一種細(xì)胞工廠操作管道系統(tǒng)的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型提供一種細(xì)胞工廠操作管道系統(tǒng)，包括第一細(xì)胞工廠和連接在細(xì)胞工廠上的進(jìn)液管道、出液管道，所述進(jìn)液管道、出液管道可替換地與洗滌消化系統(tǒng)、接毒系統(tǒng)或收獲系統(tǒng)連接。本實(shí)用新型克服現(xiàn)有的應(yīng)用細(xì)胞工廠進(jìn)行大規(guī)模細(xì)胞及病毒培養(yǎng)時(shí)，操作時(shí)間長(zhǎng)、操作繁瑣、批量大、易污染、細(xì)胞消化程度不均一等缺點(diǎn)，提供一種新的用于細(xì)胞工廠操作的管道連接系統(tǒng)，分別適用于細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)中的細(xì)胞傳代、接毒、收獲操作。該方法可以增加操作空間使用效率、縮短操作時(shí)間、且操作相對(duì)簡(jiǎn)單，降低污染的風(fēng)險(xiǎn)，從而提高細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)效率。
【專利說明】一種細(xì)胞工廠操作管道系統(tǒng)
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于生物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種病毒懸液的制備系統(tǒng)及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]細(xì)胞工廠為生物、醫(yī)藥行業(yè)常用的一種細(xì)胞培養(yǎng)工具，主要適合工業(yè)化的批量生 產(chǎn)，如疫苗、單克隆抗體或者制藥工業(yè)。不僅適合貼壁細(xì)胞培養(yǎng)也適合懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，其培 養(yǎng)模式與小規(guī)模的細(xì)胞瓶培養(yǎng)相同，因此可進(jìn)行放大培養(yǎng)。常用的細(xì)胞工廠規(guī)模有2層、4 層、10層和40層。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)常用的細(xì)胞工廠操作液體量小，操作相對(duì)簡(jiǎn)單，通常使用簡(jiǎn)單的管道體 系利用重力差的方式通過細(xì)胞工廠的小口進(jìn)行液體的進(jìn)出。若采用這種方式在40層細(xì)胞 工廠中使用，則需要多次的更換連接管道，不僅操作速度慢、在多個(gè)細(xì)胞工廠同時(shí)操作時(shí)容 易出誤差，而且細(xì)胞工廠進(jìn)出口部位暴露于空氣中的時(shí)間較長(zhǎng)，增加污染風(fēng)險(xiǎn)。進(jìn)行大規(guī)模 細(xì)胞及病毒培養(yǎng)時(shí)，操作時(shí)間長(zhǎng)、操作繁瑣、批量大、易污染、細(xì)胞消化程度不均一等缺點(diǎn)尤 為明顯。因此需要一種合理規(guī)范的管道連接系統(tǒng)，使得利用細(xì)胞工廠進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)、病毒接 種和病毒收獲的工藝更加的簡(jiǎn)便和安全。
實(shí)用新型內(nèi)容
[0004]本實(shí)用新型的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，建立一套新型的用于細(xì)胞工廠操作的 管道連接系統(tǒng)，能夠?qū)ο鄬?duì)快速的進(jìn)行細(xì)胞工廠液體進(jìn)出，完成細(xì)胞消化、傳代、傳種及收 獲等操作。
