一種納豆菌綜合酵素原液的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種納豆菌的發(fā)酵液，特別涉及一種納豆菌綜合酵素原液的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]納豆菌屬枯草芽孢桿菌納豆菌亞種，是一類好氧型，內(nèi)生抗逆胞子的桿狀細(xì)菌，自身沒有致病性，只具有單層細(xì)胞外膜，能產(chǎn)生多種抗菌素和酶，具有廣譜抗菌活性和極強(qiáng)的抗逆能力，納豆發(fā)酵過程中，會由納豆菌產(chǎn)生的一種絲氨酸蛋白酶，名為納豆激酶，直接分解血栓的纖維蛋白酶，具有強(qiáng)大的溶栓作用。
[0003]然而，天然的大豆發(fā)酵產(chǎn)生的納豆激酶含量低，難以制備成為具有治療功能的溶栓藥物，因此，目前的納豆菌發(fā)酵一般采用和具有保健功能的動植物原料進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)保健品，如，專利201210008190.2公開了一種納豆菌和蟲草菌復(fù)合酵素系列產(chǎn)品的生產(chǎn)方法；專利201010136617.8公開了納豆菌綜合酵素低分子化飲料的生產(chǎn)方法；專利201310598684.5公開了納豆菌發(fā)酵法生產(chǎn)低分子櫻桃酵素飲料的技術(shù)研究；專利201310604713.4公開了納豆菌發(fā)酵法制備低分子人參皂苷肽的方法；專利201310617333.4公開了一種納豆菌發(fā)酵法制備低分子海參肽的方法。上述專利中制備的產(chǎn)品均為保健品，具有一定的功效，但是使用效果不明顯，營養(yǎng)成分依賴于特殊的動植物原料，制備成本尚。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，通過選擇高產(chǎn)菌株和優(yōu)化發(fā)酵工藝提出一種納豆菌綜合酵素原液的制備方法。
[0005]—種納豆菌綜合酵素原液的制備方法，按照如下步驟進(jìn)行:
[0006](1)按照重量份數(shù)，取植物原料80-100份，加入80-180份水打漿，然后加入糖1_2份，膠原蛋白粉1-2份，制成發(fā)酵液；
[0007](2)按照發(fā)酵液2-4 %的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)加入納豆菌種子液，32-38 °C條件下發(fā)酵50-100 天；
[0008](3)取發(fā)酵液上清液，按照重量份數(shù)，加入0.01-0.2份維生素，0.2-0.5份異黃酮，0.3-0.6份氨基酸；
[0009](4)置于8-14°C條件下靜置3-6個(gè)月，400_1000rpm條件下離心5-10min，取上清液，置于低溫蒸發(fā)濃縮機(jī)中濃縮至離心液體積的1/2-1/8，制成。
[0010]所述納豆菌為枯草芽孢桿菌菌株QR，其保藏號為CGMCC N0.11274。該菌種的保藏單位:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號；保藏日期:2015年8月25日；分類命名:枯草芽孢桿菌Bacillus Subtilis。
[0011]所述植物原料為大豆，花生，玉米，南瓜，番茄，土豆，蘋果，梨，紅豆，豇豆，芝麻，葡萄，菠蘿，蘋果，白菜中的一種或一種以上。
[0012]所述維生素為維生素A，維生素C，維生素E，維生素D，維生素B1，維生素B2，維生素B5，維生素B6，維生素B12，維生素PP，維生素K中的一種或一種以上。
[0013]所述異黃酮為大豆異黃酮。
[0014]所述氨基酸為丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，賴氨酸，精氨酸，甘氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，半胱氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，苯丙氨酸，酪氨酸，組氨酸，色氨酸，脯氨酸中的一種或一種以上。
