一種植物鹽誘導(dǎo)表達啟動子POsSalt1及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種植物鹽誘導(dǎo)表達啟動子POsSalt1及其應(yīng)用。本發(fā)明還提供了含有該啟動子的表達盒、植物表達載體和轉(zhuǎn)化子。具體而言，本發(fā)明將上述啟動子應(yīng)用在植物轉(zhuǎn)基因工程中。本發(fā)明提供的啟動子僅在受到鹽脅迫時特異性的啟動外源基因在植物中表達，因此可以在植物抗鹽基因工程改良中具有一定應(yīng)用前景。
【專利說明】-種植物鹽誘導(dǎo)表達啟動子POsSaltl及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)和植物基因工程【技術(shù)領(lǐng)域】。具體而言，本發(fā)明涉及一種植物 鹽誘導(dǎo)基因表達啟動子及其應(yīng)用，在植物抗鹽基因工程改良中可通過替代組成型啟動子， 在保證所驅(qū)動抗鹽基因在鹽脅迫時正常發(fā)揮功能的同時避免在非鹽脅迫情況下不必要的 表達。

【背景技術(shù)】
[0002] 鹽害是最重要的植物逆境之一，鹽脅迫造成的影響幾乎涉及植物所有的生理和生 化過程，嚴(yán)重時導(dǎo)致植物不能正常生長、減產(chǎn)甚至絕收。水稻是全世界第二大糧食作物，年 種植面積20億畝左右，全世界大約有1/3的人以稻米為主食。水稻在我國是第一大糧食作 物，我國年種植面積為全國糧食播種面積的1/3,而水稻產(chǎn)量占全國糧食總產(chǎn)量的44%。從 我國水資源、氣候以及生態(tài)等方面看，除現(xiàn)有的稻區(qū)外，我國還有一些地區(qū)很適宜于水稻生 產(chǎn)，但由于土壤的鹽漬化而未能種植。因此培育耐鹽水稻品種提高水稻的耐鹽能力是提高 鹽堿地的利用率和經(jīng)濟效益，緩解世界糧食危機的最佳方案之一。
[0003] 隨著分子生物學(xué)技術(shù)以及植物基因工程的迅速發(fā)展，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)來改變一些 作物的性狀，提高其對外界脅迫條件的耐受性從而增加作物的產(chǎn)量已經(jīng)成為一種重要的技 術(shù)。外源基因在轉(zhuǎn)基因植物中低水平表達和非特異性表達是制約植物基因工程發(fā)展的一個 重要因素，主要原因是缺少理想的啟動子。
[0004] 組織特異啟動子由于其表達的空間特異性，可將外源基因在轉(zhuǎn)基因植物中定位表 達，這不但可以降低植物負擔(dān)、減輕對作物農(nóng)藝性狀的影響，而且還能提高外源基因產(chǎn)物在 特定部位的濃度，增加轉(zhuǎn)基因的效果。與組成型表達啟動子相比，誘導(dǎo)型啟動子驅(qū)動的外 源只在特定的環(huán)境或者組織中才高強度表達，因此可以根據(jù)實驗需要來控制目的基因的時 空表達。Kazuo等人在水稻中過表達0SNAC6基因，利用組成型啟動子導(dǎo)致水稻生長延遲產(chǎn) 量降低，但是利用其本身的啟動子就可以解決這個問題。Aryadee等在煙草中利用啟動子 Rabl6A表達自身基因，發(fā)現(xiàn)只有在脅迫條件下該基因才能在葉中大量表達，從而提商其抗 逆性，而且轉(zhuǎn)基因植株與對照相比其形態(tài)發(fā)育以及產(chǎn)量都沒有受到影響。因此，誘導(dǎo)型表達 啟動子在植物抗逆基因工程中亟待開放應(yīng)用。
[0005] 綜上所述，在植物中，合理使用鹽誘導(dǎo)特異性啟動子能明顯改善植物性狀，但應(yīng)用 于水稻等禾谷類作物基因工程遺傳載體構(gòu)建中能夠選用的植物內(nèi)源根特異性啟動子依然 較少，因此發(fā)展更多的水稻等禾谷類作物的鹽誘導(dǎo)特異性啟動子對基礎(chǔ)研究和生產(chǎn)應(yīng)用都 具有重要意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種驅(qū)動外源基因在鹽誘導(dǎo)條件下表達的啟動子、獲得含有 該啟動子序列的轉(zhuǎn)化子以及該啟動子的應(yīng)用。其中，本文中所涉及的"植物"是指單子葉植 物，例如水稻、小麥、玉米、大麥、高粱或燕麥，優(yōu)選為水稻。
