本發(fā)明涉及生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種枯草芽孢桿菌、脫霉劑及脫霉劑的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：霉菌毒素(mycotoxins)主要是指霉菌或其它真菌產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物，它們可通過(guò)飼料或食品進(jìn)入人和動(dòng)物的體內(nèi)，引起人和動(dòng)物的急性或慢性中毒。目前危害谷物飼料的主要有六大霉菌毒素包括：黃曲霉毒素、嘔吐毒素、煙曲霉毒素、赭曲霉毒素、t2毒素和玉米赤霉烯酮。與傳統(tǒng)的物理和化學(xué)脫霉方法相比，生物脫霉法不會(huì)破壞飼料的營(yíng)養(yǎng)成分，也不會(huì)影響飼料的品質(zhì)，生物脫霉法為霉菌毒素的脫霉提供了新的發(fā)展方向?，F(xiàn)有的生物脫霉法去除霉菌毒素的具體方法為：采用篩選分離出具有降解霉菌毒素功能的菌株，通過(guò)菌株吸附霉菌毒素。但是，目前篩選分離出的菌株吸附效果不佳。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決現(xiàn)有技術(shù)中篩選分離出的菌株吸附效果不佳的問(wèn)題，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種枯草芽孢桿菌、脫霉劑及脫霉劑的應(yīng)用。所述技術(shù)方案如下：一方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種枯草芽孢桿菌，所述枯草芽孢桿菌于2017年5月2日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctccno:m2017230。具體地，所述保藏編號(hào)為cctccno:m2017230的枯草芽孢桿菌的16srdna序列如序列表中seqinno:1所示。另一方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種脫霉劑，所述脫霉劑包括：上述枯草芽孢桿菌。具體地，所述脫霉劑還包括：蒙脫石、酵母細(xì)胞壁、乳酸菌和維生素e，所述蒙脫石、所述酵母細(xì)胞壁、所述乳酸菌、所述維生素e和所述枯草芽孢桿菌的重量份分別為：33～43份、21～28份、11～16份、5～10份和10～20份，所述乳酸菌為屎腸球菌。具體地，所述蒙脫石為納米級(jí)蒙脫石。該納米級(jí)蒙脫石能夠提高脫霉劑的吸附效率。進(jìn)一步地，所述蒙脫石、所述酵母細(xì)胞壁、所述乳酸菌、所述維生素e和所述枯草芽孢桿菌的重量份分別為：40份、25份、15份、10份和10份。優(yōu)選地，所述蒙脫石、所述酵母細(xì)胞壁、所述乳酸菌、所述維生素e和所述枯草芽孢桿菌的重量份分別為：43份、21份、16份、5份和15份。優(yōu)選地，所述蒙脫石、所述酵母細(xì)胞壁、所述乳酸菌、所述維生素e和所述枯草芽孢桿菌的重量份分別為：33份、28份、12份、7份和20份。優(yōu)選地，所述蒙脫石、所述酵母細(xì)胞壁、所述乳酸菌、所述維生素e和所述枯草芽孢桿菌的重量份分別為：37份、26份、11份、8份和18份。又一方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種上述脫霉劑在降解霉菌毒素中的應(yīng)用，所述應(yīng)用包括：將所述脫霉劑按照質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％～2％添加到飼料中。具體地，將所述脫霉劑按照質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％添加到飼料中。具體地，所述霉菌毒素包括玉米赤霉烯酮、黃曲霉毒素和嘔吐毒素中的至少一種。