[0015]所述低溫蒸發(fā)濃縮機(jī)的工作溫度為4_12°C，真空度為_70kpa?_95kpa。
[0016]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果:本發(fā)明的方法制備的納豆菌綜合酵素原液，營養(yǎng)物質(zhì)含量高，含有活性的低分子肽，寡糖，皂苷，異黃酮等對人體有益的成分，同時(shí)，含有的納豆激酶酶活性高，溶栓能力強(qiáng)，是制備抗血栓藥物及其保健品良好的原料物質(zhì)。本發(fā)明的方法制備簡單，無需復(fù)雜的分離純化設(shè)備，制備出高納豆激酶酶活的酵素原液。
【具體實(shí)施方式】
[0017]下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明，但應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明的保護(hù)范圍并不受【具體實(shí)施方式】的限制。
[0018]實(shí)施例1
[0019]—種納豆菌綜合酵素原液的制備方法，按照如下步驟進(jìn)行:
[0020](1)按照重量份數(shù)，取大豆90份，加入130份水打漿，然后加入糖1份，膠原蛋白粉1份，制成發(fā)酵液；
[0021](2)按照發(fā)酵液3%的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)加入納豆菌種子液(枯草芽孢桿菌菌株QR，其保藏號為CGMCC N0.11274)，37°C條件下發(fā)酵80天；
[0022](3)取發(fā)酵液上清液，按照重量份數(shù)，加入0.12份維生素，0.4份大豆異黃酮，0.32
份氨基酸；
[0023]所述維生素為維生素A 0.01份，維生素C 0.02份，維生素E 0.01份，維生素D0.01份，維生素B1 0.01份，維生素B2 0.01份，維生素B5 0.01份，維生素B6 0.01份，維生素B12 0.01份，維生素PP 0.01份，維生素K 0.01份。
[0024]所述氨基酸為丙氨酸0.01份，纈氨酸0.01份，亮氨酸0.02份，異亮氨酸0.02份，蛋氨酸0.05份，天冬氨酸0.03份，谷氨酸0.01份，賴氨酸0.01份，精氨酸0.03份，甘氨酸0.02份，絲氨酸0.01份，蘇氨酸0.01份，半胱氨酸0.01份，天冬酰胺0.01份，谷氨酰胺0.05份，苯丙氨酸0.01份，酪氨酸0.02份，組氨酸0.01份，色氨酸0.01份，脯氨酸0.01份。
[0025](4)置于10°C條件下靜置4個(gè)月，SOOrpm條件下離心6min，取上清液，置于低溫蒸發(fā)濃縮機(jī)中，在工作溫度為8°C，真空度為_80kpa的條件下，濃縮至離心液體積的1/4，制成。
[0026]本實(shí)施例制備的納豆菌綜合酵素原液含有較多的活性低分子肽，寡糖，皂苷，異黃酮。采用傳統(tǒng)工藝，將上述納豆菌綜合酵素原液低溫蒸干并加入25wt%藥學(xué)上可以接受的載體，制成粒劑量，每粒0.5g，含納豆激酶3000FU。
[0027]實(shí)施例2
[0028]—種納豆菌綜合酵素原液的制備方法，按照如下步驟進(jìn)行:
[0029](1)按照重量份數(shù)，取花生20份，玉米30份，南瓜40份，加入80份水打漿，然后加入糖1份，膠原蛋白粉1份，制成發(fā)酵液；
[0030](2)按照發(fā)酵液2%的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)加入納豆菌種子液(枯草芽孢桿菌菌株QR，其保藏號為CGMCC N0.11274)，35°C條件下發(fā)酵90天；
[0031](3)取發(fā)酵液上清液，按照重量份數(shù)，加入0.16份維生素，0.2份異黃酮，0.4份氨基酸；
[0032]所述維生素為維生素A 0.01份，維生素C 0.05份，維生素E 0.01份，維生素D0.01份，維生素B1 0.01份，維生素B2 0.01份，維生素B5 0.01份，維生素B6 0.01份，維生素B12 0.04份。
