禾谷縊管蚜特異性ss-coi引物對(duì)、試劑盒及其檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于分子生物學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，提供了一種禾谷縊管蚜特異性SS-COI引物對(duì)、試劑盒及其檢測(cè)方法。禾谷縊管蚜特異性SS-COI引物對(duì)如SEQ?ID?No.1和2所示，所述檢測(cè)方法包括使用所述引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增的步驟，如出現(xiàn)207bp擴(kuò)增條帶，如SEQ?ID?NO.3所示，則判定為禾谷縊管蚜的樣本。該檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單、快速、高效，一般可在5個(gè)小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，克服了傳統(tǒng)的研究捕食性天敵對(duì)害蟲捕食效應(yīng)的觀察法和生化手段研究捕食者與獵物關(guān)系的復(fù)雜性、費(fèi)用高、缺乏對(duì)靶標(biāo)的特異性等問題，適于基層推廣應(yīng)用。
【專利說明】禾谷縊管蚜特異性SS-COI引物對(duì)、試劑盒及其檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于分子生物學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說，涉及一種禾谷縊管蚜特異性SS-COI引物對(duì)、試劑盒及其檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]禾谷纟益管姆Macrosiphum avenae (Fabricius),為同翅目，Φ牙科。分布于上海、江蘇、浙江、山東、福建、四川、重慶、貴州、云南、遼寧、吉林、黑龍江、內(nèi)蒙古、新疆等。危害細(xì)葉結(jié)縷草、野牛草，還危害繡線菊、美人蕉、西府海棠、梅花、碧桃、櫻花、月季等花木以及小麥等農(nóng)作物。以成蚜、若蚜初春危害梅花的新葉，在葉背吮吸汁液，受害葉片向葉背縱卷，進(jìn)而枯黃脫落，嚴(yán)重時(shí)，被害葉株卷曲率可達(dá)90%以上。
[0003]田間棉蚜有多種捕食性天敵(如瓢蟲、草蛉等)，其保護(hù)和利用是棉蚜防治的重要措施。其中，明確捕食性天敵對(duì)棉蚜的捕食作用，對(duì)于分析田間食物鏈營(yíng)養(yǎng)關(guān)系及篩選優(yōu)勢(shì)天敵種類等具有指導(dǎo)意義。天敵捕食關(guān)系研究的方法很多，包括直接觀察法、解剖觀察法、田間系統(tǒng)調(diào)查及相關(guān)分析、實(shí)驗(yàn)種群觀察與分析、食痕與標(biāo)記法等。但是，這些方法都存在相應(yīng)的缺陷，如:費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、花費(fèi)較高、不易成功等。
[0004]Species-Specific-COI PCR檢測(cè)技術(shù)是在mtDNA COI技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的特異序列擴(kuò)增區(qū)域標(biāo)記，是利用特異性的引物，根據(jù)預(yù)期DNA條帶的有無(wú)來(lái)判斷檢測(cè)結(jié)果，無(wú)需測(cè)序和序列比對(duì)，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速、簡(jiǎn)便且重現(xiàn)性和穩(wěn)定性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，為準(zhǔn)確評(píng)價(jià)天敵對(duì)獵物的捕食作用開辟了新途徑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)不足，本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一對(duì)能特異性鑒別禾谷縊管蚜的PCR引物，包括正向引物:5' -CAGGTATAATTGGTTCATCC-3'(如SEQ ID N0.1所示)和反向引物:5' -TCTAATATTATTTAATCGTGGG-3'(如 SEQ ID N0.2 所示)。
[0006]本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種用于檢測(cè)禾谷縊管蚜的試劑盒，包括PCR反應(yīng)試劑和上述引物對(duì)，優(yōu)選的試劑盒，還包括標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性模板。
[0007]本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種禾谷縊管蚜的特異性檢測(cè)方法，所述方法包括使用上述引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增的步驟，如出現(xiàn)207bp擴(kuò)增條帶，如SEQ ID N0.3所示，則判定為禾谷縊管蚜的樣本。 [0008]優(yōu)選的，所述PCR擴(kuò)增的步驟中PCR反應(yīng)體系以20 μ I計(jì)為:
[0009]
【權(quán)利要求】
1.一種禾谷縊管蚜特異性SS-COI引物對(duì)，其特征在于，包括正向引物:5' -CAGGTATAATTGGTTCATCC-3'和反向引物:5' -TCTAATATTATTTAATCGTGGG-3'。
2.一種用于檢測(cè)禾谷縊管蚜的試劑盒，其特征在于，包括PCR反應(yīng)試劑和權(quán)利要求1所述的引物對(duì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，還包括標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性模板。
4.一種禾谷縊管蚜的特異性檢測(cè)方法，其特征在于，所述方法包括使用權(quán)利要求1所述引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增的步驟，如出現(xiàn)207bp擴(kuò)增條帶，如SEQ ID N0.3所示，則判定為禾谷縊管蚜的樣本。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增的步驟中PCR反應(yīng)體系以20 μ I計(jì)為:
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增的步驟中，PCR反應(yīng)條件為:94°C 4分鐘；94°C 30秒，54°C 30秒，72°C 30秒，共45個(gè)循環(huán)；72°C I秒。
7.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述試劑盒在檢測(cè)禾谷縊管蚜中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103773871SQ201410032662
【公開日】2014年5月7日 申請(qǐng)日期:2014年1月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月23日
【發(fā)明者】王倩, 楊帆, 陸宴輝, 楊益眾 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所