[0005]實(shí)現(xiàn)本實(shí)用新型目的的技術(shù)方案為:
[0006]一種細(xì)胞工廠操作管道系統(tǒng)，包括第一細(xì)胞工廠I和連接在細(xì)胞工廠上的進(jìn)液管 道2、出液管道3，所述進(jìn)液管道2、出液管道3可替換地與洗滌消化系統(tǒng)、接毒系統(tǒng)或收獲系 統(tǒng)連接。
[0007]通過Y三通、T三通等連接件對(duì)硅膠管道進(jìn)行連接，可根據(jù)生產(chǎn)車間具體情況調(diào)節(jié) 管道的連接位置和長(zhǎng)度。
[0008]所述洗滌消化系統(tǒng)包括上清液罐4、緩沖液罐5和消化液罐6，所述緩沖液罐5和 消化液罐6通過管道與所述出液管道3連接在三通7上，所述上清液罐4與進(jìn)液管道2連 接；
[0009]所述接毒系統(tǒng)包括配液罐8、血清容器9、無(wú)血清液罐10、濾器11、無(wú)血清分散液罐 12和懸液罐13 ;所述配液罐8通過管道、血清容器9通過管道連接在三通14的兩個(gè)接口 上，所述三通14的第三個(gè)接口連接有管道并通過三通15與無(wú)血清分散液罐12連接；所述 三通15的第三個(gè)接口連接濾器11 ;所述濾器11的出液管道通過三通16和管道分別連接 有無(wú)血清分散液罐12和三通17，所述三通17另外兩個(gè)接口分別連接懸液罐13的進(jìn)口和進(jìn) 液管道2 ；
[0010]所述收獲系統(tǒng)包括緩沖液罐5、裂解液罐18、第二細(xì)胞工廠24，所述緩沖液罐5和裂解液罐18與第二細(xì)胞工廠24通過管道連接在三通19上。所述第二細(xì)胞工廠24還連接 有第二出液管道25。
[0011 ] 其中，所述管道均為硅膠材質(zhì)。
[0012]其中，所述系統(tǒng)還包括可設(shè)置在管道上的3-12個(gè)夾緊裝置和1-3個(gè)蠕動(dòng)泵。所述 夾緊裝置可以為止血鉗或彈簧夾，可以?shī)A在管道上任何位置。所述蠕動(dòng)泵通過夾在軟管上 的輥?zhàn)拥霓D(zhuǎn)動(dòng)驅(qū)動(dòng)液體流動(dòng)，可以?shī)A在管道的任何位置。
[0013]其中，所述接毒系統(tǒng)中還包括設(shè)置在所述濾器11的出液管道上的三通20，所述三 通20的第三個(gè)接口連接取樣裝置。
[0014]其中，根據(jù)權(quán)利要求1所述的操作管道系統(tǒng)，其特征在于，所述接毒系統(tǒng)中還包括 第二細(xì)胞工廠24，所述懸液罐13的出口與第二細(xì)胞工廠24連接。
[0015]其中，所述接毒系統(tǒng)中還包括設(shè)置在懸液罐13進(jìn)口處的三通21，所述三通21的第 三個(gè)接口連接毒種容器。
[0016]第一細(xì)胞工廠通常規(guī)模小于第二細(xì)胞工廠。說明書附圖2、3中，分別以4個(gè)離心 管和14個(gè)離心管代表其規(guī)模的大小。
[0017]一種應(yīng)用本實(shí)用新型所述的細(xì)胞工廠操作管道系統(tǒng)的方法，包括步驟:
[0018]I)洗滌消化:利用所述洗滌消化系統(tǒng)
[0019]①封閉出液管道3，將第一細(xì)胞工廠I內(nèi)的上清液泵入上清液罐4 ;
[0020]②封閉進(jìn)液管道2，將裝在緩沖液罐5內(nèi)的緩沖液泵入第一細(xì)胞工廠I進(jìn)行洗滌；
[0021]③洗滌完成后再將第一細(xì)胞工廠I內(nèi)的緩沖液排入緩沖液罐5 ；
[0022]④封閉緩沖液罐5連接在三通7上的管道，將消化液罐6內(nèi)消化液泵入細(xì)胞工廠 I ;
[0023]⑤消化完成后再將消化液排回消化液罐6 ；