本發(fā)明實(shí)施例提供的技術(shù)方案帶來(lái)的有益效果是：(1)本發(fā)明實(shí)施例提供的枯草芽胞桿菌針對(duì)玉米赤霉烯酮、黃曲霉毒素和嘔吐毒素中具有良好的吸附性能，對(duì)玉米赤霉烯酮、黃曲霉毒素和嘔吐毒素中的脫霉能力強(qiáng)。特別地，該枯草芽孢桿菌的生物代謝的胞外產(chǎn)物能夠高效降解嘔吐毒素，在生物體內(nèi)的消化道中能夠?qū)I吐毒素降解為無(wú)毒的分子片段，且降解過(guò)程不產(chǎn)生毒副作用。(2)本發(fā)明實(shí)施例提供的脫霉劑具有良好的吸附性能、抑菌和殺菌的功能，可提高動(dòng)物的繁殖性能，提高仔豬的生長(zhǎng)性能，并具有對(duì)抗體效價(jià)的保護(hù)作用。其中，該脫霉劑通過(guò)物理吸附和生物吸附相結(jié)合使得該脫霉劑具有良好的脫霉效果。具體而言，該脫霉劑通過(guò)蒙脫石進(jìn)行物理吸附，蒙脫石層間距離較大，這使得蒙脫石具有最佳的陽(yáng)離子交換平衡性，從而使脫霉劑既能夠?qū)w積較大的霉菌毒素具有良好的吸附性能，如玉米赤霉烯酮，又能夠?qū)O性較弱的霉菌毒素的能力具有較強(qiáng)的吸附性能，如嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮，脫霉劑利用枯草芽胞桿菌實(shí)現(xiàn)生物吸附，同時(shí)酵母細(xì)胞壁能夠結(jié)合霉菌毒素實(shí)現(xiàn)生物吸附，從而有效脫去飼料中的霉菌毒素。(3)本發(fā)明實(shí)施例提供的脫霉劑具有解毒護(hù)肝的益生功能，該脫霉劑能夠促進(jìn)超氧化物歧化酶、還原性谷胱甘肽等抗氧化物質(zhì)的產(chǎn)生，從而減少肝臟因霉菌毒素中毒而受到氧化損傷，進(jìn)而減少脂肪肝的發(fā)生，保護(hù)肝臟細(xì)胞免受自由基損傷。附圖說(shuō)明為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。圖1是本發(fā)明實(shí)施例四提供的對(duì)照組與脫霉劑組的對(duì)比圖，圖中左側(cè)為對(duì)照組，右側(cè)為脫霉劑組；圖2是本發(fā)明實(shí)施例四提供的培養(yǎng)有大腸桿菌k88的培養(yǎng)基的抑菌圈結(jié)果圖；圖3是本發(fā)明實(shí)施例四提供的培養(yǎng)有大腸桿菌k99的培養(yǎng)基的抑菌圈結(jié)果圖；圖4是本發(fā)明實(shí)施例四提供的培養(yǎng)有大腸桿菌o157的培養(yǎng)基的抑菌圈結(jié)果圖；圖5是本發(fā)明實(shí)施例四提供的培養(yǎng)有大腸桿菌o139的培養(yǎng)基的抑菌圈結(jié)果圖；圖6是本發(fā)明實(shí)施例四提供的培養(yǎng)有金葡萄球菌的培養(yǎng)基的抑菌圈結(jié)果圖；圖7是本發(fā)明實(shí)施例四提供的培養(yǎng)有沙門(mén)氏菌的培養(yǎng)基的抑菌圈結(jié)果圖。本發(fā)明實(shí)施例提供的枯草芽孢桿菌tm02(bacillussubtilistm02)于2017年5月2日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctccno：m2017230，保藏單位地址為中國(guó)湖北省武漢市珞珈山武漢大學(xué)。具體實(shí)施方式為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明實(shí)施方式作進(jìn)一步地詳細(xì)描述。本實(shí)施例提供的蒙脫石來(lái)源于赤峰市恒潤(rùn)工貿(mào)有限公司，該公司提供的蒙脫石含量92％以上；酵母細(xì)胞壁來(lái)源于山東濰坊雅致生物有限公司，該公司提供酵母細(xì)胞壁的粗蛋白＜25％；乳酸菌來(lái)源于湖北華大瑞爾科技有限公司，該公司提供的乳酸菌大于30億cfu/g；維生素e來(lái)源于北京卓龍興業(yè)有限公司，該公司提供的維生素e的單位為2000iu。