一種提高免疫力的配方驢奶粉的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種提高免疫力的配方驢奶粉，配方以驢奶粉為主，添加藥食同源可用的山藥、百合、核桃和葛根，并輔以添加含低聚果糖和低聚半乳糖的益生元和鼠李糖乳桿菌和植物乳桿菌兩種益生菌。該配方驢奶粉能顯著增加免疫力，具體體現(xiàn)在顯著地提高淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化能力（細(xì)胞免疫功能），增加血清溶血素的生成量（體液免疫功能），增強(qiáng)碳廓清能力（單核巨噬細(xì)胞功能）和NK細(xì)胞的殺傷活性（NK細(xì)胞活性）。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種提高免疫力的配方驢奶粉
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于保健領(lǐng)域，具體來(lái)說(shuō)是一種增強(qiáng)機(jī)體免疫力的配方驢奶粉。
【背景技術(shù)】
[0002]驢奶的營(yíng)養(yǎng)成分全面，與人乳最為接近。驢奶蛋白質(zhì)中氨基酸的種類(lèi)齊全，數(shù)量充足，其賴(lài)氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸(蛋氨酸)、蘇氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、纈氨酸、組氨酸等9種人體必需氨基酸(組氨酸為嬰兒必需氨基酸)占總氨基酸的比例為40.8%，和人乳(43%)相近。脂肪酸是乳脂的主要組成成分，其中亞油酸和α-亞麻酸是必需脂肪酸(EFA)0人體缺乏必需脂肪酸(EFA)會(huì)減緩機(jī)體代謝，造成生長(zhǎng)緩慢，生殖障礙等多種疾病。驢乳富含EFA，含量約為40 mg/100 g，尤其是亞油酸，其含量是牛乳中亞油酸含量的2.5倍(15 mg/100 g)。驢奶中不僅含有多種常量元素，而且富含微量元素。常量元素中，Ca含量豐富，Na、Mg次之；微量元素中，硒含量較高,是牛奶的5.2倍。驢奶與人奶成分間的微小差異，比較容易通過(guò)配料進(jìn)行調(diào)整。然而，目前對(duì)驢奶的研究主要集中于其營(yíng)養(yǎng)成分的分析，而在驢奶的綜合開(kāi)發(fā)利用方面上缺乏深入系統(tǒng)的研究。因此，開(kāi)展驢奶粉復(fù)合配方的應(yīng)用基礎(chǔ)研究，拓寬其應(yīng)用途徑，具有重要的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明提供如下技術(shù)路線(xiàn):
本發(fā)明旨在為驢奶的市場(chǎng)開(kāi)發(fā)提供新途徑，以驢奶粉為基質(zhì)，添加藥食同源可用的山藥、百合、核桃和葛根，并輔以添加含低聚果糖和低聚半乳糖的益生元和鼠李糖乳桿菌和植物乳桿菌兩種益生菌。本發(fā)明包括如下技術(shù)方案:
一種提高免疫力的配方驢奶粉，依照如下步驟制備:
(1)選用外形圓整、表面光滑、無(wú)蟲(chóng)害霉?fàn)€的新鮮山藥作為制備原料；先洗去山藥表面的泥土，用刮皮刀將山藥表皮去除干凈并用水加以沖洗；用不銹鋼刀將去皮后的山藥切為I Cm左右的薄片，并迅速放入清水中浸泡，切片要快捷，以免在空氣中暴露時(shí)間過(guò)長(zhǎng)引起褐變；山藥切片在0.2 g /100 mL檸檬酸護(hù)色液中(98±2)°C下護(hù)色10 min左右，既能得到良好護(hù)色效果，也可使原料基本成熟而獲得濃郁的山藥風(fēng)味；護(hù)色完畢后立即用清水沖洗，以去除黏附的檸檬酸；在山藥片中加入3倍質(zhì)量的水，用粉碎機(jī)粉碎成漿狀；將山藥漿按3.6mg/g劑量添加到驢奶中;即每g驢奶加入3.6 mg山藥楽；；
