專利名稱：：菌落總數(shù)檢測(cè)膠膜及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及菌落總數(shù)檢測(cè)膠膜及制備方法。菌落總數(shù)是檢測(cè)食品、物體表面、化妝品、餐具及水等被細(xì)菌污染程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)。既往國(guó)際上通用平皿傾注法，但此法費(fèi)工、費(fèi)料、操作繁瑣，基層實(shí)驗(yàn)室不易推廣。近些年國(guó)內(nèi)外都在研究快速簡(jiǎn)易檢測(cè)手段。美國(guó)在1989年4月印出的“菌落總數(shù)說(shuō)明書(shū)”中介紹了一種菌落總數(shù)檢驗(yàn)卡，可檢驗(yàn)水和空氣的菌落總數(shù)。日本89年《技術(shù)講座》中所載“定量細(xì)菌檢驗(yàn)法綜述”VOL17.No6.P536記載了一種檢驗(yàn)菌落總數(shù)的スタンブ法，可檢測(cè)手指、床、壁面的污染。國(guó)內(nèi)于1986年在醫(yī)學(xué)科學(xué)院專家指導(dǎo)下，重慶第二衛(wèi)生防疫站研制了水和水樣樣品菌落總數(shù)檢測(cè)器;天津市環(huán)保局研制了飲用水檢驗(yàn)卡，這兩種產(chǎn)品都只限于水和水樣樣品的檢驗(yàn)。國(guó)內(nèi)外類似產(chǎn)品水的檢測(cè)器，從研究思想分析，都是利用微生物學(xué)慣用的除菌濾膜做載體，下層放營(yíng)養(yǎng)墊，外面套以?？颍贸鸀V膜孔徑小，把細(xì)菌堵留在膜面上。如果利用除菌濾膜做載體，由于孔隙太小，水分子通過(guò)都很困難，必然的只可供給檢驗(yàn)水。從上所述可看出這些現(xiàn)有技術(shù)檢測(cè)范圍是局限的，而且工藝麻煩，準(zhǔn)確性差，成本高。本發(fā)明的目的在于提供一種目前國(guó)內(nèi)外尚未解決的多功能的菌落總數(shù)檢測(cè)膠膜及制備方法，簡(jiǎn)化測(cè)試工序，擴(kuò)大檢測(cè)范圍。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是菌落總數(shù)檢測(cè)膠膜的制備方法，按下列步驟制成a、取蛋白胨20克，酵母浸膏1克，可溶性淀粉3克、氯化鈉5克、磷酸氫二鉀2.6克、胱氨酸0.13克、明膠5克、瓊脂5克、肉浸液400毫升，肝心浸液100毫升、加蒸餾水至1000毫升，加熱溶化調(diào)PH至7.4，經(jīng)15磅壓力下滅菌15分鐘為營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ，b、取葡萄糖3克加入血消化液200毫升中為營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ。c、大孔徑玻璃纖維紙做載體放入90℃熱營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中浸透，然后再浸于60℃營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ，取出后噴灑氯化三苯基四氮唑和中性紅，低溫烘干，裝袋，以鈷60100～250萬(wàn)拉德劑量照射即可。本發(fā)明的方法蛋白胨取胰胨5克、多胨10克、大豆胨5克、肝心浸液取肝浸液20毫升，心浸液80毫升。本發(fā)明的產(chǎn)品分析外環(huán)境各類細(xì)菌不同營(yíng)養(yǎng)要求而選擇了營(yíng)養(yǎng)劑蛋白胨，可溶性淀粉，肝心浸液、酵母、葡萄糖，選擇了填充劑和吸附劑明膠及瓊脂。這是膠膜的基礎(chǔ)成份，它使細(xì)菌被吸附在膜上生長(zhǎng)，由此制成的膜通透性和分散性好，可以接受大顆粒樣品的檢驗(yàn)。本發(fā)明的產(chǎn)品采用了復(fù)合指示劑氯化三苯基四氮唑和中性紅，它保證一般條件下無(wú)色，只有細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)使菌落顯色。本發(fā)明的產(chǎn)品尋找了指示劑的增強(qiáng)劑胱氨酸、血消化液、肝心浸液，該增強(qiáng)劑不僅增強(qiáng)指示劑的色度，同時(shí)對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)有促進(jìn)作用。