實(shí)施例一本發(fā)明實(shí)施例提供了一種脫霉劑，該脫霉劑包括：蒙脫石、酵母細(xì)胞壁、乳酸菌、維生素e和枯草芽孢桿菌tm02，蒙脫石、酵母細(xì)胞壁、乳酸菌、維生素e和枯草芽孢桿菌的重量份分別為：40份、25份、15份、10份和10份，具體地，蒙脫石、酵母細(xì)胞壁、乳酸菌、維生素e和枯草芽孢桿菌分別為40g、25g、15g、10g和10g。其中，枯草芽孢桿菌于2017年5月2日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctccno：m2017230，其16srdna序列如序列表中seqinno:1所示。其中，乳酸菌的來(lái)源為湖北華大瑞爾科技有限公司生產(chǎn)的屎腸球菌。蒙脫石為納米級(jí)蒙脫石，該納米級(jí)蒙脫石能夠提高脫霉劑的吸附效率。霉菌毒素包括玉米赤霉烯酮、黃曲霉毒素和嘔吐毒素中的至少一種。實(shí)施例二本發(fā)明實(shí)施例提供了一種脫霉劑，該脫霉劑包括：納米級(jí)蒙脫石、酵母細(xì)胞壁、乳酸菌、維生素e和枯草芽孢桿菌，納米級(jí)蒙脫石、酵母細(xì)胞壁、乳酸菌、維生素e和枯草芽孢桿菌的重量份分別為：43份、21份、16份、5份和15份。具體地，納米級(jí)蒙脫石、酵母細(xì)胞壁、乳酸菌、維生素e和枯草芽孢桿菌分別為43g、21g、16g、5g和15g。實(shí)施例三本發(fā)明實(shí)施例提供了一種脫霉劑，該脫霉劑包括：納米級(jí)蒙脫石、酵母細(xì)胞壁、乳酸菌、維生素e和枯草芽孢桿菌，納米級(jí)蒙脫石、酵母細(xì)胞壁、乳酸菌、維生素e和枯草芽孢桿菌的重量份分別為：33份、28份、12份、7份和20份。具體地，納米級(jí)蒙脫石、酵母細(xì)胞壁、乳酸菌、維生素e和枯草芽孢桿菌分別為33g、28g、12g、7g和20g。實(shí)施例四本發(fā)明實(shí)施例提供了一種脫霉劑，該脫霉劑包括：納米級(jí)蒙脫石、酵母細(xì)胞壁、乳酸菌、維生素e和枯草芽孢桿菌，納米級(jí)蒙脫石、酵母細(xì)胞壁、乳酸菌、維生素e和枯草芽孢桿菌的重量份分別為：37份、26份、11份、8份和18份。具體地，納米級(jí)蒙脫石、酵母細(xì)胞壁、乳酸菌、維生素e和枯草芽孢桿菌分別為37g、26g、11g、8g和18g。脫霉劑體外吸附性能測(cè)試在四個(gè)20ml帶塞離心管中，分別加入濃度為1μg/ml的zen(玉米赤霉烯酮)-pbs緩沖液中，向四個(gè)離心管中分別添加實(shí)施例一、二、三和四中所得的脫霉劑5mg，振蕩2h之后，離心10min，測(cè)定上清液中zen含量，計(jì)算脫霉率，篩選最佳脫霉劑。按下列公式計(jì)算吸附率y(％)：y＝100×(c0-c)/c0，其中：c0和c分別表示反應(yīng)前zen的濃度(mg/l)和反應(yīng)后zen的濃度(mg/l)。每個(gè)做3個(gè)平行樣，取平均值作為測(cè)定結(jié)果。根據(jù)吸附率的大小評(píng)價(jià)各脫霉劑對(duì)zen的體外吸附效果的優(yōu)劣，具體結(jié)果見(jiàn)表1。在四個(gè)20ml帶塞離心管中，分別加入濃度為5μg/ml的don(脫氧雪腐鐮刀菌烯醇)-pbs緩沖液中，向四個(gè)離心管中分別添加實(shí)施例一、二、三和四中所得的脫霉劑5mg，振蕩2h之后，離心10min，測(cè)定上清液中don含量，計(jì)算脫霉劑的吸附率，篩選最佳脫霉劑。按下列公式計(jì)算吸附率y(％)：y＝100×(c0-c)/c0，其中：c0和c分別表示反應(yīng)前don的濃度(mg/l)和反應(yīng)后don的濃度(mg/l)。每個(gè)做3個(gè)平行樣，取平均值作為測(cè)定結(jié)果。根據(jù)吸附率的大小評(píng)價(jià)各脫霉劑對(duì)don的體外吸附效果的優(yōu)劣，具體結(jié)果見(jiàn)表1。在四個(gè)20ml帶塞離心管中，分別加入濃度為0.1μg/ml的afb1(黃曲霉毒素b1)-pbs緩沖液中，向四個(gè)離心管中分別添加實(shí)施例一、二、三和四中所得的脫霉劑5mg，振蕩2h之后，離心10min，測(cè)定上清液中afb1含量，計(jì)算脫霉劑的吸附率，篩選最佳脫霉劑。