巨噬細(xì)胞抑制因子1在肝病中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及巨噬細(xì)胞抑制因子1在肝病中的應(yīng)用。具體而言，本發(fā)明涉及巨噬細(xì)胞抑制因子1在制備診斷和／或監(jiān)測受試者中肝病的試劑或試劑盒中的用途。本發(fā)明還涉及診斷和／或監(jiān)測受試者中肝病的試劑或試劑盒，其包括本發(fā)明所述檢測巨噬細(xì)胞抑制因子1的試劑。本發(fā)明的巨噬細(xì)胞抑制因子1和甲胎蛋白有很好的互補(bǔ)性，能夠大幅提高肝癌的檢出效率，具有良好的應(yīng)用前景。
【專利說明】巨噬細(xì)胞抑制因子1在肝病中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及肝病診斷監(jiān)測領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及巨噬細(xì)胞抑制因子I在肝病診斷和監(jiān)測中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】[0002]肝病尤其是肝癌嚴(yán)重威脅人類健康，其中原發(fā)性肝癌是原發(fā)于肝臟的肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，為死亡率極高、嚴(yán)重危害人類健康的惡性腫瘤之一。世界范圍內(nèi)肝癌發(fā)病率有逐年上升的趨勢，在我國惡性腫瘤發(fā)病中排名第四，發(fā)病人數(shù)約占全球的半數(shù)以上，發(fā)病率約為28.7 / 10萬。由于解剖特點(diǎn)發(fā)病早期常缺乏典型癥狀，易于被忽視而延誤治療，出現(xiàn)明顯癥狀時患者已進(jìn)入中晚期，喪失最佳治療時機(jī)。早期診斷和手術(shù)治療是提高肝癌病人生存率的關(guān)鍵。對于肝癌的高危人群，現(xiàn)在最常用的監(jiān)測手段是定期檢測血漿中甲胎蛋白水平和影像學(xué)檢查如超聲等。然而，甲胎蛋白的敏感性和特異性都不令人滿意，敏感度可達(dá)60~70%，特異性約90%左右。也有報道稱CEA、AFP、CA199的聯(lián)合檢查可提高診斷的陽性率(司序，譚桂菊，吉林醫(yī)學(xué)2008年8月第29卷第16期)。另外，使用甲胎蛋白作為標(biāo)志物，還有30%-40%的肝癌病例不能早期檢出(即AFP陰性患者)。在AFP陰性肝癌(58例)的研究表明，4種腫瘤標(biāo)志物單項(xiàng)檢測陽性率分別為AFU64%、CEA28%,CA19922%, TSGF66% (現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011年2月，20 (6)，660-662)。因此探索新的具有更高敏感性、特異性和準(zhǔn)確性并可能具有早期診斷價值的肝癌腫瘤標(biāo)志物對于提高我國肝癌臨床診斷水平乃至提高療效具有重要意義和必要性。
[0003]巨噬細(xì)胞抑制因子I (MICl)，也被稱為生長分化因子15 (⑶F15)，是TGF- ^超家族中的一個重要成員。MICl廣泛參與細(xì)胞凋亡、侵襲及轉(zhuǎn)移等生物學(xué)過程。正常人血清中的成熟MIC-1蛋白呈低水平穩(wěn)定表達(dá)，在病理狀態(tài)下如腫瘤、急性損傷及炎癥其表達(dá)水平可一過性顯著升高。盡管MICl的具體生物學(xué)功能尚未闡明，但是大量研究提示MICl涉及炎癥、凋亡和腫瘤的發(fā)生。但截止目前，MICl在肝癌中的功能尚不明確，國際上也未見MIC-1與肝癌的診斷和治療監(jiān)測的相關(guān)研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的研究結(jié)果表明，巨噬細(xì)胞抑制因子I(MIC-1)能夠作為肝病尤其是肝癌的標(biāo)志物用于肝病診斷和/或監(jiān)測中。本發(fā)明的研究還發(fā)現(xiàn)MIC-1與AFP聯(lián)合可以大幅提高肝癌的檢出效率。因此，MIC-1單獨(dú)或與AFP聯(lián)合可用于診斷和/或監(jiān)測受試者中的肝病，包括用于制備診斷和/或監(jiān)測受試者中肝病的試劑或試劑盒。
[0005]因此，本發(fā)明一方面涉及巨噬細(xì)胞抑制因子I在診斷和/或監(jiān)測受試者中肝病的用途。
