一種國酒香石斛酵素及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于保健食品【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種國酒香石斛酵素及制備方法，所述的組合物含有1-70重量份石斛或石斛多糖、1-80重量份刺梨、0.01-80重量份發(fā)酵劑。本發(fā)明提供了一種國酒香石斛酵素組合物，藥理實驗表明，本發(fā)明組合物，具有很好的免疫力增強作用。
【專利說明】一種國酒香石斛酵素及制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種國酒香石斛酵素組合物。

【背景技術(shù)】
[0002] 免疫力是人體自身的防御機制，是人體識別和消滅外來侵入的任何異物（病毒、 細菌等）；處理衰老、損傷、死亡、變性的自身細胞以及識別和處理體內(nèi)突變細胞和病毒感 染細胞的能力?，F(xiàn)代免疫學(xué)認為，免疫力是人體識別和排除"異己"的生理反應(yīng)。人體內(nèi)執(zhí) 行這一功能的是免疫系統(tǒng)。人們在日常生活經(jīng)受許多壓力。持續(xù)暴露于外部壓力被認為是 導(dǎo)致人體對無論是微生物或其他原因引起的疾病的免疫力降低。免疫力低下的身體極易招 致細菌、病毒、真菌等感染，因此免疫力低下最直接的表現(xiàn)就是容易生病。多年來人們持續(xù) 尋求"天然"方案來解決提高免疫力的問題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 基于上述原因，本發(fā)明人在多年研究的基礎(chǔ)上，得到一種國酒香石斛酵素組合物， 藥理實驗表明，本發(fā)明組合物，具有很好的免疫力增強作用。
[0004] 本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)的。
[0005] -種國酒香石斛酵素組合物，含有1-70重量份石斛或石斛多糖、1-80重量份刺 梨、0.01-80重量份發(fā)酵劑。
[0006] 所述的石斛為新鮮石斛全草、石斛超微粉、石斛組培苗、石斛內(nèi)生菌發(fā)酵產(chǎn)物中的 一種或幾種。
[0007] 所述的發(fā)酵劑為茅臺酒致香微生物、醬香發(fā)酵液、苗家酸湯、植物復(fù)合酵素、冠突 散囊菌、雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、醋酸菌、酵母菌、乳酸菌、醬香酵母、紅酒酵母、藏靈菇中的 一種或幾種。所訴茅臺酒致香微生物為從茅臺酒生產(chǎn)用的高溫大曲中篩選得到的地衣芽孢 桿菌、枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌的一種或幾種。
[0008] 所述的茅臺酒致香微生物為從茅臺酒生產(chǎn)用的高溫大曲中篩選得到的地衣芽孢 桿菌、枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌的一種或幾種。
[0009] 所述的醬香發(fā)酵液為將茅臺酒致香微生物活化液以3-20%接種量接入麩皮浸出 汁中于30-300rpm、40-60°C發(fā)酵1-6天，過濾得到的。
[0010] 所述苗家酸湯為苗族的魚酸湯、毛辣果酸湯、菜酸湯、辣酸湯中的一種。
[0011] -種制備所述的國酒香石斛酵素組合物的方法，包括以下步驟：
[0012] 步驟1 :將石斛和刺梨混合，發(fā)酵得到石斛刺梨漿；
[0013] 步驟2 :將發(fā)酵劑接入石斛刺梨漿中在有氧或厭氧條件下于l〇-6(TC、3〇-50〇rpm 振蕩培養(yǎng)或密封靜置培養(yǎng)〇. 1-20天，過濾得國酒香石斛酵素組合物。
[0014] 所述的石斛多糖由以下方法制備：
[0015] 步驟1 :通過從不同產(chǎn)地野生和人工種植石斛的莖、葉、菌根、假鱗莖、花和果實采 集樣本；將采集的樣本在無菌條件下，以75%酒精處理30s，再用0. 1 %升汞處理7min后 用無菌水沖洗，吸干多余水分，分別切成0. 3cm左右的小段或用無菌研缽磨成漿狀，接種在 PDA-抗生素酸性培養(yǎng)基、查氏培養(yǎng)基或PDA培養(yǎng)基任一培養(yǎng)基上，在20-50°C恒溫培養(yǎng)1-10 天，當切口邊緣長出真菌菌絲時，采用菌絲頂端純化法逐步純化后獲得一批石斛內(nèi)生菌的 微生物菌株，分別從直徑3cm以上的菌群邊緣，用接種環(huán)挑取菌絲并接種于篩選培養(yǎng)基上， 于20-28°C，搖床轉(zhuǎn)速0-3000rpm暗培養(yǎng)1-50天，獲得基因一致的單克隆菌液；通過高效液 相色譜法檢測內(nèi)生菌單克隆發(fā)酵液中石斛多糖含量，根據(jù)檢測結(jié)果從大量候選菌株中篩選 得到石斛多糖高產(chǎn)量內(nèi)生菌菌株；所述篩選培養(yǎng)基為：葡萄糖l_50g/L、蛋白胨l-10g/L、硫 酸銨0. l-10g/L，氯化錳0. 01-10g/L、硫酸鎂0. l-10g/L、磷酸二氧鉀0. l-5g/L、蜜環(huán)菌汁 200-800ml/L ；
