中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC No.9485,保藏日期2014年7月28。
[0011] 經(jīng)本申請(qǐng)發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，格氏乳球菌SY-1具有較強(qiáng)的產(chǎn)細(xì)菌素活性，菊芋葉醇 提物也具有一定的抗細(xì)菌病害，二者與殼聚糖聯(lián)合使用既可提高格氏乳球菌素的穩(wěn)定性， 又顯著擴(kuò)大了三者的抗菌譜，對(duì)小漿果軟腐病和灰霉病、酵母均具有較好的生防效果，并且 能顯著抑制小漿果的失重率和呼吸強(qiáng)度，保鮮效果極其顯著。
[0012] 所述格氏乳球菌素的制備方法包括：
[0013] (1)將格氏乳球菌菌種活化后，接種于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，制得種子液；
[0014] (2)將種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后，收集發(fā)酵液；
[0015] (3)將所述的發(fā)酵液離心，取上清，用酸調(diào)節(jié)PH為2~3后進(jìn)行沉淀，取沉淀，冷凍干 燥，即為所述的格氏乳球菌素。
[0016] 步驟（1)中，所述的培養(yǎng)基為MRS液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)的時(shí)間為24~36h，培養(yǎng)的溫度 為28~30Γ。
[0017]步驟（2)中，接種量為2~5% (v/v);發(fā)酵培養(yǎng)基由豆柏、玉米淀粉、菊糖、西紅柿 汁、羧甲基纖維素鈉和無(wú)菌水組成，各成分與無(wú)菌水的質(zhì)量體積比依次分別為：15~20g/L、 8~12g/L、l~2g/L、0.1~0.5g/L和0.5~1.2g/L;發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為28~30°C，時(shí)間為18~ Mlo
[0018] 步驟(3)中，所述進(jìn)行沉淀的溫度為4~8°C，時(shí)間為12~18h。
[0019] 所述的菊芋葉醇提物為菊芋葉乙醇提取物。
[0020] 所述的菊芋葉醇提物的制備方法包括：取菊芋葉，按照1:20~25的料液比置于 40%~60%醇溶液中進(jìn)行超聲提取，超聲提取結(jié)束后離心，取上清，干燥后得所述的菊芋葉 醇提物。
[0021] 超聲提取時(shí)，超聲功率為350~500w，超聲時(shí)間為40~50min。
[0022] 所述復(fù)配生物保鮮劑的制備方法包括:將格氏乳球菌素、菊芋葉醇提物和水溶性 殼聚糖直接混合。
[0023] 本發(fā)明還提供了所述復(fù)配生物保鮮劑在水果保鮮中的應(yīng)用。
[0024]所述的水果為小漿果。
[0025]所述的應(yīng)用包括:將復(fù)合生物保鮮劑用水稀釋30~60倍，將水果預(yù)冷后置于復(fù)配 生物保鮮劑稀釋液中浸漬，再結(jié)合常規(guī)冷庫(kù)保鮮方法進(jìn)行保鮮。
[0026] 具體的，所述的應(yīng)用包括:水果采收后放入冷卻間，采用冷風(fēng)降溫至2~5°C，風(fēng)速 10~15m/s，濕度80~85 %，時(shí)間1~3h，再放入復(fù)配生物保鮮劑稀釋液中浸漬1~3min，冷風(fēng) 吹干，置于冷庫(kù)中進(jìn)行保鮮。其中冷庫(kù)保鮮的條件依據(jù)水果的種類(lèi)選擇。
[0027] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：
[0028] 1)本發(fā)明提供的復(fù)配生物保鮮劑是一種全新的復(fù)配生物保鮮劑，具有高效、廣譜 的抗菌防病效果，可對(duì)軟腐病、灰霉病等進(jìn)行聯(lián)合防控。該復(fù)配生物保鮮劑還具有使用方 便，安全、可食用、顯著降低小漿果失重率和呼吸強(qiáng)度、保持果品商品性、延長(zhǎng)貨架的有益效 果。
[0029] 2)本發(fā)明采用了格氏乳球菌SY-1制備格氏乳球菌素，該菌保藏于中國(guó)微生物菌種 保藏管理委員會(huì)普通微生物菌種保藏中心(菌種保藏號(hào)為CGMCC No.9485,保藏日期2014年 7月28)，具有較強(qiáng)的產(chǎn)細(xì)菌素功能，且抗菌譜廣，與菊芋葉提取物、水溶性殼聚糖協(xié)同使用 后，其對(duì)小漿果的抗菌防病效果比單一成分制成的保鮮劑的防病效果有了顯著的增強(qiáng)，且 形成的膜均勻、持久、穩(wěn)定。