按下列公式計(jì)算吸附率y(％)：y＝100×(c0-c)/c0，其中：c0和c分別表示反應(yīng)前afb1的濃度(mg/l)和反應(yīng)后afb1的濃度(mg/l)。每個(gè)做3個(gè)平行樣，取平均值作為測(cè)定結(jié)果。根據(jù)吸附率的大小評(píng)價(jià)各脫霉劑對(duì)afb1的體外吸附效果的優(yōu)劣，具體結(jié)果見(jiàn)表1。對(duì)照例一為0.01g納米級(jí)蒙脫石分別加入濃度為1μg/ml的zen(玉米赤霉烯酮)-pbs緩沖液、濃度為5μg/ml的don(脫氧雪腐鐮刀菌烯醇)-pbs緩沖液和濃度為0.1μg/ml的afb1(黃曲霉毒素b1)-pbs緩沖液中。對(duì)照例二為0.01g酵母細(xì)胞壁分別加入濃度為1μg/ml的zen(玉米赤霉烯酮)-pbs緩沖液、濃度為5μg/ml的don(脫氧雪腐鐮刀菌烯醇)-pbs緩沖液和濃度為0.1μg/ml的afb1(黃曲霉毒素b1)-pbs緩沖液中。對(duì)照例三為0.01g本發(fā)明實(shí)施例提供的枯草芽孢桿菌分別加入濃度為1μg/ml的zen(玉米赤霉烯酮)-pbs緩沖液、濃度為5μg/ml的don(脫氧雪腐鐮刀菌烯醇)-pbs緩沖液和濃度為0.1μg/ml的afb1(黃曲霉毒素b1)-pbs緩沖液中。表1為本發(fā)明四個(gè)實(shí)施例對(duì)zen、don和afb1的吸附率組別zendonafb1對(duì)照例一(蒙脫石)27.4％26.4％60.6％對(duì)照例二(酵母細(xì)胞壁)41.73％43.07％21.73％對(duì)照例三(枯草芽孢桿菌)15.5％57.7％25.5％實(shí)施例一48.6％44.1％90.2％實(shí)施例二60.4％34.2％94.1％實(shí)施例三78.3％64.8％93.3％實(shí)施例四72.3％45.5％87.3％由此可見(jiàn)，本發(fā)明實(shí)施例提供的脫霉劑的吸附率均較高，且當(dāng)枯草芽孢桿菌tm02含量豐富時(shí)能夠?qū)Ψ菢O性的don具有良好的吸附能力。脫霉劑對(duì)抗體效價(jià)的保護(hù)作用試驗(yàn)分3組，分別為對(duì)照組、霉變?nèi)占Z組和脫霉劑組，每組選用16頭豬，其中，8頭閹割公豬，8頭母豬，且每組試驗(yàn)做4個(gè)重復(fù)試驗(yàn)并取平均值，每組共取64頭豬。3組豬先喂養(yǎng)相同的未霉變的基礎(chǔ)日糧3天(預(yù)飼期)，然后再分別喂養(yǎng)35天(正式期)未霉變的基礎(chǔ)日糧、霉變?nèi)占Z(將未霉變的基礎(chǔ)日糧放在潮濕處，隨后測(cè)定其中霉菌毒素含量，確認(rèn)霉菌毒素超標(biāo)后用于試驗(yàn)。在本實(shí)施例中，選取將基礎(chǔ)日糧放置13天后霉變的霉變?nèi)占Z，經(jīng)測(cè)定該霉變?nèi)占Z中黃曲霉毒素的濃度為47ppb，嘔吐毒素的濃度為1500ppb，玉米赤霉烯酮的濃度為668ppb，并將該霉變?nèi)占Z用于試驗(yàn))和霉變?nèi)占Z+實(shí)施例一提供的脫霉劑。試驗(yàn)的35天可以具體從豬的28日齡開(kāi)始飼養(yǎng)到62日齡結(jié)束，飼喂試驗(yàn)的時(shí)間為仔豬保育階段，飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。表2為試驗(yàn)分組處理將表2中的三組分別進(jìn)行特異性抗體測(cè)定，具體方法如下：特異性抗體指標(biāo)包括豬瘟(hc)抗體，用相應(yīng)的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定抗體檢測(cè)試劑盒(由武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司提供)檢測(cè)豬疫苗免疫后機(jī)體抗體水平。具體操作按照酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定抗體檢測(cè)試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。