用于制備β-苦味酸的蛋白及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了用于制備β-苦味酸的蛋白及其應(yīng)用。本發(fā)明所提供的用于制備β-苦味酸的蛋白及其應(yīng)用中，用于制備β-苦味酸的蛋白為蛋白組合物，所述組合物由苦味酸合成相關(guān)蛋白1和苦味酸合成相關(guān)蛋白2組成；所述苦味酸合成相關(guān)蛋白1是氨基酸序列為序列表中SEQ ID No.11的蛋白質(zhì)或氨基酸為序列表中SEQ ID No.11的第101-415位的蛋白質(zhì)；所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2是氨基酸序列為序列表中SEQ ID No.12的蛋白質(zhì)或氨基酸為序列表中SEQ ID No.12的第101-409位的蛋白質(zhì)。
【專利說(shuō)明】用于制備β-苦味酸的蛋白及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】中用于制備β-苦味酸的蛋白及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 啤酒花（Humulus lupulus L.)，也稱作忽布、蛇麻花等，是二倍體（2η = 20)，屬 于薔薇目大麻科薄草屬蛇麻種，是多年生攀緣草本植物，雌雄異株，雌花是由苞片復(fù)瓦狀 排列形成球果狀花序，長(zhǎng)3-4厘米，內(nèi)層苞片下面生有大量黃色腺體腺毛。啤酒花雌花主 要用于釀造啤酒，是啤酒特有香味和苦味的主要來(lái)源，通常被認(rèn)為是啤酒釀造的"綠色黃 金"。2010年全球的啤酒銷售額是5850億美元，預(yù)計(jì)2015銷售總額會(huì)達(dá)到6300億美元 (https://uk. finance, yahoo, com/news/global-beer-industry-000000008. html),無(wú)論是 國(guó)內(nèi)國(guó)外，啤酒銷售市場(chǎng)仍在不斷的擴(kuò)大。啤酒爽口不爽口，很大程度上取決于啤酒花風(fēng)味 品質(zhì)（其它因素還包括大麥芽和酵母菌株等）。啤酒花作為重要的經(jīng)濟(jì)作物而在我國(guó)中西 部地區(qū)（新疆、甘肅、內(nèi)蒙等地）有大面積種植，是當(dāng)?shù)剞r(nóng)民的主要經(jīng)濟(jì)來(lái)源。我國(guó)啤酒花 當(dāng)前存在的主要生產(chǎn)問(wèn)題是酒花品種單一，風(fēng)味品質(zhì)較差，高檔啤酒制造所需酒花仍需要 進(jìn)口，僅在2008年我國(guó)就進(jìn)口了總價(jià)值5千萬(wàn)美元的啤酒花。
[0003] 啤酒花風(fēng)味品質(zhì)主要是由一些酒花特有的次生代謝物（萜類，苦味酸，黃腐醇） 的含量及比例決定的，這些化合物生物合成和積累主要是在啤酒花腺體腺毛中完成。啤 酒花香味主要來(lái)源于其精油成分，主要包括單廠（月桂烯Myrcene)和倍半廠（石竹烯 Caryophyllene和啤酒花烯Humulene)等。啤酒花苦味主要來(lái)源于苦味酸（分為α-苦 味酸、β_苦味酸兩類），其中α-苦味酸是含有兩個(gè)異戊烯基團(tuán)的芳香類化合物的總稱 (α -苦味酸在啤酒釀造過(guò)程中異構(gòu)化產(chǎn)生苦味物質(zhì)），β -苦味酸的成分則是含有三個(gè)異 戊烯基團(tuán)芳香類化合物?？辔端嵋脖憩F(xiàn)出很好的藥用前景，如防止肝臟星形細(xì)胞纖維化，誘 導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，調(diào)控人體脂類代謝平衡等功效。黃腐醇和苦味酸的這一系列功效也是當(dāng) 下比較認(rèn)同"適量飲用啤酒有益健康"的理論基礎(chǔ)，從某種意義上啤酒中黃腐醇和苦味酸有 些像紅葡萄酒中白藜蘆醇（Resveratrol)的功效。但是，啤酒中的苦味酸含量很低，而為達(dá) 到保健功效成人需每天至少攝入150毫克左右，如何在不增加生產(chǎn)成本（加大啤酒花的使 用量理論上可行，但很不經(jīng)濟(jì)）的情況下增加啤酒中苦味酸含量是一個(gè)比較棘手的實(shí)際生 產(chǎn)問(wèn)題。因此提高啤酒花中苦味酸含量也是啤酒花育種行業(yè)不斷追求的目標(biāo)之一。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是如何制備苦味酸。
[0005] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明首先提供了用于制備β_苦味酸的蛋白組合物。
[0006] 本發(fā)明所提供的用于制備β -苦味酸的蛋白組合物，所述組合物為組合物X或組 合物Y ;所述組合物X由苦味酸合成相關(guān)蛋白1和苦味酸合成相關(guān)蛋白2組成；所述組合物 Y由所述苦味酸合成相關(guān)蛋白1、所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2和Z組成；所述Z為短側(cè)鏈酯 酰輔酶A連接酶CCL2、短側(cè)鏈酯酰輔酶A連接酶CCL4和苯戊酮合成酶中的三種、兩種或一 種；
