專(zhuān)利名稱：一種蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種洋蘭的無(wú)性繁殖方法，特別是蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖方法。
背景技術(shù)：
蝴蝶蘭(Phalaenopsis sp.)是蘭科蝴蝶蘭屬多年生常綠附生草本植物，屬于熱帶氣生蘭，容易栽培，花形似蝴蝶，形態(tài)優(yōu)美，色彩豐富，花期頗長(zhǎng)，素有“洋蘭皇后”之美譽(yù)，是近年來(lái)最受歡迎的洋蘭之一。蝴蝶蘭是單莖性氣生蘭，植株自身不分蘗，極少發(fā)育側(cè)芽，由于其花器結(jié)構(gòu)的特殊性，自然條件下不能完成受粉，所以很難得到種子；進(jìn)行人工授粉獲得種子，種子的萌發(fā)率也只有20%左右，在人工培養(yǎng)基上誘導(dǎo)其種子萌發(fā)，為蝴蝶蘭產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展開(kāi)辟了新的快速繁殖途徑，但是繁殖出的苗變異多，種苗生長(zhǎng)不一致。蝴蝶蘭常規(guī)的無(wú)性繁殖基本上無(wú)法進(jìn)行，因此利用組織培養(yǎng)手段輔助蝴蝶蘭進(jìn)行非常規(guī)的無(wú)性繁殖(也就是芽切芽繁殖)，獲得優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭種苗，從而提高繁殖速度，是目前解決生產(chǎn)上需要的大量蝴蝶蘭種苗的重要手段。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖方法。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案，其以蝴蝶蘭花梗腋芽作為外植體，接種到培養(yǎng)基中進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，接著將誘導(dǎo)出的新芽依次進(jìn)行繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和移栽培養(yǎng)。腋芽為蝴蝶蘭花梗基部4 5節(jié)的腋芽。具體的培養(yǎng)步驟為，(I)將蝴蝶蘭花梗帶花苞的部分剪掉，其它部分清洗后進(jìn)行殺菌處理；殺菌后，將花梗的芽點(diǎn)向上斜插接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，接種量為0. I 0. 2g/ml##s，在溫度23 27°C，光照強(qiáng)度2000 3000Lux條件下培養(yǎng)30 40天；使之在人工配制的培養(yǎng)基中實(shí)現(xiàn)分蘗；(2)將步驟(I)誘導(dǎo)出的芽從花梗段上切下，2 3株為一組，接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，接種量為0. I 0. 2g/ml±_基，在溫度23 27°C，光照強(qiáng)度2000 3000Lux條件下培養(yǎng)，繼代周期為40 50天；(3)將繼代9代的芽切分成獨(dú)立的單株，接種在生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，接種量為0. I 0. 2g/ml培養(yǎng)基，在溫度23 27°C，光照強(qiáng)度2000 3000Lux條件下培養(yǎng)，2 3 個(gè)月后即可出瓶移栽。步驟(I)中所述的蝴蝶蘭花梗為已有花苞未開(kāi)花、開(kāi)花中或花朵已凋謝的蝴蝶蘭的花梗。步驟(I)中所述的殺菌處理步驟為，在超凈工作臺(tái)上，將沖洗好的花梗剪切成5cm 長(zhǎng)的小段，每段帶有一個(gè)腋芽，將腋芽上的苞片剝?nèi)?，首先?5wt%的酒精溶液中浸一下， 用濾紙吸干酒精，然后放入0. Iwt %濃度的升汞溶液中殺菌8 15分鐘,最后用無(wú)菌水沖洗3 4遍，用濾紙吸干水放在培養(yǎng)皿中備用。步驟⑴中所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為，1/3MS或花寶I號(hào)2. 5 3. 5g -F'+BA I 3mg I :+NAA 0. I 0. 3mg .I1+ 鹿糖 20 30g .I1+ 香蓮 30 50g I、步驟⑵中所述的叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為，1/2MS+BA0. I 0. 5mg F1+蔗糖 20 30g I L步驟(3)中所述的生根培養(yǎng)基的組成為，1/2MS或花寶I號(hào)2. 5 3. 5g F'+NAA 0 Img I丨+鹿糖20 30g I丨+活性炭I 2g I丨+香蕉100 200g ^l10步驟(3)中所述的出瓶移栽選取的是生有2 3條根、葉片數(shù)為2 3個(gè)的蝴蝶