表3為特異性抗體試驗(yàn)結(jié)果組別od630nm對(duì)照組一0.51±0.04對(duì)照組二0.33±0.07脫霉劑組0.48±0.04由表3可知，脫霉劑組的特異性抗體的數(shù)值明顯該與對(duì)照組二，并接近對(duì)照組二，可見(jiàn)本發(fā)明實(shí)施例提供的脫霉劑能夠使服用過(guò)脫霉劑的豬產(chǎn)生抗體，從而能有效降低飼料中霉菌毒素對(duì)豬的免疫系統(tǒng)的損傷，進(jìn)而提高疫苗的保護(hù)效力。脫霉劑對(duì)繁殖性能的影響試驗(yàn)對(duì)象：經(jīng)產(chǎn)的懷孕母豬(避免使用第一次懷孕的母豬)，且母豬懷孕的胎次在2-5次之間。試驗(yàn)分組：隨機(jī)分為2個(gè)組，分別為試驗(yàn)組和對(duì)照組，其中，試驗(yàn)組的母豬選取253頭，對(duì)照組母豬選取251頭，且每組做4個(gè)重復(fù)試驗(yàn)并取平均值。對(duì)照組喂基礎(chǔ)日糧。試驗(yàn)組基礎(chǔ)日糧+實(shí)施例一提供的脫霉劑，且脫霉劑按照質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％添加到基礎(chǔ)日糧中。試驗(yàn)組母豬產(chǎn)活仔為3163頭，對(duì)照組母豬產(chǎn)活仔為3037頭。分別對(duì)試驗(yàn)組和對(duì)照組的活仔進(jìn)行統(tǒng)計(jì)用于評(píng)估脫霉劑對(duì)繁殖性能的影響，結(jié)果見(jiàn)表4。表4為脫霉劑對(duì)繁殖性能的影響項(xiàng)目試驗(yàn)組(頭)對(duì)照組(頭)改善程度窩產(chǎn)活仔豬數(shù)12.512.1+0.4頭窩產(chǎn)弱仔數(shù)0.8971.175減少23.7％窩產(chǎn)健仔數(shù)11.610.9+0.7頭木乃伊數(shù)88153減少42.9％死胎數(shù)137220減少38.5％表4中改善程度表示：試驗(yàn)組相對(duì)于對(duì)照組的改善程度，計(jì)算時(shí)采用：(試驗(yàn)組-對(duì)照組)/對(duì)照組×100％。由表4可知，使用脫霉劑后可以提高懷孕母豬的生產(chǎn)健康仔豬的數(shù)量，利于母豬的繁殖性能，從而提高經(jīng)濟(jì)效益。同時(shí)，根據(jù)窩產(chǎn)死胎數(shù)/(活仔數(shù)+窩產(chǎn)死胎數(shù))計(jì)算試驗(yàn)組中窩產(chǎn)死胎率為4.15％，對(duì)照組中窩產(chǎn)死胎率為6.75％。試驗(yàn)組中窩產(chǎn)死胎率相比于對(duì)照組中窩產(chǎn)死胎率降低了2.6％?？梢?jiàn)使用脫霉劑后可以降低窩產(chǎn)死胎率。脫霉劑對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響試驗(yàn)對(duì)象：體況良好、體重相近的35日齡的斷奶仔豬300頭。試驗(yàn)分組：隨機(jī)分為2個(gè)組，分別為試驗(yàn)組和對(duì)照組，每組50頭，且每組做3個(gè)重復(fù)試驗(yàn)并取平均值。預(yù)飼期3天，正式期為25天。對(duì)照組喂基礎(chǔ)日糧(保育料)，試驗(yàn)組在每噸基礎(chǔ)日糧中添加1kg本實(shí)施例一提供的脫霉劑。表5為脫霉劑對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響由表5可知，試驗(yàn)組相比于對(duì)照組對(duì)仔豬的生長(zhǎng)性能均具有促進(jìn)作用，同時(shí)還能降低料肉比，可見(jiàn)使用脫霉劑可以提高仔豬生長(zhǎng)性能，降低料肉比，從而提高經(jīng)濟(jì)效益。