專利名稱：蝴蝶蘭組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蝴蝶蘭組織培養(yǎng)方法，本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)方法，涉及生物學(xué)、植物生理學(xué)、植物栽培學(xué)和植物遺傳學(xué)等。
據(jù)報(bào)道1949年ROTOR成功地在試管中培養(yǎng)出花梗苗，但由于蝴蝶蘭繁殖難度較大，至今還沒有象建蘭屬、卡德蘭屬、石解屬等一些蘭花那樣建立起完整的無性繁殖體系。我國臺(tái)灣省林金其、林瑞林等對(duì)蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)作了認(rèn)真的研究。1989年廣東王懷宇作了蝴蝶蘭的快速繁殖的初步報(bào)道，目前關(guān)于蝴蝶蘭原球莖狀體的培養(yǎng)方面尚未見有詳細(xì)的報(bào)道。
盡管蝴蝶蘭不定芽組織培養(yǎng)即花梗苗培養(yǎng)已獲成功，但繁殖系數(shù)低、成本高、遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足工業(yè)生產(chǎn)的需要，不能更快地使蘭花進(jìn)入百姓家。
本發(fā)明的目的在于提供一種蝴蝶蘭組織培養(yǎng)方法。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的利用蝴蝶蘭的外植體、誘導(dǎo)出原球莖狀體、大大地增加繁殖系數(shù)，使其用于苗木工廠化生產(chǎn)，達(dá)到大量繁殖蝴蝶蘭苗的目的。
蝴蝶蘭組織培養(yǎng)方法，其特征在于取蝴蝶蘭莖尖或小葉，嫩莖用常規(guī)方法消毒后，在改良的Vacin and went培養(yǎng)基固體平板上，26℃，光強(qiáng)1200LX，每天光照16小時(shí)培養(yǎng)，直至誘導(dǎo)出兩小葉和嫩莖，再經(jīng)45天左右時(shí)間的培養(yǎng)大部分可長成有2-3片葉的帶根蝴蝶蘭小苗。其中所述的改良Vacin and went培養(yǎng)基配方為(mg/L)Ca3(PO4)2200KNO3525KH2PO4250MgSO4.7H2O250(NH4)2SO4500Fe2(C4H4O6).2H2O 28MnSO4.4H2O75PH＝5.4-5.6 蔗糖20克另加細(xì)胞分裂素BA3(6-芐氨基嘌呤)3mg，肌醇100mg，維生素B1、B6和煙酸各0.5mg，活性炭0.15％，香蕉1％(相對(duì)于培養(yǎng)基的體積，即100ml培養(yǎng)基中加0.15克活性炭，1克香蕉)。
本發(fā)明采用蝴蝶蘭莖尖培養(yǎng)，并用改良Vacin and went培養(yǎng)基外加BA3+0.15％活性炭+1％香蕉。用常規(guī)方法消毒，在雙筒解剖鏡下切取1-2mm的莖尖，可獲極少量(約4％)蝴蝶蘭原球莖狀體。偏大的莖尖外植體經(jīng)長時(shí)期培養(yǎng)后長成兩小葉及嫩莖，然后用利刀切成1-2mm小塊，仍置于上述培養(yǎng)基上，促使其繼續(xù)分化從材料中獲得了約30％的原球莖狀體。此舉的成功，在蝴蝶蘭原球莖狀體培育中獲得了突破性進(jìn)展，為大量繁殖蝴蝶蘭苗提供了物質(zhì)條件。


圖1是蝴蝴蝶蘭早期原球莖狀體的細(xì)胞分化圖。
圖2是蝴蝶蘭原球莖狀體圖，其中I是早期原球莖狀體；II是原球莖狀體；III、IV是出葉，V、VI是小苗。
蝴蝶蘭原球莖狀體的培育成功，縮短了與國外洋蘭繁殖技術(shù)的差距，總結(jié)出一套非原產(chǎn)地繁殖蝴蝶蘭的技術(shù)養(yǎng)護(hù)措施。大幅度降低了成本，提高了經(jīng)濟(jì)效益。一旦原球莖狀體培育成功可向社會(huì)出售蝴蝶蘭切花，蝴蝶蘭苗木以及蝴蝶蘭原球莖，可獲得很好的經(jīng)濟(jì)效益。
