一種帶位置可調(diào)的多孔隔膜的密度梯度離心管及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明具體涉及一種帶位置可調(diào)的多孔隔膜的密度梯度離心管及其應(yīng)用，主要適用于分離人或動物體液中的白細(xì)胞、紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、干細(xì)胞以及醫(yī)療診斷領(lǐng)域的循環(huán)腫瘤細(xì)胞。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著生物技術(shù)的快速發(fā)展，密度梯度離心技術(shù)成為了細(xì)胞分離與富集的常用生物技術(shù)方法，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究、細(xì)胞的再培養(yǎng)，尤其最近細(xì)胞治療技術(shù)和循環(huán)腫瘤細(xì)胞在臨床診斷和治療領(lǐng)域應(yīng)用的崛起，使得密度梯度離心技術(shù)走出了實(shí)驗(yàn)室。
[0003]密度梯度離心是用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞混懸液或體液置于介質(zhì)的頂部，通過重力或離心力場的作用使混合樣品穿過密度梯度層的沉降或上浮來達(dá)到細(xì)胞分層、分離。這類分離又可分為速度沉降和等密度沉降平衡兩種，利用這種現(xiàn)象可以分離體液中需要獲取的具有特定密度的細(xì)胞。
[0004]而傳統(tǒng)的密度梯度離心存在如下缺陷:1、進(jìn)行將樣本放置在分離液液面上操作時，很容易出現(xiàn)樣本預(yù)混到分離液中的現(xiàn)象，而發(fā)生預(yù)混會使分離效果大打折扣;2、密度梯度離心時由于離心機(jī)晃動的造成不同細(xì)胞層間的相互污染，降低細(xì)胞純度和回收率;3、離心完成后取樣時由于各層細(xì)胞間沒有物理隔斷，容易誤吸其它層的細(xì)胞，而操作造成的擾動也會干擾試驗(yàn)結(jié)果;4、黏附在試管壁上的目的細(xì)胞無法通過清洗的方式回收。
[0005]為了克服傳統(tǒng)方式的缺陷，現(xiàn)在有設(shè)計(jì)帶多孔隔膜的離心管來進(jìn)行密度梯度離心分離，然而現(xiàn)有市場上的這種產(chǎn)品，它們的多孔隔膜層是固定的，使得分離液的容積不能根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)要求做出調(diào)整，影響了實(shí)驗(yàn)的最佳結(jié)果，且適用范圍比較窄。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有每個離心管所能裝的分離液體積固定，不可調(diào)整，適用范圍窄的問題。
[0007]為此，本發(fā)明提供了一種帶位置可調(diào)的多孔隔膜的密度梯度離心管，包括離心管本體，所述離心管本體上端設(shè)有離心管蓋，所述離心管本體內(nèi)設(shè)有隔膜層，離心管本體內(nèi)壁上設(shè)有內(nèi)螺紋，隔膜層外壁上設(shè)有外螺紋，離心管本體的內(nèi)螺紋與隔膜層的外螺紋相配合，所述隔膜層上設(shè)有多個小孔。
[0008]進(jìn)一步地，上述離心管本體上端外壁設(shè)有外螺紋，離心管蓋內(nèi)壁設(shè)有內(nèi)螺紋，離心管本體的外螺紋與離心管蓋的內(nèi)螺紋相配合。
[0009]進(jìn)一步地，上述內(nèi)螺紋的凸面為弧形結(jié)構(gòu)。
[0010]進(jìn)一步地，上述隔膜層調(diào)節(jié)離心管本體下腔體積為10?20ml。
[0011 ] 進(jìn)一步地，上述小孔的孔徑為0.5?0.8mm。
[0012]進(jìn)一步地，上述隔膜層采用樹脂顆粒熱壓制而成。
[0013]進(jìn)一步地，上述隔膜層厚度為3mm。
[0014]進(jìn)一步地，上述隔膜層設(shè)有配套的輔助塑料棒，輔助塑料棒包括下部的插板、上部的手柄以及中間的連接桿，隔膜層上設(shè)有插縫，輔助塑料棒下部的插板與插縫相配合，輔助塑料棒上部的手柄伸出離心管本體。