脫霉劑的抑菌性能將大腸桿菌k88、大腸桿菌k99、大腸桿菌o157、大腸桿菌o139、金葡萄球菌和沙門(mén)氏菌分別進(jìn)行平板劃線(xiàn)培養(yǎng)，大腸桿菌k88、大腸桿菌k99、大腸桿菌o157、大腸桿菌o139、金葡萄球菌和沙門(mén)氏菌均來(lái)自于湖北華大瑞爾科技有限公司，培養(yǎng)于36℃下20h，挑取單菌落置于mh肉湯培養(yǎng)基中(直接購(gòu)買(mǎi)的商品化培養(yǎng)基，稱(chēng)取21g，加入1000mlddh2o完全溶解后，調(diào)ph值至7.3±0.1，121℃滅菌15min后使用)，置于37℃振蕩培養(yǎng)16h。將培養(yǎng)后的菌液通過(guò)0.01mol/lpbs緩沖液(磷酸鹽緩沖液)配置成1×107cfu/ml的指示菌菌液待用。將枯草芽孢桿菌tm02進(jìn)行平板劃線(xiàn)培養(yǎng)，培養(yǎng)于36℃下20h，挑取枯草芽孢桿菌tm02菌株于50ml的lb液體培養(yǎng)基(胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，瓊脂粉15g，加入1000mlddh2o完全溶解后，調(diào)ph值至7.3±0.1，121℃滅菌20min后使用)中，于37℃搖床轉(zhuǎn)速200r/min的條件下培養(yǎng)24h后作為種子液；將種子液以1％的接種量接種到100ml的lb液體培養(yǎng)基中，于37℃搖床轉(zhuǎn)速200r/min的條件下培養(yǎng)24h作為發(fā)酵液；將制備好的發(fā)酵液于10000r/min的條件下離心5min，取離心后的上清液并用0.22μm的無(wú)菌過(guò)濾器過(guò)濾后待用。取6個(gè)指示菌菌液各100μl，分別滴于6個(gè)lb固體平板培養(yǎng)基上并用涂布棒涂布均勻，直至無(wú)可見(jiàn)水滴，再用無(wú)菌鑷子取滅菌的牛津杯，輕輕放于lb固體平板培養(yǎng)基的表面，每個(gè)lb固體平板培養(yǎng)基上均勻放置1只牛津杯。用微量移液器吸取枯草芽孢桿菌tm02菌液265μl，注入到放置平穩(wěn)的每個(gè)牛津杯內(nèi)(小心加入，切勿滴灑在牛津杯之外的lb固體平板培養(yǎng)基上)。再用滅菌陶瓷蓋換掉lb固體平板培養(yǎng)基上的玻璃平皿蓋，其中，滅菌陶瓷蓋用于吸收l(shuí)b固體平板培養(yǎng)基在后面實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所蒸騰出的水分。將上述加有枯草芽孢桿菌tm02的lb固體平板培養(yǎng)基放置于4℃的冰箱進(jìn)行擴(kuò)散，8h后再將lb固體平板培養(yǎng)基放入37℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)16h～24h后，進(jìn)行拍照記錄，結(jié)果如圖2至圖7所示。測(cè)量抑菌圈的大小，每組做3個(gè)重復(fù)試驗(yàn)并取平均值并記錄在表6中。表6為枯草芽孢桿菌tm02的抑菌性能致病菌名稱(chēng)抑菌圈大小(mm)大腸桿菌k8820大腸桿菌k9922大腸桿菌o15732大腸桿菌o13920金葡萄球菌32沙門(mén)氏菌18.5抑菌圈直徑≥15mm時(shí)，表示樣品對(duì)指示菌的抑制效果明顯；抑菌圈直徑＜15mm時(shí)，表示樣品對(duì)指示菌有抑制效果，但效果不明顯；抑菌圈直徑＝0mm時(shí)，表示樣品對(duì)于指示菌無(wú)抑制效果。由表6可知，枯草芽孢桿菌tm02對(duì)以上6種致病菌的抑菌圈直徑均大于15mm，說(shuō)明枯草芽孢桿菌tm02對(duì)以上6種致病菌有很強(qiáng)的抑制效果，由此可判斷含有枯草芽孢桿菌tm02的脫霉劑也具有良好的抑菌性能。脫霉劑的脫毒性能將嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品粉劑和純水(蒸餾水)配置出3管裝有20ml嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液(1000ng/ml)備用。試驗(yàn)分組：對(duì)照組和脫霉劑組。