用于檢測染色體不穩(wěn)定綜合征的試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實用新型公開了一種用于檢測染色體不穩(wěn)定綜合征的試劑盒，包括盒體、盒蓋和設(shè)置在盒體內(nèi)的襯墊，所述襯墊上設(shè)有小孔，裝有植物血凝素的試劑管、裝有絲裂霉素的試劑管、裝有秋水仙素的試劑管被設(shè)置在所述小孔內(nèi)。本實用新型所公開的試劑盒結(jié)構(gòu)簡單、設(shè)計合理，使用本實用新型的試劑盒在檢測染色體不穩(wěn)定綜合征時，通過對染色體畸變試驗和淋巴細(xì)胞微核率檢測的結(jié)合，可對染色體不穩(wěn)定綜合征做出簡單、快捷、經(jīng)濟(jì)的實驗室輔助診斷，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，便于在廣大試驗儀器、條件相對簡單的實驗室推廣應(yīng)用。
【專利說明】用于檢測染色體不穩(wěn)定綜合征的試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型屬于細(xì)胞遺傳學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種用于檢測染色體不穩(wěn)定綜合征的試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]染色體斷裂綜合征(chromosomal breakage syndrome)是一類具有非專一的染色體自發(fā)斷裂、易患惡性腫瘤的綜合征，屬孟德爾遺傳的單基因病。多在幼年起病，因不但純合而且雜合子也表現(xiàn)了較高的腫瘤易患性而引人注目。現(xiàn)已記載的染色體斷裂綜合征有著色性干皮病(xerodermapigmentosa,簡稱XP)、毛細(xì)血管擴(kuò)張共濟(jì)失調(diào)癥(ataxiate langi ectasia or Louis-Barr syndrome,簡稱 AT)、范可尼貧血(fanconianemia,簡稱FA)等。其中，范可尼貧血是一種常染色體隱性遺傳性血液系統(tǒng)疾病，屬于先天性再生障礙性貧血。臨床表現(xiàn)為造血功能衰竭，多發(fā)性先天畸形(皮膚棕色色素沉著，骨骼畸形、性發(fā)育不全等)，易患白血病和惡性腫瘤傾向。對這類疾病的早診早治，可以改善大多數(shù)患者的癥狀，提高患者的生存率。
[0003]目前現(xiàn)有的檢測范可尼貧血等先天性遺傳染色體不穩(wěn)定綜合征的方法主要有染色體畸變分析法、淋巴細(xì)胞微核檢測法、基因檢測法、單細(xì)胞凝膠電泳法、生化分析法。染色體畸變分析法是將外周血在含有PHA和DNA交聯(lián)劑(常用絲裂霉素C)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)72小時后收獲制片，選取200個中期分裂相進(jìn)行分析，來統(tǒng)計染色體的畸變率；淋巴細(xì)胞微核檢測法是將外周血在含有PHA的培養(yǎng)基中培養(yǎng)72小時后收獲制片，鏡檢后統(tǒng)計2000個已轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞中有微核率及微核細(xì)胞率；以范可尼貧血為例，基因檢測法是從外周血中提取基因組DNA，通過PCR方法分析FANCC基因的突變情況，F(xiàn)ANCC特有的突變位點包括IVS4(+4)A>T(第四內(nèi)含子上的第四個堿基由A突變成T)和322delG(在cDNA序列的第322位丟失了堿基G);單細(xì)胞凝膠電泳法是通過單細(xì)胞凝膠電泳，分析外周血單個核細(xì)胞中，具有彗星拖尾現(xiàn)象的細(xì)胞的比例；以范可尼貧血為例，生化分析法是通過蛋白質(zhì)印跡法檢驗范可尼貧血核心復(fù)合物中FANCD2蛋白泛素化情況，從而評價范可尼蛋白復(fù)合物的功倉泛。