菌落總數(shù)的判定，必須在24小時(shí)進(jìn)行，可是，一部分細(xì)菌在24小時(shí)以后在膠膜上才逐漸顯示出來(lái)。加入生長(zhǎng)促進(jìn)因子血消化液，使這部分細(xì)菌在16小時(shí)就能生長(zhǎng)。本發(fā)明產(chǎn)品的氯化鈉及磷酸氫二鉀起緩沖作用，保證細(xì)菌平衡不受損傷。本發(fā)明的菌落總數(shù)檢測(cè)膠膜具有以下優(yōu)點(diǎn)1、本產(chǎn)品膠膜通水性好，樣品在膜面上能迅速擴(kuò)散，這種特性使得帶渣子的樣品也能夠檢驗(yàn)，故適用于多種檢樣，即對(duì)食品、化妝品、餐具、物體表面、水等都可檢測(cè)，從而檢驗(yàn)范圍比以往檢驗(yàn)水的產(chǎn)品檢驗(yàn)量大20～30倍。2、與美國(guó)的檢驗(yàn)卡、天津檢驗(yàn)卡、重慶檢測(cè)器相比，使用方便，加樣準(zhǔn)確，面額大(美國(guó)的產(chǎn)品只有1.5cm2，天津產(chǎn)品7cm2，重慶產(chǎn)品10cm2、本產(chǎn)品48cm2)，可容納2000個(gè)細(xì)菌均勻生長(zhǎng)。3、與平板傾注法相比，可免去玻璃器材的購(gòu)置，儲(chǔ)存、刷洗、滅菌、器材破損消耗、溶化傾倒平板，免去培養(yǎng)基原料的購(gòu)置、儲(chǔ)存及制作，故簡(jiǎn)化測(cè)試工序，使用方便，而且菌落呈紅色，易于辨認(rèn)，計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，又能減少眼肌疲勞。4、本發(fā)明的產(chǎn)品在室溫保存可使用半年，便于運(yùn)輸，檢測(cè)后可置冰箱內(nèi)半年，便于監(jiān)督部門(mén)定期核查，它與大腸菌群檢測(cè)紙片配套使用，極大地方便食品，環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)督部門(mén)對(duì)基層化驗(yàn)室工作質(zhì)量的監(jiān)督管理，為實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品批批檢驗(yàn)合格出廠創(chuàng)造條件。結(jié)合實(shí)例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)解決方案。本發(fā)明的方法按以下步驟操作1、肉、心、肝浸液的制備取1000克去脂碎牛肉或心、肝加入2000毫升水在冰箱冷浸15小時(shí)后煮沸1小時(shí)制成。2、血消化液的制備取牛血1000毫升，加入蒸餾水1000毫升煮沸15分，冷卻至40℃加入碳酸鈉調(diào)PH值8.5，再加胰酶60毫升，在37℃溫度下放置48小時(shí)，經(jīng)蛋白胨定性試驗(yàn)陰性，停止消化，濾過(guò)，在冰箱里保存?zhèn)溆谩?、取胰胨5克，多胨10克、大豆胨5克、酵母浸膏1克、可溶性淀粉3克、氯化鈉5克、磷酸氫二鉀2.6克、胱氨酸0.13克，明膠5克、瓊脂5克、肉浸液400毫升、肝浸液20毫升、心浸液80毫升，加蒸餾水至1000毫升，加熱溶化調(diào)PH至7.4，經(jīng)15磅壓力下滅菌15分鐘為營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ。4、取葡萄糖3克加入血消化液200毫升，為營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ。5、取浙江省杭州市新華造紙廠產(chǎn)的大孔徑玻璃纖維紙做載體放入90℃熱營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中浸透，然后再浸于60℃營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ，取出后噴灑氯化三苯基四氮唑和中性紅，在40℃溫度下烘干，裝袋，以鈷60100～250萬(wàn)拉德劑量照射即可。本發(fā)明產(chǎn)品的使用方法樣品按常規(guī)處理后，每個(gè)稀釋度用兩張膠膜，各加1毫升樣品，樣品滲透后取出，置37℃溫度條件下培養(yǎng)18～24小時(shí)，查膠膜上的紅色菌落，按常規(guī)法計(jì)數(shù)報(bào)告。