1.一種無(wú)抗水產(chǎn)免疫增強(qiáng)劑,其特征在于包括以下重量份的物質(zhì)制得:水產(chǎn)多肽80-120份、油茶籽粕改性提取物40-60份、蝦青素10-30份、巖藻黃質(zhì)10-30份、珍珠粉10-20份、海藻提取物40-80份、氯化鈣20-30份和水800-1200份。
2.如權(quán)利要求1所述的一種無(wú)抗水產(chǎn)免疫增強(qiáng)劑,其特征在于,所述水產(chǎn)多肽選自分子量在1600-4000Da區(qū)間的安康魚(yú)多肽、分子量在200-800Da區(qū)間的鱈魚(yú)多肽、分子量在600-1000Da區(qū)間的金槍魚(yú)多肽。
3.如權(quán)利要求1或2所述的一種無(wú)抗水產(chǎn)免疫增強(qiáng)劑,其特征在于,所述水產(chǎn)多肽的制備方法如下:
a、原料解凍清洗:對(duì)魚(yú)皮進(jìn)行流水解凍,解凍時(shí)間為2-5h;完全解凍后將魚(yú)皮洗凈;
b、原料預(yù)處理:將魚(yú)皮添加到5-10倍濃度為3-5wt%的氫氧化鈉溶液中,在20-30℃下脫脂4-6h,然后取魚(yú)皮用水洗凈;
c、蒸煮熬膠:將魚(yú)皮在90-100℃下進(jìn)行蒸煮熬膠8-12h,取生成的魚(yú)皮膠,并對(duì)魚(yú)皮膠通過(guò)離心處理與油脂分離,離心速率為1000r/min;
d、酶解:將魚(yú)皮膠添加到含有中性蛋白酶的酶解液中進(jìn)行酶解;其中中性蛋白酶的濃度為0.05-0.25wt%,酶解液質(zhì)量為魚(yú)皮膠質(zhì)量的2-4倍,酶解溫度為30-45℃,酶解液pH至控制在6-8,酶解時(shí)間為30-60min;
e、炭脫、板框過(guò)濾:向酶解液中添加質(zhì)量為酶解液1-2wt%的活性炭,并將酶解液加熱到70-80℃,脫色30-50min;將脫色后的酶解液轉(zhuǎn)移至板框過(guò)濾池內(nèi)進(jìn)行過(guò)濾,取澄清液;
f、分離純化:將澄清液轉(zhuǎn)移至泡沫分離柱中進(jìn)行鼓氣起泡,并收集泡沫液,,在鼓氣的同時(shí)向泡沫分離柱中注水;鼓氣速率為3-5L/min,注水速率為0.1-0.3L/min,泡沫分離柱中液體的裝載高度與泡沫分離柱內(nèi)徑比為8-10:1,澄清液溫度保持在25-35℃;待收集的泡沫液滅泡后,用離子交換器對(duì)泡沫液進(jìn)行重金屬分離;向重金屬分離后的泡沫液中添加質(zhì)量為泡沫液1-2%的磁性親和微球并分散均勻,靜置親和吸附50-70min后利用磁場(chǎng)使磁性親和微球聚集;分離出磁性親和微球后,用pH值為7.2的Tris-HCl緩沖液對(duì)磁性親和微球進(jìn)行洗脫,再次利用磁場(chǎng)分離出磁性親和微球后,得到洗脫液,將洗脫液在75-85℃下儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?/p>
g、濃縮:將洗脫液先后輸入雙效濃縮鍋和四效濃縮鍋中進(jìn)行濃縮,制得濃縮液,所述濃縮液的折光度控制在5-6,濃縮后濃縮液在50-60℃下儲(chǔ)存;
h、膜過(guò)濾:將濃縮液通過(guò)二級(jí)0.22微米膜過(guò)濾器進(jìn)行除雜除菌;其中膜過(guò)濾溫度小于45℃,一級(jí)過(guò)濾壓力小于0.25MPa,二級(jí)過(guò)濾壓力小于0.4MPa;
i、多肽分級(jí):采用超濾膜或納濾膜對(duì)膜過(guò)濾后的濃縮液按分子量進(jìn)行分離,得到目標(biāo)分子量的水產(chǎn)多肽;
j、噴霧干燥:對(duì)水產(chǎn)多肽進(jìn)行噴霧干燥;噴霧溫度為80-90℃,噴霧干燥后水產(chǎn)多肽的含水率小于等于5wt%。
