一種復(fù)方桑黃口服液及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種復(fù)方桑黃口服液及其制備方法，是應(yīng)用生物工程發(fā)酵技術(shù)，以桑黃菌為出發(fā)菌株，經(jīng)液體發(fā)酵、微波提取獲得富含桑黃多糖的粗多糖濃縮液，再加上絞股藍(lán)粗多糖濃縮液、蘆薈粗多糖濃縮液、黨參粗多糖濃縮液、枸杞粗多糖濃縮液（多糖濃度均達(dá)10mg/ml），經(jīng)調(diào)配、裝瓶、鎖蓋、殺菌后制得復(fù)方桑黃口服液。經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，本發(fā)明的復(fù)方桑黃口服液具有增強(qiáng)單核-巨噬細(xì)胞功能、增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞活力，提示本復(fù)方桑黃口服液具有增強(qiáng)免疫功能的作用，可顯著提高機(jī)體特異性和非特異性免疫功能。
【專利說明】一種復(fù)方桑黃口服液及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于保健品領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)方桑黃口服液及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]秦黃{PhelIinus igniarius (L.ex Fr.) Quel),屬擔(dān)子菌綱、多孔菌目、多孔菌科、針層孔菌屬，俗稱火木層孔菌、針層孔菌、桑耳、桑臣、胡孫眼等。桑黃是一種珍貴的藥用真菌，在我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)藥領(lǐng)域中主要用以治療淋病、崩漏、帶下、疵瘕積聚、癖軟、脾虛泄瀉等，在日本則作為利尿劑使用。近年來，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)桑黃的藥理作用作了較為深入的研究，證實(shí)桑黃子實(shí)體及其提取物除了具有傳統(tǒng)認(rèn)知的藥理作用以外，還具有抗癌、抗腫瘤、抗誘變、免疫調(diào)節(jié)、保肝和抗肝硬化等作用。
[0003]桑黃加工品在國(guó)際醫(yī)藥市場(chǎng)上價(jià)格昂貴，但由于野生桑黃越來越稀少，且外銷需求量大，往往出現(xiàn)供不應(yīng)求的局面。在我國(guó)，桑黃的人工栽培研究才剛剛起步，無法滿足市場(chǎng)的需求，且主要針對(duì)桑黃子實(shí)體及其提取物，較少以桑黃液體發(fā)酵提取物進(jìn)行研究?，F(xiàn)代研究表明，桑黃中具有抗癌作用的物質(zhì)是桑黃多糖，它能通過細(xì)胞調(diào)節(jié)和體液免疫來提高免疫力而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，并且無毒副作用。因此，研究桑黃液體發(fā)酵提取物——桑黃多糖，對(duì)于保護(hù)天然資源、解決資源缺乏，具有十分重要的意義。劉斌等的發(fā)明專利(CN 103405639A)介紹了一種桑黃多糖與中藥復(fù)方降血糖口服液及其制備方法，它以桑黃液體菌為出發(fā)菌，進(jìn)行巨菌草固體發(fā)酵，獲得大量的桑黃菌絲；采用熱水浸提法提取桑黃多糖，去雜、醇沉、濃縮后冷凍干燥成多糖粉末；最后將多糖粉末與中藥復(fù)方濃縮液(玉竹、黃芪、桑葉、三七、枸杞子)混合配制成不同劑量的復(fù)合物。桑黃多糖與中藥復(fù)方降血糖復(fù)合物經(jīng)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，表明高劑量組的血糖下降率高達(dá)44.62%，具有很強(qiáng)的降血糖效果。