[0016] 步驟2 :將蜜環(huán)菌種子液接種到共生發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵0. 1-180小時后，再將石斛 產(chǎn)石斛多糖內(nèi)生菌種子液按照5-20%的體積比接入共生培養(yǎng)基中于溫度為20-40°C、攪拌 轉(zhuǎn)速為10-600rpm條件下發(fā)酵1-20天，得共生發(fā)酵液；
[0017] 所述的共生發(fā)酵培養(yǎng)基為蔗糖10-100g/L、麩皮浸出汁10-200ml/L、硫胺素 0· l-50g/L、乙醇 l-50g/L、磷酸二氫鉀 0· l-10g/L、硫酸鎂 0· l-10g/L、基質(zhì) 10-900ml/L :所 述的基質(zhì)為榛葉汁、榛樹疏松愈傷組織漿、榛樹內(nèi)生菌發(fā)酵液中的一種；
[0018] 步驟3 :將步驟1所得的共生發(fā)酵液加入復(fù)合酶于10°C _65°C下水解0. 1-60小時， 將酶解后的共生發(fā)酵液減壓濃縮后得到發(fā)酵石斛漿；
[0019] 所述的復(fù)合酶為糖苷酶、內(nèi)生青霉菌纖維素酶、果膠酶、纖維素酶、木聚糖酶、高溫 淀粉酶、糖化酶、普魯蘭酶的一種或幾種；
[0020] 步驟4 :將發(fā)酵石斛漿和水按照I : (l-60)g/mL比例混勻，在功率400W、溫度 20-75°C下微波萃取1-10分鐘，將萃取液減壓濃縮或氮吹濃縮后低溫干燥得到石斛多糖。 實施例
[0021] 以下通過【具體實施方式】的描述對本發(fā)明作進一步說明，但這并非是對本發(fā)明的限 制，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進，但是只要不脫離本 發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0022] 石斛、刺梨均購自貴州茅味生物科技有限公司；
[0023] 茅臺酒致香微生物購于中國微生物菌種保藏中心，其他菌種由市面購得。
[0024] 藥效試驗1 :提高免疫力試驗
[0025] 在體外細胞培養(yǎng)試驗中使用巨噬細胞的活化評估組合物的免疫學(xué)效力
[0026] 樣品：
[0027] 石斛：將購得新鮮石斛烘干后制成石斛超微粉備用；
[0028] 石斛多糖：根據(jù)制備實施例2制得的石斛多糖；
[0029] 刺梨：將購得新鮮刺梨烘干后制成刺梨超微粉備用。
[0030] 方法：
[0031] A.細胞培養(yǎng)
[0032] 在具有10% FCS (胎牛血清）的DMEM中連續(xù)維持Raw264. 7細胞系。它們每2-3 天傳代一次，在5%二氧化碳的氣氛中在37°C下培育。
[0033] B.巨噬細胞吞噬試驗
[0034] 以105細胞/玻璃蓋片的密度在蓋玻片上涂覆Raw264. 7細胞，并使其粘附。用不 同原料的組合培育細胞2小時。培育后，用106乳膠珠/105細胞（細胞：珠=1 : 10)培 育細胞2小時。風(fēng)干蓋玻片上的細胞，并用甲醇固定細胞。細胞經(jīng)Giemsa染色10分鐘，并 用顯微鏡計數(shù)。
[0035] 巨噬細胞吞噬試驗的結(jié)果表示為吞噬作用指數(shù)，即，每100個細胞的細胞內(nèi)的總 數(shù)。
[0036] 使用表1所示濃度的材料進行實驗（每實驗4個樣本）。平均吞噬作用指數(shù)的數(shù) 據(jù)連同標準差也總結(jié)于表1。使用統(tǒng)計方法分析的數(shù)據(jù)表明t檢驗中置信度大于95%。
[0037] 表1吞噬作用結(jié)果比較
[0038]

【權(quán)利要求】