[0030] 3)本發(fā)明在制備菊芋葉提取物時(shí)，采用了超聲提取技術(shù)，制備出的提取物含量高、 生物活性高，抗菌效果明顯，并能顯著抑制果實(shí)采后色澤褐變、風(fēng)味劣變，很好的保持了果 實(shí)的營(yíng)養(yǎng)和活性成分、提高了果品的商品價(jià)值。
[0031] 4)本發(fā)明制備的復(fù)配生物保鮮劑安全、高效、無(wú)毒、可以食用，不會(huì)對(duì)環(huán)境和人體 造成傷害，結(jié)合常規(guī)冷庫(kù)保鮮技術(shù)，具有比化學(xué)保鮮劑以及普通涂膜保鮮劑不可比擬的優(yōu) 點(diǎn)。
[0032] 5)本發(fā)明復(fù)配生物保鮮劑應(yīng)用于小漿果保鮮時(shí)，會(huì)在果實(shí)表明形成一層透明鮮亮 的可食膜，可抑制果品呼吸強(qiáng)度、降低失重率、保持果品的營(yíng)養(yǎng)和活性成分、延長(zhǎng)果品貨架 期，能產(chǎn)生較大的經(jīng)濟(jì)效益。
【附圖說(shuō)明】
[0033] 圖1為格氏乳球菌SY-1抑菌圖；
[0034]圖2為格氏乳球菌SY-1在ATB培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)；
[0035]圖3為格氏乳球菌SY-1革蘭氏染色圖；
[0036] 圖4為格氏乳球菌SY-1 16S rRNA基因序列；
[0037] 圖5為不同保鮮劑對(duì)草莓腐爛率的影響；
[0038] 圖6為不同保鮮劑對(duì)草莓失重率的影響；
[0039]圖7為不同保鮮劑對(duì)草莓可溶性固形物含量的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0040] 下面詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施例，需要說(shuō)明的是，本實(shí)施例是敘述性的，不是限定性 的，不能以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0041] 實(shí)施例1格氏乳球菌SY-1的分離鑒定
[0042] 本發(fā)明所涉及的格氏乳球菌(Lactococcus garviea)SY_l，已于2014年7月28保藏 于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物菌種保藏中心(簡(jiǎn)稱(chēng)CGMCC，地址北京市朝陽(yáng) 區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵政編碼：100101)，分類(lèi)命名為格氏乳球 菌Lactococcus garviea，菌種保藏號(hào)為CGMCC No·9485。本發(fā)明格氏乳球菌(Lactococcus garvi ea) SY-1是從山藥表皮分離獲得。
[0043]以下所述的ATB培養(yǎng)基配方為:葡萄糖8g/L，酵母浸粉4g/L，蛋白胨10g/L，MgS04· 7H20 0.2g/L，MnS〇4 · 4H20 0.05g/L，番茄汁250mL/L，pH值4.5-4.8，121°C滅菌SOmiruATB固 體培養(yǎng)基:ATB液體培養(yǎng)基中加入2 %瓊脂。
[0044] 1、分離
[0045]取新鮮山藥皮(帶泥土)50g，打碎，混合均勻，取10g處理過(guò)的山藥皮倒入含有20粒 細(xì)玻璃珠和l〇〇mL滅菌去離子水的250mL三角瓶中，在搖床上
[0046] 150r/min、25 °C條件下震蕩lh，靜止30min后，取上清lmL，用滅菌去離子水10倍梯 度稀釋?zhuān)謩e得到10-\1〇-2、l〇-3、l〇-4、l〇- 5、l〇-6、1〇-7 7個(gè)梯度，分別吸取100yL，不同梯度稀 釋液涂于ATB固體平板培養(yǎng)基上，25-28°C，靜止培養(yǎng)30-36h。利用接種環(huán)挑取單菌落在ATB 固體培養(yǎng)基平板上劃線純化2-3次，
[0047]將純化的不同形態(tài)的單菌落編號(hào)轉(zhuǎn)接到ATB固體平板上，25-28°C，靜止培養(yǎng)30- 36h，然后保存于4°C待用。
[0048] 2、抑菌試驗(yàn)
