源于廣西巴馬長壽村的鼠李糖乳桿菌在輔助降血脂方面的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物【技術領域】，涉及源于廣西巴馬長壽村的鼠李糖乳桿菌在輔助降血脂方面應用。本發(fā)明對分離自廣西巴馬長壽村的具有體外降膽固醇及分解甘油三酯能力的鼠李糖乳桿菌hsryfm1301（CGMCC?NO.8545）進行動物試驗，并評價其輔助降血脂功能和安全性。結果表明，連續(xù)灌胃hsryfm13017天后，大鼠生長狀態(tài)正常、毛色光滑、精神活躍，菌株不發(fā)生肝腸易位等現象；對實驗性大鼠輔助降血脂功能特性研究，表明鼠李糖乳桿菌hsryfm1301及其發(fā)酵乳能夠降低大鼠肝臟脂肪的堆積、降低血清低密度脂蛋白作用，表明鼠李糖乳桿菌hsryfm1301具有輔助降血脂功能。
【專利說明】源于廣西巴馬長壽村的鼠李糖乳桿菌在輔助降血脂方面的應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術領域】，特別涉及源于廣西巴馬長壽村的益生菌鼠李糖乳桿菌hsryfml301及在輔助降血脂功能方面的應用。
技術背景
[0002]隨著人們生活水平的提高，高血脂及其引發(fā)的心血管疾病發(fā)病率也逐年升高，藥物作為治療這些疾病的主要方式，具有較大的副作用。乳酸菌是人體腸道中重要的益生菌，對維持宿主腸道的微生態(tài)平衡和提高免疫系統功能起著至關重要的作用，而在一些長壽之鄉(xiāng)如高加索山區(qū)和地中海沿岸的人們常飲用自制的酸牛奶，極少患有由高血脂引發(fā)的心血管及肥胖等疾病；近年來，大量的研究也表明，益生乳酸菌及其發(fā)酵制品具有降血脂的效果。本發(fā)明對篩選出的體外具有降膽固醇及分解甘油三酯能力的鼠李糖乳桿菌hsryfml301進行體內輔助降血脂功能研究，為研發(fā)具有輔助降血脂功能的發(fā)酵乳制品打下基礎。
【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明目的在于提供鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)hsryfml301在降血糖功能方面的應用。
[0004]本發(fā)明提供了一株鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)hsryfml301,該菌株具有體內降膽固醇及分解甘油三酯能力，已于2013年12月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏號是CGMCC N0.8545。
[0005]本發(fā)明公開了鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus) CGMCC N0.8545 在制備具有輔助降血脂功能的發(fā)酵乳中的應用。
[0006]公開了鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus) CGMCC N0.8545 在制備具有輔助降血脂功能的發(fā)酵乳飲料中的應用。
[0007]公開了鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus) CGMCC N0.8545 在制備具有輔助降血脂功能的活菌制劑中的應用。
[0008]經動物試驗證明，鼠李糖乳桿菌CGMCC N0.8545連續(xù)灌胃7天后，大鼠生長狀態(tài)正常、毛色光滑、精神活躍，菌株不發(fā)生肝腸易位等現象；對實驗性大鼠輔助降血脂功能特性研究，表明該菌株及其發(fā)酵乳能夠降低大鼠肝臟脂肪的堆積、降低血清低密度脂蛋白作用，表明該菌株具有輔助降血脂功能。
【具體實施方式】
[0009]實施例一:菌株篩選和鑒定
[0010]相關培養(yǎng)基及試劑配方
[0011](I)MRS-THIO培養(yǎng)基:蛋白胨10.0g,三水醋酸鈉3.0g，牛肉膏8.0g，檸檬酸三銨2.0g，酵母浸膏4.0g，七水硫酸鎂0.2g，葡萄糖10.0g，一水硫酸錳0.04g，吐溫-801.0mL，磷酸氫二鉀2.0g，硫乙醇酸鈉2.0g，調pH至6.4，121°C滅菌15min，冷卻備用。
