浙貝母多糖的超聲輔助提取工藝和含浙貝母多糖的保健品的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種浙貝母多糖的超聲輔助提取工藝和含浙貝母多糖的保健品，包括以下步驟：（1）除脂（2）水提取，取干燥后的浙貝母，粉碎，按超聲輔助提取工藝提取多糖，即提取條件為：料液比為1：15，超聲波作用功率為120W，提取溫度80℃，提取時間為1.5h；濾渣至少重復(fù)提取三次，合并濾液，得到浙貝母多糖水提液；（3）醇沉（4）脫蛋白，得純化的浙貝母多糖。本發(fā)明的優(yōu)點是提取時間短，效率高，而且含浙貝母多糖的保健品有消除自由基，抗氧化性強的保健效果。
【專利說明】浙貝母多糖的超聲輔助提取工藝和含浙貝母多糖的保健品
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于化合物提取領(lǐng)域，具體是指浙貝母多糖的超聲輔助提取工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]多糖作為來自高等植物、動物和微生物細(xì)胞中的天然高分子化合物，是由多個單糖分子縮合、失水而成的一類分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜且龐大的糖類物質(zhì)，是構(gòu)成生命的四大基本物質(zhì)之一。多糖由于其重要的生理功能及廣泛的應(yīng)用被不斷挖掘，多糖作為藥物始于1943年，目前人們已成功地從許多生物材料中提取出了多糖，這些多糖具有非常重要與特殊的生理活性。
[0003]浙貝母(Fritillaria thunbergiiMiq.)為百合科貝母屬的一種多年生草本植物。地下鱗莖具有清熱散結(jié)、化痰止咳的功能，可用于治療風(fēng)熱犯肺、痰火咳嗽、肺癰、乳癰、瘰疬和瘡毒，是“浙八味”之一。
[0004]現(xiàn)代藥學(xué)對浙貝母活性成分的研究主要針對生物堿等小分子化合物，剩余的廢渣在提取的過程中白白浪費。然而，浙貝母中多糖含量高，對多糖的開發(fā)利用研究僅見提取工藝研究，尚未見多糖結(jié)構(gòu)和活性的研究報道，超聲輔助提取方法研究也尚未見文獻報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點和不足，而提供一種耗時少，耗能少，提取率更高的浙貝母多糖的超聲輔助提取工藝。
[0006]本發(fā)明的另一個目的是，提供一種包括有純化的浙貝母多糖和溶劑，該純化的浙貝母多糖的濃度 12mg/mL。
[0007]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種含浙貝母多糖的保健品。
[0008]( I)除脂
將浙貝母整理去雜，用95%乙醇浸沒，80°C的水浴回流，至少3h后取出浙貝母，并干
燥；
(2)水提取
取干燥后的浙貝母，粉碎，按超聲輔助提取工藝提取多糖，即提取條件為:料液比為1:15，超聲波作用功率為120W，提取溫度80°C，提取時間為1.5h ;濾渣至少重復(fù)提取三次，合并濾液，得到浙貝母多糖水提液。
[0009](3)醇沉
將浙貝母多糖水提液濃縮，加入3-4倍體積的95%的乙醇溶液，邊加邊攪拌，出現(xiàn)絮狀粗多糖沉淀物，而后置于4°C的冰箱中保存，至少24h后，取出，緩慢倒出上層液體，下層物質(zhì)在4500r/min以上的轉(zhuǎn)速下離心至少20min,離心沉淀物即為粗多糖；
(4)脫蛋白
將粗多糖溶解制成5%的糖溶液，加入1/5體積的氯仿-正丁醇溶液，在調(diào)速振蕩器上充分振蕩，至少30min后，于4500r/min以上的轉(zhuǎn)速下離心至少IOmin,得到三層液體,取最上層黃色液體，重復(fù)3-5次，得純化的浙貝母多糖。
[0010]本發(fā)明的優(yōu)點是:多糖的提取率(8.61%)較傳統(tǒng)提取工藝的提取率(7.43%)提高1.18%。而且本發(fā)明提取時間短，效率高。具體參見本申請實施例中的實驗例部分。
[0011]為實現(xiàn)本發(fā)明的第二個發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是含浙貝母多糖的保健品，包括有純化的浙貝母多糖和溶劑，該純化的浙貝母多糖的濃度>12mg/mL。本發(fā)明的保健品具有較強的抗氧化活性，對羥自由基的清除率高達98.17%，可以作為保健藥品開發(fā)。