[0007] 所述苦味酸合成相關(guān)蛋白1為下述Xla)或Xlb)的蛋白質(zhì)：
[0008] Xla) C端至少含有序列表中SEQ ID No. 11的第141-414位氨基酸序列，并且從SEQ ID No. 11的第141位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 11的氨基酸序列向SEQ ID No. 11的N端延長(zhǎng)， 得到長(zhǎng)度為274-414個(gè)氨基酸的任意一個(gè)蛋白質(zhì)；
[0009] Xlb)在Xla)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾 個(gè)氨基酸殘基得到的具有相同功能的由Xla)衍生的蛋白質(zhì)；
[0010] 所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2為下述Yla)或Ylb)的蛋白質(zhì)：
[0011] Yla) C端至少含有序列表中SEQ ID No. 12的第101-408位氨基酸序列，并且從SEQ ID No. 12的第101位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 12的氨基酸序列向SEQ ID No. 12的N端延長(zhǎng)， 得到長(zhǎng)度為308-408個(gè)氨基酸的任意一個(gè)蛋白質(zhì)；
[0012] Ylb)在Yla)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾 個(gè)氨基酸殘基得到的具有相同功能的由Yla)衍生的蛋白質(zhì)；
[0013] 所述短側(cè)鏈酯酰輔酶A連接酶CCL2為下述Hl)或H2)的蛋白質(zhì)：
[0014] Hl)氨基酸序列為SEQ ID No. 3的蛋白質(zhì)；
[0015] H2)在SEQ ID No. 3所示的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或 幾個(gè)氨基酸殘基得到的具有短側(cè)鏈酯酰輔酶A連接酶功能的由Hl)衍生的蛋白質(zhì)；
[0016] 所述短側(cè)鏈酯酰輔酶A連接酶CCL4為下述Kl)或K2)的蛋白質(zhì)：
[0017] Kl)氨基酸序列為SEQ ID No. 13的蛋白質(zhì)；
[0018] K2)在SEQ ID No. 13所示的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或 幾個(gè)氨基酸殘基得到的具有短側(cè)鏈酯酰輔酶A連接酶功能的由Kl)衍生的蛋白質(zhì)；
[0019] 所述苯戊酮合成酶為下述II)或12)的蛋白質(zhì)：
[0020] II)氨基酸序列為SEQ ID No. 4的蛋白質(zhì)；
[0021] 12)在SEQ ID No. 4所示的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或 幾個(gè)氨基酸殘基得到的具有苯戊酮合成酶功能的由Hl)衍生的蛋白質(zhì)。
[0022] 上述組合物具體可為權(quán)利要求2-3的用于制備β -苦味酸的蛋白組合物。
[0023] 上述組合物中，序列表中SEQ ID No. 1所示的DNA分子（苦味酸合成相關(guān)基因1) 編碼氨基酸序列為序列表中SEQ ID No. 11的蛋白質(zhì)（苦味酸合成相關(guān)蛋白1)，序列表中 SEQ ID No. 2所示的DNA分子（苦味酸合成相關(guān)基因2)編碼氨基酸序列為序列表中SEQ ID No. 12的蛋白質(zhì)（苦味酸合成相關(guān)蛋白2)，序列表中SEQ ID No. 5所示的DNA分子（短側(cè) 鏈酯酰輔酶A連接酶CCL2基因）編碼氨基酸序列為序列表中SEQ ID No. 3的蛋白質(zhì)（短 側(cè)鏈酯酰輔酶A連接酶CCL2)，序列表中SEQ ID No. 6所示的DNA分子（苯戊酮合成酶基 因）編碼氨基酸序列為序列表中SEQ ID No. 4的蛋白質(zhì)（苯戊酮合成酶），序列表中SEQ ID No. 14所示的DNA分子（短側(cè)鏈酯酰輔酶A連接酶CCL4基因）編碼氨基酸序列為序列 表中SEQ ID No. 13的蛋白質(zhì)（短側(cè)鏈酯酰輔酶A連接酶CCL4)。
[0024] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明還提供了苦味酸合成相關(guān)蛋白2。
[0025] 本發(fā)明所提供的苦味酸合成相關(guān)蛋白2,為上述組合物中所述苦味酸合成相關(guān)蛋 白2,所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2的氨基酸序列不為SEQ ID No. 12。
[0026] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明還提供了與苦味酸合成相關(guān)蛋白2相關(guān)的遺傳材 料。