[0004]但目前尚未見以桑黃多糖作為主要成分，結(jié)合其它增強(qiáng)免疫的藥食兩用材料的提取物多糖，經(jīng)復(fù)方調(diào)配制成具有增強(qiáng)免疫功能的口服液的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種復(fù)方桑黃口服液，制備工藝穩(wěn)定可靠，可操作性強(qiáng)，生產(chǎn)周期短，降低生產(chǎn)能耗；通過與其他藥食兩用原料的協(xié)同作用，可達(dá)到較好的保健效果。經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)表明，本復(fù)方桑黃口服液具有增強(qiáng)單核-巨噬細(xì)胞功能、增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞活力，提示本復(fù)方桑黃口服液具有增強(qiáng)免疫功能的作用，可顯著提高機(jī)體特異性和非特異性免疫功能。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種復(fù)方桑黃口服液中的組分及各組分重量百分?jǐn)?shù)為:桑黃粗多糖濃縮液60%，絞股藍(lán)粗多糖濃縮液10%，蘆薈粗多糖濃縮液10%，黨參粗多糖濃縮液10%，枸杞粗多糖濃縮液10%。
[0007]所述復(fù)方桑黃口服液的制備方法，是以桑黃菌為出發(fā)菌株，經(jīng)液體發(fā)酵、微波提取獲得富含桑黃多糖的粗多糖濃縮液，再加上絞股藍(lán)粗多糖濃縮液、蘆薈粗多糖濃縮液、黨參粗多糖濃縮液、枸杞粗多糖濃縮液調(diào)制而成。
[0008]所述復(fù)方桑黃口服液的具體制備方法包括以下步驟:
O桑黃菌的液體發(fā)酵:
按專利文件CN 100438882C中的桑黃菌液體發(fā)酵方法進(jìn)行發(fā)酵，得發(fā)酵醪；
2)桑黃粗多糖濃縮液的制備:
將發(fā)酵醪經(jīng)板框壓濾后，得到發(fā)酵液和富含菌絲的濾渣A ;將濾渣A加入其重量1-5倍的水，微波功率480W處理lOmin，再經(jīng)板框壓濾得第一次提取液和濾渣B ;將濾渣B再重復(fù)提取、過濾，得第二次提取液；將發(fā)酵液和兩次提取液合并，50-7(TC，0.05-0.095MPa下低溫真空濃縮至可溶性固形物含量為15%-20%，加入乙醇，使醇析時(shí)的乙醇濃度為70%-75%，冷卻靜置10_20h后離心得沉淀物，再加水溶解得桑黃粗多糖濃縮液，其多糖含量為IOmg/
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[0009]3)絞股藍(lán)粗多糖濃縮液的制備:
取絞股藍(lán)洗凈、粉碎，加入絞股藍(lán)重量10-30倍水，微波功率250W處理1-2 min，經(jīng)板框壓濾得第一次提取液和濾渣；將濾渣再重復(fù)提取、過濾，得第二次提取液；合并兩次提取液，50-70°C，0.05-0.095MPa下低溫真空濃縮至可溶性固形物含量為15%_20%，加入乙醇，使醇析時(shí)的乙醇濃度為70%-75%，冷卻靜置10-20h后離心得沉淀物，再加水溶解得絞股藍(lán)粗多糖濃縮液，其多糖含量為10mg/mL ；
4)蘆薈粗多糖濃縮液的制備:
將新鮮蘆薈葉洗凈、去皮取凝膠體，按凝膠體重量10-20倍加入水，微波功率250W處理1-2 min，經(jīng)板框壓濾得第一次提取液和濾渣；將濾渣再重復(fù)提取、過濾，得第二次提取液；合并兩次提取液，50-70°C，0.05-0.095MPa下低溫真空濃縮至可溶性固形物含量為15%-20%，加入乙醇，使醇析時(shí)的乙醇濃度為70%-75%，冷卻靜置10-20h后離心得沉淀物，再加水溶解得蘆薈粗多糖濃縮液，其多糖含量為lOmg/mL ；
5)黨參粗多糖濃縮液的制備:
取黨參洗凈、切碎，按黨參重量10-30倍加入水，微波功率480W處理5-10 min，經(jīng)板框壓濾得第一次提取液和濾渣；將濾渣再重復(fù)提取、過濾，得第二次提取液；合并兩次提取液，50-70°C，0.05-0.095MPa下低溫真空濃縮至可溶性固形物含量為15%_20%，加入乙醇，使醇析時(shí)的乙醇濃度為70%-75%，冷卻靜置10-20h后離心得沉淀物，再加水溶解得黨參粗多糖濃縮液，其多糖含量為10mg/mL ；
6)枸杞粗多糖濃縮液的制備:
取枸杞洗凈，按枸杞重量5-15倍加入水，微波功率480W處理5-10 min,經(jīng)板框壓濾得第一次提取液和濾渣；將濾渣再重復(fù)提取、過濾，得第二次提取液；合并兩次提取液，50-70°C,0.05-0.095MPa下低溫真空濃縮至可溶性固形物含量為15%_20%，加入乙醇，使醇析時(shí)的乙醇濃度為70%-75%，冷卻靜置10-20h后離心得沉淀物，再加水溶解得枸杞粗多糖濃縮液，其多糖含量為10mg/mL ；
7)口服液的調(diào)制:
將所得桑黃粗多糖濃縮液、絞股藍(lán)粗多糖濃縮液、蘆薈粗多糖濃縮液、黨參粗多糖濃縮液和枸杞粗多糖濃縮液按所述比例混合均勻后，經(jīng)裝瓶、鎖蓋、殺菌后即為成品。
[0010]本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)在于:本發(fā)明復(fù)方桑黃口服液的制備工藝穩(wěn)定可靠，而且采用微波結(jié)合熱水浸提法進(jìn)行提取，可操作性強(qiáng)，生產(chǎn)周期短，降低了生產(chǎn)能耗；通過與其他藥食兩用原料的協(xié)同作用，生產(chǎn)成本更低的同時(shí)可達(dá)到較好的保健效果。經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)表明，本發(fā)明復(fù)方桑黃口服液的高劑量組(40ml/kg)能明顯增強(qiáng)小鼠碳廓清能力，中(20ml/kg)、高劑量組能明顯提高小鼠巨噬細(xì)胞對(duì)雞紅細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)，低(10ml/kg)、中、高劑量組能明顯增強(qiáng)小鼠NK細(xì)胞活力，表明本復(fù)方桑黃口服液具有增強(qiáng)單核-巨噬細(xì)胞功能、增強(qiáng)NK細(xì)胞活力，提示本復(fù)方桑黃口服液具有增強(qiáng)免疫功能的作用，可顯著提高機(jī)體特異性和非特異性免疫功能。
【具體實(shí)施方式】
[0011]一種復(fù)方桑黃口服液，是以桑黃菌為出發(fā)菌株，經(jīng)液體發(fā)酵、微波提取獲得富含桑黃多糖的提取液，再經(jīng)醇析后制成桑黃粗多糖濃縮液，再加上絞股藍(lán)粗多糖濃縮液、蘆薈粗多糖濃縮液、黨參粗多糖濃縮液、枸杞粗多糖濃縮液，經(jīng)調(diào)配、裝瓶、鎖蓋、殺菌后制得所述復(fù)方桑黃口服液。
[0012]其制備包括以下步驟:
O桑黃菌的液體發(fā)酵:
桑黃菌種由福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物保藏室提供，編號(hào)為/?.7 0001 ；
將桑黃保存種用馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基)進(jìn)行活化、復(fù)壯，置28°C恒溫箱靜止培養(yǎng)15天，得到生產(chǎn)斜面種，置冰箱中冷藏備用；所述的PDA培養(yǎng)基的配方為(g/L):去皮馬鈴薯200，葡萄糖20，瓊脂20，加水定容至所需體積，pH自然；
將生產(chǎn)斜面種用搖瓶培 養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，得到生產(chǎn)搖瓶一級(jí)種；所述的搖瓶培養(yǎng)基的配方為(g/L):玉米粉50、麩皮粉30、KH2PO4 3、MgSO4.7H20 1.5、VB1 0.1，加水定容至所需體積，pH自然；培養(yǎng)條件為:以160mL/500mL裝量，接入Icm2的斜面菌種，旋轉(zhuǎn)式搖床140rpm培養(yǎng)8d，溫度28°C ;將生產(chǎn)搖瓶一級(jí)種按15%的接種量，按上述搖瓶培養(yǎng)基的配方和培養(yǎng)條件再次用搖瓶培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)5天，得到生產(chǎn)搖瓶二級(jí)種；
將生產(chǎn)搖瓶二級(jí)種轉(zhuǎn)接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的200L種子罐進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)得到發(fā)酵一級(jí)種；所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為(kg/100L):黃豆粉4、玉米粉3、麩皮粉0.5、酵母粉0.4、CaSO4 UK2SO4 0.UNa2HPO4 0.15、ZnSO4.7H20 0.0UFeSO4.7H20 0.05、VB1 0.01，加水定容至100L，pH 7;培養(yǎng)條件為:接種量4L，罐溫28°C，罐壓0.05MPa，攪拌轉(zhuǎn)速100 rpm，通氣量1:0.5 v/v.min，發(fā)酵培養(yǎng)4 d ;按上述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方和培養(yǎng)條件將發(fā)酵一級(jí)種轉(zhuǎn)接入裝有2500L發(fā)酵培養(yǎng)基的5000L發(fā)酵罐培養(yǎng)，發(fā)酵6 d放罐，得發(fā)酵醪；