[0007] 為了實現(xiàn)上述目的，一方面，本發(fā)明提供一種植物鹽誘導(dǎo)表達啟動子，所述植物鹽 誘導(dǎo)表達啟動子包含序列表中SEQ ID No: 1所示的DNA序列。序列表中SEQ ID No: 1所示的 DNA序列為來源于日本晴水稻（Oryza sativa L cv. Nipponbare)的水稻鹽誘導(dǎo)表達啟動子， 本文中稱為POsSaltl或啟動子POsSaltl。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)日本晴水稻中的一段DNA 序列能夠起到驅(qū)動特定基因在鹽誘導(dǎo)的情況下特異性表達的作用，因此提取出了該DNA序 列并加以驗證。
[0008] 優(yōu)選地，本發(fā)明提供的植物鹽誘導(dǎo)表達啟動子的DNA序列為SEQ IDNo:l所示的序 列，即POsSaltl或啟動子POsSaltl。
[0009] 另一方面，本發(fā)明還提供一種包含上述植物鹽誘導(dǎo)表達啟動子POsSaltl的表達 盒。
[0010] 又一方面，本發(fā)明還提供一種重組表達載體，所述重組表達載體包含上述的 植物鹽誘導(dǎo)表達啟動子POsSaltl，在所述重組表達載體中，所述植物鹽誘導(dǎo)表達啟動 子連接于待表達的基因序列的上游；優(yōu)選地，所述待表達的基因為Gus基因，所述重組 表達載體為pCAMBIA1391-P0sSaltl，該重組表達載體為將SEQ ID No:l所示的序列即 POsSaltl或啟動子POsSaltl構(gòu)建于pCAMBIA1391中得到的重組表達載體，本文中稱為 pCAMBIA1391-P0sSaltl〇 toon] 另一方面，本發(fā)明還提供一種宿主菌，所述宿主菌包含本發(fā)明提供的上述植物鹽 誘導(dǎo)表達啟動子POsSaltl、上述表達盒、或上述重組表達載體；優(yōu)選地，所述宿主菌為根癌 農(nóng)桿菌。
[0012] 另一方面，本發(fā)明提供一種轉(zhuǎn)化子，所述轉(zhuǎn)化子包含本發(fā)明提供的上述植物鹽誘 導(dǎo)表達啟動子POsSaltl、上述表達盒、上述重組表達載體、或上述宿主菌。其中，所述轉(zhuǎn)化子 優(yōu)選為轉(zhuǎn)基因細胞系、愈傷組織或植株。
[0013] 再一方面，本發(fā)明提供上述植物鹽誘導(dǎo)表達啟動子POsSaltl在培育轉(zhuǎn)基因植物 中的應(yīng)用。所述應(yīng)用包括將本發(fā)明提供的上述植物鹽誘導(dǎo)表達啟動子連接于載體的待表達 的基因序列上游（例如，將所述啟動子序列置于目標(biāo)基因之前），從而構(gòu)建重組表達載體， 將所述重組表達載體轉(zhuǎn)化到植物細胞、組織或器官中進行培育。
[0014] 并且優(yōu)選地，所述應(yīng)用可以用于改良植物生長特性，所述植物為單子葉植物，例如 水稻、小麥、玉米、大麥、高粱或燕麥，優(yōu)選為水稻。
[0015] 本發(fā)明中所提供的啟動子的DNA序列為（與序列表中SEQ ID No :1中相同）：
[0016] GGGGTGAA 6A GAAA CGCTGGGG GAGAGAGGGAAGGAGGGAGGAGGAAGAAGGGAAGCCGG GAAGGAGCTAGAGGGAGGATGACATGTGGGTCTCACATATCAATGGATCCCACAATATAATTTTTTGTGTGAGTGAC ATGTAGGTCCTACCTTTTTTTTATTTTTATTCTAATGCCACATAAGCGCCACGTAGAACAAAGACTTGGTCAATACC GCCACGTAGGCGCCACGTCAGCTAAAATCACCGAGGGATATAATTTGCACCGGTTTTGATAGTTGGAGGAGTCAATT TACCTGGTTTTGTGGTTAAAGGATATGAATCATACTCGGAGCTATAGTTGAGGGAGTCAAAGTATATTTTTCCATCC CAATTGTCCCACCCACCTGATACTACCATCACGCGACGCGACGCCCCACGGCCGGCGGCGGCGCGAATCGCCTACCG CCCGCTGCACAGGGGCACTAGACACACATGGGCTGATGGGCACATGACTTAGCCCAGCATTCTCGCTTACATATCTT ATGTTGTTTTTTTTATTAAGACGTGGATTTTACCAAGGATTTTATTAGTATGTTTTCTAAACCGCTAAACAATATGT TTTTCAAAAAATTATATAAAAATAATTTTAAAATATCAAATAAATTTATTTTTAAGTTTGTAACAATTAAAACTTAA TTAATCATGTGACTTTTTCATTTTACGTATGCTAACTTAATCTATATCCAACTCTATTTTAATTATATGTTAATGGC