一種降脂保肝的功能食品的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種降脂保肝的功能食品。由海藻多酚40?60重量份、巖藻黃素20?40重量份、蝦青素10?20重量份、?；撬?0?20重量份經(jīng)過調(diào)配、殺菌、制粒、壓片、包裝工藝制成?？芍苽涑赡z囊、片劑、沖劑、口服液。具有有效抑制小鼠體重的過快增長，使小鼠肝臟系數(shù)以及內(nèi)臟白色脂肪保持在正常范圍。顯著降低小鼠血清TC、LDL、AST以及ALT濃度；顯著降低小鼠肝臟中TC、TG、LDL水平和提高HDL水平；及良好的抗脂肪肝的功能。
【專利說明】
一種降脂保肝的功能食品
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及保健食品技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種降脂保肝的功能食品。
【背景技術(shù)】
[0002] 血脂異常是導(dǎo)致心血管疾病的主要原因。近年來，由于高脂膳食結(jié)構(gòu)與運動缺乏， 血脂異常人群急劇上升。據(jù)《中國健康大數(shù)據(jù)》最新報告，我國血脂異常人群規(guī)模在2億以 上，血脂異常率超過20%。此外，高脂膳食結(jié)構(gòu)還容易導(dǎo)致非酒精性脂肪肝的發(fā)生。調(diào)查發(fā) 現(xiàn)，非酒精性脂肪肝的發(fā)病率在美國、日本及中國分別達到了33%、29%和10%，且發(fā)病年 齡有年輕化的趨勢(Farrell et al.，2006)。非酒精性脂肪肝屬于代謝綜合癥范疇，與中心 性肥胖、高血脂、高甘油三酯血癥、n型糖尿病、動脈粥樣硬化等疾病都有密切關(guān)系 (Matthew et al.，2007)。據(jù)調(diào)查，30%的肥胖人群、50%的II型糖尿病患者、100%的中心 性肥胖癥患者均同時患有非酒精性脂肪肝(Shivakumar et al.，2011)。此外，非酒精性脂 肪肝是非良性動態(tài)發(fā)展性病變，可在短期內(nèi)發(fā)展為嚴重的肝損害，其肝纖維化的發(fā)生率可 高達25%，肝硬化為1.5%-8%(Cheung et al.，2011)，對人類健康危害極大。以此，血脂異 常及非酒精性脂肪肝已成為我國重要的公共衛(wèi)生問題。
[0003] 然而，目前對于血脂異常及非酒精性脂肪肝的藥物治療效果較差，且藥物治療的 療程長，毒副作用大，甚至有進一步加劇病情的風險?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》認為"上工治未病，中工治 欲病，下工治已病"，通過食療從養(yǎng)生角度介入疾病的早期干預(yù)是預(yù)防血脂異常及非酒精性 脂肪肝的最有效方式。醫(yī)學研究發(fā)現(xiàn)，非酒精性脂肪肝的發(fā)生與肝臟脂肪代謝功能的紊亂 密切相關(guān)，其病理發(fā)展是從單純性脂肪變性(simple steatosis)或單純性脂肪肝到脂肪性 肝炎，最后到肝硬化(Brunt，2010) JAFL為NAFLD的早期階段，是一種良性的可逆病變，如果 能夠及時去除病因和控制發(fā)病，肝的組織病變可以得到好轉(zhuǎn)，甚至完全恢復(fù)正常。因此，通 過膳食功能因子對非酒精性脂肪肝早期階段進行干預(yù)已成為食品學、營養(yǎng)學以及醫(yī)學界的 研究熱點。
