一種幼海蜇基因組dna的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種腔腸動(dòng)物門水母體基因組DNA的提取方法，更具體的說(shuō)涉及一種幼海蜇基因組DNA提取方法。具體為：取幼海蜇觸手，放入95%酒精中脫水后，放入離心管中，按照CTAB法提取幼海蜇DNA。本發(fā)明提供一種簡(jiǎn)單、快速幼海蜇DNA的提取方法，適合大規(guī)模DNA提取，取樣品方便快捷，幼海蜇不需處死，該方法提取DNA純度高，能滿足后續(xù)PCR等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的要求，有利于選擇育種基礎(chǔ)群體家系選育、分子標(biāo)記輔助育種等后續(xù)研究。
【專利說(shuō)明】—種幼海蜇基因組DNA的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及腔腸動(dòng)物門水母體一種組織DNA的提取方法，更具體的說(shuō)涉及一種幼海蜇基因組DNA提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]DNA提取是分子生物學(xué)研究最基礎(chǔ)的技術(shù)，高質(zhì)量的DNA是開展分子生物學(xué)后續(xù)研究的重要保證。對(duì)于水產(chǎn)動(dòng)物基礎(chǔ)群體家系選育、分子標(biāo)記輔助育種和遺傳多樣性等方面的研究，要求盡量保證群體個(gè)體成活并需要大量的研究個(gè)體，目前許多DNA提取方法已經(jīng)不能很好地滿足這種要求；已報(bào)道的海蜇基因組DNA提取方法，操作復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)，不利于大規(guī)模樣本的提取，而且無(wú)法保證個(gè)體的成活；幼海蜇是選擇育種研究中最重要的發(fā)育階段，其含水量高、自溶和再生等生物學(xué)特點(diǎn)，高質(zhì)量的DNA提取難度較大，實(shí)驗(yàn)研究中我們對(duì)幼海蜇不同組織器官進(jìn)行基因組DNA的提取，發(fā)現(xiàn)DNA提取效果差異顯著，本發(fā)明提供一種簡(jiǎn)單快速的幼海蜇DNA提取方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明目的是提供一種簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)快速的幼海蜇DNA的提取方法，克服現(xiàn)有DNA提取方法存在的缺陷，由于幼海蜇不同組織因其細(xì)胞結(jié)構(gòu)及所含的成分不同，從而導(dǎo)致不同組織器官基因組DNA提取效果存在明顯差異，本發(fā)明選擇幼海蜇觸手為研究對(duì)象，幼海蜇不需處死，適合大規(guī)模DNA的提取，該方法提取DNA純度高，能滿足后續(xù)PCR等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的要求。
[0004]一種幼海蜇基因組DNA提取方法，包括以下步驟:
[0005]I)取幼海蜇觸手2~4根，放入95%酒精中脫水后，用CTAB提取液消化至溶液澄清；
[0006]2)對(duì)步驟I)制備的樣品用CTAB法提取DNA。
[0007]優(yōu)選的，對(duì)于上文技術(shù)方案中，所述的CTAB法提取DNA的步驟如下:
[0008]①樣品抽提:向樣品消化液中加入等體積飽和酚、再加入等體積氯仿-異戊醇溶液混勻，上下震蕩離心，吸取上清液，再加入氯仿-異戊醇溶液混勻，離心吸取上清液；
[0009]②沉淀:向步驟①上清液中加入2倍體積無(wú)水乙醇混勻，放入_20°C冰箱20min，離心棄上清液；
[0010]③洗滌:用70%的乙醇洗滌2次后晾干；
[0011 ] ④溶解:晾干后加入50uL的1%TE溶解，加入RNA酶2uL，-20°C保存待用。
[0012]優(yōu)選的，對(duì)于上文技術(shù)方案中，所述的觸手與CTAB法中所用的CTAB提取液的比例為 0.01g:300ul，50 ~55°C消化 0.7 ~1.0 小時(shí)。
[0013]上述技術(shù)方案中使用的溶液配制方法如下:
[0014]CTAB提取液的配制·:3mL濃度為2%的CTAB溶液、30uL濃度為20mg/mL的蛋白酶K0[0015]2%的CTAB溶液配制:稱取Ig CTAB溶解于20mL重蒸餾水中，移取8mLlM Tris-HCl(pH8.0)和IOmL0.5M EDTA (pH8.0)于溶液中，再稱取IgNaCl加入到溶液中，并向溶液中加Λ IOOuL0.5%β -巰基乙醇，加重蒸餾水，定容至50mL。
[0016]氯仿-異戊醇溶液的配制:向24mL氯仿中加入ImL異戊醇。
[0017]有益效果:
[0018]本發(fā)明的幼海蜇基因組DNA提取方法，只需少量幼海蜇觸手，取樣品方便、無(wú)需研磨和剪碎等繁瑣操作，耗時(shí)短，更適合大規(guī)?；蚪MDNA提取；海蜇再生能力強(qiáng)，取少量觸手對(duì)個(gè)體成活無(wú)影響，更利于選擇育種基礎(chǔ)群體家系選育、分子標(biāo)記輔助育種等后續(xù)研究。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0019]圖1為本發(fā)明提取DNA檢測(cè)電泳圖:圖中編號(hào)1-5為幼海蜇觸手提取的DNA ;編號(hào)6-10為幼海蜇傘狀部提取的DNA。上樣量均為5uL，其中M為Marker (DL15000)購(gòu)自于寶生物工程(大連)有限公司。