[0049]將保存于ATB固體培養(yǎng)基上的純化了的菌株在ATB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為 25°C，靜止培養(yǎng)36h。另外將山藥表皮黑斑上的菌體接種到ATB固體培養(yǎng)基平板上，均勻涂 布，在30°C培養(yǎng)48h。然后利用滅菌打孔器在固體平板上打孔，孔徑為4mm，每個(gè)平板均勻打6 個(gè)孔。然后將40yL培養(yǎng)好的待測(cè)定分離純化菌液滴加到孔內(nèi)，在28°C靜止培養(yǎng)36h，通過(guò)抑 菌圈評(píng)估待測(cè)菌株對(duì)山藥黑斑病菌的抑制活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)有三株菌株對(duì)山藥黑斑病菌有明 顯抑制作用，但SY-1抑制活性最強(qiáng)，抑菌圈直徑為24.3mm，結(jié)果見(jiàn)圖1。因此后面對(duì)這株菌進(jìn) 行了進(jìn)一步的鑒定。
[0050] 3、形態(tài)觀察
[00511將抑菌活性最強(qiáng)的菌株SY-1接種到100mL ATB液體培養(yǎng)基中，25°C靜止培養(yǎng)30h， 然后在無(wú)菌條件下用無(wú)菌接種環(huán)在ATB固體培養(yǎng)基上劃線，之后在25°C靜止培養(yǎng)36h，觀察 菌落形態(tài)，單菌落為乳白色、圓形，表面光滑，邊緣完整，結(jié)果見(jiàn)圖2所示。挑取單菌落，進(jìn)行 革蘭氏染色，并在顯微鏡下觀察，此菌為革蘭氏染色陽(yáng)性球菌，結(jié)果見(jiàn)圖3所示。由圖2和圖3 結(jié)果基本鑒定SY-1為乳酸球菌。
[0052] 4、分子生物學(xué)鑒定
[0053] 利用滅菌牙簽挑取SY-1單菌落于含有50mL ATB液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，在 25 °C靜止培養(yǎng)24h，然后利用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取此菌的基因組DNA。利用16S rRNA通用引物fd2 (5 ' -AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3 '）和rp 1 (5 ' -ACGGTTACCTTGTTACGACTT-3 '） PCR擴(kuò)增DNA片段，將PCR產(chǎn)物送基因測(cè)序公司進(jìn)行測(cè)序。此菌16S rRNA基因測(cè)序結(jié)果如圖4 所示。根據(jù)獲得的16S rRNA基因序列，在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中利用genebank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，得出 其與格氏乳球菌基因相似度最高達(dá)99.5%，因此鑒定此菌為格氏乳球菌（Lactococcus garviea)，并命名此菌為格氏乳球菌SY_1。
[0054] 實(shí)施例2
[0055] -種復(fù)配生物保鮮劑及其用于草莓保鮮的方法，步驟是：
[0056] (1)菊芋葉醇提物的制備:取干燥的菊芋葉(江蘇碧青園海洋生物科技有限公司）， 按照一定的1:20的料液比（g/L)加入到50%的乙醇水溶液中，放入超聲波清洗儀，進(jìn)行超聲 提取，于超聲波功率350w條件下超聲提取40min，然后放入離心機(jī)，于3000rpm/min下離心 20min，上清用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮15倍，再用凍干機(jī)干燥至恒重。
[0057] (2)菌種培養(yǎng):取格氏乳球菌SY-1(保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微 生物菌種保藏中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC No.9485，保藏日期2014年7月28)甘油保存菌種， 劃線接種至新鮮的MRS(乳酸細(xì)菌培養(yǎng)基）固體平板上，在30°C條件下活化培養(yǎng)24h，然后在 固體平板上挑取一個(gè)單菌落接種到一個(gè)含有50mL MRS液體培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，30°C 下培養(yǎng)24h，即為種子液；
[0058] (3)發(fā)酵培養(yǎng)基制備：由豆柏、玉米淀粉、菊糖（江蘇碧青園海洋生物科技有限公 司）、西紅柿汁、羧甲基纖維素鈉(均為市售)和無(wú)菌水組成，各成分與無(wú)菌水的質(zhì)量體積比 依次為：15g/L、8g/L、2g/L、0 · 2g/L、0 · 5g/L。
[0059] (4)格氏乳球菌素溶液的制備:將步驟2)制備的種子液以2% (v/v)的比例接種于 發(fā)酵培養(yǎng)基中，30 °C下培養(yǎng)20h。培養(yǎng)結(jié)束后4000r/min離心20min，取上清，用檸檬酸（市售 食品級(jí)）調(diào)pH值至3，4°C過(guò)夜沉淀，隔日于9000r/min，4°C離心10min，提取到的沉淀冷凍干 燥后用10倍質(zhì)量的去離子水溶解，即為格氏乳球菌素溶液。
[0060] (5)復(fù)配:將菊芋葉醇提物以及水溶性殼聚糖（濟(jì)南海得貝海洋生物工程有限公 司，商品編號(hào)為syxOOl)加入到格氏乳球菌素溶液中，攪拌至完全溶解，即為復(fù)配生物保鮮 劑。其中菊芋葉醇提物和水溶性殼聚糖在格氏乳球菌素溶液中所占質(zhì)量體積比分別為5g/L 和60g/L。
[0061] (6)將復(fù)配后的復(fù)配生物保鮮劑稀釋倍數(shù)為3倍，備用；
[0062] (7)草莓(江蘇省農(nóng)科院溧水植物基地)采收后，立即放入冷卻間，采用冷風(fēng)機(jī)強(qiáng)制 降溫至2°C，風(fēng)速lOm/s，濕度80%，時(shí)間lh，再放入稀釋了 3倍的復(fù)配生物保鮮劑稀釋液中浸 漬lmin，撈出，用冷風(fēng)吹干，再按照常規(guī)冷庫(kù)保鮮方法(冷庫(kù)溫度0~4°C，濕度90~95 % )進(jìn) 行保鮮。
[0063] 確定保鮮時(shí)間時(shí)，設(shè)置對(duì)照(無(wú)保鮮劑處理）、格氏乳球菌素（100g/L)處理、菊芋葉 醇提物(5g/L)處理、乳球菌素（100g/L)和菊芋葉醇提物(5g/L)聯(lián)合處理、以及格氏乳球菌 素（100g/L)加菊芋葉醇提物(5g/L)加殼聚糖(60g/L)聯(lián)合處理5種保鮮方式，處理時(shí)，各保 鮮劑稀釋3倍使用，檢測(cè)不同保鮮時(shí)間內(nèi)草莓的腐爛率、失重率、可溶性固形物含量，由圖1、 圖2、圖3可見(jiàn)，對(duì)照組在保鮮3天時(shí)腐爛率即達(dá)到9.2%，保鮮5天時(shí)，腐爛率可高達(dá)24%，由 此可確定對(duì)照組草莓最長(zhǎng)保鮮時(shí)間為3~4天，絕不可超過(guò)5天。同一保鮮時(shí)間內(nèi)，各處理組 的保鮮效果依次為格氏乳球菌素加菊芋葉醇提物加殼聚糖聯(lián)合處理組>乳球菌素和菊芋 葉醇提物聯(lián)合處理組 > 格氏乳球菌素處理組 > 菊芋葉醇提物處理組。三者聯(lián)合處理的草莓 其腐爛率和失重率明顯低于其他處理組，可溶性固形物含量則明顯高于其他處理組。表明 三者對(duì)草莓病害以及草莓營(yíng)養(yǎng)成分的保持具有協(xié)同增效的作用。
[0064] 利用該復(fù)配生物保鮮劑保鮮草莓，可使草莓在冷庫(kù)中保鮮7~10天(未使用復(fù)配生 物保鮮劑的草莓在〇~4 °C冷庫(kù)中保鮮期為3~4天）。
[0065] 實(shí)施例3
[0066] -種復(fù)配生物保鮮劑及其應(yīng)用于兔眼藍(lán)莓保鮮的方法，步驟是：
[0067] (1)菊芋葉醇提物的制備:取干燥的菊芋葉(江蘇碧青園海洋生物科技有限公司）， 按照一定的1:25的料液比（g/L)加入到50%的乙醇水溶液中，放入超聲波清洗儀，進(jìn)行超聲 提取，于超聲波功率400w條件下超聲提取45min，然后放入離心機(jī)，于3000rpm/min下離心 15min，上清用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮15倍，再用凍干機(jī)干燥至恒重。
[0068] (2)菌種培養(yǎng):取格氏乳球菌SY-1(保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微 生物菌種保藏中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC No.9485，保藏日期2014年7月28)甘油保存菌種， 劃線接種至新鮮的MRS固體平板上，在28°C條件下活化培養(yǎng)40h，然后在固體平板上挑取一 個(gè)單菌落接種到一個(gè)含有50mL MRS液體培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，30°C下培養(yǎng)30h，即為種 子液；