[0012]下面結(jié)合說明書附圖和【具體實施方式】對本發(fā)明做進一步介紹。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1浙貝母多糖清除羥自由基活性的曲線圖；
圖2料液比對多糖提取率的影響的曲線圖；
圖3溫度對多糖提取率的影響曲線圖；
圖4功率對多糖提取率的影響曲線圖；
圖5提取時間對多糖提取率的影響曲線圖。
【具體實施方式】
[0014]下面通過實施例對本發(fā)明進行具體的描述，只用于對本發(fā)明進行進一步說明，不能理解為對本發(fā)明保護范圍的限定，該領(lǐng)域的技術(shù)工程師可根據(jù)上述發(fā)明的內(nèi)容對本發(fā)明作出一些非本質(zhì)的改進和調(diào)整。
`[0015]實施例1:1除脂
將浙貝母整理去雜，準(zhǔn)確稱取500g，用95%乙醇浸沒，80°C的水浴回流，3h后取出浙貝母樣品，干燥。
[0016]水提取
取干燥后的浙貝母，粉碎，按超聲輔助提取工藝提取多糖，即提取條件為:料液比為1:15，超聲波作用功率為120W，提取溫度80°C，提取時間為1.5h。濾渣重復(fù)提取三次，合并濾液，得到浙貝母多糖水提液。
[0017]醇沉
將浙貝母多糖水提液濃縮成500ml，加入4倍體積的95%的乙醇溶液(貝母多糖溶液:乙醇溶液=1:4)，邊加邊攪拌，出現(xiàn)絮狀粗多糖沉淀物，而后置于4°C的冰箱中保存。24h后，取出，緩慢倒出上層液體，下層物質(zhì)在4500r/min的轉(zhuǎn)速下離心20min,離心沉淀物即為粗多糖。干燥后樣品重量為119.7 go
[0018]法脫蛋白
將粗多糖溶解制成5%的糖溶液，用Sevag法除蛋白，即加入1/5體積的氯仿-正丁醇溶液(貝母粗多糖:氯仿-正丁醇=5:1)，在調(diào)速振蕩器上充分振蕩。30min后，于4500r/min的轉(zhuǎn)速下離心lOmin，得到三層液體。取最上層黃色液體，重復(fù)3-5次，每次脫蛋白后用考馬斯亮藍測量蛋白質(zhì)含量，直至蛋白質(zhì)接近于無。多糖樣品凍干，得純化多糖38.9g。
[0019]實施例2:1除脂將浙貝母整理去雜，準(zhǔn)確稱取5000g，用95%乙醇浸沒，800C的水浴回流，3h后取出浙貝母樣品，干燥。
[0020]水提取
取干燥后的浙貝母，粉碎，按超聲輔助提取工藝提取多糖，即提取條件為:料液比為1:15，超聲波作用功率為120W，提取溫度80°C，提取時間為1.5h。濾渣重復(fù)提取三次，合并濾液，得到浙貝母多糖水提液。
[0021]醇沉
將浙貝母多糖水提液濃縮成1500ml，加入4倍體積的95%的乙醇溶液(貝母多糖溶液:乙醇溶液=1:4)，邊加邊攪拌，出現(xiàn)絮狀粗多糖沉淀物，而后置于4°C的冰箱中保存。24h后，取出，緩慢倒出上層液體，下層物質(zhì)在4500r/min的轉(zhuǎn)速下離心20min,離心沉淀物即為粗多糖。干燥后樣品重量為586.4 go
[0022]法脫蛋白
將粗多糖溶解制成5%的糖溶液，用Sevag法除蛋白，即加入1/5體積的氯仿-正丁醇溶液(貝母粗多糖:氯仿-正丁醇=5:1)，在調(diào)速振蕩器上充分振蕩。30min后，于4500r/min的轉(zhuǎn)速下離心lOmin，得到三層液體。取最上層黃色液體，重復(fù)3-5次，每次脫蛋白后用考馬斯亮藍測量蛋白質(zhì)含量，直至蛋白質(zhì)接近于無。多糖樣品凍干，得純化多糖196.2g。
[0023]實施例3
將本發(fā)明工藝提純的浙貝母多糖配置成濃度> 12mg/mL的保健品，具有優(yōu)異的抗氧化活性。如圖1所示，浙貝母多糖對羥自由基的清除率隨著濃度的升高而升高，清除能力與濃度之間有明顯的量效關(guān)系。當(dāng)濃度在疒8mg/mL范圍內(nèi)，多糖對羥自由基的清除作用顯著，當(dāng)濃度再次增加時，多糖對對羥自由基的清除作用基本保持不變。當(dāng)濃度達到12mg/mL時，清除率高達98.17%。
[0024]實驗例
I超聲波輔助提取的單因素實驗 1.1不同料液比對多糖提取率的影響
