專利名稱：腫瘤化療藥物敏感預測試劑配制方法及試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種藥物敏感性預測試劑，特別涉及一種治療惡性腫瘤的化療藥物敏感性預測試劑的配制方法，以及由此方法制成的試劑盒。
目前，化療仍是治療各種惡性腫瘤的主要手段之一。由于腫瘤類型不同，甚至同一類型腫瘤在不同個體上的化療效果也存在著較大差異，因而僅憑臨床經驗選擇化療藥物就帶有相當大的盲目性，不能對某一具體的惡性腫瘤有針對性地施以某種化療藥物進行治療。據統(tǒng)計，在臨床中，具體的惡性腫瘤與化療藥物選定的符合率很低，即與臨床符合率很低，只有14%。這樣，無針對性的化療藥物注入人體內不僅不能有效地控制腫瘤細胞的生長，而且還能導致人體腫瘤細胞對化療藥物產生抗藥性，給以后的治療埋下難以克服的隱患。
因此，在臨床化療之前，對化療藥物的敏感性、抗藥性進行預測，選擇針對性較強的個體化治療的敏感化療藥物，就成為治療惡性腫瘤的關鍵。這種做法不僅可以提高化療效果，而且可以避免抗藥性及藥物副作用。
自六十年代開展腫瘤化療藥物敏感性預測以來，逐漸發(fā)展成體內、體外兩大系列化療藥物敏感性檢測方法，與臨床符合率達70%以上，效果不錯。但這種方法存在著對實驗條件要求高、檢測周期長、操作復雜、成本高、體積大及不方便，因而無法在臨床實踐中大量推廣使用。
本發(fā)明的目的就是要克服上述缺陷，設計一種采用密閉式培養(yǎng)體系，直接觀察腫瘤細胞基因轉錄水平變化，確定藥物對細胞的影響。
本發(fā)明的技術方案選用RPMI1640培養(yǎng)基，免除CO2培養(yǎng)箱，應用AgNOR技術檢測細胞核內基因轉錄水平變化(1)取300-400m.l三蒸水加入中性容器中;
(2)加入5-6g RPMI1640培養(yǎng)基粉;
(3)加入青鏈霉素、慶大霉素各5萬單位/500ml培養(yǎng)液;
(4)加入0.8-1.2g HEPES;
(5)加入95-105ml滅活小牛血清，混勻;
(6)滴加0.5mol/l NaOH，至PH值為7.0-7.4;
(7)抽濾、除菌;
試劑盒內裝試劑瓶、檢測液瓶、腫瘤標本瓶、若干個藥物標本瓶。
本發(fā)明的優(yōu)點和效果在于由于不需CO2培養(yǎng)箱，故對實驗條件要求相對降低，體積也變小了;同時由于加入HEPES緩沖劑，使腫瘤細胞生長順利，采用AgNOR技術直接觀察細胞核內基因轉錄水平變化，因而檢測周期短，最長只需48小時，操作也簡單，成本也大為降低，與臨床符合率高，達80%以上。
具體實施例方式(1)取350ml三蒸水加入到1000ml中性容器中;
(2)加入5.2gRPMI1640培養(yǎng)基粉;
(3)加入青鏈霉素、慶大霉素各5萬單位/500ml培養(yǎng)液;
(4)加入1gHEPES;
(5)將100ml小牛血清置于67℃水洛鍋中滅活30分鐘，然后加入到上述中性容器中，混合均勻;
(6)滴加0.5mol/l NaOH，調節(jié)PH值為7.2-7.4;
(7)抽濾、除菌。
將上述試劑培養(yǎng)液20ml無菌注入30ml試劑瓶，放在試劑盒內;試劑盒內再放置檢測液瓶銀染液、顯影液;取5ml容量瓶加入試劑培養(yǎng)液2ml，作腫瘤標本瓶也放置在試劑盒內，按現在普遍使用的8種化療藥物制作8個化療藥物標本瓶，其內分別含有0.5mgrcR、10mgAdR、25mgmts、25mgrp16-213、150mg(5-Fr)、2mgmme、7.5mgPDD、2.5mg平陽霉素，并被分別放置在試劑盒內。
使用時，先將腫瘤組織置于試劑盒中的腫瘤標本瓶中，同時取病人血5ml放入血樣瓶中，在無菌操作臺上，將腫瘤標本放入消毒培養(yǎng)器皿中，吸入試劑培養(yǎng)液，剪碎標本，用吸管吹打已剪碎的標本，將細胞懸液吸回培養(yǎng)液(試劑)瓶中，再將細胞懸液按每瓶1ml均勻注入8種化療藥物標本瓶中，搖勻、加蓋，用消毒注射器將瓶中的空氣吸出，置于37℃，培養(yǎng)40-48小時。過后分別滴于玻片上，加銀染液、顯影液數滴，混勻復蓋細胞表面，37℃、避光20分鐘，用水沖洗染色液，待干燥。
計數均值下降率＝ (對照組平均顆粒數-加藥組平均顆粒數)/(對照組平均顆粒數) ×100%下降率≥50%為敏感，30-50%為中度敏感;＜30%為耐藥。從而可選擇下降率較大的化療藥物治療腫瘤，以取得最佳療效。
如果有新的化療藥物發(fā)明并用于臨床，則化療藥物標本瓶可相應增加。
權利要求
1.腫瘤化療藥物敏感預測試劑配制方法，其特征在于選用RPMI1640培養(yǎng)基，免除CO2培養(yǎng)箱，應用AgNOR技術檢測細胞核內基因轉錄水平變化(1)取300-400ml三蒸水加入中性容器中；(2)加入5-6g RPMI1640培養(yǎng)基粉；(3)加入青鏈霉素、慶大霉素各5萬單位/500ml培養(yǎng)液；(4)加入0.8-1.2g HEPES；(5)加入95-105ml滅活小牛血清，混勻；(6)滴加0.5mol/l NaOH，至PH值為7.0-7.4；(7)抽濾、除菌；
2.根據權利要求1所述的腫瘤化療藥物敏感預測試劑配制方法，其特征在于使用小牛血清前，將其置于50-60℃水洛鍋中滅活30-40分鐘。
3.上述配制方法生產的試劑盒，其特征在于內裝試劑瓶、檢測液瓶、腫瘤標本瓶、若干個化療藥物標本瓶。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藥物敏感性預測試劑，特別涉及一種治療惡性腫瘤的化療藥物敏感性預測試劑的配制方法，以及由此方法制成的試劑盒。本發(fā)明選有RPMI1640培養(yǎng)基，免除了CO
文檔編號C12Q1/04GK1096542SQ9311155
公開日1994年12月21日 申請日期1993年6月18日 優(yōu)先權日1993年6月18日
發(fā)明者田富榮, 徐榮臻 申請人:泰興市長江精細化工廠