[0004] 研究表明，高血脂、非酒精性脂肪肝的病理發(fā)生涉及人體代謝的多個環(huán)節(jié)，與多個 器官作用密切相關(guān)。盡管已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多天然活性物質(zhì)都具有降脂保肝的活性，但這些物質(zhì) 的降脂機理或者降脂途徑存在明顯不同。目前較為公認的降脂途徑包括：（1)減少腸道對脂 肪(膽固醇)的吸收；（2)減少肝臟內(nèi)源性脂質(zhì)的合成；（3)促進脂質(zhì)(膽固醇）的轉(zhuǎn)運和排泄；
[4] 提高機體對脂質(zhì)(膽固醇）的代謝能力。因此，由于單一天然活性成分存在靶向單一的缺 陷，使用一種或一類膳食營養(yǎng)素開發(fā)降脂保肝的功能食品必然導(dǎo)致功效較差。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種功效明顯、綠色天然、適合廣大消費群體降脂保肝的 功能食品。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種降脂保肝的配方，其特征在于，由海藻多酚40-60重量份、巖藻黃素20-40重量份、蝦青素10-20重量份和?；撬?0-20重量份制備得到。
[0007] 進一步，所述海藻多酚中總酚重量含量不少于20%，6，6 二鵝掌菜酚占海藻多酚 中總酚重量的80 %。
[0008] 進一步，所述巖藻黃素中巖藻黃素重量含量不少于10%
[0009] 進一步，所述海藻多酚和巖藻黃素來源于可食用海藻。
[0010] 進一步，所述可食用海藻為海帶、紫菜、羊棲菜、裙帶菜、鼠尾藻、紅毛藻、泡葉藻、 麒麟菜、江蘺、墨角藻或微球藻。
[0011] 進一步，所述降脂保肝的配方制備成片劑、膠囊或沖劑。
[0012] 所述降脂保肝的配方用于功能食品的用途。
[0013] 進一步，所述功能食品是飲料或休閑食品。
[0014] 海藻是海洋植物多酚的主要來源，其結(jié)構(gòu)與陸源植物多酚存在很大不同。研究表 明，細微的結(jié)構(gòu)差異會導(dǎo)致生物活性的巨大不同。海藻多酚由于結(jié)構(gòu)區(qū)別于傳統(tǒng)多酚化合 物，其降脂保肝功能尚未見報道。巖藻黃素的抗氧化活性是維生素E的13.5倍，可實現(xiàn)受損 肝細胞的快速修復(fù);?；撬峥砂邢虼龠M呼吸鏈作用;蝦青素能提高血清高密度脂蛋白HDL水 平，促進膽固醇轉(zhuǎn)運和排泄。因此，本發(fā)明以海藻多酚為主要原料，同時結(jié)合傳統(tǒng)中醫(yī)理論 的"多途徑、多靶點、協(xié)同作用"思想，實現(xiàn)與巖藻黃素、蝦青素、?；撬岬墓πЩパa，從而得 到降脂保肝效果突出的功能食品。
[0015] 所述海藻多酚是按本發(fā)明人前期已申請受理發(fā)明專利"一種高純度海藻多酚的制 備方法"（專利受理公開號:CN105193863A)記載的方法進行制備的。
[0016] 所述巖藻黃素是按本發(fā)明人前期已授權(quán)發(fā)明專利"一種酶法制備褐藻巖藻聚糖與 巖藻黃素的方法"（專利號:ZL201310142757. X)記載的方法進行制備的。
[0017] 所述功能食品配方中的主要活性成分是海藻多酚，并與巖藻黃素、?；撬?、蝦青素 按一定比例構(gòu)成，以上成分在降脂保肝中具有不同作用靶點和作用途徑，從而實現(xiàn)功效成 分的協(xié)同增效。發(fā)明人采用高血脂動物模型證實，海藻多酚降脂保肝效果明顯，主要途徑是 通過提高肝細胞磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)活性，促進脂質(zhì)的能量轉(zhuǎn)化，【具體實施方式】 部分的表4數(shù)據(jù)顯示，當海藻多酚的劑量2 80mg/kg時降脂保肝效果顯著，在劑量范圍80mg/ kg-120mg/kg呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系，但進一步提高海藻多酸劑量已無法進一步降低血清及 肝臟中的脂質(zhì)水平。因此，海藻多酚的有效劑量確定為80mg/kg-120mg/kg。此外，海藻多酚 在有效劑量范圍內(nèi)可明顯提高AMPK活性，促進多余脂質(zhì)進行能量轉(zhuǎn)化。