對(duì)照組為1000ng/ml嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，不加脫霉劑；脫霉劑組為1000ng/ml嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液中加入0.01g本發(fā)明實(shí)施例三提供的脫霉劑(按1噸飼料添加500g脫霉劑)；樣品處理：將對(duì)照組和脫霉劑組分別置于臺(tái)式振蕩器中振蕩2h，各取5ml溶液加入裝有25ml濃度為70％的甲醇溶液的50ml離心管中，渦旋儀高速渦旋3min，靜置10min，取靜置后的上清液200μl，加入裝有3.8ml蒸餾水的離心管中，充分混勻后待檢。樣品檢測(cè)：提前15min打開(kāi)免疫定量速測(cè)系統(tǒng)，使孵化器溫度達(dá)到37℃，取嘔吐毒素快速檢測(cè)卡，取上述兩個(gè)混勻后待檢樣品溶液各50μl分別加入到嘔吐毒素快速檢測(cè)卡的點(diǎn)樣孔處，孵化檢測(cè)10min后得出結(jié)果。試驗(yàn)結(jié)果如表7：表7為脫霉劑的脫毒結(jié)果實(shí)驗(yàn)組別對(duì)照組脫霉劑檢測(cè)值(單位：ppb)997.7257.44脫毒率—74.2％由表7可知，脫霉劑組的嘔吐毒素含量明顯降低，可見(jiàn)，本實(shí)施例提供的脫霉劑具有良好的脫霉效果。脫霉劑的抗氧化性能稱(chēng)取0.03g固體高錳酸鉀加入100ml水中，攪拌混勻后得到濃度為0.03％的高錳酸鉀溶液，將高錳酸鉀溶液分裝到2個(gè)玻璃試管中，分別作為對(duì)照組和脫霉劑組。將本發(fā)明實(shí)施例三獲得的脫霉劑加入濃度為0.03％的高錳酸鉀溶液中，混合均勻后靜置30min，觀(guān)察各組分的顏色變化，結(jié)果如圖1所示，右邊的脫霉劑組顏色明顯淺于左邊的對(duì)照組。由此可知，脫霉劑組能夠使高錳酸鉀溶液褪色，證明本實(shí)施例提供的脫霉劑具有很強(qiáng)的抗氧化性能。(1)本發(fā)明實(shí)施例提供的枯草芽胞桿菌針對(duì)玉米赤霉烯酮、黃曲霉毒素和嘔吐毒素中具有良好的吸附性能，對(duì)玉米赤霉烯酮、黃曲霉毒素和嘔吐毒素中的脫霉能力強(qiáng)。特別地，該枯草芽孢桿菌的生物代謝的胞外產(chǎn)物能夠高效降解嘔吐毒素，在生物體內(nèi)的消化道中能夠?qū)I吐毒素降解為無(wú)毒的分子片段，且降解過(guò)程不產(chǎn)生毒副作用。(2)本發(fā)明實(shí)施例提供的脫霉劑具有良好的吸附性能、抑菌和殺菌的功能，可提高動(dòng)物的繁殖性能，提高仔豬的生長(zhǎng)性能，并具有對(duì)抗體效價(jià)的保護(hù)作用。其中，該脫霉劑通過(guò)物理吸附和生物吸附相結(jié)合使得該脫霉劑具有良好的脫霉效果。具體而言，該脫霉劑通過(guò)蒙脫石進(jìn)行物理吸附，蒙脫石層間距離較大，這使得蒙脫石具有最佳的陽(yáng)離子交換平衡性，從而使脫霉劑既能夠?qū)w積較大的霉菌毒素具有良好的吸附性能，如玉米赤霉烯酮，又能夠?qū)O性較弱的霉菌毒素的能力具有較強(qiáng)的吸附性能，如嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮，脫霉劑利用枯草芽胞桿菌實(shí)現(xiàn)生物吸附，同時(shí)酵母細(xì)胞壁能夠結(jié)合霉菌毒素實(shí)現(xiàn)生物吸附，從而有效脫去飼料中的霉菌毒素。(3)本發(fā)明實(shí)施例提供的脫霉劑具有解毒護(hù)肝的益生功能，該脫霉劑能夠促進(jìn)超氧化物歧化酶、還原性谷胱甘肽等抗氧化物質(zhì)的產(chǎn)生，從而減少肝臟因霉菌毒素中毒而受到氧化損傷，進(jìn)而減少脂肪肝的發(fā)生，保護(hù)肝臟細(xì)胞免受自由基損傷。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。