專利名稱：用于海洋長孢葡萄穗霉生產(chǎn)纖溶活性化合物的培養(yǎng)基的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物技術領域，更具體地，本發(fā)明涉及用于海洋長孢葡萄穗霉生產(chǎn)纖溶活性化合物的培養(yǎng)基及其制備方法。
背景技術：
目前大部分天然藥物源于陸地，而海洋則是目前開發(fā)極少的巨大生物資源寶庫。最近幾年從海洋生物特別是無脊椎動物、微生物中分離出了大量新型生物活性物質(zhì)，統(tǒng)計表明2003年報道了 656種新化合物，2004年報道了 716種新化合物。其中部分處于1-1II期臨床實驗。海洋微生物，包括海洋放線菌、真菌等是新活性物質(zhì)的重要來源。相比陸生生物，海洋中發(fā)現(xiàn)的新型化合物具有較高幾率的生物活性。例如，在國際腫瘤協(xié)會對于臨床前細胞毒性篩選中，檢測到幾乎1%的待測海洋活性樣品有抗腫瘤活性的潛在能力，而相比陸生活性樣品，只有0.1%的待測樣品有活性。纖溶活性化合物FGFCl是上海海洋大學從海洋真菌長孢葡萄穗霉FG216 (Stachybotrys longispora FG216)中分離出來的一種具有纖溶活性的新型化合物；很有必要對其進行創(chuàng)新藥物的深入研究。然而纖溶活性化合物FGFCl在原始菌株中含量較低，制約了對其進行進一步的體內(nèi)外活性評價及構效研究，因此通過規(guī)?；l(fā)酵及代謝調(diào)控研究，進行高效發(fā)酵生產(chǎn)是必須加以解決的首要問題。而要進行大規(guī)模高效發(fā)酵生產(chǎn)和代謝調(diào)控研究，繼而進行后續(xù)的醫(yī)藥學研究，首要解決的就是產(chǎn)量問題，所以開發(fā)一種促進海洋長孢葡萄穗霉FG216生產(chǎn)纖溶活性化合物FGFCl的培養(yǎng)基就成為后續(xù)研究的一個非常重要的前提條件。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在·于提供用于海洋長孢葡萄穗霉生產(chǎn)纖溶活性化合物的培養(yǎng)基及其制備方法。在本發(fā)明的第一方面，提供一種海洋長孢葡萄穗霉的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基包括以下組分:葡萄糖30-170重量份；硝酸鈉2-5重量份；三水磷酸氫二鉀0.01-0.2重量份；七水硫酸鎂0.2-0.9重量份；氯化鉀0.4-0.8重量份；酵母提取物0.5-1.5重量份；六水氯化鈷0.0015-0.005重量份；七水硫酸亞鐵0.01-0.03重量份；無水氯化鈣0.004-0.01重量份；和L-鳥氨酸鹽酸鹽8-20重量份。
在一個優(yōu)選例中，所述培養(yǎng)基包括以下組分:葡萄糖35-155重量份；硝酸鈉2.5-4重量份；三水磷酸氫二鉀0.01-0.15重量份；七水硫酸鎂0.3-0.8重量份；氯化鉀0.5-0.8重量份；酵母提取物0.60-1.25重量份；六水氯化鈷0.002-0.004重量份；七水硫酸亞鐵0.01-0.025重量份；無水氯化鈣0.005-0.009重量份；和L-鳥氨酸鹽酸鹽10-20重量份。在另一優(yōu)選例中，所述培養(yǎng)基包括以下組分:葡萄糖125重量份；硝酸鈉3.3重量份；三水磷酸氫 二鉀0.07重量份；七水硫酸鎂0.4重量份；氯化鉀0.625重量份；酵母提取物0.7重量份；六水氯化鈷0.003125重量份；七水硫酸亞鐵0.01875重量份；無水氯化鈣0.0065重量份；和L-鳥氨酸鹽酸鹽13-15重量份；其中，各組分在培養(yǎng)基中的含量按照重量份可在±10%(更佳地±5%)范圍內(nèi)浮動。在另一優(yōu)選例中，所述培養(yǎng)基中，各組分配制于1000重量(或體積)份水(較佳地，所述的水是去離子水)中；和/或所述培養(yǎng)基的PH值5.5-6.5。