[0006]在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，所述肝病包括肝癌、肝臟良性腫瘤和慢性肝炎，優(yōu)選肝癌。本發(fā)明的分析檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MIC-1與AFP有較好的互補(bǔ)性，在AFP陰性患者當(dāng)中，令人吃驚的發(fā)現(xiàn)高達(dá)73%的患者呈現(xiàn)MIC-1血清陽性。因此在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，所述肝病是甲胎蛋白陰性肝癌。
[0007]在本發(fā)明的另一個方案中，本發(fā)明的巨噬細(xì)胞抑制因子I可以進(jìn)一步與不同于巨噬細(xì)胞抑制因子I的其它肝病標(biāo)志物聯(lián)合使用，從而有利于提高特異性，這樣的肝病標(biāo)志物可以是本領(lǐng)域已知的任何肝病標(biāo)志物(TSG、IAP、GGT、IAP、PHC、CEA、CA199)。本領(lǐng)域有大量文獻(xiàn)公開了這樣的標(biāo)志物。在一個實(shí)施方案中，不同于巨噬細(xì)胞抑制因子I的其它肝病標(biāo)志物可以是已知的肝癌標(biāo)志物如甲胎蛋白，已知的肝臟良性腫瘤標(biāo)志物或已知的慢性肝炎標(biāo)志物。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，例如在腫瘤如肝癌篩查中，鑒于MIC-1與AFP有較好的互補(bǔ)性，本發(fā)明的巨噬細(xì)胞抑制因子I進(jìn)一步與甲胎蛋白聯(lián)合使用，從而提高可以大幅提高肝癌的檢出效率。
[0008]本發(fā)明的研究表明與本發(fā)明的MIC-1在肝癌的早期顯診斷方面顯著高于AFP。因此，在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的MIC-1用于早期診斷I期肝癌或II期肝癌。
[0009]在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的試劑或試劑盒可用于組織原位檢測和/或監(jiān)測巨噬細(xì)胞抑制因子I的表達(dá)(例如mRNA水平)，或者用于檢測和/或監(jiān)測巨噬細(xì)胞抑制因子I的血清水平。
[0010]在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，所述巨噬細(xì)胞抑制因子I的血清水平的臨界值設(shè)為600pg / ml，從而可以提高靈敏度，有利地用于肝癌的篩查，特別是I或II期肝癌的診斷。
[0011]在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，所述巨噬細(xì)胞抑制因子I的血清水平的臨界值設(shè)為IOOOpg / ml,從而提高診斷和/或監(jiān)測特異性。
[0012]本發(fā)明另一方方面涉及診斷和/或監(jiān)測受試者中肝病的試劑或試劑盒，其中包括上文描述的試劑或試劑盒。在本發(fā)明發(fā)現(xiàn)MIC-1可用于肝病的檢測或監(jiān)測后，這樣的試劑和/或試劑盒可通過本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)容易地制備。例如所述試劑和/或試劑盒可以包括檢測MIC-1和/或AFP的抗體，優(yōu)選單克隆抗體，或者用于檢測MIC-1和/或AFP表達(dá)的引物和/或探針等。所述試劑或試劑盒還可以包括常規(guī)的進(jìn)行PCR反應(yīng)的緩沖液、聚合酶、dNTPs混合物等。本發(fā)明的試劑盒還可以包括使用說明書等。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1.腫瘤組織中MIC-1的表達(dá)水平顯著高于癌旁正常組織和肝硬化組織。
[0014]圖2.免疫組化顯示MIC-1在腫瘤組織中的該表達(dá)和分布。
[0015]圖3.腫瘤組織和癌旁MIC-1水平的western blot分析。