提取溫度70°c，超聲波作用功率120W，提取時間2.5h的條件下，改變料液比，多糖的提取率如圖2。由圖2可得，提取率多糖的提取率隨著料液比的增大而提高，當(dāng)料液比從1:10提高到1: 15時，提取率顯著增加，從2.43%提高到6.93%。當(dāng)料液比大于1: 15，隨著料液比的提高，提取率反而有降低的趨勢。因此，超聲波提取的最適料液比是1:15附近。
[0025]不同提取溫度對多糖提取率的影響料液比為1:20，超聲波作用功率120w，提取時間2.5h的條件下，改變提取溫度，多糖的提取率如圖3。由圖3可得，提取率多糖的提取率隨著溫度的增大而提高，升溫有利于獲得較高的提取率，但是當(dāng)溫度超過90°C，會破壞多糖的糖苷鍵。從圖中顯示，當(dāng)提取溫度等于70°C時，多糖的提取率為6.78%，當(dāng)提取溫度大于70°C時，多糖的提取率趨于平緩，從能耗等多個方面綜合考慮，選擇70°C和80°C的提取溫度較為妥當(dāng)。
[0026]不同功率對多糖提取率的影響提取溫度為70°C，料液比為1:20，提取時間2.5h的條件下，改變超聲波的作用功率， 多糖的提取率如圖4。超聲波功率提高，不僅能加速水的循環(huán)，加快物質(zhì)的溶解，還能產(chǎn)生振動改變細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，從而加速多糖的轉(zhuǎn)移。由圖3可得，提取率多糖的提取率隨著溫度的增大而提高。當(dāng)功率為160W時，提取率為9.02% ;當(dāng)功率大于160W時，多糖提取率有下降的趨勢。可能是由于超聲波的劇烈震蕩引起多糖的講解，造成多糖提取率下降。因此，超聲波作用功率最佳為160W~200W。
[0027]不同提取時間對多糖提取率的影響提取溫度為70°C，料液比為1:20，超聲波作用功率120W的條件下，改變提取時間，多糖的提取率如圖4。時間在1.0h — 1.5h內(nèi)，多糖的提取率呈現(xiàn)上升趨勢，當(dāng)提取時間為1.5h時，多糖的提取率為8.49%，當(dāng)提取時間大于1.5h，多糖的提取率明顯下降，在4% — 5%之間。所以，多糖的最佳提取時間為1.5h。
[0028]超聲波提取工藝的正交實驗
在超聲波輔助提取的單因素實驗的基礎(chǔ)上，對影響浙貝母多糖含量的主要因素，即提取溫度、提取時間、料液比和超聲波作用功率進行L9(34)的正交實驗。因素水平分析見表1，結(jié)果分析見表2，方差分析見表3。
[0029]
【權(quán)利要求】
1.一種浙貝母多糖的超聲輔助提取工藝，其特征在于包括以下步驟: (1)除脂 將浙貝母整理去雜，用95%乙醇浸沒，80°C的水浴回流，至少3h后取出浙貝母，并干燥； (2)水提取 取干燥后的浙貝母，粉碎，按超聲輔助提取工藝提取多糖，即提取條件為:料液比為1:15，超聲波作用功率為120W，提取溫度80°C，提取時間為1.5h ;濾渣至少重復(fù)提取三次，合并濾液，得到浙貝母多糖水提液； (3)醇沉 將浙貝母多糖水提液濃縮，加入3-4倍體積的95%的乙醇溶液，邊加邊攪拌，出現(xiàn)絮狀粗多糖沉淀物，而后置于4°C的冰箱中保存，至少24h后，取出，緩慢倒出上層液體，下層物質(zhì)在4500r/min以上的轉(zhuǎn)速下離 心至少20min,離心沉淀物即為粗多糖； (4)脫蛋白 將粗多糖溶解制成5%的糖溶液，加入1/5體積的氯仿-正丁醇溶液，在調(diào)速振蕩器上充分振蕩，至少30min后，于4500r/min以上的轉(zhuǎn)速下離心至少IOmin,得到三層液體,取最上層黃色液體，重復(fù)3-5次，得純化的浙貝母多糖。
2.一種如權(quán)利要求1的工藝所提純的含浙貝母多糖的保健品，其特征在于:包括有純化的浙貝母多糖和溶劑，該純化的浙貝母多糖的濃度> 12mg/mL。
【文檔編號】A23L1/09GK103483459SQ201310372605
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年8月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月23日
【發(fā)明者】鄭賽, 張旭, 周丹楠, 葉美良, 鄭志飛, 吳明江 申請人:溫州大學(xué)