(2)取新鮮百合，選用大而整齊、潔白肥厚的百合，剔除霉?fàn)€、病蟲(chóng)的百合；去除外圍枯老鱗片及莖底盤(pán)，用流動(dòng)水清洗干凈；取清洗的百合，加入5倍水，按100 g百合加入0.4 g異VC-Na和0.1%的檸檬酸，加熱至100°C處理5?10 min，至百合晶亮透明為止，立即冷卻，進(jìn)行破碎打漿；以膠體磨處理百合漿2次，至無(wú)百合粗顆粒；調(diào)節(jié)百合漿的pH值至6.0，加入耐高溫α-淀粉酶，用量為200 U/g，在95°C下液化25 min ;調(diào)節(jié)的pH至5.5，加入糖化酶，用量為100?300 U/g，在60?70°C下處理I?3 h ;經(jīng)過(guò)酶解處理的百合水解液，在100°C保持5 min進(jìn)行滅酶處理；將滅酶處理的百合衆(zhòng)按7.2 mg/g添加到驢奶中； (3)選用肉質(zhì)飽滿(mǎn)、無(wú)損傷無(wú)蟲(chóng)蛀、無(wú)霉變的新鮮核桃仁除去碎殼和隔膜等雜質(zhì)，再用清水漂洗核桃仁；核桃仁仁用0.2% NaOH煮沸3 min后用弱酸中和，然后用水沖洗；脫去種皮的核桃仁在高速組織搗碎機(jī)中搗碎，料液比為1:4，然后用膠體磨細(xì)磨；膠體磨間距大小適當(dāng)，一般選擇5?8 μ m ;將研磨后的核桃粉按3.0 mg/g劑量添加到驢奶中；
(4)稱(chēng)取處理好的葛根粉約2g，倒入浸提回流裝置中，加入60 mL濃度為50%的乙醇，其中固液比為1:30，于90°C的水浴鍋中回流浸提3 h，抽濾并收集濾液，將抽濾得到的澄清液轉(zhuǎn)入棕色瓶中保存；葛根黃酮按0.24 mg/g劑量添加到驢奶中；
(5)菊苣低聚果糖按0.985 mg/g劑量添加到驢奶粉；
(6)益生菌凍干活菌粉的制備:首先配制質(zhì)量百分比濃度為10%的脫脂奶乳濁液，分裝于4只500 mL三角瓶?jī)?nèi)，每瓶200 mL，121°C滅菌20 min冷卻至37°C，分別按2%體積比例接種鼠李糖乳桿菌和植物乳桿菌，37°C厭氧培養(yǎng)24-28 h，檢測(cè)2株益生菌培養(yǎng)液的活菌數(shù)，各培養(yǎng)液活菌數(shù)>109 CFU/mL,則可停止培養(yǎng)，如果活菌數(shù)〈109 CFU/mL,繼續(xù)培養(yǎng)直至達(dá)至IJIO9 CFU/mL;將培養(yǎng)液在無(wú)菌條件下導(dǎo)入玻璃安瓶中，液面高度0.8 cm至I cm，加蓋瓶塞后放入-30°C冰柜速凍，凍結(jié)后將玻璃安瓶用托盤(pán)盛裝，放入凍干機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，制備粉末凍干菌種；鼠李糖乳桿菌凍干菌粉按0.4 mg/g劑量添加驢奶中,植物乳桿菌按0.2 mg/g劑量添加到驢奶中；
(7)將添加了上述材料的驢奶混合物進(jìn)行均質(zhì)，均質(zhì)壓力和溫度分別為20-25MPa和45-50°C ;將均質(zhì)后的驢奶混合物，進(jìn)行噴霧干燥；噴霧干燥條件控制為:進(jìn)風(fēng)溫度為130-160°C優(yōu)選為150°C，塔溫為75°C，排風(fēng)溫度為70_75°C。
[0004]為評(píng)價(jià)本發(fā)明在驢奶粉的基礎(chǔ)上進(jìn)一步增強(qiáng)機(jī)體免疫力，通過(guò)對(duì)免疫低下小鼠進(jìn)行分組灌胃，含生理鹽水組，驢奶粉組和配方驢奶粉組。
[0005]在采用腹腔注射環(huán)磷酰胺制備免疫低下小鼠后，按灌胃組別分別連續(xù)灌胃28天。灌胃結(jié)束后，取小鼠脾臟，研磨得到脾淋巴細(xì)胞，添加ConA刺激淋巴細(xì)胞，觀(guān)察不同灌胃組別小鼠的淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化能力。灌胃結(jié)束后，通過(guò)尾靜脈注射墨汁，評(píng)價(jià)不同灌胃組別小鼠的碳廓清能力；在灌胃結(jié)束前的第四天，腹腔注射綿陽(yáng)血紅細(xì)胞，待灌胃結(jié)束后取小鼠脾臟研磨得到脾淋巴細(xì)胞，評(píng)價(jià)NK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞YAC-1的殺傷能力；在灌胃結(jié)束前的第四天，腹腔注射綿陽(yáng)血紅細(xì)胞，待灌胃結(jié)束后取血，測(cè)定血清溶血素的生成。
[0006]本發(fā)明的有益效果:
1、本發(fā)明配方驢奶粉具有提高免疫力的效果；
2、本發(fā)明配方驢奶粉味道清新，口感好，更易為普通群眾接受，易于推廣。
【具體實(shí)施方式】
[0007]實(shí)施例1
一種提高免疫力的配方驢奶粉，依照如下步驟制備:
(I)選用外形圓整、表面光滑、無(wú)蟲(chóng)害霉?fàn)€的新鮮山藥作為制備原料；先洗去山藥表面的泥土，用刮皮刀將山藥表皮去除干凈并用水加以沖洗；用不銹鋼刀將去皮后的山藥切為I Cm左右的薄片，并迅速放入清水中浸泡，切片要快捷，以免在空氣中暴露時(shí)間過(guò)長(zhǎng)引起褐變；山藥切片在0.2 g/100 mL檸檬酸護(hù)色液中(98±2)°C下護(hù)色10 min左右，既能得到良好護(hù)色效果，也可使原料基本成熟而獲得濃郁的山藥風(fēng)味；護(hù)色完畢后立即用清水沖洗，以去除黏附的檸檬酸；在山藥片中加入3倍質(zhì)量的水，用粉碎機(jī)粉碎成漿狀；將山藥漿按3.6mg/g劑量添加到驢奶中;即每g驢奶加入3.6 mg山藥楽；；
(2)取新鮮百合，選用大而整齊、潔白肥厚的百合，剔除霉?fàn)€、病蟲(chóng)的百合；去除外圍枯老鱗片及莖底盤(pán)，用流動(dòng)水清洗干凈；取清洗的百合，加入5倍水，按100 g百合加入0.4 g異VC-Na和0.1%的檸檬酸，加熱至100°C處理5~10 min，至百合晶亮透明為止，立即冷卻，進(jìn)行破碎打漿；以膠體磨處理百合漿2次，至無(wú)百合粗顆粒；調(diào)節(jié)百合漿的pH值至6.0，加入耐高溫α-淀粉酶，用量為200 U/g，在95°C下液化25 min ;調(diào)節(jié)的pH至5.5，加入糖化酶，用量為100~300 U/g，在60~70°C下處理I~3 h ;經(jīng)過(guò)酶解處理的百合水解液，在100°C保持5 min進(jìn)行滅酶處理；將滅酶處理的百合楽；按7.2 mg/g添加到驢奶中；
(3)選用肉質(zhì)飽滿(mǎn)、無(wú)損傷無(wú)蟲(chóng)蛀、無(wú)霉變的新鮮核桃仁除去碎殼和隔膜等雜質(zhì)，再用清水漂洗核桃仁；核桃仁仁用0.2% NaOH煮沸3 min后用弱酸中和，然后用水沖洗；脫去種皮的核桃仁在高速組織搗碎機(jī)中搗碎，料液比為1:4，然后用膠體磨細(xì)磨；膠體磨間距大小適當(dāng)，一般選擇5~8 μ m ;將研磨后的核桃粉按3.0 mg/g劑量添加到驢奶中；
(4)稱(chēng)取處理好的葛根粉約2g，倒入浸提回流裝置中，加入60 mL濃度為50%的乙醇，其中固液比為1:30，于90°C的水浴鍋中回流浸提3 h，抽濾并收集濾液，將抽濾得到的澄清液轉(zhuǎn)入棕色瓶中保存；葛根黃酮按0.24 mg/g劑量添加到驢奶中；
(5)菊苣低聚果糖按0.985 mg/g劑量添加到驢奶粉；
(6)益生菌凍干活菌粉的制備:首先配制質(zhì)量百分比濃度為10%的脫脂奶乳濁液，分裝于4只500 mL三角瓶?jī)?nèi)，每瓶200 mL，12rC滅菌20 min冷卻至37°C，分別按2%體積比例接種鼠李糖乳桿菌和植物乳桿菌，37°C厭氧培養(yǎng)24-28 h，檢測(cè)2株益生菌培養(yǎng)液的活菌數(shù)，各培養(yǎng)液活菌數(shù)>109 CFU/mL,則可停止培養(yǎng)，如果活菌數(shù)〈109 CFU/mL,繼續(xù)培養(yǎng)直至達(dá)到IO9 CFU/mL ;將培養(yǎng)液在無(wú)菌條件下導(dǎo)入玻璃安瓶中，液面高度0.8 cm至I cm，加蓋瓶塞后放入-30°C冰柜速凍，凍結(jié)后將玻璃安瓶用托盤(pán)盛裝，放入凍干機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，制備粉末凍干菌種；鼠李糖乳桿菌凍干菌粉按0.4 mg/g劑量添加驢奶中，植物乳桿菌按0.2mg/g劑量添加到驢奶中；
(7)將添加了上述材料的驢奶混合物進(jìn)行均質(zhì)，均質(zhì)壓力和溫度分別為20-25MPa和45-50°C ;將均質(zhì)后的驢奶混合物，進(jìn)行噴霧干燥；噴霧干燥條件控制為:進(jìn)風(fēng)溫度為130-160°C，塔溫為75°C，排風(fēng)溫度為70_75°C。
[0008]實(shí)施例2免疫試驗(yàn)