[0027] 本發(fā)明所提供的與苦味酸合成相關(guān)蛋白2相關(guān)的遺傳材料中，所述苦味酸合成相 關(guān)蛋白2為上述組合物中所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2,所述與苦味酸合成相關(guān)蛋白2相關(guān)的 遺傳材料是下述Fl)至F21)中的任一種：
[0028] Fl)編碼所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2的核酸分子；
[0029] F2)編碼所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2的基因；
[0030] F3)含有F2)的表達(dá)盒；
[0031] F4)含有F2)的重組載體；
[0032] F5)含有F3)所述表達(dá)盒的重組載體；
[0033] F6)含有F2)的重組微生物；
[0034] F7)含有F3)所述表達(dá)盒的重組微生物；
[0035] F8)含有F4)所述重組載體的重組微生物；
[0036] F9)含有F5)所述重組載體的重組微生物；
[0037] F10)含有F2)的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞系；
[0038] Fl 1)含有F3)所述表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞系；
[0039] F12)含有F4)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞系；
[0040] F13)含有F5)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞系；
[0041] F14)含有F2)的轉(zhuǎn)基因植物組織；
[0042] F15)含有F3)所述表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因植物組織；
[0043] F16)含有F4)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因植物組織；
[0044] F17)含有F5)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因植物組織；
[0045] F18)含有F2)的轉(zhuǎn)基因植物器官；
[0046] F19)含有F3)所述表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因植物器官；
[0047] F20)含有F4)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因植物器官；
[0048] F21)含有F5)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因植物器官。
[0049] 上述遺傳材料中，F(xiàn)3)所述的含有編碼所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2的基因的表達(dá) 盒，是指能夠在宿主細(xì)胞中表達(dá)所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2的DNA，該DNA不但可包括啟動(dòng) 所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2的基因轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子，還可包括終止所述苦味酸合成相關(guān)蛋白 2的轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄的終止子。進(jìn)一步，所述表達(dá)盒還可包括增強(qiáng)子序列。
[0050] 可用現(xiàn)有的表達(dá)載體構(gòu)建含有所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2的基因的表達(dá)盒的重 組載體。
[0051] 上述遺傳材料中，所述載體可為質(zhì)粒、黏粒、噬菌體或病毒載體。
[0052] 上述遺傳材料中，所述微生物可為酵母、細(xì)菌、藻或真菌。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例 中，所述微生物具體為酵母DD104(erg20-2)，所述DD104的基因型為MATa erg9-l erg20-2 ura3 his3 leu2 ade2〇
[0053] 上述遺傳材料中，所述遺傳材料不包括繁殖材料。
[0054] 上述遺傳材料中，所述編碼所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2的基因?yàn)槿缦翨la)或Blb) 或Blc)所示的核酸分子：
