一種制備尿激酶粗品的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種制備尿激酶粗品的方法。本發(fā)明的技術(shù)方案是利用吸附工序、脫附工序、鹽析工序從合格尿液中制備尿激酶粗品的方法。本發(fā)明操作簡單且有較高的收率。
【專利說明】一種制備尿激酶粗品的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說涉及從合格的尿液中制備尿激酶粗品的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]尿激酶是一種堿性蛋白酶，由腎臟產(chǎn)生，主要存在于人體及哺乳動物的尿液中，血液凝固時人體的正常機能，但是在某些病理狀態(tài)下，由血管內(nèi)形成血栓堵塞血液流通時，就會造成嚴(yán)重后果。尿激酶是溶血栓藥物，但它本身并不直接用于血塊本身，而是首先激活體內(nèi)的纖溶酶原，成為有活性的纖溶酶，纖溶酶作用于纖維蛋白酶凝塊，使其分解成可溶性多碳。
[0003]尿激酶有多種分子量形式，高分子量的尿激酶溶解血栓臨床效果要比低分子量的約高一倍，因此，國際上把尿激酶的分子量作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢查項目之一，為減少低分子量的產(chǎn)生，生產(chǎn)過程中pH值不宜過低。
[0004]由于尿激酶有著重要的醫(yī)藥價值，所以相繼有很多?？瘓蟮懒四蚣っ复制返奶崛》椒?，因人體尿液中尿激酶含量很低，取尿激酶的關(guān)鍵就是如何從大量的尿液中富集尿激酶，從目前發(fā)表的?？瘉砜?，主要有三類方法:(I)、發(fā)泡法:即以高速攪拌使酶液發(fā)泡，然后使泡沫液化，加入硫酸銨使尿激酶沉淀。(2)、沉淀劑法:在尿液中加入沉淀劑，使尿激酶沉淀，尿激酶則保留在沉淀中。(3)、吸附劑法:此法應(yīng)用最多，選擇適當(dāng)?shù)奈絼?，有選擇的吸附尿激酶。
[0005] 本工藝就是采用離子交換樹脂作為吸附劑，生產(chǎn)尿激酶粗品。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是從合格的尿液中提取尿激酶粗品。。
[0007]本發(fā)明的技術(shù)方案是:利用吸附工序、脫附工序、鹽析工序從合格尿液中制備尿激酶粗品的方法。本發(fā)明操作簡單且有較高的收率。包括如下步驟:
[0008](I)吸附工序:取合格尿液用二層紗布過濾，濾入攪拌罐中；在不斷攪拌的同時，以緩慢的速度加入D-160A離子交換樹脂，并用精密儀器測定，調(diào)節(jié)尿液pH到4.5~6.5之間；攪拌吸附I~2小時，棄去尿液，用水洗滌樹脂去殘尿及雜質(zhì)，再用磷酸緩沖液洗至澄清為止；
[0009](2)脫附工序:用含氯化鈉的氨水?dāng)嚢柘疵?.5~1.5小時，抽濾，收集洗脫液，樹脂再用同樣溶液洗脫20~50分鐘，收集洗脫液，合并二次洗脫液；
[0010](3)鹽析工序:按洗脫液的體積計算加入固體硫酸銨,攪拌溶解,達到50%~70%飽和度，于-4~O°C上清液用醋酸調(diào)pH到4.5~6.5，加I~3倍量丙酮，稍攪拌后，放置沉淀12~16小時，離心，收集沉淀的尿激酶鹽析品；
[0011](4)將尿激酶鹽析品放置陰涼處保存；【具體實施方式】
[0012]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。
[0013]實施例1
[0014]所述的利用吸附工序、脫附工序、鹽析工序從合格尿液中制備尿激酶粗品的方法，包括如下步驟:
[0015]1.吸附工序:
[0016]1.1取合格尿液500公斤，用二層紗布過濾，濾入攪拌罐中；
[0017]1.2在不斷攪拌的同時，以緩慢的速度加入D-160A離子交換樹脂，并用精密儀器測定，調(diào)節(jié)尿液PH到6.0 ；
[0018]1.3攪拌吸附1.5小時，棄去尿液，用水洗滌樹脂去殘尿及雜質(zhì)，再用磷酸緩沖液洗至澄清為止；；
[0019]2.脫附工序:
[0020]2.1用含氯化鈉的氨水?dāng)嚢柘疵揑小時，抽濾，收集洗脫液，
[0021]2.2樹脂再用同樣溶液洗脫30分鐘，收集洗脫液，合并二次洗脫液；
[0022]3.鹽析工序:
[0023]3.1按洗脫液的體積計算加入固體硫酸銨，攪拌溶解，達到65%飽和度；
[0024]3.2于-4~(TC上清液用醋酸調(diào)pH到5.0 ；
[0025]3.3加2倍量丙酮，稍攪拌后，放置沉淀14小時，離心，收集沉淀的尿激酶鹽析品；
[0026]4.將尿激酶鹽析品放置陰涼處保存；
[0027]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非是對本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種制備尿激酶粗品的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟: (1)吸附工序:取合格尿液用二層紗布過濾，濾入攪拌罐中；不斷攪拌的同時，緩慢加入離子交換樹脂，調(diào)節(jié)PH，攪拌吸附，洗滌樹脂至澄清； (2)脫附工序:攪拌洗脫，抽濾，收集洗脫液，再次洗脫，收集洗脫液，合并兩次洗脫液； (3)鹽析工序:加入固體硫酸銨，攪拌溶解，調(diào)節(jié)pH值，加丙酮，攪拌，放置沉淀，離心，得尿激酶鹽析品，即尿激酶粗品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟⑴中，調(diào)節(jié)尿液的pH值到4.5~6.5 ;攪拌吸附的時間為:1~2小時；洗滌樹脂時先用水洗滌去殘尿及雜質(zhì)，然后用磷酸緩沖液洗至澄清。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(2)中，所用的洗脫液為含氯化鈉的氨水；第一次攪拌洗脫時間為0.5~1.5小時；第二次攪拌洗脫時間為20~50分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(3)中，按照洗脫液的體積加入固體硫酸銨，攪拌溶解，使溶液達到50%~70%的飽和度；在-4~0°C用醋酸調(diào)節(jié)溶液上清液pH值至4.5~6.5 ;用丙酮沉淀，沉淀時間為12~16小時；每1000ml溶液中加入固體硫酸銨的重量為300~450g。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述 的方法，其特征在于:所得的尿激酶粗品應(yīng)在陰涼處保存。
【文檔編號】C12N9/72GK103740687SQ201310643507
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年11月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月30日
【發(fā)明者】劉乃山, 張曉涵, 安迪, 張元澤 申請人:青島康原藥業(yè)有限公司