[0004]以上幾種方法作為染色體不穩(wěn)定綜合征的實驗室輔助診斷方法在實際操作中各有特點:染色體畸變分析和淋巴細(xì)胞微核檢測優(yōu)點在于操作相對容易，可以作為疾病的初篩，收費較低，易于被患者接受；缺點在于需要建立自己實驗室的CUt-Off值。基因檢測的方法優(yōu)勢在于突變位點明確，對結(jié)果的判定比較容易；缺點是需要專門的儀器設(shè)備和具有分析能力的專門技術(shù)人員，醫(yī)院不易常規(guī)開展。單細(xì)胞凝膠電泳和生化分析的方法優(yōu)點在于方法較新，輔助診斷效果較好；缺點是技術(shù)比較難掌握，而且受致病因研究進(jìn)展的限制，不能對所有的染色體不穩(wěn)定綜合征進(jìn)行檢測，醫(yī)院很難常規(guī)開展。
[0005]根據(jù)文獻(xiàn)報道，范可尼貧血細(xì)胞對某些DNA交聯(lián)劑，即絲裂霉素(MMC)異常敏感。在低濃度的MMC誘導(dǎo)下FA染色體斷裂率明顯高于正常人，染色體畸變試驗是目前范可尼貧血的經(jīng)典診斷依據(jù)。近年的研究結(jié)果還表明，包括范可尼貧血在內(nèi)的染色體斷裂綜合征患者往往也會出現(xiàn)淋巴細(xì)胞微核率較高。淋巴細(xì)胞微核率的檢測由于具有經(jīng)濟(jì)，簡便，快速的特點，在疾病初期篩查中具有很大的優(yōu)勢。
實用新型內(nèi)容
[0006]為了解決上述技術(shù)問題，本實用新型的目的在于提供一種用于檢測為染色體不穩(wěn)定綜合征的試劑盒，將染色體畸變檢測和淋巴細(xì)胞微核率檢測相結(jié)合，可以快速、簡便、經(jīng)濟(jì)地檢測范可尼貧血等先天性遺傳染色體不穩(wěn)定綜合征。
[0007]為實現(xiàn)上述目的，本實用新型采取的技術(shù)方案是:一種用于檢測染色體不穩(wěn)定綜合征的試劑盒，包括盒體(I)、盒蓋(2)和設(shè)置在盒體(I)內(nèi)的襯墊(3)，所述襯墊(3)上設(shè)有小孔，裝有植物血凝素的試劑管(4 )、裝有絲裂霉素的試劑管(5 )、裝有秋水仙素的試劑管(6)被設(shè)置在所述小孔內(nèi)。
[0008]其中，所述試劑盒還包括:裝有Giemsa染色法I染色液的試劑管(7)和裝有Giemsa染色法II染色液的試劑管(8)。
[0009]其中，所述襯墊(3)上設(shè)有5個小孔，所述小孔在所述襯墊(3)上分成兩排平行排列。
[0010]通過以上技術(shù)方案，本實用新型的有益效果如下:
[0011](I)本實用新型的試劑盒結(jié)構(gòu)簡單、設(shè)計合理，方便攜帶、保存，不易受污染。
[0012](2)本實用新型的試劑盒在檢測染色體不穩(wěn)定綜合征時，通過對染色體畸變試驗和淋巴細(xì)胞微核率檢測的結(jié)合，可對染色體不穩(wěn)定綜合征做出簡單、快捷、經(jīng)濟(jì)的實驗室輔助診斷，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，便于在廣大試驗儀器、條件相對簡單的實驗室推廣應(yīng)用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1為本實用新型的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0014]圖中，1-盒體，2-盒蓋，3-襯墊，4-裝有植物血凝素的試劑管，5-裝有絲裂霉素的試劑管，6-裝有秋水仙素的試劑管，7-裝有Giemsa染色法I染色液的試劑管，8-裝有Giemsa染色法II染色液的試劑管。
【具體實施方式】
[0015]下面結(jié)合實施例對本實用新型的【具體實施方式】作進(jìn)一步描述，本實用新型的優(yōu)點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本實用新型的范圍構(gòu)成任何限制。