[0069] (3)發(fā)酵培養(yǎng)基制備：由豆柏、玉米淀粉、菊糖、西紅柿汁、羧甲基纖維素鈉(均為市 售）、和無(wú)菌水組成，各成分與無(wú)菌水的質(zhì)量體積比依次為：15g/L、10g/L、lg/L、0.5g/L、lg/ L〇
[0070] (4)格氏乳球菌素溶液的制備:將步驟2)制備的種子液以4% (v/v)的比例接種于 發(fā)酵培養(yǎng)基中，30 °C下培養(yǎng)20h。培養(yǎng)結(jié)束后4000r/min離心20min，取上清，用檸檬酸（市售 食品級(jí)）調(diào)pH值至2，4°C過(guò)夜沉淀，隔日于9000r/min，4°C離心15min，提取到的沉淀冷凍干 燥后用10倍質(zhì)量的去離子水溶解，即為格氏乳球菌素溶液。
[0071] (5)復(fù)配:將菊芋醇提物以及水溶性殼聚糖(濟(jì)南海得貝海洋生物工程有限公司） 加入到格氏乳球菌素溶液中，攪拌至完全溶解，即為復(fù)配生物保鮮劑。其中菊芋葉醇提物和 水溶性殼聚糖在格氏乳球菌素溶液中所占質(zhì)量體積比分別為2g/L和45g/L。
[0072] (6)將復(fù)配后的復(fù)配生物保鮮劑稀釋倍數(shù)為6倍，備用；
[0073] (7)兔眼藍(lán)莓(南京白龍有機(jī)農(nóng)業(yè)科技開(kāi)發(fā)有限公司）采收后，立即放入冷卻間，采 用冷風(fēng)機(jī)強(qiáng)制降溫至4°C，風(fēng)速lOm/s，濕度75%，時(shí)間3h，再放入稀釋了 6倍的復(fù)配生物保鮮 劑稀釋液中浸漬lmin，撈出，用冷風(fēng)吹干，再按照常規(guī)冷庫(kù)保藏方法(冷庫(kù)溫度0~5°C，濕度 85~90 % )進(jìn)行保鮮。
[0074]利用該復(fù)配生物保鮮劑保鮮藍(lán)莓，可使藍(lán)莓在冷庫(kù)中保鮮50~60天(未使用復(fù)配 生物保鮮劑的藍(lán)莓在〇~5°C冷庫(kù)中保鮮期為30~35天）。
[0075] 實(shí)施例4
[0076] -種復(fù)配生物保鮮劑及其應(yīng)用于無(wú)花果保鮮的方法，步驟是：
[0077] (1)菊芋葉醇提物的制備:取干燥的菊芋葉(江蘇碧青園海洋生物科技有限公司）， 按照一定的1:20的料液比（g/L)加入到50%的乙醇水溶液中，放入超聲波清洗儀，進(jìn)行超聲 提取，于超聲波功率500w條件下超聲提取50min，然后放入離心機(jī)，于3000rpm/min下離心 20min，上清用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮15倍，再用凍干機(jī)干燥至恒重。
[0078] (2)菌種培養(yǎng):取格氏乳球菌SY-1(保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微 生物菌種保藏中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC No.9485，保藏日期2014年7月28)甘油保存菌種， 劃線接種至新鮮的MRS固體平板上，在30°C條件下活化培養(yǎng)30h，然后在固體平板上挑取一 個(gè)單菌落接種到一個(gè)含有50mL MRS液體培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，30°C下培養(yǎng)24h，即為種 子液；
[0079] (3)發(fā)酵培養(yǎng)基制備：由豆柏、玉米淀粉、菊糖、西紅柿汁、羧甲基纖維素鈉(均為市 售）、和無(wú)菌水組成，各成分與無(wú)菌水的質(zhì)量體積比依次為：20g/L、12g/L、2g/L、0.4g/L、 0.8g/L〇
[0080] (4)格氏乳球菌素溶液的制備:將步驟2)制備的種子液以5% (v/v)的比例接種于 發(fā)酵培養(yǎng)基中，30 °C下培養(yǎng)24h。培養(yǎng)結(jié)束后4000r/min離心15min，取上清，用檸檬酸（市售 食品級(jí)）調(diào)pH值至2.5，4°C過(guò)夜沉淀，隔日于9000r/min，4°C離心15min，提取到的沉淀冷凍 干燥后用10倍質(zhì)量的去離子水溶解，即為格氏乳球菌素溶液。
[0081] (5)復(fù)配:將菊芋醇提物以及水溶性殼聚糖(濟(jì)南海得貝海洋生物工程有限公司） 加入到格氏乳球菌素溶液中，攪拌至完全溶解，即為復(fù)配生物保鮮劑。其中菊芋葉醇提物和 水溶性殼聚糖在格氏乳球菌素溶液中所占質(zhì)量體積比分別為5g/L和55g/L。
[0082] (6)將復(fù)配后的復(fù)配生物保鮮劑稀釋倍數(shù)為4倍，備用；