【附圖說明】
[0018] 圖1是空白對照組小鼠肝組織病理切片圖（油紅0染色X 400);
[0019]圖2是模型對照組小鼠肝組織病理切片圖（油紅0染色X400);
[0020]圖3是陽性對照組小鼠肝組織病理切片圖（油紅0染色X400);
[0021]圖4是組方干預(yù)組小鼠肝組織病理切片圖（油紅0染色X 400)。
【具體實施方式】
[0022]下面詳細描述本發(fā)明的實施例，所述實施例的示例在附圖中示出，其中自始至終 相同或類似的標號表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附 圖描述的實施例是示例性的，旨在用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。實施例 中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明 書進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0023]實施例1:降脂保肝的功能食品配方
[0024]以海藻多酚50重量份、巖藻黃素30重量份、蝦青素10重量份、?；撬?0重量份的比 例稱取上述各提取物，混合均勻，待用。
[0025]實施例2:降脂保肝的功能食品配方
[0026]以海藻多酚40重量份、巖藻黃素20重量份、蝦青素15重量份、?；撬?5重量份的比 例稱取上述各提取物，混合均勻，待用。
[0027]實施例3:降脂保肝的功能食品配方
[0028]以海藻多酚60重量份、巖藻黃40重量份、蝦青素20重量份、?；撬?0重量份的比例 稱取上述各提取物，混合均勻，待用。
[0029]實施例4:效果驗證實驗
[0030] 將實施例2中得到的配方設(shè)置為組方干預(yù)組，并設(shè)置空白對照組，模型對照組和陽 性對照組(北大維信牌血脂康膠囊）。
[0031] 實驗動物：SPF級雌性ICR小鼠，15-20g，購于上海斯萊克實驗動物有限責任公司。 小鼠基礎(chǔ)飼料成分:碳水化合物64 %，蛋白質(zhì)21 %，脂肪4 %，纖維5 %，水分6 % ;小鼠高脂飼 料成分：10 %豬油，1 %膽固醇，〇. 1 %膽酸鹽和88.9 %基礎(chǔ)飼料。上述飼料均購于上海斯萊 克實驗動物有限責任公司。飼養(yǎng)室溫度:23±2°C，相對濕度55±5%。
[0032]劑量的確定:血脂康灌胃量按使用說明書的預(yù)防劑量，為200mg/kg;配方灌胃的劑 量為 200mg/kg。
[0033] 動物分組及處理方法：小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按照體重隨機分為6組，每組10只， 空白對照組給予基礎(chǔ)飼料，模型對照組、陽性對照組及組方干預(yù)組給予高脂飼料，自由采 食。每3天稱一次體重，根據(jù)體重變化調(diào)整給藥量。給藥時，將實施例2所得產(chǎn)品（組方干預(yù) 組)或血脂康藥物（陽性對照組）用去離子水配置成液體狀后，按劑量經(jīng)口灌胃。連續(xù)8周給 藥后處死小鼠。實驗結(jié)束時，將小鼠禁食12h，摘眼球取血，4000 X g離心5min，分離血清，測 定總膽固醇(TC)、總甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白（LDL)、高密度脂蛋白（HDL)、谷草轉(zhuǎn)氨酶 (AST)及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT);摘取小鼠肝臟，于含冰的生理鹽水中快速漂洗，拭干，稱重。肝臟 一部分用于制作肝冷凍切片，其余迅速投入液氮，冷凍后移入_80°C冰箱保存，用于測定肝 臟 TC、TG、LDL 和 HDL 含量。
