降低蛋雞腸炎沙門氏菌增殖和入侵的微量元素預(yù)混料及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于于動(dòng)物飼料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種降低蛋雞腸炎沙門氏菌增殖和入 侵的微量元素預(yù)混料，本發(fā)明還提供一種降低蛋雞腸炎沙門氏菌增殖和入侵的微量元素預(yù) 混料的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 沙門氏菌（SalmonellaEnteritidisphagetype4)是危害蛋雞生產(chǎn)的主要病原 菌之一。蛋雞沙門氏菌感染不僅導(dǎo)致腸道炎癥反應(yīng)、腹瀉和生產(chǎn)性能下降，而且由攜帶沙門 氏菌蛋雞及其產(chǎn)品引起的食品安全問題已經(jīng)成為一個(gè)人類公共衛(wèi)生方面關(guān)注的熱點(diǎn)。目 前，蛋雞生產(chǎn)上主要應(yīng)用抗生素和疫苗來預(yù)防和治療沙門氏菌感染，但由于抗生素藥物使 菌株易產(chǎn)生抗藥性、疫苗的生產(chǎn)跟不上沙門氏菌血清型的變化，肉雞沙門氏菌病的防控已 成為全球性的難題。
[0003] 鐵、銅、錳和鋅是動(dòng)物必需的營(yíng)養(yǎng)素，作為機(jī)體多種酶的輔基或輔因子廣泛參與體 內(nèi)的一系列代謝活動(dòng)，包括基因的轉(zhuǎn)錄、翻譯，細(xì)胞增殖、分化及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)等方面的 調(diào)節(jié)，在機(jī)體的免疫機(jī)能、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)、蛋白質(zhì)和核酸代謝等等過程中發(fā)揮重要作用。同時(shí)， 鐵、鋅和錳也是微生物尤其是病原沙門氏菌繁殖必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。因此，這為通過銅、鐵、錳 和鋅的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控來蛋雞沙門氏菌的增殖與入侵奠定了理論基礎(chǔ)。
[0004] 鐵在動(dòng)物體沙門氏菌感染過程中具有重要的調(diào)節(jié)作用。沙門氏菌引起腸粘膜上 皮組織產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，產(chǎn)生大量的自由基，導(dǎo)致組織氧化損傷，這可能與上皮組織細(xì)胞中鐵 的含量增加有關(guān)（Millar等，2000)。利用大鼠沙門氏菌結(jié)腸炎模型的研究發(fā)現(xiàn)，腸道鐵離 子缺乏能夠改善組織損傷的嚴(yán)重程度（Bergeron等，2003)，而口服鐵離子反而加重了腸道 上皮組織的炎癥反應(yīng)和組織損傷（Seril等，2002)。沙門氏菌腸炎還能引起動(dòng)物貧血或血 紅蛋白含量降低，70%的沙門氏菌腸炎病人機(jī)體也呈現(xiàn)鐵缺乏癥狀（Wilson等，2004)。沙 門氏菌腸炎引起的鐵缺乏必將通過鐵參與的酶影響機(jī)體的多個(gè)代謝過程，降低機(jī)體的抗病 能力。另外，鐵水平影響病原菌誘導(dǎo)上皮細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子、趨化因子。體 外研究發(fā)現(xiàn)，高鐵降低了人結(jié)腸癌細(xì)胞產(chǎn)生轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-β1)和單核細(xì)胞趨化蛋白 (MCP-1)，而感染沙門氏菌后增加了TGF-β1、MCP-1和腫瘤壞死因子（TNF-α)的表達(dá)量 (Fosteria等，2001)。鐵缺乏的大鼠，腸粘膜上皮組織中IL-1的含量明顯降低（Byrd和 H〇rwitz，1989)。貧血嬰兒注射LPS后，其單核巨噬細(xì)胞分泌的TNF-α顯著升高。高水平 鐵增加大鼠肺泡巨噬細(xì)胞IL-1和TNF-a的分泌（P印percorn，1993)。因此，鐵可能通過影 響腸道上皮細(xì)胞的免疫識(shí)別和免疫調(diào)節(jié)及吞噬細(xì)胞清除病原菌能力調(diào)節(jié)腸道抵抗沙門氏 菌感染。