2)桑黃粗多糖濃縮液的制備:
將發(fā)酵醪經(jīng)板框壓濾后，得到發(fā)酵液和富含菌絲的濾渣A ;將濾渣A加入其重量3倍的水，微波功率480W處理lOmin，再經(jīng)板框壓濾得第一次提取液和濾渣B ;將濾渣B再重復(fù)提取、過濾，得第二次提取液；將發(fā)酵液和兩次提取液合并，60°C，0.0SMPa下低溫真空濃縮至可溶性固形物含量為16%，加入乙醇，使醇析時(shí)的乙醇濃度為75%，冷卻靜置15h后離心得沉淀物，再加水溶解得桑黃粗多糖濃縮液，其多糖含量為10mg/mL。
[0013]3)絞股藍(lán)粗多糖濃縮液的制備:
取絞股藍(lán)洗凈、粉碎，加入絞股藍(lán)重量20倍水，微波功率250W處理2 min,經(jīng)板框壓濾得第一次提取液和濾渣；將濾渣再重復(fù)提取、過濾，得第二次提取液；合并兩次提取液，60°C,0.08MPa下低溫真空濃縮至可溶性固形物含量為15%，加入乙醇，使醇析時(shí)的乙醇濃度為75%，冷卻靜置15h后離心得沉淀物，再加水溶解得絞股藍(lán)粗多糖濃縮液，其多糖含量為 10mg/mL ；
4)蘆薈粗多糖濃縮液的制備:
將新鮮蘆薈葉洗凈、去皮取凝膠體，按凝膠體重量10倍加入水，微波功率250W處理Imin，經(jīng)板框壓濾得第一次提取液和濾渣；將濾渣再重復(fù)提取、過濾，得第二次提取液；合并兩次提取液，60°C，0.08MPa下低溫真空濃縮至可溶性固形物含量為15%，加入乙醇，使醇析時(shí)的乙醇濃度為75%，冷卻靜置15h后離心得沉淀物，再加水溶解得蘆薈粗多糖濃縮液，其多糖含量為10mg/mL ；
5)黨參粗多糖濃縮液的制備:
取黨參洗凈、切碎，按黨參重量30倍加入水，微波功率480W處理8 min,經(jīng)板框壓濾得第一次提取液和濾渣；將濾渣再重復(fù)提取、過濾，得第二次提取液；合并兩次提取液，65°C，
0.09MPa下低溫真空濃縮至可溶性固形物含量為20%，加入乙醇，使醇析時(shí)的乙醇濃度為75%，冷卻靜置15h后離心得沉淀物，再加水溶解得黨參粗多糖濃縮液，其多糖含量為IOmg/mL ；
6)枸杞粗多糖濃縮液的制備:
取枸杞洗凈，按枸杞重量10倍加入水，微波功率480W處理10 min,經(jīng)板框壓濾得第一次提取液和濾渣；將濾渣再重復(fù)提取、過濾，得第二次提取液；合并兩次提取液，70°C，
0.09MPa下低溫真空濃縮至可溶性固形物含量為18%，加入乙醇，使醇析時(shí)的乙醇濃度為75%，冷卻靜置15h后離心得沉淀物，再加水溶解得枸杞粗多糖濃縮液，其多糖含量為IOmg/mL ；
7)口服液的調(diào)制:
將桑黃粗多糖濃縮液60 wt%，絞股藍(lán)粗多糖濃縮液10 wt%，蘆薈粗多糖濃縮液10 wt%,黨參粗多糖濃縮液10 wt%和枸杞粗多糖濃縮液10 wt%混合均勻后，經(jīng)裝瓶、鎖蓋、殺菌后即為復(fù)方桑黃保健口服液。
[0014]將本實(shí)施例的復(fù)方桑黃保健口服液，按衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003年版)所述方法進(jìn)行增強(qiáng)免疫的藥效學(xué)試驗(yàn)，其結(jié)果如下:
1.樣品對(duì)小鼠體重的影響
分別將不同劑量的復(fù)方桑黃口服液與專利文件CN 100438882C中的桑黃保健口服液作為樣品，以生理鹽水作為陰性對(duì)照，對(duì)灌胃小鼠2周，研究其對(duì)小鼠體重的影響，結(jié)果如表1、表2所不。
[0015]表I樣品(免疫I組)對(duì)小鼠體重的影響(g，X 土S)
【權(quán)利要求】
1.一種復(fù)方桑黃口服液，其特征在于:所述復(fù)方桑黃口服液中的組分及各組分重量百分?jǐn)?shù)為:桑黃粗多糖濃縮液60%，絞股藍(lán)粗多糖濃縮液10%，蘆薈粗多糖濃縮液10%，黨參粗多糖濃縮液10%，枸杞粗多糖濃縮液10%。