[0083] (7)無(wú)花果（蘇州西山國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)示范園區(qū)有限責(zé)任公司）采收后，立即放入冷 卻間，采用冷風(fēng)機(jī)強(qiáng)制降溫至4°C，風(fēng)速1 Om/s，濕度75%，時(shí)間40min，再放入稀釋了4倍的復(fù) 配生物保鮮劑稀釋液中浸漬1.5h，撈出，用冷風(fēng)吹干，再按照常規(guī)冷庫(kù)保藏方法(冷庫(kù)溫度-2~4°C，濕度85~90% )進(jìn)行保鮮。
[0084]利用該復(fù)配生物保鮮劑保鮮無(wú)花果，可使無(wú)花果在冷庫(kù)中保鮮15~20天(未使用 復(fù)配生物保鮮劑的無(wú)花果在-2~4°C冷庫(kù)中保鮮期為5~7天）。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種復(fù)配生物保鮮劑，其特征在于，包括格氏乳球菌素、菊芋葉醇提物和水溶性殼聚 糖。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)配生物保鮮劑，其特征在于，所述格氏乳球菌素、菊芋葉醇 提物和水溶性殼聚糖的質(zhì)量比為100:2~5:40~65。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)配生物保鮮劑，其特征在于，所述的格氏乳球菌素源自格氏 乳球菌SY-1，該菌株的保藏號(hào)為CGMCC No.9485。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)配生物保鮮劑，其特征在于，所述格氏乳球菌素的制備方法 包括： (1) 將格氏乳球菌菌種活化后，接種于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，制得種子液； (2) 將種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后，收集發(fā)酵液； (3) 將所述的發(fā)酵液離心，取上清，用酸調(diào)節(jié)PH為2~3后進(jìn)行沉淀，取沉淀，冷凍干燥， 即為所述的格氏乳球菌素。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的復(fù)配生物保鮮劑，其特征在于，步驟（2)中，發(fā)酵培養(yǎng)基由豆 柏、玉米淀粉、菊糖、西紅柿汁、羧甲基纖維素鈉和無(wú)菌水組成，各成分與無(wú)菌水的質(zhì)量體積 比依次為：15~20g/L、8~12g/L、1~2g/L、0.1~0.5g/L和0.5~1.2g/L;發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為 28~30°C，時(shí)間為18~24h。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)配生物保鮮劑，其特征在于，所述的菊芋葉醇提物為菊芋葉 乙醇提取物。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)配生物保鮮劑，其特征在于，所述的菊芋葉醇提物的制備方 法包括:取菊芋葉，按照1: 20~25的料液比置于40 %~60 %醇溶液中進(jìn)行超聲提取，超聲提 取結(jié)束后離心，取上清，干燥后得所述的菊芋葉醇提物。8. 根據(jù)權(quán)利要求1~7任一項(xiàng)所述的復(fù)配生物保鮮劑在水果保鮮中的應(yīng)用。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的水果為小漿果。10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述復(fù)合生物保鮮劑在使用時(shí)需用水稀 釋30~60倍;所述水果于稀釋液中浸漬后，再結(jié)合常規(guī)冷庫(kù)保鮮方法進(jìn)行保鮮。
【文檔編號(hào)】A23B7/16GK106070586SQ201610438169
【公開(kāi)日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月17日
【發(fā)明人】馬艷弘, 李亞輝, 趙密珍, 黃開(kāi)紅, 張宏志, 于紅梅, 蔡偉建
【申請(qǐng)人】句容萬(wàn)山紅遍生物科技有限公司, 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院