[0033]所述氨基酸為丙氨酸0.02份，纈氨酸0.02份，亮氨酸0.02份，異亮氨酸0.02份，蛋氨酸0.05份，天冬氨酸0.03份，谷氨酸0.01份，賴氨酸0.01份，精氨酸0.03份，甘氨酸0.02份，絲氨酸0.01份，蘇氨酸0.01份，半胱氨酸0.01份，天冬酰胺0.01份，谷氨酰胺0.05份，苯丙氨酸0.01份，酪氨酸0.02份，組氨酸0.01份，色氨酸0.01份，脯氨酸0.03份。
[0034](4)置于8°C條件下靜置3個(gè)月，400rpm條件下離心5min，取上清液，置于低溫蒸發(fā)濃縮機(jī)中，在工作溫度為4°C，真空度為_95kpa的條件下，濃縮至離心液體積的1/2，制成。
[0035]本實(shí)施例制備的納豆菌綜合酵素原液含有較多的活性低分子肽，寡糖，皂苷，異黃酮。采用傳統(tǒng)工藝，將上述納豆菌綜合酵素原液低溫蒸干并加入25wt%藥學(xué)上可以接受的載體，制成粒劑量，每粒0.5g，含納豆激酶2800FU。
[0036]實(shí)施例3
[0037]—種納豆菌綜合酵素原液的制備方法，按照如下步驟進(jìn)行:
[0038](1)按照重量份數(shù)，取番茄30份，土豆30份，蘋果30份，加入100份水打漿，然后加入糖2份，膠原蛋白粉2份，制成發(fā)酵液；
[0039](2)按照發(fā)酵液4%的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)加入納豆菌種子液(枯草芽孢桿菌菌株QR，其保藏號為CGMCC N0.11274)，38°C條件下發(fā)酵50天；
[0040](3)取發(fā)酵液上清液，按照重量份數(shù)，加入0.015份維生素，0.5份大豆異黃酮，0.42份氨基酸；
[0041]所述維生素為維生素A 0.01份，維生素C 0.05份，維生素E 0.01份，維生素D0.01份，維生素B1 0.01份，維生素B2 0.01份，維生素B5 0.01份，維生素B6 0.01份，維生素B12 0.03份。
[0042]所述氨基酸為丙氨酸0.02份，纈氨酸0.02份，亮氨酸0.02份，異亮氨酸0.02份，蛋氨酸0.05份，天冬氨酸0.03份，谷氨酸0.01份，賴氨酸0.01份，精氨酸0.03份，甘氨酸0.04份，絲氨酸0.01份，蘇氨酸0.01份，半胱氨酸0.01份，天冬酰胺0.01份，谷氨酰胺0.05份，苯丙氨酸0.01份，酪氨酸0.02份，組氨酸0.01份，色氨酸0.01份，脯氨酸0.03份。
[0043](4)置于14°C條件下靜置3個(gè)月，lOOOrpm條件下離心lOmin，取上清液，置于低溫蒸發(fā)濃縮機(jī)中，在工作溫度為4°C，真空度為_80kpa的條件下，濃縮至離心液體積的1/6，制成。
[0044]本實(shí)施例制備的納豆菌綜合酵素原液含有較多的活性低分子肽，寡糖，皂苷，異黃酮。采用傳統(tǒng)工藝，將上述納豆菌綜合酵素原液低溫蒸干并加入25wt%藥學(xué)上可以接受的載體，制成粒劑量，每粒0.5g，含納豆激酶3200FU。
[0045]實(shí)施例4
[0046]—種納豆菌綜合酵素原液的制備方法，按照如下步驟進(jìn)行:
[0047](1)按照重量份數(shù)，取紅豆35份，豇豆35份，芝麻20份，加入180份水打漿，然后加入糖2份，膠原蛋白粉2份，薰衣草精油1份，制成發(fā)酵液；
[0048](2)按照發(fā)酵液3%的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)加入納豆菌種子液(枯草芽孢桿菌菌株QR，其保藏號為CGMCC N0.11274)，36°C條件下發(fā)酵90天；
[0049](3)取發(fā)酵液上清液，按照重量份數(shù)，加入0.12份維生素，0.4份大豆異黃酮，0.32
份氨基酸；
[0050]所述維生素為維生素A 0.01份，維生素C 0.02份，維生素E 0.01份，維生素D0.01份，維生素B1 0.01份，維生素B2 0.01份，維生素B5 0.01份，維生素B6 0.01份，維生素B12 0.01份，維生素PP 0.01份，維生素K 0.01份。
[0051]所述氨基酸為丙氨酸0.01份，纈氨