蘭組培苗。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明公布了一種蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖方法，使蝴蝶蘭在人工配制的培養(yǎng)基中實(shí)現(xiàn)分蘗，打破了蝴蝶蘭單莖性的生殖特點(diǎn)，此方法不用傷害蝴蝶蘭母株即可得到用來(lái)誘導(dǎo)的花梗苗，而且可以反復(fù)使用同一母株的花梗。本發(fā)明生產(chǎn)出的種苗健壯、整齊一致，可以解決生產(chǎn)上優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭種苗的來(lái)源問(wèn)題，可以創(chuàng)造更大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I選取剛剛抽花箭有花苞的蝴蝶蘭成熟母株“千惠玫瑰”的花梗作為外植體，用洗衣粉水清洗一下，然后放在流水下沖洗30 40分鐘，在超凈工作臺(tái)上將沖洗好的花梗剪切成 5cm長(zhǎng)的小段，每段帶有一個(gè)腋芽，將腋芽上的苞片剝?nèi)?，首先?5wt %的酒精溶液中浸一下，用濾紙吸干酒精，然后放入0. lwt%濃度的升汞溶液中殺菌8分鐘，最后用無(wú)菌水沖洗3 遍,用濾紙吸干水放在培養(yǎng)皿中。將花梗兩側(cè)各切下0.5cm，然后芽點(diǎn)向上斜插接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，接種量為
0.lg/ml##a,在溫度23°C，光照強(qiáng)度3000LUX的條件下培養(yǎng)30天，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為， 1/3MS+BA Img F'+NAAO. Img I—1+ 蔗糖 20g I—1+ 香蕉 50g I-1。每個(gè)芽點(diǎn)能誘導(dǎo) I 株苗， 極少數(shù)能誘導(dǎo)出2株苗。將誘導(dǎo)出的芽從花梗段上切下，2個(gè)芽的不用切開(kāi)，連在一起接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，接種量為0. lg/ml##s，，在溫度27°C，光照強(qiáng)度3000LUX的條件下進(jìn)行繼代培養(yǎng)，， 繼代周期為40天，叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為，1/2MS+BA 0. 5mg F1+蔗糖30g F10將繼代9代的芽切分成獨(dú)立的單株，接種在生根培養(yǎng)基中，接種量為0. IgMim 基，，在溫度27°C，光照強(qiáng)度2000LUX條件下進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基的組成為，1/2MS+NAA Img r1+蔗糖30g r1+活性炭Ig r1+香蕉ioog r1。2個(gè)月后選取的是生有2 3條根、葉片數(shù)為2 3個(gè)的蝴蝶蘭組培苗進(jìn)行出瓶移栽。實(shí)施例2選取正在開(kāi)花中的蝴蝶蘭成熟母株“巨寶紅玫瑰”的花梗作為外植體，用洗衣粉水清洗一下，然后放在流水下沖洗30 40分鐘，在超凈工作臺(tái)上將沖洗好的花梗剪切成5cm 長(zhǎng)的小段，每段帶有一個(gè)腋芽，將腋芽上的苞片剝?nèi)?，首先?5wt%的酒精溶液中浸一下， 用濾紙吸干酒精，然后放入0. Iwt %濃度的升汞溶液中殺菌10分鐘,最后用無(wú)菌水沖洗3 4遍，用濾紙吸干水放在培養(yǎng)皿中。
將花梗兩側(cè)各切下0.5cm，然后芽點(diǎn)向上斜插接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，接種量為
0.2g/ml##s，，在溫度27°C，光照強(qiáng)度3000LUX的條件下培養(yǎng)40天，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為，花寶 I 號(hào) 3. 5g F^BA 3mg F1+NAA 0. 2mg r1+鹿糖 30g r1+香蕉 30g F10 每個(gè)芽點(diǎn)能誘導(dǎo)I株苗，極少數(shù)能誘導(dǎo)出2株苗。將誘導(dǎo)出的芽從花梗段上切下，2個(gè)芽的不用切開(kāi)，連在一起接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，接種量為0. lg/ml##s，，在溫度為25°C，光照強(qiáng)度3000Lux的條件下進(jìn)行繼代培養(yǎng)，繼代周期為40天，叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為，1/2MS+BA 0. Img F1+蔗糖20g F10將繼代9代的芽切分成獨(dú)立的單株，接種在生根培養(yǎng)基中，接種量為0. 2g/ml # 養(yǎng)基，，在溫度為25°C，光照強(qiáng)度2000LUX的條件下進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基的組成為， 1/2MS+NAA 0. 5mg I—1+ 蔗糖 20g I—1+ 活性炭 Ig I—1+ 香蕉 200g .I-1。3 個(gè)月后選取的是生有2 3條根、葉片數(shù)為2 3個(gè)的蝴蝶蘭組培苗進(jìn)行出瓶移栽實(shí)施例3選取花苞完全開(kāi)放的蝴蝶蘭成熟母株“紅太子”的花梗作為外植體，用洗衣粉水清洗一下，然后放在流水下沖洗30 40分鐘，在超凈工作臺(tái)上將沖洗好的花梗剪切成5cm長(zhǎng)的小段，每段帶有一個(gè)腋芽，將腋芽上的苞片剝?nèi)?，首先?5wt %的酒精溶液中浸一下，用濾紙吸干酒精，然后放入0. lwt%&度的升汞溶液中殺菌12分鐘，最后用無(wú)菌水沖洗3 4 遍,用濾紙吸干水放在培養(yǎng)皿中。將花梗兩側(cè)各切下0.5cm，然后芽點(diǎn)向上斜插接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，接種量為