[0034]實驗結(jié)果：
[0035]由表1可知，與空白對照組相比較，模型對照組小鼠的體重、肝臟系數(shù)以及內(nèi)臟白 色脂肪都明顯升高(P〈〇.05)。在連續(xù)的8周給藥后，組方干預(yù)組能有效抑制小鼠體重的過快 增長，使小鼠肝臟系數(shù)以及內(nèi)臟白色脂肪保持在正常范圍。陽性對照組的血脂康雖然也能 有效控(P〈0.05)制小鼠體重、降低小鼠肝臟系數(shù)以及內(nèi)臟白色脂肪堆積，但效果沒有組方 干預(yù)組的功效明顯。
[0036]表1配方對高脂飲食小鼠體重、肝重、白色脂肪堆積的影響表(n = 10)
[0038]在血脂各項生化參數(shù)方面，由表2可知，高脂飲食誘導(dǎo)8周后，模型對照組小鼠血清 TC、LDL、AST以及ALT濃度與空白對照組相比均顯著升高(P〈0.05)，形成了高血脂癥，肝臟出 現(xiàn)了輕微炎癥。給藥后，組方干預(yù)組小鼠血清TC、LDL、AST以及ALT濃度均顯著降低（P〈 0.05)。陽性對照組也能明顯降低高血脂小鼠血清TC、LDL、AST以及ALT濃度(P〈0.05)。
[0039 ]表2配方對高脂飲食小鼠血清血脂指標的影響表(n = 10)
[0042]在預(yù)防脂肪肝效果方面，從表3可以看出，經(jīng)過8周的高脂飼料喂養(yǎng)，模型對照組小 鼠肝臟中TC、TG、LDL和HDL含量均顯著高于空白對照組(P〈0.05)，這說明模型對照組小鼠的 肝臟已經(jīng)出現(xiàn)了明顯的脂質(zhì)異常堆積，出現(xiàn)了非酒精性脂肪肝癥狀。組方干預(yù)組及陽性對 照組均顯著降低肝臟中TC、TG、LDL和HDL水平，且組方干擾組的效果明顯好于陽性對照組的 效果。
[0043]表3配方對高脂飲食小鼠肝臟脂質(zhì)指標的影響(n = 10)
[0045] 肝組織病理切片觀察:經(jīng)過8周的試驗，各組小鼠肝臟進行油紅0染色，觀察肝細胞 脂肪沉積情況。結(jié)果顯示:空白對照組呈陰性，未見明顯病理異常(見圖1，圖1是空白對照組 小鼠肝組織病理切片圖）；模型對照組肝細胞水腫，肝竇消失，胞漿內(nèi)可見圓形空泡，肝細胞 中脂肪變性顯著，85%肝細胞內(nèi)可見彌漫性體積較小的脂肪滴(見圖2,圖2是模型對照組小 鼠肝組織病理切片圖）；陽性對照組肝病理情況出現(xiàn)明顯好轉(zhuǎn)，只有少量肝細胞腫脹、胞漿 疏松，15 %肝細胞內(nèi)可見彌漫性體積較小的脂肪滴(見圖3，圖3是陽性對照組小鼠肝組織病 理切片圖）；組方干預(yù)組呈陰性，肝細胞內(nèi)未見明顯脂肪滴，與空白對照組無明顯差異(見圖 4,圖4是組方干預(yù)組小鼠肝組織病理切片圖）。以上說明組方具有良好的抗脂肪肝的功能。
[0046]采用實施例1和3所得進行效果驗證，具有與實施例2同樣良好的功能:有效抑制小 鼠體重的過快增長，使小鼠肝臟系數(shù)以及內(nèi)臟白色脂肪保持在正常范圍。顯著降低小鼠血 清TC、LDL、AST以及ALT濃度;顯著降低肝臟中TC、TG、LDL水平和提高HDL水平;及良好的抗脂 肪肝。
[0047]實施例5:功能食品的制備
[0048] (1)顆粒劑的制備
[0049]向200g實施例1中制備的組方中加入適量可溶性淀粉、糊精、蔗糖、乳糖和甘露醇 其中一種或幾種，用適量70% (v/v)乙醇潤濕，制軟材，過20目篩制粒，70-80°C干燥，60目整 粒，得顆粒劑。
[0050] (2)膠囊的制備
[0051]向200g實施例2中制備的組方中加入適量硬脂酸鎂和淀粉，混勻，用全自動膠囊填 充機填充入硬膠囊，每粒裝量〇. 5g。