TTTTTTATTTTAGGTAGACTATCTTAATCTTCGTCCAACTCTATTTTTTAATTTTTAAGTTTGTAATAATACTGCCC AACACGGCCAGGATGAAGCGTCGATCTGAATTTCTTTTTCAATTTTGAGGGCACTCTCCTTCTAGAGACACTCCCTT ATGAACGGAGCATCGAATTTGGGATTGTGGCAAATGGCAATGCACCGTTGCTGTGCACAGGTGCCGGCCGGGCGCGC TTACACGGCTACACCTAACACGCCTACACTCTTTTTTCTCATCAGTCATCAGAATACTTACACGTTTACATTTGTGC TTTTGACAATCCTAGTAGGTTATAATTAGTACTAAGTGCTTAGCCGATGAACGAAATGATGACCAACACCACCGACA CACCACCAAAACTCTTGTATGGATGTTTTTCTGTTGTTTGCATATCATTTAAATAGTTACAAATAAATTAATAAAAA CTAGAAGATATATTAATATGTGATATATCACTTCATAAACACGTAACTTAACATTTAATTTCTACTTGTAAGTTTAA TTTATTTTTTGTTGTCATATACAGAAGTTAAATTTTAAGTTGTATGTTTGTAGAGTGATATATCACATGTTAATATA TTTTTTAAAAGCTTTTTATAACTATTTGAGTAGTATGCAAGTAAGGAGTGGAAGTAAGGAGTGGACGTTCAAAACTA GTACTCGCTAAACTAGTCGAGATCTCTTTTTCTCTACCGCTGCGCAACAACATTTGATTGAACCATCTTACGATGCT TTTTCTCAGGCTCATGCAGCCATGCTTGGATGCTTGCGTTGTTGAGACTTGAGAGCACGGCACGTATGCGAACTTGA TCAGGTAGGTCGTCACAAACGCGGCGCGCGTCGACGAGAGGCCGAGACAACCACCCACCCACTAGCGCGCGCACCGA GCGAGCTATCTCTCCGCTCGGTCTCGGTCGATCGCCGCGCGCGCGCGTGGCCGAGCTTGCACGGCGCCATTGGCCGA CGCGAGCCGGTGAGGCGATAGTGCTCGCTCCACCACTCTCCCCGACCATCATGGGGGTGTCACCTCACCTGCTACGC CTGTATATATATAAAGCACCAGCAGCCATGAAGCCCATCAACGAAAAACTACGTGACAGCGTGACACAGGGGGTAGT TAATTACTAGTTATTCGCAG TGCGTGCGT GTGTGTGTGTGA G
[0017] 需要說明的是：上述啟動子的DNA序列中，序列開頭以斜體并加粗表示的序列 "(707(707,⑶為獲得啟動子過程中使用的正向弓丨物的留存序列， 共計22bp ;序列末尾以斜體并加粗表示的序列"Γ6Τ6Τ6Τ6Τ6Τ(；7'6Τ6?6Τ61?；"為獲 得啟動子過程中使用的反向引物的留存序列（該留存序列與反向引物的相應(yīng)序列互補）， 共計22bp ;該DNA序列中剩余的部分則為獲自日本晴水稻中的DNA序列。需要強調(diào)的是， 本文中所提到的啟動子既可以指上述整個DNA序列，也可以指去除上述引物留存序列后的 DNA序列。
[0018] 綜上所述，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)日本晴水稻中的一段DNA序列能夠起到驅(qū) 動特定基因在鹽誘導(dǎo)的情況下特異性表達的作用，并從日本晴水稻（Oryza sativa L cv. Nipponbare)中分離克隆L0C_0s04g33920. 1基因上游包括轉(zhuǎn)錄起始位點在內(nèi)的1950bp 的DNA序列，并將其命名為POsSaltl (序列表中的SEQ ID No: 1)。將該序列經(jīng)酶切后連接 到植物雙元表達載體PCAMBIA1391上，獲得相應(yīng)的重組質(zhì)粒（即重組表達載體），利用該重 組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌菌株EHA105,然后用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法進行水稻的轉(zhuǎn)化，得到轉(zhuǎn)基 因水稻植株。對獲得的轉(zhuǎn)基因水稻進行組織化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因植株在鹽誘導(dǎo)處理后，整 體上的Gus基因表達水平相對較高并顯藍色，從而證明該1950bp的序列具有驅(qū)動基因表達 的活性，而且該啟動子驅(qū)動的Gus基因在水稻鹽誘導(dǎo)處理后表達。