[0012](3)膽固醇培養(yǎng)基:膽固醇0.10g、吐溫-801.0mL、蔗糖酯0.10g、冰乙酸5.0mLjjC浴超聲破碎備用。將上述制備的膽固醇膠束溶液加入到MRS液體培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基中膽固醇的終濃度為0.10mg/mL。并調pH至6.50±0.20，121°C滅菌15min，冷卻備用。
[0013](4)甘油三酯培養(yǎng)基:將2%的聚乙烯醇水溶液與植物油按3:1的比例混合，用高速組織搗碎機處理后作為甘油三酯的來源。將上述制備的植物油乳化液加入到MRS液體培養(yǎng)基中，調pH至6.50±0.20，121°C滅菌15min，冷卻備用。
[0014](5)人工胃液的配制:準確量取20.0mLImoI/L的HC1，用去離子水將pH分別調至2.0、3.0，加入NaCl使其質量分數達到0.2%，每100.0mL溶液中加入l.0g胃蛋白酶，充分溶解后，用0.22μπι微孔濾膜在無菌操作臺中過濾除菌，于無菌試劑瓶中低溫保藏備用。
[0015](6)硫酸鐵銨顯色劑:稱取4.46g硫酸鐵銨溶解于100.0mL85%磷酸中，取10.0mL溶液用濃硫酸定容至100.0mL，放入硅膠干燥皿中備用。
[0016]具體步驟:
[0017]I樣品采集
[0018]采集廣西巴馬長壽村中長壽人群及其家族人群樣品，加入ImL滅菌液體石蠟油密封后，迅速置于冰盒內，分離樣品中的乳酸菌。
[0019]2乳酸菌的分離
[0020]將采集的樣品經梯度稀釋后，分別接種于MRS固體培養(yǎng)基、LBS固體培養(yǎng)基中，37°C厭氧培養(yǎng)48h，挑取平板上的典型菌落，劃線分離得到純菌落。挑取各平板上的純菌落于MRS液體培養(yǎng)基中，37°C厭氧培養(yǎng)24h后，4°C冰箱冷藏備用或凍干保藏。
[0021]3乳酸菌的生理生化試驗
[0022]對分離到的乳酸菌進行革蘭氏染色，于顯微鏡下觀察菌體形態(tài)，并進行接觸酶、運動性、硝酸鹽還原及吲哚等生理生化試驗。
[0023]結果表明，從采集的15份樣品中分離獲得217株菌株，通過生理生化試驗發(fā)現156株菌革蘭氏染色為陽性，形狀為桿狀、短桿狀或球狀，在15°C及45°C環(huán)境下均能生長，接觸酶、運動性、硝酸鹽還原、吲哚、產H2S及明膠液化試驗均為陰性，所以將156株分離細菌初步鑒定為乳酸菌。
[0024]4乳酸菌分解膽固醇及甘油三酯能力的測定
[0025]將活化好的乳酸菌按3%的接種量接種至MRS-THIO膽固醇培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)24h后,取培養(yǎng)液0.2mL,加入1.0mL無水乙醇振蕩混勻Imin,再加入3.8mL無水乙醇振蕩混勻Imin,靜置5min后再次振蕩混勻,4000r/min離心10min,取2.0mL上清液用于膽固醇的測定，以未接菌的膽固醇培養(yǎng)基作為對照。膽固醇的測定采用硫酸鐵銨比色法，參照GB/T5009.128-2003食品中膽固醇的測定方法，測定其0D560nm值，膽固醇的分解率按下式計
算:
[0026]
【權利要求】
1.鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)CGMCC N0.8545在制備具有輔助降血脂功能的發(fā)酵乳中的應用。
2.鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)CGMCC N0.8545在制備具有輔助降血脂功能的發(fā)酵乳飲料中的應用。
3.鼠李糖 乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)CGMCC N0.8545在制備具有輔助降血脂功能的活菌制劑中的應用。
【文檔編號】C12N1/20GK103898017SQ201410122292
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2014年3月28日 優(yōu)先權日:2014年3月28日
【發(fā)明者】顧瑞霞, 陳大衛(wèi), 伍云, 黃嘉棣, 謝秉鏘, 孫寧 申請人:廣西皇氏甲天下乳業(yè)股份有限公司