[0055] Bla) 3'端至少含有序列表中SEQ ID No. 2的第301-1227位核苷酸序列，并且從 SEQ ID No. 2的第301位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 2的核苷酸序列向SEQ ID No. 2的5'端延 長(zhǎng)，得到長(zhǎng)度為927至1227bp的任意一個(gè)DNA分子；
[0056] Blb)與Bla)限定的核苷酸序列具有75%或75%以上同一性，且編碼所述苦味酸 合成相關(guān)蛋白2的cDNA分子或基因組DNA分子；
[0057] Blc)在嚴(yán)格條件下與Bla)限定的核苷酸序列雜交，且編碼所述苦味酸合成相關(guān) 蛋白2的cDNA分子或基因組DNA分子。
[0058] 上述遺傳材料中，所述編碼所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2的基因是下述B2)_B4)中 的任一種DNA分子：
[0059] B2) 3'端至少含有序列表中SEQ ID No. 2的第241-1227位核苷酸序列，并且從 SEQ ID No. 2的第241位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 2的核苷酸序列向SEQ ID No. 2的5'端延 長(zhǎng)，得到長(zhǎng)度為987至1227bp的任意一個(gè)DNA分子；
[0060] B3) 3'端至少含有序列表中SEQ ID No. 2的第181-1227位核苷酸序列，并且從 SEQ ID No. 2的第181位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 2的核苷酸序列向SEQ ID No. 2的5'端延 長(zhǎng)，得到長(zhǎng)度為1047至1227bp的任意一個(gè)DNA分子；
[0061] B4) 3'端至少含有序列表中SEQ ID No. 2的第121-1227位核苷酸序列，并且從 SEQ ID No. 2的第121位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 2的核苷酸序列向SEQ ID No. 2的5'端延 長(zhǎng)，得到長(zhǎng)度為1107至1227bp的任意一個(gè)DNA分子。
[0062] 上述遺傳材料中，所述編碼所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2的基因是Dll)-D55)中的 任一種DNA分子：
[0063] Dl 1)核苷酸序列為序列表中SEQ ID No. 2的DNA分子；
[0064] D22)核苷酸序列為序列表中SEQ ID No. 2的第301-1227位核苷酸所示的DNA分 子；
[0065] D33)核苷酸序列為序列表中SEQ ID No. 2的第241-1227位核苷酸所示的DNA分 子；
[0066] D44)核苷酸序列為序列表中SEQ ID No. 2的第121-1227位核苷酸所示的DNA分 子；
[0067] D55)核苷酸序列為序列表中SEQ ID No. 2的第181-1227位核苷酸所示的DNA分 子。
[0068] 上述遺傳材料中，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以很容易地采用已知的方法，例如定向 進(jìn)化和點(diǎn)突變的方法，對(duì)本發(fā)明的苦味酸合成相關(guān)蛋白2的基因的核苷酸序列進(jìn)行突變。 那些經(jīng)過(guò)人工修飾的，具有與本發(fā)明分離得到的苦味酸合成相關(guān)蛋白2的基因的核苷酸序 列75%或者更高同一性、且編碼所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2的核苷酸序列，均是衍生于本 發(fā)明的核苷酸序列并且等同于本發(fā)明的序列。
[0069] 這里使用的術(shù)語(yǔ)"同一性"指與天然核酸序列的序列相似性。"同一性"包括與本 發(fā)明的SEQ ID No. 2具有75%或更高，或85%或更高，或90%或更高，或95%或更高同一 性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或計(jì)算機(jī)軟件進(jìn)行評(píng)價(jià)。使用計(jì)算機(jī)軟件，兩個(gè)或多 個(gè)序列之間的同一性可以用百分比（％)表示，其可以用來(lái)評(píng)價(jià)相關(guān)序列之間的同一性。
[0070] 上述遺傳材料中，所述嚴(yán)格條件是在2X SSC，0. 1% SDS的溶液中，在68°C下雜交 并洗膜2次，每次5min，又于0. 5XSSC，0. 1% SDS的溶液中，在68°C下雜交并洗膜2次，每 次 15min〇
[0071] 上述75%或75%以上同一性，可為80%、85%、90%或95%以上的同一性。
[0072] 上述遺傳材料中，所述蛋白組合物中各組分可獨(dú)立包裝，也可包裝在一起。
[0073] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明還提供了下述I或II或III或IV的應(yīng)用：
[0074] I、所述組合物在制備β -苦味酸中的應(yīng)用；