在本發(fā)明的另一方面，提供所述的培養(yǎng)基的用途，用于培養(yǎng)海洋長孢葡萄穗霉，生產(chǎn)纖溶活性化合物FGFCl。在本發(fā)明的另一方面，提供一種制備海洋長孢葡萄穗霉的培養(yǎng)基的方法，所述方法包括:將前面任一所述的培養(yǎng)基的各組分在水中混勻，調(diào)節(jié)至pH值5.5-6.5。在另一優(yōu)選例中，所述的方法還包括:將混勻及調(diào)節(jié)pH值后的培養(yǎng)基在121°C，滅菌 15_20min。在本發(fā)明的另一方面，提供一種利用海洋長孢葡萄穗霉生產(chǎn)纖溶活性化合物FGFCl的方法，所述方法包括:利用前面任一所述的培養(yǎng)基培養(yǎng)海洋長孢葡萄穗霉，從而生產(chǎn)纖溶活性化合物FGFCl。在一個優(yōu)選例中，將海洋長孢葡萄穗霉按照體積以5-10%的接種量接入前面任一所述的培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)8-13天，獲得發(fā)酵液，其中含有纖溶活性化合物FGFCl。在本發(fā)明的另一方面，提供一種用于培養(yǎng)海洋長孢葡萄穗霉的試劑盒，所述試劑盒中包括:前面任一所述的培養(yǎng)基。
本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對本領域的技術人員而言是顯而易見的。
具體實施例方式本發(fā)明人經(jīng)過長期而深入的研究，研究開發(fā)了一種新的適合于培養(yǎng)海洋長孢葡萄穗霉(較佳地為FG216)使之高效生產(chǎn)纖溶活性化合物FGFCl的培養(yǎng)基配方。本發(fā)明的培養(yǎng)基，適合于海洋長孢葡萄穗霉的生長，且可大大地提高纖溶活性化合物FGFCl的產(chǎn)量。如本文所用，所述的“含有”，“具有”或“包括”包括了“包含”、“主要由……構成”、“基本上由……構成”、和“由……構成”;“主要由……構成”、“基本上由……構成”和“由……構成”屬于“含有”、“具有”或“包括”的下位概念。如本文所用，“重量份”或“重量份數(shù)”可互換使用，所述的重量份可以是任何一個固定的以毫克、克數(shù)或千克數(shù)表示重量(如lmg、lg、2g、5g、或Ikg等)。例如,一個由I重量份組分a和9重量份組分b構成的組合物，可以是I克組分a + 9克組分b，也可以是10克組分a+ 90克組分b等構成的組合物。在所述組合物，某一組分的百分比含量=(該組分的重量份數(shù)/所有組分的重量份數(shù)之和)X 100%。因此，由I重量份組分a和9重量份組分b構成的組合物中，組分a的含量為10%，組分b為90%。術語“本發(fā)明的海洋長孢葡萄穗霉的培養(yǎng)基”指含有葡萄糖，硝酸鈉，三水磷酸氫二鉀，七水硫酸鎂，氯化鉀，酵母提取物，六水氯化鈷，七水硫酸亞鐵，無水氯化鈣，L-鳥氨酸鹽酸鹽的組合物；或基本 上由葡萄糖，硝酸鈉，三水磷酸氫二鉀，七水硫酸鎂，氯化鉀，酵母提取物，六水氯化鈷，七水硫酸亞鐵，無水氯化鈣，L-鳥氨酸鹽酸鹽組成的組合物。在組合物中，所述的葡萄糖，硝酸鈉，三水磷酸氫二鉀，七水硫酸鎂，氯化鉀，酵母提取物，六水氯化鈷，七水硫酸亞鐵，無水氯化I丐，L-鳥氨酸鹽酸鹽占培養(yǎng)基總重量的80-100%,較佳地占90-100%,更佳地占 95-100%，如 98%，99%。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，用于配制本發(fā)明的海洋長孢葡萄穗霉培養(yǎng)基的各組分的用量如表I所示。表I
權利要求