【具體實(shí)施方式】
[0020]以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，而不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0021]實(shí)施例1:
[0022]用本發(fā)明的方法提取幼海蜇基因組DNA
[0023]I)取新鮮幼海蜇觸手·2根約0.01g，放入95%酒精中脫水并保存；
[0024]2) 2根經(jīng)過(guò)步驟I)脫水處理的觸手用蒸餾水沖洗，用濾紙吸干表面水分后，無(wú)需處理，直接放入1.5mL的離心管中，加入300uLCTAB提取液，放入55°C雜交爐中，消化1.0小時(shí)，直至溶液澄清；
[0025]3)向樣品消化液中加入300此飽和酚、300此氯仿和異戊醇(24:1)混勻，上下震蕩 IOmin,離心 12000rpml0min,吸取上清液 500uL ；
[0026]4)加入5001^氯仿和異戍醇(24:1)混勻，離心12000rpml0min,吸取上清液400uL ；
[0027]5)加入無(wú)水乙醇800uL混勻，放入_20°C冰箱20min,離心12000rpml0min,棄上清液；
[0028]6)用70%的乙醇洗滌2次，置于空氣中讓其自然干燥或者用風(fēng)筒吹干；晾干后加入50uL的1%TE溶解，加入RNA酶2uL，-20°C保存待用。
[0029]本實(shí)驗(yàn)提取幼海蜇觸手部位基因組DNA瓊脂糖電泳如圖1 (1-5道)所示，DNA主帶完整、條帶亮、純度高。
[0030]實(shí)施例2:
[0031]與實(shí)施例1不同之處在于:
[0032]I)取新鮮幼海蜇傘狀部組織約0.01g，放入95%酒精中脫水并保存。
[0033]2)傘狀部組織用蒸餾水沖洗，用濾紙吸干表面水分，放入1.5mL的離心管中用剪刀剪碎至無(wú)明顯顆粒狀，加入300uLCTAB提取液，放入55°C雜交爐中，消化1.0小時(shí)，直至溶
液澄清；
[0034]本實(shí)驗(yàn)提取幼海蜇傘狀部組織基因組DNA瓊脂糖電泳如圖1 (6-10道)所示，DNA主帶完整，條帶較暗，純度較低。 [0035]對(duì)比實(shí)施例1和2:幼海蜇觸手和傘狀部基因組DNA提取比較見(jiàn)圖1,從圖1中可以看出，觸手基因組DNA (泳道1-5)質(zhì)量明顯高于傘狀部(泳道6-10)。證明本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)的幼海蜇基因組DNA提取方法，僅僅需要少量幼海蜇觸手即可，取樣品方便、無(wú)需現(xiàn)有技術(shù)的研磨和剪碎等繁瑣操作，耗時(shí)短，適合大規(guī)模基因組DNA提??；海蜇再生能力強(qiáng)，取少量觸手對(duì)個(gè)體成活無(wú)影響，更利于選擇育種基礎(chǔ)群體家系選育、分子標(biāo)記輔助育種等后續(xù)研究。
【權(quán)利要求】
1.一種幼海蜇基因組DNA提取方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)取幼海蜇觸手2~4根，放入95%酒精中脫水后，用CTAB提取液消化至溶液澄清； 2)對(duì)步驟I)制備的樣品用CTAB法提取DNA。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的幼海蜇基因組DNA提取方法，其特征在于:所述的CTAB法提取DNA的步驟如下: ①樣品抽提:向樣品消化液中加入等體積飽和酚、再加入等體積氯仿-異戊醇溶液混勻，上下震蕩離心，吸取上清液，再加入氯仿-異戊醇溶液混勻，離心吸取上清液； ②沉淀:向步驟①上清液中加入2倍體積無(wú)水乙醇混勻，放入_20°C冰箱20min，離心棄上清液； ③洗滌:用70%的乙醇洗滌2次后晾干； ④溶解:晾干后加入50uL的1%TE溶解，加入RNA酶2uL，_20°C保存待用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的幼海蜇基因組DNA提取方法，其特征在于:所述的觸手與CTAB法中所用的CTAB提取液`的比例為0.01g:300ul,50~55°C消化0.7~1.0小時(shí)。
【文檔編號(hào)】C12N15/10GK103667263SQ201310753650
【公開日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2013年12月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月31日
【發(fā)明者】李云峰, 赫崇波, 李石磊, 劉衛(wèi)東, 高祥剛, 鮑相勃, 蘇浩, 高磊 申請(qǐng)人:遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院