[0075] II、所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2在制備β -苦味酸中的應(yīng)用。
[0076] III、所述與苦味酸合成相關(guān)蛋白2相關(guān)的遺傳材料在制備苦味酸合成相關(guān)蛋白2 中的應(yīng)用；
[0077] IV、所述與苦味酸合成相關(guān)蛋白2相關(guān)的遺傳材料在制備β -苦味酸中的應(yīng)用。
[0078] 上述應(yīng)用中，所述β-苦味酸可為合蛇麻酮（Colupulone，如式1所示）、蛇麻酮 (Lupulone，如式2所示）、聚蛇麻酮（Adlupulone，如式3所示）中的至少一種。
[0079]

【權(quán)利要求】
1. 用于制備￠-苦味酸的蛋白組合物，所述組合物為組合物X或組合物Y;所述組合 物X由苦味酸合成相關(guān)蛋白1和苦味酸合成相關(guān)蛋白2組成；所述組合物Y由所述苦味酸 合成相關(guān)蛋白1、所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2和Z組成；所述Z為短側(cè)鏈酯酰輔酶A連接酶 CCL2、短側(cè)鏈酯酰輔酶A連接酶CCL4和苯戊酮合成酶中的三種、兩種或一種； 所述苦味酸合成相關(guān)蛋白1為下述Xla)或Xlb)的蛋白質(zhì)： Xla)C端至少含有序列表中SEQ ID No. 11的第141-414位氨基酸序列，并且從SEQ ID No. 11的第141位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 11的氨基酸序列向SEQ ID No. 11的N端延長(zhǎng)，得 到長(zhǎng)度為274-414個(gè)氨基酸的任意一個(gè)蛋白質(zhì)； Xlb)在Xla)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由Xla)衍生的蛋白質(zhì)； 所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2為下述Yla)或Ylb)的蛋白質(zhì)： Yla)C端至少含有序列表中SEQ ID No. 12的第101-408位氨基酸序列，并且從SEQ ID No. 12的第101位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 12的氨基酸序列向SEQ ID No. 12的N端延長(zhǎng)，得 到長(zhǎng)度為308-408個(gè)氨基酸的任意一個(gè)蛋白質(zhì)； Ylb)在Yla)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由Yla)衍生的蛋白質(zhì)； 所述短側(cè)鏈酯酰輔酶A連接酶CCL2為下述H1)或H2)的蛋白質(zhì)： H1)氨基酸序列為SEQ ID No. 3的蛋白質(zhì)； H2)在SEQ ID No. 3所示的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè) 氨基酸殘基得到的具有短側(cè)鏈酯酰輔酶A連接酶功能的由H1)衍生的蛋白質(zhì)； 所述短側(cè)鏈酯酰輔酶A連接酶CCL4為下述K1)或K2)的蛋白質(zhì)： K1)氨基酸序列為SEQ ID No. 13的蛋白質(zhì)； K2)在SEQ ID No. 13所示的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè) 氨基酸殘基得到的具有短側(cè)鏈酯酰輔酶A連接酶功能的由K1)衍生的蛋白質(zhì)； 所述苯戊酮合成酶為下述II)或12)的蛋白質(zhì)： 11) 氨基酸序列為SEQ ID No. 4的蛋白質(zhì)； 12) 在SEQ ID No. 4所示的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè) 氨基酸殘基得到的具有苯戊酮合成酶功能的由H1)衍生的蛋白質(zhì)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于：所述苦味酸合成相關(guān)蛋白1為下述 X2a)-X6b)的蛋白質(zhì)中的任一種： X2a)C端至少含有序列表中SEQ ID No. 11的第121-414位氨基酸序列，并且從SEQ ID No. 11的第121位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 11的氨基酸序列向SEQ ID No. 11的N端延長(zhǎng)，得 到長(zhǎng)度為294-414個(gè)氨基酸的任意一個(gè)蛋白質(zhì)； X2b)在X2a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由X2a)衍生的蛋白質(zhì)； X3a)C端至少含有序列表中SEQ ID No. 11的第101-414位氨基酸序列，并且從SEQ ID No. 11的第101位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 