0.lg/ml##s，，在溫度23°C，光照強(qiáng)度3000LUX的條件下培養(yǎng)30天，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為，花寶 I 號(hào) 2. 5g F^BA 2mg F1+NAA 0. 3mg r1+鹿糖 20g r1+香蕉 30g F10 每個(gè)芽點(diǎn)能誘導(dǎo)I株苗，極少數(shù)能誘導(dǎo)出2株苗。將誘導(dǎo)出的芽從花梗段上切下，2個(gè)芽的不用切開(kāi)，連在一起接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，接種量為0. 2g/ml##s，，在溫度為25°C，光照強(qiáng)度3000LUX的條件下進(jìn)行繼代培養(yǎng)，繼代周期為50天，叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為，1/2MS+BA 0. 3mg r1+蔗糖 30g I 1O將繼代9代的芽切分成獨(dú)立的單株，接種在生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，接種量為0. lg/ml ，在溫度為27°C，光照強(qiáng)度3000LUX的條件下進(jìn)行繼代培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基的組成為，花寶 I 號(hào) 3. 5g F'+NAAO. 2mg I—1+ 蔗糖 30g I—1+ 活性炭 Ig I—1+ 香蕉 200g I-1。 3個(gè)月后選取的是生有2 3條根、葉片數(shù)為2 3個(gè)的蝴蝶蘭組培苗進(jìn)行出瓶移栽。實(shí)施例4選取花苞已凋謝的蝴蝶蘭成熟母株“紅龍”的花梗作為外植體，用洗衣粉水清洗一下，然后放在流水下沖洗30 40分鐘，在超凈工作臺(tái)上將沖洗好的花梗剪切成5cm長(zhǎng)的小段，每段帶有一個(gè)腋芽，將腋芽上的苞片剝?nèi)?，首先?5wt%的酒精溶液中浸一下，用濾紙吸干酒精，然后放入0. lwt%濃度的升汞溶液中殺菌15分鐘，最后用無(wú)菌水沖洗3 4遍， 用濾紙吸干水放在培養(yǎng)皿中。將花梗兩側(cè)各切下0. 5cm，然后芽點(diǎn)向上斜插接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。接種量為
0.lg/ml##s，，在溫度27°C，光照強(qiáng)度3000LUX的條件下培養(yǎng)40天，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為，1/3MS+BA Img F'+NAA 0. 3mg I—1+ 蔗糖 20g I—1+ 香蕉 50g I-1。每個(gè)芽點(diǎn)能誘導(dǎo) I 株苗，極少數(shù)能誘導(dǎo)出2株苗。
將誘導(dǎo)出的芽從花梗段上切下，2個(gè)芽的不用切開(kāi)，連在一起接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)。接種量為0. lg/ml##s，，在溫度27°C，光照強(qiáng)度3000LUX的條件下進(jìn)行繼代培養(yǎng)，繼代周期為50天，叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為，1/2MS+BA 0. 2mg r1+蔗糖 30g I 1O 將繼代9代的芽切分成獨(dú)立的單株，接種在生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，接種量為0. lg/ml ，在溫度27°C，光照強(qiáng)度2000條件下進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基的組成為， 花寶I號(hào)2.5g r1+蔗糖30g r1+活性炭2g r1+香蕉ioog r1。3個(gè)月后選取的是生有2 3條根、葉片數(shù)為2 3個(gè)的蝴蝶蘭組培苗進(jìn)行出瓶移栽。實(shí)施例中的“千惠玫瑰”、“巨寶紅玫瑰”、“紅太子”、“紅龍”購(gòu)自中鼎生物科技(上海)有限公司。
權(quán)利要求