[0015]另外，本發(fā)明還提供了上述帶多孔隔膜位置可調(diào)的密度梯度離心管的應(yīng)用，具體包括如下步驟:
I)取無菌的該離心管本體，向其中加入設(shè)計(jì)量的分離液。
[0016]2)向離心管本體中放入隔膜層，通過隔膜層外螺紋與離心管本體的內(nèi)螺紋相配合，旋扭調(diào)整隔膜層位置至隔膜層下部與分離液水平。
[0017]3)將待分離的樣品加入到隔膜層上層，離心管本體蓋緊離心管蓋。
[0018]4)將步驟3)中裝有待分離樣品的離心管本體進(jìn)行離心。
[0019]5)離心完成后，倒出隔膜層上層的樣品至另一新離心管中。
[0020]6)用洗液清洗離心管本體的隔膜層上層，取出洗液至步驟5)中的新離心管中。
[0021]7)將新離心管中的樣品進(jìn)行離心，去上清液，得到目的組份。
[0022]具體地，上述步驟2)中隔膜層的位置調(diào)整通過輔助塑料棒完成，隔膜層上表面中心開設(shè)插縫，輔助塑料棒下端插入插縫中，旋轉(zhuǎn)輔助塑料棒調(diào)節(jié)隔膜層的位置。
[0023]本發(fā)明的有益效果:
(I)本發(fā)明提供的這種帶位置可調(diào)的多孔隔膜的密度梯度離心管設(shè)置隔膜層，有效避免離心前待分離樣本與離心管中分離液的預(yù)混合，以及離心后分離到隔膜層下端的組分回流到隔膜層上層造成上層組分的污染，提高試驗(yàn)成功率和分離效果。
[0024](2)本發(fā)明提供的這種帶位置可調(diào)的多孔隔膜的密度梯度離心管設(shè)置的隔膜層位置可通過旋鈕移動來調(diào)節(jié)隔膜層下端的不同容積，以使該離心管適應(yīng)不同樣本要求的分離，提高了離心管的使用靈活性，可以分離較小量的樣品。
[0025](3)本發(fā)明提供的這種帶位置可調(diào)的多孔隔膜的密度梯度離心管操作簡單，結(jié)構(gòu)簡潔無死角，細(xì)胞回收率高。
[0026]以下將結(jié)合附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。
【附圖說明】
[0027]圖1是本發(fā)明中離心管本體的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0028]圖2是本發(fā)明中離心管蓋的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0029]圖3是本發(fā)明中隔膜層的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0030]圖4是本發(fā)明中輔助塑料棒的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0031]附圖標(biāo)記說明:1、離心管蓋;2、離心管本體;3、隔膜層;4、小孔;5、內(nèi)螺紋;6、插縫；
7、輔助塑料棒。
【具體實(shí)施方式】
[0032]下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0033]實(shí)施例1:
本實(shí)施例提供了一種如圖1、圖2和圖3所示的帶位置可調(diào)的多孔隔膜的密度梯度離心管，包括離心管本體2，所述離心管本體2上端設(shè)有離心管蓋I，所述離心管本體2內(nèi)設(shè)有隔膜層3，離心管本體2通過隔膜層3將離心管分為盛裝樣本的上層空間和預(yù)裝分離液的下層空間，離心管本體2內(nèi)壁上設(shè)有內(nèi)螺紋5，隔膜層3外壁上設(shè)有外螺紋，離心管本體2的內(nèi)螺紋5與隔膜層3的外螺紋相配合，通過螺紋結(jié)構(gòu)旋轉(zhuǎn)隔膜層3使其上下移動，調(diào)整隔膜層3下端的空間容積，所述隔膜層3上設(shè)有多個小孔4。
[0034]其中一種實(shí)施方式，所述離心管本體2上端外壁設(shè)有外螺紋，離心管蓋I內(nèi)壁設(shè)有內(nèi)螺紋，離心管蓋I通過蓋子內(nèi)部內(nèi)螺紋結(jié)構(gòu)和離心管本體2上的外螺紋部分結(jié)合，保持離心管整體封閉性。
[0035]優(yōu)選的，離心管本體2內(nèi)壁的內(nèi)螺紋5可使隔膜層3旋鈕移動，內(nèi)螺紋5的凸面為弧形結(jié)構(gòu)，以防止不必要的細(xì)胞攔截。