11的氨基酸序列向SEQ ID No. 11的N端延長(zhǎng)，得 到長(zhǎng)度為314-414個(gè)氨基酸的任意一個(gè)蛋白質(zhì)； X3b)在X3a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由X3a)衍生的蛋白質(zhì)； X4a)C端至少含有序列表中SEQ ID No. 11的第81-414位氨基酸序列，并且從SEQ ID No. 11的第81位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 11的氨基酸序列向SEQ ID No. 11的N端延長(zhǎng)，得到 長(zhǎng)度為334-414個(gè)氨基酸的任意一個(gè)蛋白質(zhì)； X4b)在X4a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由X4a)衍生的蛋白質(zhì)； X5a)C端至少含有序列表中SEQ ID No. 11的第61-414位氨基酸序列，并且從SEQ ID No. 11的第61位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 11的氨基酸序列向SEQ ID No. 11的N端延長(zhǎng)，得到 長(zhǎng)度為354-414個(gè)氨基酸的任意一個(gè)蛋白質(zhì)； X5b)在X5a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由X5a)衍生的蛋白質(zhì)； X6a)C端至少含有序列表中SEQ ID No. 11的第41-414位氨基酸序列，并且從SEQ ID No. 11的第41位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 11的氨基酸序列向SEQ ID No. 11的N端延長(zhǎng)，得到 長(zhǎng)度為374-414個(gè)氨基酸的任意一個(gè)蛋白質(zhì)； X6b)在X6a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由X6a)衍生的蛋白質(zhì)； 所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2為下述Y2a)-Y4b)的蛋白質(zhì)中的任一種： Y2a)C端至少含有序列表中SEQ ID No. 12的第81-408位氨基酸序列，并且從SEQ ID No. 12的第81位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 12的氨基酸序列向SEQ ID No. 12的N端延長(zhǎng)，得到 長(zhǎng)度為328-408個(gè)氨基酸的任意一個(gè)蛋白質(zhì)； Y2b)在Y2a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由Y2a)衍生的蛋白質(zhì)； Y3a)C端至少含有序列表中SEQ ID No. 12的第61-408位氨基酸序列，并且從SEQ ID No. 12的第61位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 12的氨基酸序列向SEQ ID No. 12的N端延長(zhǎng)，得到 長(zhǎng)度為348-408個(gè)氨基酸的任意一個(gè)蛋白質(zhì)； Y3b)在Y3a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由Y3a)衍生的蛋白質(zhì)； Y4a)C端至少含有序列表中SEQ ID No. 12的第41-408位氨基酸序列，并且從SEQ ID No. 12的第41位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 12的氨基酸序列向SEQ ID No. 12的N端延長(zhǎng)，得到 長(zhǎng)度為368-408個(gè)氨基酸的任意一個(gè)蛋白質(zhì)； Y4b)在Y4a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由Y4a)衍生的蛋白質(zhì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2中任一所述的組合物，其特征在于：所述苦味酸合成相關(guān)蛋白1 為下述Cla)_C7b)的蛋白質(zhì)中的任意一種： Cla)氨基酸序列為序列表中SEQ ID No. 11的蛋白質(zhì)； Clb)在Cla)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由Cla)衍生的蛋白質(zhì)； C2a)氨基酸序列為序列表中SEQ ID No. 11的第101-414位氨基酸的蛋白質(zhì)； C2b)在C2a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由C2a)衍生的蛋白質(zhì)； C3a)氨基酸序列為序列表中SEQ ID No. 11的第41-414位氨基酸的蛋白質(zhì)； C3b)在C3a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由C3a)衍生的蛋白質(zhì)； C4a)氨基酸序列為序列表中SEQ ID No. 11的第121-414位氨基酸的蛋白質(zhì)； C4b)在C4a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由C4a)衍生的蛋白質(zhì)； C5a)氨基酸序列為序列表中SEQ ID No. 11的第81-414位氨基酸的蛋白質(zhì)； C5b)在C5a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由C5a)衍生的蛋白質(zhì)； C6a)氨基酸序列為序列表中SEQ ID No. 11的第61-414位氨基酸的蛋白質(zhì)； C6b)在C6a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由C6a)衍生的蛋白質(zhì)； C7a)氨基酸序列為序列表中SEQ ID No. 11的第141-414位氨基酸的蛋白質(zhì)； C7b)在C7a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由C7a)衍生的蛋白質(zhì)； 所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2為下述Dla)-D5b)的蛋白質(zhì)中的任意一種： Dla)氣基酸序列為序列表中SEQ ID No. 12的蛋白質(zhì)； Dlb)在Dla)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由Dla)衍生的蛋白質(zhì)； D2a)氨基酸序列為序列表中SEQ ID No. 12的第101-408位氨基酸的蛋白質(zhì)； D2b)在D2a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由D2a)衍生的蛋白質(zhì)； D3a)氨基酸序列為序列表中SEQ ID No. 12的第81-408位氨基酸的蛋白質(zhì)； D3b)在D3a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由D3a)衍生的蛋白質(zhì)； D4a)氨基酸序列為序列表中SEQ ID No. 12的第41-408位氨基酸的蛋白質(zhì)； D4b)在D4a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由D4a)衍生的蛋白質(zhì)； D5a)氨基酸序列為序列表中SEQ ID No. 12的第61-408位氨基酸的蛋白質(zhì)； D5b)在D5a)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代和/或缺失和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸殘基得到的具有相同功能的由D5a)衍生的蛋白質(zhì)。
4. 權(quán)利要求1-3中任一所述的苦味酸合成相關(guān)蛋白2,所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2的 氨基酸序列不為SEQ ID No. 12。
5. 與權(quán)利要求1-3中任一所述的苦味酸合成相關(guān)蛋白2相關(guān)的遺傳材料，是下述FI) 至F21)中的任一種： F1)編碼權(quán)利要求1-3中任一所述的苦味酸合成相關(guān)蛋白2的核酸分子； F2)編碼權(quán)利要求1-3中任一所述的苦味酸合成相關(guān)蛋白2的基因； F3)含有F2)的表達(dá)盒； F4)含有F2)的重組載體； F5)含有F3)所述表達(dá)盒的重組載體； F6)含有F2)的重組微生物； F7)含有F3)所述表達(dá)盒的重組微生物； F8)含有F4)所述重組載體的重組微生物； F9)含有F5)所述重組載體的重組微生物； F10)含有F2)的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞系； F11)含有F3)所述表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞系； F12)含有F4)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞系； F13)含有F5)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞系； F14)含有F2)的轉(zhuǎn)基因植物組織； F15)含有F3)所述表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因植物組織； F16)含有F4)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因植物組織； F17)含有F5)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因植物組織； F18)含有F2)的轉(zhuǎn)基因植物器官； F19)含有F3)所述表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因植物器官； F20)含有F4)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因植物器官； F21)含有F5)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因植物器官。