[0005] 銅與動(dòng)物的免疫功能有著密切的關(guān)系。銅參與機(jī)體免疫功能調(diào)節(jié)，缺銅可引起免 疫功能下降。鼠傷寒沙門氏菌的感染試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，銅缺乏大鼠比對(duì)照組死亡率高，存活時(shí)間 短；這可能是缺銅鼠的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對(duì)感染的反應(yīng)降低所致（Tocco-Bradley等，1985)。 比較兩種小鼠對(duì)急性和遲發(fā)性過敏應(yīng)答的效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)缺銅不影響小鼠對(duì)急性過敏的應(yīng)答， 卻能明顯延遲小鼠對(duì)臭氧的遲發(fā)接觸過敏的應(yīng)答。大腸埃希氏菌內(nèi)毒素攻擊和感染對(duì)雞 血清、肝、脾和法氏囊中銅含量動(dòng)力學(xué)變化的影響實(shí)驗(yàn)表明，在感染和內(nèi)毒素攻擊期間，血 清、肝、脾和法氏囊中銅的含量均明顯增加；這證明銅參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)。大鼠實(shí)驗(yàn)性缺 銅時(shí)，白細(xì)胞總數(shù)下降，中性粒細(xì)胞數(shù)減少，白細(xì)胞吞噬能力尤其是吞噬之后的殺傷能力下 降，血清中補(bǔ)體總濃度降低。銅缺乏也使T細(xì)胞減少，淋巴細(xì)胞對(duì)抗原反應(yīng)的能力減退。銅 缺乏小鼠白細(xì)胞介素的水平僅為正常鼠的40 %~50 %，并發(fā)現(xiàn)在患各種感染時(shí)，血清銅升 高，刺激并增加肝臟合成和釋放銅藍(lán)蛋白，有利于抵抗微生物的侵襲。而血銅升高主要與中 性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞被激活時(shí)分泌的一種白細(xì)胞內(nèi)源性物質(zhì)有關(guān)，該物質(zhì)隨血液到達(dá)相關(guān) 靶細(xì)胞，并發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)及殺菌功能。
[0006] 錳通過各種酶或輔酶參與動(dòng)物體內(nèi)脂肪、蛋白質(zhì)和碳水化合物的代謝。Smialowicz等（1985)研究表明，通過肌肉注射MnCl2，可增加小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力，提 高脾臟巨噬細(xì)胞對(duì)雞紅細(xì)胞的吞噬能力。飼糧中添加錳增加了小鼠巨噬細(xì)胞和自然殺傷性 細(xì)胞的吞噬能力，降低了細(xì)胞內(nèi)活性氧（R0S)和N0的濃度（Son等，2007)。錳離子能增加 LPS誘導(dǎo)人和小鼠免疫細(xì)胞（中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞）產(chǎn)生的IL-l、IL-6、IL-8、 TNF-α和IFN-γ(Rishi等，2010 ;Mokgobu等2012 ;2015)。近年來在神經(jīng)生物學(xué)上的研究 也發(fā)現(xiàn)，Mn2+能提高神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的先天性免疫，增加其IL-1、IL-6、IL-8和TNF-α的表達(dá) 與釋放，促進(jìn)炎癥反應(yīng)（Spranger等，1998;Liu等，2006;Zhang等，2010;Dodd和Filipov， 2011)。在家禽上的研究發(fā)現(xiàn)，飼喂添加錳增加了肉雞對(duì)綿羊紅細(xì)胞的抗體滴度顯著增加， 且提高了對(duì)嗜堿性致敏性植物凝集素的細(xì)胞免疫能力（Gajula等，2011)。低劑量的錳離子 能促進(jìn)肉雞脾臟淋巴細(xì)胞熱應(yīng)激蛋白的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞免疫；但高劑量的錳對(duì)脾臟淋巴細(xì) 胞有毒性效應(yīng)（Zhu等，2013)。但Liu等（2012)發(fā)現(xiàn)，高劑量（600~1800mg/kg飼糧）的 錳降低了蛋公雞脾臟、胸腺和法氏囊的IL-1β和IL-2基因表達(dá)及血液中水平。