序列表<110>湖北華大瑞爾科技有限公司<120>一種枯草芽孢桿菌、脫霉劑及脫霉劑的應(yīng)用<160>1<170>patentinversion3.4<210>1<211>1598<212>dna<213>枯草芽孢桿菌（bacillussubtilis）<400>1cttgcttacgaatacgagctcggtaccctagggacctctagagattggttaccttgttac60gacttcaccccaatcatctgtcccaccttcggcggctggctcctaaaaggttacctcacc120gacttcgggtgttacaaactctcgtggtgtgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacg180tattcaccgcggcatgctgatccgcgattactagcgattccagcttcacgcagtcgagtt240gcagactgcgatccgaactgagaacagatttgtgggattggcttaacctcgcggtttcgc300tgccctttgttctgtccattgtagcacgtgtgtagcccaggtcataaggggcatgatgat360ttgacgtcatccccaccttcctccggtttgtcaccggcagtcaccttagagtgcccaact420gaatgctggcaactaagatcaagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatctcac480gacacgagctgacgacaaccatgcaccacctgtcactctgcccccgaaggggacgtccta540tctccaggattgtcagaggatgtcaagacctggtaaggttcttcgcgttgcttcgaatta600aaccacatgctccaccgcttgtgcgggcccccgtcaattcctttgagtttcagtcttgcg660accgtactccccaggcggagtgcttaatgcgttagctgcagcactaaggggcggaaaccc720cctaacacttagcactcatcgtttacggcgtggactaccagggtatctaatcctgttcgc780tccccacgctttcgctcctcagcgtcagttacagaccagagagtcgccttcgccactggt840gttcctccacatctctacgcatttcaccgctacacgtggaattccactctcctcttctgc900actcaagttccccagtttccaatgaccctccccggttgagccgggggctttcacatcaga960cttaagaaaccgcctgcgagccctttacgcccaataattccggacaacgcttgccaccta1020cgtattaccgcggctgctggcacgtagttagccgtggctttctggttaggtaccgtcaag1080gtgccgccctatttgaacggcacttgttcttccctaacaacagagctttacgatccgaaa1140accttcatcactcacgcggcgttgctccgtcagactttcgtccattgcggaagattccct1200actgctgcctcccgtaggagtctgggccgtgtctcagtcccagtgtggccgatcaccctc1260tcaggtcggctacgcatcgtcgccttggtgagccgttacctcaccaactagctaatgcgc1320cgcgggtccatctgtaagtggtagcggaagccaccttttatgtctgaatcatgcggttca1380aacaaccatccggtattagccccggtttcccggagttatcccagtcttacaggcaggtta1440cccacgtgttactcacccgtccgccgctaacatcagggagcaagctcccatctgtccgct1500cgacttgcatgtattaggcacgccgccagcgttcgtcctgagccaggatcaactctaatc1560gtcgacctgcaggcatgcaagctggcacgaccgtcgtg1598當(dāng)前第1頁(yè)12