下面的實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，而不是限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例(1)蝴蝶蘭莖尖(含其他營養(yǎng)體)培養(yǎng)基用改良Vacin and went(mg/L)Ca3(PO4)2200KNO3525KH2PO4250MgSO4.7H2O250(NH4)2SO4500Fe2(C4H4O6).2H2O 28MnSO4.4H2O 75 蔗糖20克PH＝5.4-5.6另加細(xì)胞分裂素BA3(6-芐氨基嘌呤)3mg，肌醇100mg，維生素B1、B6和煙酸各0.5mg，活性炭0.15％，香蕉1％(相對(duì)于培養(yǎng)基的體積，即100ml培養(yǎng)基中加0.15克活性炭，1克香蕉)。
(2)莖尖培養(yǎng)剪取蝴蝶蘭莖尖后用自來水沖洗15-20分鐘，再用洗滌劑清洗，用75％酒精消毒0.5分鐘，無菌水沖洗2次，再用0.1％汞消毒5分鐘，用無菌水清洗5-6次。然后，用無菌濾紙吸除表面多余水分，在超凈工作臺(tái)上，將材料置于消過毒的培養(yǎng)皿內(nèi)，在解剖鏡下切取1-2mm的莖尖，平放在上述改良的Vacin and went的固體培養(yǎng)基上，溫度26℃，光強(qiáng)1200LX，每天光照16小時(shí)培養(yǎng)。從培養(yǎng)開始45天后莖尖材料細(xì)胞開始分化，出現(xiàn)了早期原球莖狀體(見附圖1)。
或者莖尖以外的營養(yǎng)體即兩小葉和嫩莖作為繁殖材料，將其切成1-2mm小塊，再采用相同方法進(jìn)行培養(yǎng)誘導(dǎo)成原球莖狀體。莖尖以外的營養(yǎng)體誘導(dǎo)出原球莖狀體需經(jīng)68天時(shí)間。不論是莖尖或莖尖外的營養(yǎng)體一旦誘導(dǎo)成原球莖狀體，培養(yǎng)在低濃度即1升中有1ppm細(xì)胞分裂素(BA1)的培養(yǎng)基內(nèi)或繼續(xù)延長培養(yǎng)時(shí)間，經(jīng)60天左右的培養(yǎng)可誘發(fā)出兩小葉和嫩莖，然后再經(jīng)45天左右時(shí)間的培養(yǎng)大部分可長成有2-3片葉的帶根蝴蝶蘭小苗。其培養(yǎng)條件與上述相同。
實(shí)施本發(fā)明必須具有一個(gè)接種、培養(yǎng)室，要嚴(yán)格滅菌，控制光照、溫度、濕度條件，同時(shí)還需備有顯微鏡，解剖鏡等條件。在蝴蝶蘭苗木養(yǎng)護(hù)管理上冬季溫室供暖設(shè)備增濕不能低于10℃，夏季濕度保持60-80％，并要注意通風(fēng)，要控制光照造成一個(gè)散射光的環(huán)境，夏末秋初適當(dāng)增加光照強(qiáng)度有利蝴蝶蘭花芽分化。同時(shí)，必須備有素質(zhì)高、事業(yè)性強(qiáng)的操作管理人員。
權(quán)利要求
1.蝴蝶蘭組織培養(yǎng)方法，其特征在于取蝴蝶蘭莖尖或小葉，嫩莖用常規(guī)方法消毒后，在改良的Vacin and went培養(yǎng)基固體平板上，26℃，光強(qiáng)1200LX，每天光照16小時(shí)培養(yǎng)，直至誘導(dǎo)出兩小葉和嫩莖，再經(jīng)45天左右時(shí)間的培養(yǎng)大部分可長成有2-3片葉的帶根蝴蝶蘭小苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭組織培養(yǎng)方法，其特征在于其中所述的改良Vacin and went培養(yǎng)基配方為(mg/L)Ca3(PO4)2200KNO3525KH2PO4250MgSO4.7H2O 250(NH4)2SO4500Fe2(C4H4O6).2H2O 28MnSO4.4H2O 75PH＝5.4-5.6 蔗糖 20克另加細(xì)胞分裂素BA3(6-芐氨基嘌呤)3mg，肌醇100mg，維生素B1、B6和煙酸各0.5mg，活性炭0.15％，香蕉1％(相對(duì)于培養(yǎng)基的體積，即100ml培養(yǎng)基中加0.15克活性炭，1克香蕉)。
全文摘要
用改良的Vacin and went培養(yǎng)基并加BA
文檔編號(hào)C12N5/04GK1180104SQ9611988
公開日1998年4月29日 申請(qǐng)日期1996年10月9日 優(yōu)先權(quán)日1996年10月9日
發(fā)明者左汶, 郭繼善, 楊駿 申請(qǐng)人:中國石化揚(yáng)子石油化工公司