[0024]2)接毒:利用所述接毒系統(tǒng)
[0025]①無(wú)血清液罐10內(nèi)加入無(wú)血清生長(zhǎng)液配制原料，封閉血清容器9連接在三通14 上的管道，將無(wú)血清生長(zhǎng)液配制原料泵入配液罐8 ；
[0026]②配制完成后，封閉無(wú)血清液罐10連接在三通15上的管道，無(wú)血清生長(zhǎng)液配制原 料從配液罐泵入濾器11過濾至無(wú)血清分散液罐12，留做分散細(xì)胞用。
[0027]③過濾完成后將無(wú)血清分散液罐12連接至三通16的管道封閉，將無(wú)血清分散液 罐12連接至進(jìn)液管道2 ；
[0028]④過濾完成后，打開血清容器9連接在三通14上的管道，將血清泵入配液罐8，配 制含血清生長(zhǎng)液。
[0029]⑤配制完成后，含血清生長(zhǎng)液通過濾器11過濾至懸液罐13中，液體流動(dòng)動(dòng)力來自 配液罐內(nèi)的壓縮空氣(由水氣系統(tǒng)提供)，三通21連接的取樣口用于生長(zhǎng)液的取樣、送檢；
[0030]⑥用無(wú)血清分散液罐12內(nèi)的無(wú)血清生長(zhǎng)液分散細(xì)胞，分散后的細(xì)胞懸液泵入懸 液罐13內(nèi)；毒種通過三通21加入至懸液罐13內(nèi)；
[0031]⑦懸液罐13內(nèi)的細(xì)胞懸液加入第二細(xì)胞工廠24中，液體流動(dòng)動(dòng)力來自懸液罐內(nèi) 壓縮空氣(由水氣系統(tǒng)提供)。
[0032]3)收獲:利用所述收獲系統(tǒng)
[0033]①將細(xì)胞工廠I內(nèi)的上清液通過出液管道3排出，然后封閉第二出液管道25,將所述緩沖液罐5內(nèi)的緩沖液泵入第二細(xì)胞工廠24進(jìn)行洗滌；
[0034]②洗滌完成后再通過第二出液管道25將緩沖液排出；
[0035]③向第二細(xì)胞工廠24內(nèi)加入裂解液。
[0036]其中，所述封閉，是用夾緊裝置夾在管道上，實(shí)現(xiàn)管道的封閉。例如止血鉗夾在軟 管上，軟管內(nèi)的液體就不再流動(dòng)。
[0037]其中，所述泵入，是將蠕動(dòng)泵設(shè)置在管道上，具體地是將管道夾在蠕動(dòng)泵泵頭上， 通過操作螺動(dòng)泵實(shí)現(xiàn)管道內(nèi)液體正向或反向的流動(dòng)。
[0038]其中，所述2)接毒步驟中還包括對(duì)濾器11的出液取樣檢測(cè)的步驟；所述3)收獲 中還包括緩沖液取樣檢測(cè)的步驟。
[0039]本實(shí)用新型的有益技術(shù)效果在于:
[0040]本實(shí)用新型克服現(xiàn)有的應(yīng)用細(xì)胞工廠進(jìn)行大規(guī)模細(xì)胞及病毒培養(yǎng)時(shí)，操作時(shí)間 長(zhǎng)、操作繁瑣、批量大、易污染、細(xì)胞消化程度不均一等缺點(diǎn)，提供一種新的用于細(xì)胞工廠操 作的管道連接系統(tǒng)，分別適用于細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)中的細(xì)胞傳代、接毒、收獲操作。該方法可 以增加操作空間使用效率、縮短操作時(shí)間、且操作相對(duì)簡(jiǎn)單，降低污染的風(fēng)險(xiǎn)，從而提高細(xì) 胞擴(kuò)大培養(yǎng)效率。