1.一種海洋長孢葡萄穗霉的培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基包括以下組分: 葡萄糖30-170重量份； 硝酸鈉2-5重量份； 三水磷酸氫二鉀0.01-0.2重量份； 七水硫酸鎂0.2-0.9重量份； 氯化鉀0.4-0.8重量份； 酵母提取物0.5-1.5重量份； 六水氯化鈷0.0015-0.005重量份； 七水硫酸亞鐵0.01-0.03重量份； 無水氯化鈣0.004-0.01重量份；和 L-鳥氨酸鹽酸鹽8-20重量份。
2.如權利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基包括以下組分: 葡萄糖35-155重量份； 硝酸鈉2.5-4重量份； 三水磷酸氫二鉀0.01-0.15重量份； 七水硫酸鎂0.3-0.8重量份； 氯化鉀0.5-0.8重量份； 酵母提取物0.60-1.25重量份； 六水氯化鈷0.002-0.004重量份； 七水硫酸亞鐵0.01-0.025重量份； 無水氯化鈣0.005-0.009重量份；和 L-鳥氨酸鹽酸鹽10-20重量份。
3.如權利要求2所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基包括以下組分: 葡萄糖125重量份； 硝酸鈉3.3重量份； 三水磷酸氫二鉀0.07重量份； 七水硫酸鎂0.4重量份； 氯化鉀0.625重量份； 酵母提取物0.7重量份； 六水氯化鈷0.003125重量份； 七水硫酸亞鐵0.01875重量份； 無水氯化鈣0.0065重量份；和 L-鳥氨酸鹽酸鹽13-15重量份； 其中，各組分在培養(yǎng)基中的含量按照重量份可在±10%范圍內(nèi)浮動。
4.如權利要求1-3任一所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基中，各組分配制于1000重量份水中；和/或所述培養(yǎng)基的PH值5.5-6.5。
5.權利要求1-4任一所述的培養(yǎng)基的用途，用于培養(yǎng)海洋長孢葡萄穗霉，生產(chǎn)纖溶活性化合物FGFCI。
6.一種制備海洋長孢葡萄穗 霉的培養(yǎng)基的方法，其特征在于，所述方法包括:將權利要求1-4任一所述的培養(yǎng)基的各組分在水中混勻，調(diào)節(jié)至pH值5.5-6.5。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括:將混勻及調(diào)節(jié)pH值后的培養(yǎng)基在121。。，滅菌 15-20min。
8.一種利用海洋長孢葡萄穗霉生產(chǎn)纖溶活性化合物FGFCl的方法，其特征在于，所述方法包括:利用權利要求1-4任一所述的培養(yǎng)基培養(yǎng)海洋長孢葡萄穗霉，從而生產(chǎn)纖溶活性化合物FGFCl。
9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，將海洋長孢葡萄穗霉按照體積以5-10%的接種量接入權利要求1-4任一所述的培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)8-13天，獲得發(fā)酵液，其中含有纖溶活性化合物FGFCl。
10.一種用于培養(yǎng)海洋長孢葡萄穗霉的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括:權利要求1-4任一所 述的培養(yǎng)基。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于海洋長孢葡萄穗霉生產(chǎn)纖溶活性化合物的新型培養(yǎng)基，本發(fā)明的培養(yǎng)基適合于海洋長孢葡萄穗霉的生長，且可大大地提高纖溶活性化合物FGFC1的產(chǎn)量。
文檔編號C12P17/18GK103233048SQ20131017043
公開日2013年8月7日 申請日期2013年5月9日 優(yōu)先權日2013年5月9日
發(fā)明者蔡孟浩, 王美霞, 周祥山, 張元興 申請人:華東理工大學