[0007] 鋅對(duì)免疫系統(tǒng)的發(fā)育以及正常免疫功能的維持具有十分重要的作用（成廷水等， 2004 ;黃艷玲等，2008)。鋅缺乏減少⑶4+/⑶8+Τ細(xì)胞的比例，減少IL-2的激活，導(dǎo)致Thl 與Th2免疫輔助T細(xì)胞的免疫功能不平衡，形成Thl介導(dǎo)的免疫通路的缺失（Beck等，1997 ; Prasad等，1998)。已有研究表明，鋅具有"營(yíng)養(yǎng)免疫作用"(Thomas等，2010)。鼠在感染葡萄 球菌或沙門氏菌或注射鼠傷寒沙門氏菌時(shí)，引起體內(nèi)鋅穩(wěn)衡代謝改變、體內(nèi)和細(xì)胞內(nèi)鋅的 重分配，表現(xiàn)出血清和粒細(xì)胞質(zhì)中的Zn含量顯著下降，而在肝、脾等組織鋅富集，這種改變 有益于宿主的免疫應(yīng)激和抗感染，一方面抑制血液中依賴于鋅的細(xì)菌的生長(zhǎng)，另一方面促 進(jìn)肝臟中蛋白（或酶）的合成以及脾臟中淋巴細(xì)胞的增殖以便宿主對(duì)應(yīng)激和病原感染作出 及時(shí)有益的反應(yīng)。因此，供給適宜的鋅水平可以發(fā)揮鋅抗沙門氏菌的作用。邵玉新等（2012) 報(bào)道感染鼠傷寒沙門氏菌降低肉仔雞盲腸微生物多樣性及均勻度，導(dǎo)致生產(chǎn)性能降低；日 糧中添加鋅一定程度上阻止沙門氏菌在腸道的定植、有利于穩(wěn)定肉仔雞腸道微生物區(qū)系， 改善肉仔雞生產(chǎn)性能。張炳坤等（2012)報(bào)道，日糧中添加鋅有利于改善鼠傷寒沙門氏菌 感染導(dǎo)致的肉仔雞腸黏膜屏障功能障礙，并且此作用可能與促進(jìn)回腸黏膜claudin-Ι和 occludinmRNA表達(dá)相關(guān)。
[0008] 現(xiàn)有的沙門氏菌防控中利用抗生素藥物使菌株易產(chǎn)生抗藥性、疫苗的生產(chǎn)跟不上 沙門氏菌血清型的變化。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的是提供一種降低蛋雞腸炎沙門氏菌增殖和入侵的預(yù)混料，解決現(xiàn)在 沙門氏菌防控中利用抗生素藥物使菌株易產(chǎn)生抗藥性、疫苗的生產(chǎn)跟不上沙門氏菌血清型 的變化的問題，本發(fā)明通過營(yíng)養(yǎng)手段來提高動(dòng)物免疫力，調(diào)控營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在宿主和病原菌間 的分配，抑制腸炎沙門氏菌增殖和入侵。
[0010] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是，一種降低蛋雞腸炎沙門氏菌增殖和入侵的預(yù)混料， 按照質(zhì)量百分比由以下組分構(gòu)成：富馬酸亞鐵2% -4%，乳酸亞鐵2% -4%，蛋氨酸螯合鋅 3%-7%，丙酸鋅3%-7%，蛋氨酸螯合錳8%-12%，硫酸銅1 %-2%，乙酸鈷0. 1 %-0.3%， 亞硒酸鈉預(yù)混劑〇. 5 % -1. 5 %，碘化鉀預(yù)混劑3 % -5 %，硫酸鎂18 % -22 %，碳酸鈣 45% -50%，以上質(zhì)量總量為100%。
[0011] 進(jìn)一步地，該預(yù)混料按照質(zhì)量百分比由以下組分構(gòu)成：富馬酸亞鐵3%，乳酸亞鐵 3 %，蛋氨酸螯合鋅5 %，丙酸鋅5 %，蛋氨酸螯合錳10 %，硫酸銅1. 5 %，乙酸鈷0. 2 %，亞硒 酸鈉預(yù)混劑1 %，碘化鉀預(yù)混劑4 %，硫酸鎂20 %，碳酸鈣47. 3 %。
[0012] 進(jìn)一步地，亞硒酸鈉預(yù)混劑的硒的質(zhì)量含量為0. 45% ;碘化鉀預(yù)混劑的碘質(zhì)量含 量為1%。
[0013] 本發(fā)明所采用的第二技術(shù)方案是，一種降低蛋雞腸炎沙門氏菌增殖和入侵的預(yù)混 料的制備方法，包括以下步驟：
[0014] 步驟1、稱量：按照質(zhì)量百分比稱量以下組分：富馬酸亞鐵2% -4%，乳酸亞 鐵2% -4%，蛋氨酸螯合鋅3 % -7%，丙酸鋅3% -7%，蛋氨酸螯合錳8% -12%，硫