1.一種蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖方法，其特征在于，以蝴蝶蘭花梗腋芽作為外植體，接種到培養(yǎng)基中進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，接著將誘導(dǎo)出的新芽依次進(jìn)行繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和移栽培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖方法，其特征在于，具體的培養(yǎng)步驟為，(1)將蝴蝶蘭花梗帶花苞的部分剪掉，其它部分清洗后進(jìn)行殺菌處理；殺菌后，將花梗的芽點(diǎn)向上斜插接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，接種量為0. I 0. 2g/ml##s，在溫度23 27°C， 光照強(qiáng)度2000 3000Lux的條件下培養(yǎng)30 40天；(2)將步驟(I)誘導(dǎo)出的芽從花梗段上切下，2 3株為一組，接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，接種量為0. I 0. 2g/ml##基，在溫度23 27°C，光照強(qiáng)度2000 3000Lux的條件下培養(yǎng)，繼代周期為40 50天；(3)將繼代9代的芽切分成獨(dú)立的單株，接種在生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，接種量為 0. I 0. 2g/ml ■基，在溫度23 27°C，光照強(qiáng)度2000 3000Lux的條件下培養(yǎng)，2 3個(gè)月后即可出瓶移栽。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖方法，其特征在于，步驟(I)中所述的蝴蝶蘭花梗為已有花苞未開(kāi)花、開(kāi)花中或花朵已凋謝的蝴蝶蘭的花梗。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖方法，其特征在于，步驟(I)中所述的殺菌處理步驟為，在超凈工作臺(tái)上，將沖洗好的花梗剪切成5cm長(zhǎng)的小段，每段帶有一個(gè)腋芽，將腋芽上的苞片剝?nèi)?，首先?5wt%的酒精溶液中浸一下，用濾紙吸干酒精，然后放入 0. lwt%&度的升萊溶液中殺菌8 15分鐘,最后用無(wú)菌水沖洗3 4遍,用濾紙吸干水放在培養(yǎng)皿中備用。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖方法，其特征在于，步驟(I)中所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為，1/3MS或花寶I號(hào)2. 5 3. 5g F'+BA I 3mg F'+NAA 0. I 0. 3mg .I1+ 鹿糖 20 30g .I1+ 香蕉 30 50g I、
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖方法，其特征在于，步驟(2)中所述的叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為，1/2MS+BA 0. I 0. 5mg I—1+蔗糖20 30g I-1。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖方法，其特征在于，步驟(3)中所述的生根培養(yǎng)基的組成為，1/2MS或花寶I號(hào)2. 5 3. 5g .r1+NAA 0 Img .r1+蔗糖20 30g .r1+ 活性炭I 2g r1+香蕉loo 200g r1。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖方法，其特征在于，步驟(3)中所述的出瓶移栽選取的是生有2 3條根、葉片數(shù)為2 3個(gè)的蝴蝶蘭組培苗。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種洋蘭的無(wú)性繁殖方法，特別是蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖方法。本發(fā)明提供了一種蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖方法。以蝴蝶蘭花梗腋芽作為外植體，接種到培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，接著將誘導(dǎo)出的新芽依次進(jìn)行繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和移栽培養(yǎng)。本發(fā)明使蝴蝶蘭在人工配制的培養(yǎng)基中實(shí)現(xiàn)分蘗，打破了蝴蝶蘭單莖性的生殖特點(diǎn)，此方法不用傷害蝴蝶蘭母株即可得到用來(lái)誘導(dǎo)的花梗苗，而且可以反復(fù)使用同一母株的花梗。本發(fā)明生產(chǎn)出的種苗健壯、整齊一致，可以解決生產(chǎn)上優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭種苗的來(lái)源問(wèn)題，可以創(chuàng)造更大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102613076SQ20121008107
公開(kāi)日2012年8月1日 申請(qǐng)日期2012年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月26日
發(fā)明者印東生, 吳海紅, 姚園媛, 屈連偉, 崔玥晗, 李丹, 楊佳明, 潘百濤, 王茹, 胡新穎, 蘇勝舉, 趙興華, 邢桂梅 申請(qǐng)人:吳海紅