免疫低下小鼠的制備:購(gòu)買(mǎi)BALB/c小鼠72只，放置動(dòng)物房觀(guān)察一周后，隔日腹腔注射環(huán)磷酰胺溶液，第一天按100 mg/kg劑量注射,第三天按80 mg/kg劑量注射,制備免疫低下小鼠。
[0009]小鼠灌胃組別的設(shè)置:將小鼠隨機(jī)分成3組，每組10只，依次為空白組，驢奶組，配方驢奶粉組。每組小鼠灌胃期均為28天，每只小鼠的灌胃量為300 μ!7日?？瞻捉M的小鼠灌胃0.85%的無(wú)菌生理鹽水，驢奶粉組和配方驢奶粉組(取實(shí)施例1制備的配方驢奶粉)的小鼠按5 g/kg的劑量灌胃。
[0010]脾細(xì)胞懸液的制備:采用勁椎脫臼法處死小鼠，用75%的乙醇浸泡2 min中，消毒處理。將小鼠置于解剖托盤(pán)中，沿腹膜解剖小鼠，無(wú)菌取脾，置于盛有適量無(wú)菌Hank’s液平皿中，去除脾臟上粘連的結(jié)締組織，并輕輕洗滌后將脾轉(zhuǎn)移至無(wú)菌Hank’s液平皿中。用鑷子將脾在40目紗布上輕輕磨碎，經(jīng)200目篩網(wǎng)過(guò)濾后獲得單細(xì)胞懸液。細(xì)胞懸液經(jīng)1000r/min離心10 min后,按10:1比例加入紅細(xì)胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解時(shí)間約5 min左右。1000 r/min離心10 min，去除上清液，細(xì)胞沉淀用無(wú)菌Hank’s液洗滌2次。將細(xì)胞懸浮于I mL RPMI1640完全培養(yǎng)液中，用臺(tái)盼蘭染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)(應(yīng)在95%以上)，調(diào)整細(xì)胞濃度為3 X IO6個(gè)/mL。
[0011]細(xì)胞免疫功能的測(cè)定——小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn):將每一份脾細(xì)胞懸液分4孔加入24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔I mL，其中3個(gè)孔作為平行樣孔，均加入50 μ L ConA液(相當(dāng)于5 yg/mL)，剩余I孔中加入50 μ L細(xì)胞培養(yǎng)液代替ConA液作為空白孔。置5% C02，37°C孵箱中培養(yǎng)72 h ;培養(yǎng)結(jié)束前4 h，每孔輕輕吸去0.7 mL上清液，再加入0.7 mL不含血清的RPMI1640培養(yǎng)液，同時(shí)每孔加入50 μ L MTT溶液(5 mg/mL)，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入I mL酸性異丙醇，充分吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解。然后分裝到96孔培養(yǎng)板中，每個(gè)孔作3個(gè)平行孔，于酶標(biāo)儀570 nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的吸光OD值并記錄。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示，結(jié)果表明:與生理鹽水組相比，灌胃單一組分的驢奶粉不能提高脾淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率(P>0.05)，而灌胃配方驢奶粉組小鼠的脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著高于驢奶粉組的小鼠(P〈0.05)。
[0012]表1不同的灌胃組別對(duì)Con-A誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響(X土SD)
【權(quán)利要求】