1. 一種國酒香石斛酵素組合物，其特征在于，所述組合物中含有1-70重量份石斛或石 斛多糖、1-80重量份刺梨、0. 01-80重量份發(fā)酵劑。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述的石斛為新鮮石斛全草、石斛超微 粉、石斛組培苗、石斛內(nèi)生菌發(fā)酵產(chǎn)物中的一種或幾種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述的發(fā)酵劑為茅臺酒致香微生物、醬 香發(fā)酵液、苗家酸湯、植物復(fù)合酵素、冠突散囊菌、雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、醋酸菌、酵母菌、 乳酸菌、醬香酵母、紅酒酵母、藏靈菇中的一種或幾種。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其特征在于，所述的茅臺酒致香微生物為從茅臺酒 生產(chǎn)用的高溫大曲中篩選得到的地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌的一種或 幾種。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其特征在于，所述的醬香發(fā)酵液為將茅臺酒致香微 生物活化液以3-20%接種量接入麩皮浸出汁中于30-300rpm、40-6(TC發(fā)酵1-6天，過濾得 到的。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其特征在于，所述苗家酸湯為苗族的魚酸湯、毛辣果 酸湯、菜酸湯、辣酸湯中的一種。
7. -種制備權(quán)利要求1所述的國酒香石斛酵素組合物的方法，其特征在于，包括以下 步驟： 步驟1 :將石斛和刺梨混合，發(fā)酵得到石斛刺梨漿； 步驟2 :將發(fā)酵劑接入石斛刺梨漿中在有氧或厭氧條件下于10-6(TC、3()-5(K)rpm振蕩 培養(yǎng)或密封靜置培養(yǎng)〇. 1-20天，過濾得國酒香石斛酵素組合物。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的石斛多糖由以下共生發(fā)酵方法制備： 步驟1 :通過從不同產(chǎn)地野生和人工種植石斛的莖、葉、菌根、假鱗莖、花和果實采集樣 本；將采集的樣本在無菌條件下，以75 %酒精處理30s，再用0. 1 %升萊處理7min后用無菌 水沖洗，吸干多余水分，分別切成0. 3cm左右的小段或用無菌研缽磨成漿狀，接種在PDA-抗 生素酸性培養(yǎng)基、查氏培養(yǎng)基或PDA培養(yǎng)基任一培養(yǎng)基上，在20-50°C恒溫培養(yǎng)1-10天， 當切口邊緣長出真菌菌絲時，采用菌絲頂端純化法逐步純化后獲得一批石斛內(nèi)生菌的微生 物菌株，分別從直徑3cm以上的菌群邊緣，用接種環(huán)挑取菌絲并接種于篩選培養(yǎng)基上，于 20-28°C，搖床轉(zhuǎn)速0_3000rpm暗培養(yǎng)1-50天，獲得基因一致的單克隆菌液；通過高效液相 色譜法檢測內(nèi)生菌單克隆發(fā)酵液中石斛多糖含量，根據(jù)檢測結(jié)果從大量候選菌株中篩選得 到石斛多糖高產(chǎn)量內(nèi)生菌菌株；所述篩選培養(yǎng)基為：葡萄糖l_50g/L、蛋白胨l-10g/L、硫 酸銨0. l-10g/L，氯化錳0. 01-10g/L、硫酸鎂0. l-10g/L、磷酸二氫鉀0. l-5g/L、蜜環(huán)菌汁 200-800ml/L ； 步驟2 :將蜜環(huán)菌種子液接種到共生發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵0. 1-180小時后，再將石斛產(chǎn)石 斛多糖內(nèi)生菌種子液按照5-20%的體積比接入共生培養(yǎng)基中于溫度為20-40°C、攪拌轉(zhuǎn)速 為10-600rpm條件下發(fā)酵1-20天，得共生發(fā)酵液； 所述的共生發(fā)酵培養(yǎng)基為蔗糖l〇-l〇〇g/L、麩皮浸出汁10_200ml/L、硫胺素0. l-50g/ L、乙醇l-50g/L、磷酸二氫鉀0. l-10g/L、硫酸鎂0. l-10g/L、基質(zhì)10-900ml/L ;所述的基質(zhì) 為榛葉汁、榛樹疏松愈傷組織漿、榛樹內(nèi)生菌發(fā)酵液中的一種； 步驟3 :將步驟1所得的共生發(fā)酵液加入復(fù)合酶于10°C -65°C下水解0. 1-60小時，將 酶解后的共生發(fā)酵液減壓濃縮后得到發(fā)酵石斛漿； 所述的復(fù)合酶為糖苷酶、內(nèi)生青霉菌纖維素酶、果膠酶、纖維素酶、木聚糖酶、高溫淀粉 酶、糖化酶、普魯蘭酶的一種或幾種； 步驟4 :將發(fā)酵石斛漿和水按照1 : (1-60) g/mL比例混勻，在功率400W、溫度20-75°C下 微波萃取1-10分鐘，將萃取液減壓濃縮或氮吹濃縮后低溫干燥得到石斛多糖。
【文檔編號】A23L1/212GK104366318SQ201410538532
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年10月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月14日
【發(fā)明者】杜超峰 申請人:杜超峰