可常溫運(yùn)輸?shù)母煞刍銣財(cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種可常溫運(yùn)輸?shù)母煞刍銣財(cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑及其制備方法。在液體試劑中加入凍干保護(hù)劑，采用真空冷凍干燥的方法，將液態(tài)的恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑的組分凍干成固態(tài)的干粉，該固態(tài)試劑可常溫運(yùn)輸，在反應(yīng)時(shí)加入液態(tài)的反應(yīng)底物溶解即可進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)性能優(yōu)越，操作方便，可廣泛應(yīng)用于各類(lèi)病原、食品微生物、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品等的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】可常溫運(yùn)輸?shù)母煞刍銣財(cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種可常溫運(yùn)輸?shù)母煞刍銣財(cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)是2000年由日本榮研化學(xué)株式會(huì)社開(kāi)發(fā)的一種新穎的恒溫核酸擴(kuò)增方法，其特點(diǎn)是針對(duì)靶基因的6個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)4種特異引物，利用一種鏈置換DNA聚合酶在等溫條件(63°C左右)保溫30 - 60分鐘，即可完成核酸擴(kuò)增反應(yīng)。與常規(guī)PCR相t匕，不需要模板的熱變性、溫度循環(huán)、電泳及紫外觀察等過(guò)程。環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法是一種全新的核酸擴(kuò)增方法， 具有簡(jiǎn)單、快速、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。該技術(shù)在靈敏度、特異性和檢測(cè)范圍等指標(biāo)上能媲美甚至優(yōu)于PCR技術(shù)，不依賴(lài)任何專(zhuān)門(mén)的儀器設(shè)備實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)高通量快速檢測(cè)，檢測(cè)成本遠(yuǎn)低于熒光定量PCR。
[0003]環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)需要具備以下條件:
(O要被復(fù)制的DNA模板；
(2)針對(duì)DNA模板設(shè)計(jì)的特異性引物；
(3)fciDNA聚合酶；
(4)反應(yīng)液；
(5)dNTP ；
(6)Mg2+；
但這些物質(zhì)都需要冷凍儲(chǔ)存，尤其是fei DNA聚合酶，需要在-20°C保存，其不能反復(fù)凍融，因此，給試劑的運(yùn)輸和客戶(hù)使用帶來(lái)了極大的麻煩，增加了運(yùn)輸成本，同時(shí)，每次實(shí)驗(yàn)都要配制相應(yīng)反應(yīng)體系，使用起來(lái)也非常不方便，容易導(dǎo)致由于操作者操作引起的誤差，且容易造成實(shí)驗(yàn)間的污交叉染。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中所存在的不足，提供一種可常溫運(yùn)輸?shù)母煞刍銣財(cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑及其制備方法。
[0005]本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是:
一種凍干保護(hù)劑，其含有棉籽糖、牛血清白蛋白、聚乙二醇20000和L-蘇氨酸。
[0006]作為優(yōu)選的，所述凍干保護(hù)劑含有3~10份棉籽糖、0.1~1份牛血清白蛋白、
0.5~2份聚乙二醇20000和0.01~0.1份L-蘇氨酸，按質(zhì)量份計(jì)。
[0007]一種可常溫運(yùn)輸?shù)母煞刍銣財(cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑，其包括恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑和上述的凍干保護(hù)劑。
[0008]所述恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑包括恒溫PCR反應(yīng)液、DNA聚合酶、引物和熒光染料。
[0009]作為優(yōu)選的，所述凍干保護(hù)劑在整個(gè)體系中的濃度為3.61%~13.1%。
[0010]一種可常溫運(yùn)輸?shù)母煞刍銣財(cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑的制備方法，包括如下步驟:
(O按權(quán)利要求3~5任一項(xiàng)的配方制備凍干粉原液；(2)將凍干粉原液凍干即可。
[0011]本發(fā)明的有益效果是:
I)本發(fā)明的干粉化恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑可增加恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑的穩(wěn)定性，長(zhǎng)期放置后凍干劑的檢測(cè)靈敏度和檢出時(shí)間與新配置的檢測(cè)試劑差別不大，且凍干試劑可常溫運(yùn)輸，節(jié)約能源和運(yùn)輸成本。
[0012]2 )本發(fā)明的干粉化恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑已將各非變量試劑進(jìn)行組合，大大減少實(shí)驗(yàn)步驟，方便使用，同時(shí)減少實(shí)驗(yàn)誤差。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0013]圖1為真空冷凍干燥后的恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑。
【具體實(shí)施方式】
[0014]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但并不局限于此。如無(wú)特別說(shuō)明，以下“％”均指質(zhì)量百分比。
[0015]本發(fā)明的干粉化恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑，組分見(jiàn)表1。下述體系凍干后，只需要加入23 μ I超純水溶解，再加入2 μ I核酸模板，即可完成對(duì)病原的檢測(cè)。
[0016]表1
【權(quán)利要求】
1.一種凍干保護(hù)劑，其含有棉籽糖、牛血清白蛋白、聚乙二醇20000和L-蘇氨酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凍干保護(hù)劑，其特征在于，所述凍干保護(hù)劑含有3~10份棉籽糖、0.1~1份牛血清白蛋白、0.5~2份聚乙二醇20000和0.01~0.1份L-蘇氨酸，按質(zhì)量份計(jì)。
3.一種可常溫運(yùn)輸?shù)母煞刍銣財(cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑，其包括恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑和權(quán)利要求1或2所述的凍干保護(hù)劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的可常溫運(yùn)輸?shù)母煞刍銣財(cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑，其特征在于，所述凍干保護(hù)劑在整個(gè)體系中的濃度為3.61%~13.1%。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的可常溫運(yùn)輸?shù)母煞刍銣財(cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑，其特征在于，所述恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑包括恒溫PCR反應(yīng)液、DNA聚合酶、引物和熒光染料。
6.一種可常溫運(yùn)輸?shù)母煞刍銣財(cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑的制備方法，包括如下步驟: (O按權(quán)利要求3~5任一項(xiàng)的配方制備凍干粉原液； (2)將凍干粉原液凍干即可。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103966323SQ201410173060
【公開(kāi)日】2014年8月6日 申請(qǐng)日期:2014年4月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月25日
【發(fā)明者】劉助紅, 劉永偉, 劉美賢, 唐大運(yùn), 李紅梅, 張璜, 曹煒偉, 石磊 申請(qǐng)人:廣州迪澳生物科技有限公司