1.一種提高免疫力的配方驢奶粉，其特征在于依照如下步驟制備: (1)選用外形圓整、表面光滑、無(wú)蟲(chóng)害霉?fàn)€的新鮮山藥作為制備原料；先洗去山藥表面的泥土，用刮皮刀將山藥表皮去除干凈并用水加以沖洗；用不銹鋼刀將去皮后的山藥切為I Cm左右的薄片，并迅速放入清水中浸泡；山藥切片在0.2 g/100 mL檸檬酸護(hù)色液中(98±2) °C下護(hù)色10 min左右；護(hù)色完畢后立即用清水沖洗，以去除黏附的檸檬酸；在山藥片中加入3倍質(zhì)量的水，用粉碎機(jī)粉碎成漿狀；將山藥漿按3.6 mg/g劑量添加到驢奶中；即每g驢奶加入3.6 mg山藥衆(zhòng)； (2)取新鮮百合，選用大而整齊、潔白肥厚的百合，剔除霉?fàn)€、病蟲(chóng)的百合；去除外圍枯老鱗片及莖底盤(pán)，用流動(dòng)水清洗干凈；取清洗的百合，加入5倍水，按100 g百合加入0.4 g異VC-Na和0.1%的檸檬酸，加熱至100°C處理5?10 min，至百合晶亮透明為止，立即冷卻，進(jìn)行破碎打漿；以膠體磨處理百合漿2次，至無(wú)百合粗顆粒；調(diào)節(jié)百合漿的pH值至6.0，加入耐高溫α -淀粉酶，用量為200 U/g，在95°C下液化25 min ;調(diào)節(jié)的pH至5.5，加入糖化酶，用量為100?300 U/g，在60?70°C下處理I?3 h ;經(jīng)過(guò)酶解處理的百合水解液，在100°C保持5 min進(jìn)行滅酶處理；將滅酶處理的百合衆(zhòng)按7.2 mg/g添加到驢奶中； (3)選用肉質(zhì)飽滿(mǎn)、無(wú)損傷、無(wú)蟲(chóng)蛀、無(wú)霉變的新鮮核桃仁除去碎殼和隔膜等雜質(zhì)，再用清水漂洗核桃仁；核桃仁仁用0.2% NaOH煮沸3 min后用弱酸中和，然后用水沖洗；脫去種皮的核桃仁在高速組織搗碎機(jī)中搗碎，料液比為1:4，然后用膠體磨細(xì)磨；膠體磨間距選擇5?8 μ m ;將研磨后的核桃粉按3.0 mg/g劑量添加到驢奶中； (4)稱(chēng)取處理好的葛根粉約2g，倒入浸提回流裝置中，加入60 mL濃度為50%的乙醇，其中固液比為1:30，于90°C的水浴鍋中回流浸提3 h，抽濾并收集濾液，將抽濾得到的澄清液轉(zhuǎn)入棕色瓶中保存；葛根黃酮按0.24 mg/g劑量添加到驢奶中； (5)菊苣低聚果糖按0.985 mg/g劑量添加到驢奶粉； (6)益生菌凍干活菌粉的制備:首先配制質(zhì)量百分比濃度為10%的脫脂奶乳濁液，分裝于4只500 mL三角瓶?jī)?nèi)，每瓶200 mL，12rC滅菌20 min冷卻至37°C，分別按2%體積比例接種鼠李糖乳桿菌和植物乳桿菌，37°C厭氧培養(yǎng)24-28 h，檢測(cè)2株益生菌培養(yǎng)液的活菌數(shù)，各培養(yǎng)液活菌數(shù)>109 CFU/mL，則可停止培養(yǎng)，如果活菌數(shù)〈109 CFU/mL，繼續(xù)培養(yǎng)直至達(dá)至IJ 109CFU/mL ;將培養(yǎng)液在無(wú)菌條件下導(dǎo)入玻璃安瓶中，液面高度0.8 cm至I cm，加蓋瓶塞后放入-30°C冰柜速凍，凍結(jié)后將玻璃安瓶用托盤(pán)盛裝，放入凍干機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，制備粉末凍干菌種；鼠李糖乳桿菌凍干菌粉按0.4 mg/g劑量添加驢奶中,植物乳桿菌按0.2 mg/g劑量添加到驢奶中； (7)將添加了上述材料的驢奶混合物進(jìn)行均質(zhì)，均質(zhì)壓力和溫度分別為20-25MPa和45-500C ;將均質(zhì)后的驢奶混合物，進(jìn)行噴霧干燥。
2.如權(quán)利要求1所述的配方驢奶粉，其特征在于步驟(7)噴霧干燥條件控制為:進(jìn)風(fēng)溫度為130-160°C，優(yōu)選為150°C，塔溫為75°C，排風(fēng)溫度為70_75°C。
【文檔編號(hào)】A23C9/16GK103734338SQ201310693239
【公開(kāi)日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2013年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月18日
【發(fā)明者】魏華, 許恒毅, 熊勇華, 彭珊珊, 徐鋒 申請(qǐng)人:南昌大學(xué)