應(yīng)用實(shí)例一、送檢單位哈爾濱市衛(wèi)生防疫站考核單位中國(guó)科學(xué)院微生物研究所二、送檢日期一九八八年八月，一九八九年三月三、送檢目的(一)各類菌能否在膠膜上生長(zhǎng)(二)膠膜法與平皿傾注法在反映菌落數(shù)量上有否差異。四、方法(一)測(cè)定菌株1、365大腸埃希氏菌2、89金黃色葡萄球菌3、31普通變形菌4、8821-1地衣芽胞桿菌5、8816短小芽胞桿菌6、8840，8514銅綠假單胞菌7、595糞鏈球菌8、8801假絲酵母9、396炭黑曲霉(二)步驟1、菌懸液配制挑取一小環(huán)24小時(shí)的斜面培養(yǎng)物，均勻懸浮于10毫升無(wú)菌生理鹽水中，以100倍依次稀釋到十萬(wàn)分之一。2、培養(yǎng)選擇合適濃度，分別取1毫升加至膠膜，在37℃培養(yǎng)48小時(shí)。3、計(jì)數(shù)對(duì)紙片上的紅點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)。五、結(jié)果(一)各類菌的生長(zhǎng)試驗(yàn)?zāi)z膜可支持所測(cè)定菌類的生長(zhǎng)，詳見(jiàn)表一。表一各類菌的生長(zhǎng)測(cè)定</tables>(二)膠膜法與平皿法的比較膠膜法和平皿法稍有差異，見(jiàn)表2。表二膠膜法與平板法的比較</tables>六、結(jié)論(一)所測(cè)定的細(xì)菌、酵母及曲霉在膠膜上均能生長(zhǎng)，膠膜營(yíng)養(yǎng)可支持多種菌類生長(zhǎng)，應(yīng)用范圍也可隨之?dāng)U大。(二)從表二可見(jiàn)，膠膜法計(jì)數(shù)稍低于平皿法，二者計(jì)數(shù)誤差在同一數(shù)量級(jí)上。(三)所顯示的紅色菌落邊緣清晰，甚至對(duì)易擴(kuò)散的變形菌群也能看到清楚的單個(gè)菌落，便于計(jì)數(shù)。權(quán)利要求1.一種菌落總數(shù)檢測(cè)膠膜的制備方法，其特征在于采用下列方法制成，a、取蛋白胨20克，酵母浸膏1克，可溶性淀粉3克、氯化鈉5克、磷酸氫二鉀2.6克、胱氨酸0.13克、明膠5克、瓊脂5克、肉浸液400毫升、肝心浸液100毫升，加蒸餾水至1000毫升，加熱溶化調(diào)PH至7.4，經(jīng)15磅壓力下滅菌15分鐘為營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ，b、取葡萄糖3克加入血消化液200毫升中為營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ，c、大孔徑玻璃纖維紙做載體放入90℃熱營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中浸透，然后再浸于60℃營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ，取出后噴灑氯化三苯基四氮唑和中性紅，低溫烘干，裝袋，以鈷60100～250萬(wàn)拉德劑量照射即可。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于蛋白胨取胰胨5克、多胨10克、大豆胨5克。3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于肝心浸液取肝浸液20毫升、心浸液80毫升。4.一種菌落總數(shù)檢測(cè)膠膜，其特征在于采用權(quán)利要求1的方法制備的產(chǎn)品。全文摘要一種菌落總數(shù)檢測(cè)膠膜及其制備方法，采用大孔徑玻璃纖維做載體，熱浸于蛋白胨、酵母浸膏、可溶性淀粉、胱氨酸、明膠、瓊脂、肉浸液、肝心浸液等配成的營(yíng)養(yǎng)液，然后再浸于葡萄糖、血消化液制成的營(yíng)養(yǎng)液，取出后噴灑氯化三苯基四氮唑和中性紅，低溫烘干而制成，該膠膜可檢測(cè)食品、化妝品、餐具、物體表面、水等的菌落總數(shù)，檢測(cè)范圍寬、檢測(cè)工序簡(jiǎn)單。文檔編號(hào)C12Q1/04GK1051758SQ9010839公開(kāi)日1991年5月29日申請(qǐng)日期1990年10月13日優(yōu)先權(quán)日1990年10月13日發(fā)明者張瀾,徐迪誠(chéng),姜遠(yuǎn)珠申請(qǐng)人:哈爾濱市衛(wèi)生防疫站