[0052] (3)片劑的制備
[0053]向200g實施例3中制備的配方中加入適量的糊精、淀粉、微晶纖維素和乳糖中的一 種或幾種輔料，混合均勻，用適量70 % (v/v)乙醇潤濕，制軟材，過30目篩制粒，于70-80 °C干 燥，用60目篩整粒，壓片，得片劑，每片0.2g。
[0054] (4)飲料的制備
[0055]將200g實施例1中制備的配方溶于適量的70% (v/v)乙醇，加入大豆卵磷脂、硬脂 酰乳酸鈉、三聚甘油酯、蔗糖酯、月桂酸單甘油酯中的一種或幾種進行乳化，然后經(jīng)復(fù)溶、加 入適量的甜味劑和穩(wěn)定劑，混勻，過濾，灌裝，殺菌，即得飲料。
[0056]實施例6:海藻多酚降脂保肝效果實驗
[0057]發(fā)明人采用高血脂動物模型證實，海藻多酚降脂保肝效果明顯，主要途徑是通過 提高肝細胞磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)活性，促進脂質(zhì)的能量轉(zhuǎn)化，如表4所示。實驗方 法：
[0058]實驗動物：SPF級雌性ICR小鼠，15_20g，購于上海斯萊克實驗動物有限責任公司。 小鼠基礎(chǔ)飼料成分:碳水化合物64 %，蛋白質(zhì)21 %，脂肪4 %，纖維5 %，水分6 % ;小鼠高脂飼 料成分：10 %豬油，1 %膽固醇，〇. 1 %膽酸鹽和88.9 %基礎(chǔ)飼料。上述飼料均購于上海斯萊 克實驗動物有限責任公司。飼養(yǎng)室溫度:23±2°C，相對濕度55±5%。
[0059]給藥劑量及方法：海藻多酸的灌胃的劑量分別為60mg/kg、80mg/kg、100mg/kg、 120mg/kg和140mg/kg。
[0060] 動物分組及處理方法：小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按照體重隨機分為6組，每組10只， 正常組給予基礎(chǔ)飼料，模型對照組、陽性對照組及組方干預(yù)組均給予高脂飼料，自由采食。 每3天稱一次體重，根據(jù)體重變化調(diào)整給藥量。給藥時，將海藻多酚用去離子水配置成液體 狀后，按劑量經(jīng)口灌胃。連續(xù)8周給藥后處死小鼠。實驗結(jié)束時，將小鼠禁食12h，摘眼球取 血，4000Xg離心5min，分離血清，測定總膽固醇(TC)和甘油三酯（TG);摘取小鼠肝臟，于含 冰的生理鹽水中快速漂洗，拭干，用于測定肝臟TC、TG和AMPK含量。
[0061 ]表4海藻多酚降脂保肝功能與作用途徑表
[0064] 結(jié)果顯示，當海藻多酚的劑量2 80mg/kg時降脂保肝效果顯著，在劑量范圍80mg/ kg-120mg/kg呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系，但進一步提高海藻多酸劑量已無法進一步降低血清及 肝臟中的脂質(zhì)水平。因此，海藻多酚的有效劑量確定為80mg/kg-120mg/kg。此外，海藻多酚 在有效劑量范圍內(nèi)可明顯提高AMPK活性，促進多余脂質(zhì)進行能量轉(zhuǎn)化。
[0065] 為了進一步有效提高降脂保肝功能食品的功效性，根據(jù)中醫(yī)理論的"多靶點、多途 徑、協(xié)同作用"思想，在海藻多酚促進肝細胞AMPK表達、實現(xiàn)脂質(zhì)能量轉(zhuǎn)化基礎(chǔ)上，充分結(jié)合 巖藻黃素的抗氧化及細胞修繕功能、?；撬岽龠M呼吸鏈功能、蝦青素促進膽固醇轉(zhuǎn)運和排 泄功能，實現(xiàn)海藻多酚與巖藻黃素、?；撬?、蝦青素的科學組方設(shè)計，有益效果如表5所示。 [0066]實驗方法：