[0019] 本發(fā)明所述的啟動子序列可與植物雙元表達載體連接，用于取代組成型啟動子。 并且，該啟動子序列可以與所需的靶標(biāo)基因連接，構(gòu)建重組植物表達載體，經(jīng)轉(zhuǎn)化后，在鹽 誘導(dǎo)處理后可驅(qū)動靶標(biāo)基因在植株中特異性表達，從而提高外源靶標(biāo)基因在植物中的表達 量，增加轉(zhuǎn)基因的效果。
[0020] 技術(shù)效果
[0021] 本發(fā)明所克隆的水稻啟動子POsSaltl能夠調(diào)控基因在植株中集中表達，在實際 應(yīng)用中具有顯著價值。通過該啟動子對農(nóng)作物品種進行基因改造，如通過該啟動子調(diào)控目 標(biāo)基因在植株中表達，可以提高和改善水稻的生長特性和機制，代替35S等組成型啟動子。 可以在保證所驅(qū)動抗鹽基因在鹽脅迫時正常發(fā)揮功能的同時避免在非鹽脅迫情況下不必 要的表達，從而培育出實用有效的抗鹽植物品種。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0022] 以下，結(jié)合附圖來詳細說明本發(fā)明的實施方案，其中：
[0023] 圖1為將POsSaltl啟動子構(gòu)建于pCAMBIA1391載體質(zhì)粒中的示意圖，其中圖1中 A 為 pCAMBIA1391 示意圖，B 為 pCAMBIA1391-P0sSaltl 示意圖，其中示出 了利用 POsSaltl 啟動子驅(qū)動位于其下游的GUS基因表達；
[0024] 圖2為對本發(fā)明的啟動子進行酶切驗證的結(jié)果示意圖。
[0025] 圖3為鹽誘導(dǎo)處理圖片，將萌發(fā)7天后的POsSaltl : :gus轉(zhuǎn)基因幼苗，在200mM NaCl溶液中處理24小時，模擬鹽處理，同時以水處理為對照。圖中NT為對照，Salt是200mM NaCl處理24小時后的染色結(jié)果。

【具體實施方式】
[0026] 以下參照具體的實施例來說明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，這些實施例僅 用于說明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0027] 下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的藥 材原料、試劑材料等，如無特殊說明，均為市售購買產(chǎn)品。
[0028] 含有酶切位點的POsSaltl啟動子的獲得
[0029] 步驟1、引物的設(shè)計
[0030] 根據(jù)NCBI中提供的水稻品種日本晴（Oryza sativa L cv. Nipponbare)全基因組序 列，依據(jù)水稻POsSaltl基因的序列設(shè)計擴增引物，并根據(jù)選用的載體及靶標(biāo)基因的特點， 設(shè)計引物的酶切位點。
[0031] 本實施例中以水稻雙元表達載體pCAMBIA1391(圖1A，來自于CAMBIA，公開使用載 體，安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因生物產(chǎn)品成分監(jiān)督檢驗測試中心水稻組保存）為例， 靶標(biāo)基因為Gus基因，具體設(shè)計的引物為：正向引物（SEQ ID No: 2)5'端帶PstI，酶切位點 (CTGCAG)，反向引物（SEQIDNo:3)5,端帶EcoRI，酶切位點（GAATTC)，引物序列如下：
[0032] 正向引物：CTGCAGGGGGTGAAGAGAAACGCTGGGG PstI
[0033] 反向引物：GAATTCCTCACACACACACACGCACGCA EcoRI
[0034] 由深圳華大基因公司合成。
[0035] 步驟2、啟動子POsSaltl的獲得
[0036] 以水稻品種日本晴DNA為模板，利用正向引物、反向引物擴增啟動子POsSal11，按 常規(guī)PCR體系，采用如下擴增程序：
[0037] 95°C預(yù)變性 5min ;95°C變性 30s，58°C退火 30s，72°C延伸 2min30s，循環(huán) 35 次；最 后 72°C延伸 10min。