2.一種如權(quán)利要求1所述復(fù)方桑黃口服液的制備方法，其特征在于:以桑黃菌為出發(fā)菌株，經(jīng)液體發(fā)酵、微波提取獲得富含桑黃多糖的粗多糖濃縮液，再加上絞股藍(lán)粗多糖濃縮液、蘆薈粗多糖濃縮液、黨參粗多糖濃縮液、枸杞粗多糖濃縮液調(diào)制而成。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述復(fù)方桑黃口服液的制備方法，其特征在于:將經(jīng)液體發(fā)酵得到的發(fā)酵醪經(jīng)板框壓濾后，得到發(fā)酵液和富含菌絲的濾渣A ;將濾渣A加入其重量1-5倍的水，微波功率480W處理lOmin，再經(jīng)板框壓濾得第一次提取液和濾渣B ;將濾渣B再重復(fù)提取、過濾，得第二次提取液；將發(fā)酵液和兩次提取液合并，50-7(TC，0.05-0.095MPa下低溫真空濃縮至可溶性固形物含量為15%-20%，加入乙醇，使醇析時(shí)的乙醇濃度為70%-75%，冷卻靜置10_20h后離心得沉淀物，再加水溶解得桑黃粗多糖濃縮液，其多糖含量為10mg/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述復(fù)方桑黃口服液的制備方法，其特征在于:所述絞股藍(lán)粗多糖濃縮液的制備方法為:取絞股藍(lán)洗凈、粉碎，加入絞股藍(lán)重量10-30倍水，微波功率250W處理1-2 min，經(jīng)板框壓濾得第一次提取液和濾渣；將濾渣再重復(fù)提取、過濾，得第二次提取液；合并兩次提取液，50-700C，0.05-0.095MPa下低溫真空濃縮至可溶性固形物含量為15%-20%，加入乙醇，使醇析時(shí)的乙醇濃度為70%-75%，冷卻靜置10-20h后離心得沉淀物，再加水溶解得絞股藍(lán)粗多糖濃縮液，其多糖含量為10mg/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述復(fù)方桑黃口服液的制備方法，其特征在于:所述蘆薈粗多糖濃縮液的制備方法為:將新鮮蘆薈葉洗凈、去皮取凝膠體，按凝膠體重量10-20倍加入水，微波功率250W處理1-2 min，經(jīng)板框壓濾得第一次提取液和濾渣；將濾渣再重復(fù)提取、過濾，得第二次提取液；合并兩次提取液，50-7(TC，0.05-0.095MPa下低溫真空濃縮至可溶性固形物含量為15%-20%，加入乙醇，使醇析時(shí)的乙醇濃度為70%-75%，冷卻靜置10-20h后離心得沉淀物，再加水溶解得蘆薈粗多糖濃縮液，其多糖含量為10mg/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述復(fù)方桑黃口服液的制備方法，其特征在于:所述黨參粗多糖濃縮液的制備方法為:取黨參洗凈、切碎，按黨參重量10-30倍加入水，微波功率480W處理5-10 min,經(jīng)板框壓濾得第一次提取液和濾渣；將濾渣再重復(fù)提取、過濾，得第二次提取液；合并兩次提取液，50-70°C，0.05-0.095MPa下低溫真空濃縮至可溶性固形物含量為15%-20%，加入乙醇，使醇析時(shí)的乙醇濃度為70%-75%，冷卻靜置10-20h后離心得沉淀物，再加水溶解得黨參粗多糖濃縮液，其多糖含量為10mg/mL。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述復(fù)方桑黃口服液的制備方法，其特征在于:所述枸杞粗多糖濃縮液的制備方法為:取枸杞洗凈，按枸杞重量5-15倍加入水，微波功率480W處理5-10 min,經(jīng)板框壓濾得第一次提取液和濾渣；將濾渣再重復(fù)提取、過濾，得第二次提取液；合并兩次提取液，50-70°C，0.05-0.095MPa下低溫真空濃縮至可溶性固形物含量為15%_20%，加入乙醇，使醇析時(shí)的乙醇濃度為70%-75%，冷卻靜置10-20h后離心得沉淀物，再加水溶解得枸杞粗多糖濃縮液，其多糖含量為10mg/mL。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述復(fù)方桑黃口服液的制備方法，其特征在于:將所得桑黃粗多糖濃縮液、絞股藍(lán)粗多糖濃縮液、蘆薈粗多糖濃縮液、黨參粗多糖濃縮液和枸杞粗多糖濃縮液按比例混合均勻后，經(jīng)裝瓶、鎖蓋、殺菌后即為成品。
【文檔編號(hào)】A23L1/09GK103876014SQ201410122454
【公開日】2014年6月25日 申請(qǐng)日期:2014年3月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月31日
【發(fā)明者】傅海慶, 傅華英, 林希 申請(qǐng)人:福建農(nóng)林大學(xué)