[0016]圖4.腫瘤標(biāo)志物MIC-1診斷肝癌的ROC曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0017]為評估肝細(xì)胞癌中MICl中的作用，我們首先研究了 80組配對肝癌組織和對應(yīng)患者治療前血清樣本中的MICl表達(dá)。通過對80組肝癌組織和鄰近配對組織的mRNA進(jìn)行分析，我們發(fā)現(xiàn)70% (56 / 80)的肝細(xì)胞癌中MICl存在高表達(dá)，顯著高于癌旁肝組織(P<0.001)和無癌肝硬化組織(P〈0.001)(圖1)，免疫組化結(jié)果顯示肝癌組織中MICl彌散性分布于肝細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中(圖2)。對4份代表性的患者組織樣本提取總蛋白進(jìn)行Westernblot分析(圖3)，結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)肝癌組織中MICl的表達(dá)顯著高于癌旁組織和無癌肝硬化組織；結(jié)果提示MIC-1在肝癌的發(fā)生發(fā)展中可能具有重要作用。此外，研究發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中的MIC-1表達(dá)與血清樣品成顯著正相關(guān)(r=0.551, P<0.001)，組織中MICl表達(dá)陽性的患者血清MICl中位值(N=56)顯著高于陰性組(N=24) (P〈0.001)。研究提示血清中MIC-1水平的顯著升高與肝癌組織MIC-1的過表達(dá)存在顯著相關(guān)，對血清中的MIC-1血清進(jìn)行檢測，可以反應(yīng)患者腫瘤組織中MIC-1的表達(dá)改變，MIC-1能夠作為肝癌腫瘤標(biāo)志物在肝癌的診斷和治療監(jiān)測中發(fā)揮重要作用。
[0018]為探索MICl在肝病中的應(yīng)用價值，我們分別檢測440肝癌、30肝臟良性腫瘤、30慢性肝炎和500正常對照組血清MIC-1濃度，結(jié)果惡性腫瘤組MIC-1濃度顯著高于良性腫瘤(P〈0.001)、慢性炎癥(P<0.001)和正常對照組(P<0.001);慢性肝炎組MIC-1水平顯著高于良性腫瘤(P〈0.001)和正常對照組(P〈0.001);良性腫瘤組MIC-1水平顯著高于正常對照組(P〈0.001)，結(jié)果見表1。 [0019]表1:肝癌、肝臟良性疾病、慢性炎癥和正常對照組中的MIC-1血清濃度比較
[0020]
【權(quán)利要求】
1.巨噬細(xì)胞抑制因子I在制備診斷和/或監(jiān)測受試者中肝病的試劑或試劑盒中的用途。
2.權(quán)利要求1所述的用途，其中所述肝病包括肝癌、肝臟良性腫瘤和慢性肝炎，優(yōu)選肝癌，更優(yōu)選為甲胎蛋白陰性肝癌。
3.權(quán)利要求1或2所述的用途，其中所述巨噬細(xì)胞抑制因子I進(jìn)一步與不同于巨噬細(xì)胞抑制因子I的其它肝病標(biāo)志物聯(lián)合使用，所述其它肝病標(biāo)志物可以是肝癌標(biāo)志物如甲胎蛋白，肝臟良性腫瘤標(biāo)志物或慢性肝炎標(biāo)志物。
4.權(quán)利要求3所述的用途，其中所述其它肝病標(biāo)志物是甲胎蛋白，所述肝病是肝癌。
5.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的用途，其中所述肝癌為I期肝癌或II期肝癌。
6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述試劑或試劑盒用于檢測和/或監(jiān)測肝組織中巨噬細(xì)胞抑制因子I的表達(dá)。
7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述試劑或試劑盒用于檢測和/或監(jiān)測巨噬細(xì)胞抑制因子I的血清水平。
8.權(quán)利要求7所述的用途，其中所述巨噬細(xì)胞抑制因子I的血清水平的臨界值設(shè)為600pg/ml。
9.權(quán)利要求7所述的用途，其中所述巨噬細(xì)胞抑制因子I的血清水平的臨界值設(shè)為IOOOpg / mlo
10.診斷和/或監(jiān)測受試者中肝病的試劑或試劑盒，其中所述試劑或試劑盒包括權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)中定義的試劑或試劑盒。
【文檔編號】C12Q1/68GK103616519SQ201310612603
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月28日
【發(fā)明者】張偉, 王小兵, 田海梅, 李艷芬, 李茉 申請人:張偉