[0041]本實(shí)用新型提出的管道連接系統(tǒng)通過Y三通、T三通等連接件對(duì)硅膠管道進(jìn)行連 接，可根據(jù)生產(chǎn)車間具體情況調(diào)節(jié)管道長(zhǎng)度，此外，也可根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模調(diào)整細(xì)胞工廠操作數(shù) 量，為I?20個(gè)。連接細(xì)胞工廠接頭和溶液接頭可根據(jù)工序需要加減(控制范圍I?20 個(gè))。可操作CFlO (10層細(xì)胞工廠)、CF40 (40層細(xì)胞工廠)、CF2 (2層細(xì)胞工廠)。各管道 的長(zhǎng)短根據(jù)車間操作空間設(shè)計(jì)，有一定長(zhǎng)度限制，應(yīng)便于操作。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0042]圖1為細(xì)胞工廠和洗滌消化管道系統(tǒng)組合圖。
[0043]圖2為細(xì)胞工廠和接毒管道系統(tǒng)組合圖。
[0044]圖3為細(xì)胞工廠和收獲管道系統(tǒng)組合圖。
[0045]圖中，I為細(xì)胞工廠,2為進(jìn)液管道,3為出液管道,4為上清液罐,5緩沖液罐,6為 消化液罐，7為Y三通,8為配液罐,9為血清容器，10為無(wú)血清原料液罐，11為濾器，12為無(wú) 血清分散液罐，13為含血清生長(zhǎng)液罐，14為三通，15、16、17為Y三通，18為裂解液罐，19、 20,21為Y三通，22、23為取樣口，24為第二細(xì)胞工廠，25為第二出液管道。
【具體實(shí)施方式】
[0046]現(xiàn)以以下最佳實(shí)施例來說明本實(shí)用新型，但不用來限制本實(shí)用新型的范圍。若未 特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。
[0047]實(shí)施例1:細(xì)胞工廠操作管道系統(tǒng)
[0048]包括細(xì)胞工廠I和連接在細(xì)胞工廠上的進(jìn)液管道2、出液管道3,所述進(jìn)液管道2、 出液管道3可替換地與洗滌消化系統(tǒng)(圖1)、接毒系統(tǒng)(圖2)或收獲系統(tǒng)(圖3)連接；
[0049]I)洗滌消化系統(tǒng)包括上清液罐4、緩沖液罐5和消化液罐6，所述緩沖液罐5和消 化液罐6通過管道與所述出液管道3連接在三通7上，所述上清液罐4與進(jìn)液管道2連接；
[0050]2)所述接毒系統(tǒng)包括配液罐8、血清容器9、無(wú)血清液罐10、濾器11、無(wú)血清分散液罐12和懸液罐13、第二細(xì)胞工廠24 ;所述配液罐8通過管道、血清容器9通過管道連接在 三通14的兩個(gè)接口上，所述三通14的第三個(gè)接口連接有管道并通過三通15與無(wú)血清分散 液罐12連接；所述三通15的第三個(gè)接口連接濾器11 ;所述濾器11的出液管道通過三通16 和管道分別連接有無(wú)血清分散液罐12和三通17，所述三通17另外兩個(gè)接口分別連接懸液 罐13的進(jìn)口和出液管道3 ;所述懸液罐13的出口與進(jìn)液管2連接。濾器11的出液管道上 設(shè)置有三通20，三通20的第三個(gè)接口用于取樣。懸液罐13進(jìn)口處設(shè)置有三通21，三通21 的第三個(gè)接口連接毒種容器。
[0051]3)所述收獲系統(tǒng)包括緩沖液罐5、第二細(xì)胞工廠24、第二出液管道25、裂解液罐 18，所述緩沖液罐5和裂解液罐18、第二細(xì)胞工廠24通過管道連接在三通19上。
[0052]本實(shí)施例中管道均為硅膠材質(zhì)。
[0053]本系統(tǒng)還配有多個(gè)止血鉗和2個(gè)蠕動(dòng)泵。
[0054]本管道系統(tǒng)使用的三通為不銹鋼材質(zhì),三通的三個(gè)接口可以接三個(gè)管道，管道上 還可以視需要增加三通和更多管道。
[0055]應(yīng)用:
[0056]1.在洗滌和消化操作中使用的細(xì)胞工廠操作管道系統(tǒng)(圖1)