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的遺傳材料，其特征在于：所述編碼所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2 的基因?yàn)槿缦翨la)或Bib)或Blc)所示的核酸分子： Bla) 3'端至少含有序列表中SEQ ID No. 2的第301-1227位核苷酸序列，并且從SEQ ID No. 2的第301位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 2的核苷酸序列向SEQ ID No. 2的5'端延長(zhǎng)， 得到長(zhǎng)度為927至1227bp的任意一個(gè)DNA分子； Bib)與Bla)限定的核苷酸序列具有75%或75%以上同一性，且編碼所述苦味酸合成 相關(guān)蛋白2的cDNA分子或基因組DNA分子； Blc)在嚴(yán)格條件下與Bla)限定的核苷酸序列雜交，且編碼所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2 的cDNA分子或基因組DNA分子。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的遺傳材料，其特征在于：所述編碼所述苦味酸合成相關(guān) 蛋白2的基因是下述B2)-B4)中的任一種DNA分子： B2)3'端至少含有序列表中SEQ ID No. 2的第241-1227位核苷酸序列，并且從SEQ ID No. 2的第241位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 2的核苷酸序列向SEQ ID No. 2的5'端延長(zhǎng)，得到 長(zhǎng)度為987至1227bp的任意一個(gè)DNA分子； B3)3'端至少含有序列表中SEQ ID No. 2的第181-1227位核苷酸序列，并且從SEQ ID No. 2的第181位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 2的核苷酸序列向SEQ ID No. 2的5'端延長(zhǎng)，得到 長(zhǎng)度為1047至1227bp的任意一個(gè)DNA分子； B4) 3'端至少含有序列表中SEQ ID No. 2的第121-1227位核苷酸序列，并且從SEQ ID No. 2的第121位開(kāi)始、按照SEQ ID No. 2的核苷酸序列向SEQ ID No. 2的5'端延長(zhǎng)，得到 長(zhǎng)度為1107至1227bp的任意一個(gè)DNA分子。
8. 根據(jù)權(quán)利要求5或6或7所述的遺傳材料，其特征在于：所述編碼所述苦味酸合成 相關(guān)蛋白2的基因是Dll)-D55)中的任一種DNA分子： D11)核苷酸序列為序列表中SEQ ID No. 2的DNA分子； D22)核苷酸序列為序列表中SEQ ID No. 2的第301-1227位核苷酸所示的DNA分子； D33)核苷酸序列為序列表中SEQ ID No. 2的第241-1227位核苷酸所示的DNA分子； D44)核苷酸序列為序列表中SEQ ID No. 2的第121-1227位核苷酸所示的DNA分子； D55)核苷酸序列為序列表中SEQ ID No. 2的第181-1227位核苷酸所示的DNA分子。
9. 下述I或II的應(yīng)用： I、 權(quán)利要求1-3中任一所述的組合物在制備P -苦味酸中的應(yīng)用； II、 權(quán)利要求4所述苦味酸合成相關(guān)蛋白2在制備￠-苦味酸中的應(yīng)用。
10. 下述III或IV的應(yīng)用： III、 權(quán)利要求5-8中任一所述的遺傳材料在制備苦味酸合成相關(guān)蛋白2中的應(yīng)用； IV、 權(quán)利要求5-8中任一所述的遺傳材料在制備0 -苦味酸中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12N15/52GK104404058SQ201410617367
【公開(kāi)日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年11月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月5日
【發(fā)明者】王國(guó)棟, 李好勛, 覃浩, 班兆男 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所