[0038] 回收PCR擴增的目的片段，目的片段長度1950bp，將其連接到PGEM-T-Easy載體 (購自Promega公司，按載體說明書中的比例混合）上，按照熱激法轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL-Blue 感受態(tài)細胞后，使感受態(tài)細胞激活，進而將目的片段轉(zhuǎn)入到激活的感受態(tài)細胞中，然后，經(jīng) 菌落PCR篩選獲得陽性克隆，挑取單克隆搖菌液提質(zhì)粒，用PstI和EcoRI進行雙酶切驗證， 如圖2所示。將經(jīng)過鑒定的陽性克隆送交Invitrogen公司測序。驗證正確的克隆即為所 要獲得的啟動子POsSaltl，其核酸序列如SEQ ID No: 1所示。
[0039] 植物表達載體的構(gòu)建和農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化
[0040] 從上面"啟動子POsSaltl的獲得"過程中獲得的陽性克隆中提取質(zhì)粒，用PstI 和EcoRI雙酶切，回收啟動子POsSaltl片段。同時利用PstI和EcoRI對pCAMBIA1391 進行線性化處理、回收PCAMBIA1391，將上述的POsSaltl片段和pCAMBIA1391片段用T4 連接酶（購于TaKaRa公司）進行連接，得到啟動子POsSaltl與Gus基因融合的植物 表達載體pCAMBIA1391-P0sSaltl (圖1B)，利用凍融法將植物表達載體轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌 (Agrobacterium tumefaciens) EHA105 (安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因生物產(chǎn)品成分監(jiān) 督檢驗測試中心水稻組保存）。
[0041] 利用啟動子POsSaltl驅(qū)動Gus報告基因在水稻中表達
[0042] 步驟1 :農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水稻遺傳轉(zhuǎn)化
[0043] 成熟種子去掉穎殼后，用70%酒精浸泡種子lmin，倒掉酒精。用含有1滴Tween20 的50%次氯酸鈉（原液有效氯濃度大于4% )溶液浸泡種子40min(150r/min)。倒掉次氯 酸鈉，無菌水洗5遍至溶液澄清，無次氯酸鈉味道。無菌水浸泡種子過夜。用解剖刀沿種子 的糊粉層將胚剝下，將胚接種于愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。30°C下暗培養(yǎng)11天后將愈傷與胚乳及 胚芽分離，將去芽的狀態(tài)良好、分裂旺盛的初級愈傷組織進行預(yù)培養(yǎng)3?5天后用于農(nóng)桿菌 轉(zhuǎn)化。
[0044] 采用上述"植物表達載體的構(gòu)建和農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化"過程中轉(zhuǎn)入了重組表達載 體的根癌農(nóng)桿菌進行農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化，獲得POsSaltl : :gus轉(zhuǎn)基因水稻植株該 遺傳轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)化子篩選及轉(zhuǎn)基因植株再生等參照Yongbo Duan(Yongbo Duan，Chenguang Zhai, et al. An efficient and high-throughput protocol for Agrobacterium mediated transformation based on phosphomannose isomerase positive selection in Japonica rice (Oryza sativa L.)[J]. Plant Cell Report,2012. D0I10. 1007/s00299-012-1275-3.) 等提出的方法。
[0045] 步驟2、甘露醇模擬的鹽脅迫處理
[0046] 以萌發(fā)7天后的POsSaltl : :gus轉(zhuǎn)基因水稻植株為材料，置于200mM NaCl溶液 中24小時鹽處理后，取全株染色；同時將材料置于水中為對照。
[0047] 步驟3、⑶S組織化學(xué)染色