[0057]①進(jìn)液管道2用止血鉗夾緊，出液管道3打開并連蠕動(dòng)泵，連接第一細(xì)胞工廠I 后，將Veix)細(xì)胞上清液排入50L的上清液罐4內(nèi)。
[0058]②用止血鉗封閉出液管道3，進(jìn)液管道2處連接蠕動(dòng)泵，4L的消化液罐6至三通7 處的管道夾緊，緩沖液罐5的管道保持暢通，將裝在50L緩沖液罐5內(nèi)的PBS緩沖液加入第 一細(xì)胞工廠I進(jìn)行洗滌；
[0059]③洗滌完成后再將第一細(xì)胞工廠I內(nèi)的PBS排入緩沖液灌5中；
[0060]④進(jìn)液管道2處仍連接螺動(dòng)泵,緩沖液罐5的管道、進(jìn)液管道2的管道用止血鉗夾 緊，消化液罐6至三通7處的管道保持暢通，向細(xì)胞工廠加入胰蛋白酶(消化液)進(jìn)行消化；
[0061]⑤消化完成后再將胰蛋白酶排回原4L的消化液罐6 ；
[0062]⑥細(xì)胞工廠I可從管道連接處斷開，放入恒溫室進(jìn)行消化。
[0063]2.在接毒操作中使用細(xì)胞工廠操作管道系統(tǒng)(如圖2)
[0064]①配制無(wú)血清生長(zhǎng)液(含Eagle’ s基質(zhì)液、碳酸氫鈉、谷氨酰胺、硫酸慶大霉素，含 量為行業(yè)公知配方，按照說明說上要求配制完成)，配液罐8的出液管道連接蠕動(dòng)泵，血清容 器9的管道用止血鉗夾緊，無(wú)血清液罐10內(nèi)的無(wú)血清生長(zhǎng)液配制原料(將除血清之外的溶 液)打入配液罐8，液體流動(dòng)動(dòng)力為蠕動(dòng)泵；
[0065]②配制完成后，將無(wú)血清液罐10的管道也用止血鉗夾緊，無(wú)血清生長(zhǎng)液配制原料 通過濾器11過濾至4個(gè)50L的無(wú)血清分散液罐12內(nèi)，留做分散細(xì)胞用；
[0066]③過濾完成后將與無(wú)血清分散液罐12連接的管道斷開，無(wú)血清生長(zhǎng)液進(jìn)入第一 細(xì)胞工廠I。
[0067]④過濾完成后，血清容器9的管道打開，配液罐8的管道處仍連接蠕動(dòng)泵，將血清 通過蠕動(dòng)泵打入配液罐，配制含血清生長(zhǎng)液；
[0068]⑤配制完成后，含血清生長(zhǎng)液通過濾器11過濾至懸液罐13中，液體流動(dòng)動(dòng)力來自 配液罐13內(nèi)的壓縮空氣，三通20的一個(gè)接口用做取樣口 22，將生長(zhǎng)液取樣、送檢；
[0069]⑥第一細(xì)胞工廠I產(chǎn)生的細(xì)胞用無(wú)血清生長(zhǎng)液進(jìn)行分散，分散后的細(xì)胞懸液打入懸液te 13內(nèi)；
[0070]⑦分散完成后三通21的一個(gè)接口處用于加甲肝病毒TZ84株毒種。
[0071]⑧細(xì)胞懸液與毒種在懸液罐13內(nèi)進(jìn)行攪拌攪拌完成后，連接第二細(xì)胞工廠24，將 接種后的細(xì)胞懸液加入第二細(xì)胞工廠24中，液體流動(dòng)動(dòng)力來自懸液罐13內(nèi)壓縮空氣。
[0072]3.在收獲操作中使用細(xì)胞工廠管道系統(tǒng)(如圖3)
[0073]①I處用于連接PBS緩沖液罐5，三通19的另一個(gè)用于連接裂解液罐18，
[0074]②緩沖液灌4連接第二細(xì)胞工廠24的進(jìn)液管道2并先夾緊，連接完成后，將上清 液通過第二出液管道25排出，隨后夾住第二出液管道25，進(jìn)行PBS洗滌；
[0075]③洗滌完成后再通過第二出液管道25將PBS排出。
[0076]④三通19的另一個(gè)接口管道加入裂解液。
[0077]23為取樣口，用于PBS緩沖液配制過濾完成后的檢測(cè)取樣。