[0016]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0017]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0018]如圖1所示，本實用新型提供了一種用于檢測染色體不穩(wěn)定綜合征的試劑盒，包括盒體1、盒蓋2和設(shè)置在盒體I內(nèi)的襯墊3，所述襯墊3上設(shè)有5個小孔，所述小孔在所述襯墊3上分成兩排平行排列，裝有植物血凝素的試劑管4、裝有絲裂霉素的試劑管5、裝有秋水仙素的試劑管6、裝有Giemsa染色法I染色液的試劑管7和裝有Giemsa染色法II染色液的試劑管8被設(shè)置在所述小孔內(nèi)。
[0019]其中，所述植物血凝素、絲裂霉素的、秋水仙素均為固體試劑，使用時根據(jù)需要配制成液體試劑來使用，所述Giemsa染色法I染色液和Giemsa染色法II染色液均為本領(lǐng)域常規(guī)染色試劑。
[0020]檢測步驟如下:
[0021](I)使用常規(guī)技術(shù)進(jìn)行外周血常規(guī)培養(yǎng)，其中染色體畸變檢測培養(yǎng)基中添加PHA和不同濃度的絲裂霉素，淋巴細(xì)胞微核檢測培養(yǎng)基中只添加PHA ;其中兩個培養(yǎng)基中PHA的終濃度均按照本領(lǐng)域常規(guī)參數(shù)添加，染色體畸變檢測培養(yǎng)基的絲裂霉素終濃度范圍為25ng/ml ?100ng/ml ；
[0022](2)37°C的C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)，其中淋巴細(xì)胞微核檢測培養(yǎng)基培養(yǎng)54小時，淋巴細(xì)胞微核檢測培養(yǎng)基培養(yǎng)72小時；
[0023](3)收獲細(xì)胞；其中染色體畸變檢測實驗收獲后添加秋水仙素將染色體分裂阻滯在分裂中期；
[0024](4)制片和染色；使用Giemsa染色法I染色液和Giemsa染色法II染色液,采用常規(guī)Giemsa染色法，其中染色體畸變檢測還需要做Q顯帶；
[0025](5)鏡檢；低倍鏡檢查制片和染色效果，高倍鏡和油鏡下觀察和統(tǒng)計染色體畸變和淋巴細(xì)胞微核率；
[0026](6)根據(jù)實驗室建立的cut-off值對檢測結(jié)果做出結(jié)論。
[0027]上面已經(jīng)舉例說明了本實用新型的實施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本實用新型的精神和范圍下可以對本實用新型技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本實用新型的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種用于檢測染色體不穩(wěn)定綜合征的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒包括盒體(I)、盒蓋(2)和設(shè)置在盒體(I)內(nèi)的襯墊(3)，所述襯墊(3)上設(shè)有小孔，裝有植物血凝素的試劑管(4)、裝有絲裂霉素的試劑管(5)、裝有秋水仙素的試劑管(6)被設(shè)置在所述小孔內(nèi)。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種用于檢測染色體不穩(wěn)定綜合征的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括:裝有Giemsa染色法I染色液的試劑管(7)和裝有Giemsa染色法II染色液的試劑管(8)。
3.按照權(quán)利要求2所述的一種用于檢測染色體不穩(wěn)定綜合征的試劑盒，其特征在于:所述襯墊(3)上設(shè)有5個小孔，所述小孔在所述襯墊(3)上分成兩排平行排列。
【文檔編號】C12M1/00GK203613174SQ201320689048
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2013年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月4日
【發(fā)明者】王桂林, 張玉杰, 鄧勝, 孫媛, 梁超, 王緒華, 方國偉, 黃士昂, 陳忠 申請人:北京海思特臨床檢驗所有限公司