4.如權(quán)利要求3所述的一種無(wú)抗水產(chǎn)免疫增強(qiáng)劑,其特征在于,所述磁性親和微球由以下方法制得:將海藻酸鈉、聚乙二醇、殼聚糖、正庚烷、乙酸、水按質(zhì)量比2-3:1:2:0.5:3-5:100混合溶解,攪拌均勻后制得混合液A;向混合液A中添加混合液A質(zhì)量4-6%的四氧化三鐵磁粉并分散均勻,得到混合液B;對(duì)混合液B進(jìn)行超聲波分散,同時(shí)向混合液B中勻速滴加混合液B質(zhì)量40-60%的乳化液,得到混合液C;先后向混合液C中添加混合液C質(zhì)量0.1-0.2%的98wt%的戊二醛和混合液C質(zhì)量0.5-1倍的2.5-3.5wt%的氯化鈣溶液,充分?jǐn)嚢?,靜置1-2h,生成磁性微球;利用磁場(chǎng)對(duì)液體中磁性微球進(jìn)行聚集,取出磁性微球后進(jìn)行清洗、干燥;將磁性微球浸泡在水中溶脹15-25min,然后取出磁性微球并添加到活化液中在35-45℃下活化40-80min,磁性微球與活化液的固液比為0.5-1.0g/mL;活化后取出磁性微球并洗凈,將磁性微球與肝素按質(zhì)量比1.5-2.5:1進(jìn)行混合,得到懸浮液,將懸浮液pH值調(diào)節(jié)至4-5,然后向懸浮液中添加懸浮液體積1.5-2.5倍的3wt%的1-乙基-3-二甲氨丙基-碳二亞胺,在4℃下靜置12-18h;生成磁性親和微球,最后從懸浮液中取出磁性親和微球,洗凈、干燥,備用。
5.如權(quán)利要求4所述的一種無(wú)抗水產(chǎn)免疫增強(qiáng)劑,其特征在于,所述乳化液為體積占比為30-40%的司盤(pán)-80無(wú)水乙醇混合液,乳化液在10-20min內(nèi)滴加完畢。
6.如權(quán)利要求4所述的一種無(wú)抗水產(chǎn)免疫增強(qiáng)劑,其特征在于,所述活化液由1mol/L的氫氧化鈉溶液、二甲基亞砜和環(huán)氧氯丙烷按體積比4-6:1:0.5-0.7組成。
7.如權(quán)利要求1所述的一種無(wú)抗水產(chǎn)免疫增強(qiáng)劑,其特征在于,所述油茶籽粕改性提取物的制備方法如下:取榨油后的油茶籽粕,研磨成粉,按液固比16-20mL/g將油茶籽粕添加到濃度為70-80wt%的乙醇溶液中并攪拌均勻,將乙醇溶液轉(zhuǎn)移至微波提取器中進(jìn)行加熱提取,提取溫度為60-70℃,提取時(shí)間為2-4min,微波功率為800-1000W;提取后得到粗提液,將粗提液過(guò)濾,取過(guò)濾液,向過(guò)濾液中添加過(guò)濾液體積0.02-0.04倍的30wt%雙氧水溶液,在50-60℃下加熱10-20min,然后向溶液中添加溶液質(zhì)量0.4-0.6%殼聚糖,在室溫下靜置10-20h,離心、過(guò)濾得到精提液,將精提液真空干燥后制得油茶籽粕提取物;將油茶籽粕提取物溶于酸性溶液中配得濃度為4-6wt%、pH為3-4的油茶籽粕提取物酸性溶液,在2-4h內(nèi)向油茶籽粕提取物酸性溶液中勻速滴加質(zhì)量為油茶籽粕提取物0.4-0.6倍的亞硒酸鈉進(jìn)行反應(yīng),反應(yīng)溫度為60-80℃;反應(yīng)結(jié)束后經(jīng)過(guò)濃縮、真空干燥制得油茶籽粕改性提取物。
8.如權(quán)利要求1所述的一種無(wú)抗水產(chǎn)免疫增強(qiáng)劑,其特征在于,所述海藻提取物的制備方法如下:將切碎的海藻碎末與水混合,打漿后制得濃度為10-30wt%的海藻漿料;向海藻漿料中添加等體積的檸檬酸鈉溶液,制得pH值為4-6的混合漿料,將混合漿料在60-80℃下提取2-4h,提取后過(guò)濾得到海藻粗提液,將海藻粗提液轉(zhuǎn)移至高壓滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行熟化滅菌;然后繼續(xù)對(duì)海藻粗提液通過(guò)微濾膜去除大分子雜蛋白,最后冷凍干燥后制得海藻提取物。