[0048] 參照 Jefferson (Jefferson RA 等人· GUS fusion : β-Glucuronidase as a sensitive and versatile gene fusion marker in higher plant[J]. ΕΜΒ0 J. ,1987, 6:3901-3907)等提出的方法，將需要染色的組織抽真空，然后浸入染色液中，37°C染色24 小時。脫色時在37°C條件下用95%乙醇處理，至陰性對照材料呈白色。
[0049] ⑶S組織染色結(jié)果顯示，在鹽誘導(dǎo)條件處理24小時后，NaCl處理的POsSaltl :: gus轉(zhuǎn)基因水稻植株經(jīng)⑶S染色后呈現(xiàn)藍色，而未處理的對照植株無染色。結(jié)果說明，在鹽 脅迫誘導(dǎo)條件下，啟動子POsSaltl能夠驅(qū)動Gus基因在水稻植株中高水平表達，結(jié)果見圖 3,圖中左側(cè)為未處理的植株、右側(cè)為鹽誘導(dǎo)脅迫下的植株。
[0050] 以上對本發(fā)明【具體實施方式】的描述并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本 發(fā)明作出各種改變或變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的范 圍。
【權(quán)利要求】
1. 一種植物鹽誘導(dǎo)表達啟動子POsSaltl，其特征在于，所述植物鹽誘導(dǎo)表達啟動子 POsSaltl包含SEQ ID No: 1所示的DNA序列。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物鹽誘導(dǎo)表達啟動子，其特征在于，所述植物鹽誘導(dǎo)表達 啟動子POsSaltl的DNA序列為SEQ ID No: 1所示的序列。
3. -種表達盒，其特征在于，所述表達盒包含權(quán)利要求1-2中任意一項所述的植物鹽 誘導(dǎo)表達啟動子POsSaltl。
4. 一種重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體包含權(quán)利要求1-3中任意一項 所述的植物鹽誘導(dǎo)表達啟動子，在所述重組表達載體中，所述植物鹽誘導(dǎo)表達啟動子連接 于載體中待表達的基因序列的上游； 優(yōu)選地，所述待表達的基因為Gus基因，所述重組表達載體為pCAMBIA1391-P0sSaltl， 其中PCAMBIA1391為植物雙元表達載體。
5. -種宿主菌，其特征在于，所述宿主菌包含權(quán)利要求1-2中任意一項所述的植物鹽 誘導(dǎo)表達啟動子POsSaltl、權(quán)利要求3所述的表達盒、或根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組表達載 體，其中，所述宿主菌為根癌農(nóng)桿菌。
6. -種轉(zhuǎn)化子，其特征在于，所述轉(zhuǎn)化子包含權(quán)利要求1-3中任意一項所述的植物鹽 誘導(dǎo)表達啟動子POsSaltl、權(quán)利要求4所述的表達盒、或根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組表達載 體。
7. -種根據(jù)權(quán)利要求1-2中任意一項所述的植物鹽誘導(dǎo)表達啟動子POsSaltl在培育 轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括：將根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項所述的 植物鹽誘導(dǎo)表達啟動子POsSaltl連接于載體中待表達的基因序列上游，從而構(gòu)建重組表 達載體；將所述重組表達載體轉(zhuǎn)化到植物細胞、組織或器官中進行培育。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用用于改良植物生長特性，所述植 物為單子葉植物：水稻、小麥、玉米、大麥、高粱或燕麥。
【文檔編號】C12N15/113GK104046629SQ201410325516
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年7月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月8日
【發(fā)明者】秦瑞英, 楊劍波, 李莉, 李 浩, 馬卉, 魏鵬程, 楊亞春, 許蓉芳 申請人:安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所