[0067]實驗動物：SPF級雌性ICR小鼠，15_20g，購于上海斯萊克實驗動物有限責任公司。 小鼠基礎(chǔ)飼料成分:碳水化合物64 %，蛋白質(zhì)21 %，脂肪4 %，纖維5 %，水分6 % ;小鼠高脂飼 料成分：10 %豬油，1 %膽固醇，〇. 1 %膽酸鹽和88.9 %基礎(chǔ)飼料。上述飼料均購于上海斯萊 克實驗動物有限責任公司。飼養(yǎng)室溫度:23±2°C，相對濕度55±5%。
[0068]給藥劑量及方法:組方灌胃劑量為200mg/kg。
[0069] 動物分組及處理方法：小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按照體重隨機分為6組，每組10只， 正常組給予基礎(chǔ)飼料，模型對照組、陽性對照組及組方干預(yù)組給予高脂飼料，自由采食。每3 天稱一次體重，根據(jù)體重變化調(diào)整給藥量。給藥時，將各組方用去離子水配置成液體狀后， 按劑量經(jīng)口灌胃。連續(xù)8周給藥后處死小鼠。實驗結(jié)束時，將小鼠禁食12h，摘眼球取血，4000 Xg離心5min，分離血清，測定總膽固醇（TC);摘取小鼠肝臟，于含冰的生理鹽水中快速漂 洗，拭干，用于測定肝臟TC含量。
[0070]表5海藻多酚與巖藻黃素、牛磺酸、蝦青素進行配伍的降脂保肝效果表（劑量： 200mg/kg)
[0072]從表5可以看出，以高血脂小鼠動物為模型，給藥劑量為200mg/kg，其中，海藻多酚 的重量含量為40wt% (根據(jù)海藻多酚有效劑量的下限為80mg/kg)，發(fā)現(xiàn)僅與巖藻黃素、?；?酸、蝦青素中的一種或2種進行配伍，效果均沒有4種有效成分的配伍效果好。同時，研究發(fā) 現(xiàn)，在固定海藻多酚比例的前提下，巖藻黃素、?；撬?、蝦青素在產(chǎn)品中比例分別為20?丨％_ 40wt %、10wt %-20wt %、10wt %-20wt %時可實現(xiàn)血清及肝臟膽固醇接近正常值，提高或降 低以上成分的比例，其效果都會變差。
[0073] 盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例，可以理解的是，上述實施例是示例 性的，不能理解為對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨 的情況下在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對上述實施例進行變化、修改、替換和變型。
【主權(quán)項】
1. 一種降脂保肝的配方，其特征在于，由海藻多酚40-60重量份、巖藻黃素20-40重量 份、奸青素1〇_20重量份和?；撬?0-20重量份制備得到。2. 權(quán)利要求1所述降脂保肝的配方，其特征在于，所述海藻多酚中總酚重量含量不少于 20%，6,6'_二鵝掌菜酚占海藻多酚中總酚重量的80%。3. 權(quán)利要求1所述降脂保肝的配方，其特征在于，所述巖藻黃素中巖藻黃素重量含量不 少于10%。4. 權(quán)利要求1所述降脂保肝的配方，其特征在于，所述海藻多酚和巖藻黃素來源于可食 用海藻。5. 權(quán)利要求4所述降脂保肝的配方，其特征在于，所述可食用海藻為海帶、紫菜、羊棲 菜、裙帶菜、鼠尾藻、紅毛藻、泡葉藻、麒麟菜、江蘺、墨角藻或微球藻。6. 權(quán)利要求1所述降脂保肝的配方，其特征在于，所述降脂保肝的配方制備成片劑、膠 囊或沖劑。7. 權(quán)利要求1所述降脂保肝的配方用于功能食品的用途。8. 權(quán)利要求7所述用于功能食品的用途，其特征在于，所述功能食品是飲料或休閑食 品。
【文檔編號】A23L33/00GK105852114SQ201610322166
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年5月14日
【發(fā)明人】劉翼翔, 劉光明, 曹敏杰, 吳永沛, 劉萌
【申請人】集美大學