[0078]以上所述僅是本實(shí)用新型的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技 術(shù)人員來說，在不脫離本實(shí)用新型技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和替換，這些改 進(jìn)和替換也應(yīng)視為本實(shí)用新型的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種細(xì)胞工廠操作管道系統(tǒng)，其特征在于，包括第一細(xì)胞工廠(I)和連接在第一細(xì) 胞工廠(I)上的進(jìn)液管道(2 )、出液管道(3 ),所述進(jìn)液管道(2 )、出液管道(3 )可替換地與洗 滌消化系統(tǒng)、接毒系統(tǒng)或收獲系統(tǒng)連接；所述洗滌消化系統(tǒng)包括上清液罐(4)、緩沖液罐(5)和消化液罐(6)，所述緩沖液罐(5) 和消化液罐(6 )通過管道與所述出液管道(3 )連接在三通(7 )上，所述上清液罐(4 )與進(jìn)液 管道(2)連接；所述接毒系統(tǒng)包括配液罐(8)、血清容器(9)、無(wú)血清液罐(10)、濾器(11)、無(wú)血清分散 液罐(12)、懸液罐(13);所述配液罐(8)通過管道、血清容器(9)通過管道連接在三通(14) 的兩個(gè)接口上，所述三通(14)的第三個(gè)接口連接有管道并通過三通(15)與無(wú)血清分散液 罐(12)連接；所述三通(15)的第三個(gè)接口連接濾器(11);所述濾器(11)的出液管道通過 三通(16)和管道分別連接有無(wú)血清分散液罐(12)和三通(17)，所述三通(17)另外兩個(gè)接 口分別連接懸液罐(13)的進(jìn)口和進(jìn)液管道(2)；所述收獲系統(tǒng)包括緩沖液罐(5)、裂解液罐(18)和第二細(xì)胞工廠(24)，所述緩沖液罐(5)和裂解液罐(18)與第二細(xì)胞工廠(24)通過管道連接在三通(19)上；所述第二細(xì)胞工 廠還連接有第二出液管道(25 )。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的操作管道系統(tǒng)，其特征在于，所述管道均為硅膠材質(zhì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的操作管道系統(tǒng)，其特征在于，所述系統(tǒng)還包括可設(shè)置在管道 上的3-12個(gè)夾緊裝置和1-3個(gè)蠕動(dòng)泵。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的操作管道系統(tǒng)，其特征在于，所述接毒系統(tǒng)中還包括第二細(xì) 胞工廠(24)，所述懸液罐(13)的出口與第二細(xì)胞工廠(24)連接。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的操作管道系統(tǒng)，其特征在于，所述接毒系統(tǒng)中還包括設(shè)置在 所述濾器(11)的出液管道上的三通(20)，所述三通(20)的第三個(gè)接口連接取樣裝置。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的操作管道系統(tǒng)，其特征在于，所述接毒系統(tǒng)中還包括設(shè)置在 懸液罐(13 )進(jìn)口處的三通(21)，所述三通(21)的第三個(gè)接口連接毒種容器。
【文檔編號(hào)】C12M3/02GK203451535SQ201320554992
【公開日】2014年2月26日 申請(qǐng)日期:2013年9月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月6日
【發(fā)明者】張穎, 李進(jìn)軍, 廉曉娟, 譚劍, 王楠, 王云鵬, 黃金鳳, 李靜, 尹衛(wèi)東 申請(qǐng)人:北京科興生物制品有限公司