一種來源于水稻的受衰老信號(hào)誘導(dǎo)的OsPaO啟動(dòng)子及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明基因工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體為一種來源于水稻的受衰老信號(hào)誘導(dǎo)的OsPaO啟動(dòng)子及其應(yīng)用。本發(fā)明的啟動(dòng)子來源于水稻葉片衰老相關(guān)基因OsPaO，其DNA序列為SEQIDNO：1所示。將編碼目的產(chǎn)物基因的核酸序列與上述啟動(dòng)子片段融合得到重組DNA，用該種重組DNA轉(zhuǎn)化獲得的轉(zhuǎn)基因植株中，目的基因的表達(dá)受衰老信號(hào)的誘導(dǎo)表達(dá)。本發(fā)明的啟動(dòng)子可以在衰老信號(hào)的誘導(dǎo)下啟動(dòng)目的基因的表達(dá)，可用于產(chǎn)量和品質(zhì)性狀的轉(zhuǎn)基因改良。
【專利說明】一種來源于水稻的受衰老信號(hào)誘導(dǎo)的OsPaO啟動(dòng)子及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于基因工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種來源于水稻的受衰老信號(hào)誘導(dǎo)的啟動(dòng)子及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]啟動(dòng)子是RNA聚合酶能夠識(shí)別并與之結(jié)合，從而起始基因轉(zhuǎn)錄的一段DNA序列，通常位于基因上游。一個(gè)典型的啟動(dòng)子包括CAAT-box和TATA-box，它們分別是依賴DNA的RNA聚合酶的識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)，一般位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游幾十個(gè)堿基處。在核心啟動(dòng)子上游通常會(huì)有一些特殊的DNA序列，即順式作用元件，轉(zhuǎn)錄因子與之結(jié)合從而激活或抑制基因的轉(zhuǎn)錄。一旦RNA聚合酶定位并結(jié)合在啟動(dòng)子上即可啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄，因此啟動(dòng)子是基因表達(dá)調(diào)控的重要元件，并與RNA聚合酶及其他蛋白輔助因子等反式作用因子的相互作用。根據(jù)啟動(dòng)子啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的模式可將其分為3類:組成型啟動(dòng)子、組織或器官特異性啟動(dòng)子和誘導(dǎo)型啟動(dòng)子[路靜等，自然科學(xué)進(jìn)展14 (8) =856-862, 2004] 0
[0003]與組成型啟動(dòng)子和組織器官特異性啟動(dòng)子相比，誘導(dǎo)型啟動(dòng)子有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì):它可根據(jù)需要在植物特定的發(fā)育階段、組織器官或生長環(huán)境下，快速誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄的開與關(guān)。根據(jù)來源，可將誘導(dǎo)型啟動(dòng)子分為天然的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子和人工構(gòu)建的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子[路靜等，自然科學(xué)進(jìn)展14 (8):856-862，2004]。天然誘導(dǎo)型的啟動(dòng)子包括光、溫度、激素、干旱、高鹽脅迫、病原菌應(yīng)答啟動(dòng)子等[路靜等，自然科學(xué)進(jìn)展14 (8) =856-862,2004 ；Narusaka Y,et al, Plant J,34 (2):137-148, 2003 ;Song FM,et al, Gene,290:115-124,2002]。目前研究最多、最深入的人工可誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)是化學(xué)誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)，如四環(huán)素誘導(dǎo)的TetR系統(tǒng)、地塞米松誘導(dǎo) 的GR系統(tǒng)、雌二醇誘導(dǎo)的ER系統(tǒng)、殺蟲劑誘導(dǎo)的EcR系統(tǒng)(Gatz C，et al,Proc Nalt Acad Sci USA，1988，85:1394-1397 ；Aoyama T，et al,Plant J,1999,11:605-612 ；Zuo J,et al,Plant J,2000,24:265-273 ；Unger E, et al,TransgenicRes,2002,11:455_465)。
[0004]為了實(shí)現(xiàn)葉片功能期調(diào)控的目標(biāo)，Gan和Amasino (Inhibition of leafsenescence by autoregulated production of cytokinin, Science,270:1986—1988,1995)將一個(gè)源于擬南芥衰老正調(diào)控基因的啟動(dòng)子與細(xì)胞分裂素合成關(guān)鍵酶基因IPT(異戊烯基轉(zhuǎn)移酶)融合，構(gòu)建了一個(gè)衰老特異的外源基因表達(dá)自反饋增強(qiáng)表達(dá)融合載體，將該融合載體轉(zhuǎn)入煙草，轉(zhuǎn)基因煙草表現(xiàn)了葉片衰老進(jìn)程延緩的表型。付永彩等[Asenescence—inhibition chimeric gene was transferred into rice by the biolisticmethod and expressed, J Agr Biotech (農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)),7 (I): 17-22, 2000]將這一融合載體轉(zhuǎn)入水稻，培育了防止早衰的水稻新株系。利用根癌農(nóng)桿菌感染方法將這一融合基因?qū)肭嗖?，轉(zhuǎn)基因青菜葉綠素含量高，衰老延遲，為高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)新型蔬菜品種的培育提供了一種高效的技術(shù)途徑[袁政等，植物生理與分子生物學(xué)學(xué)報(bào)，28 (5) =379-384, 2002] 0
[0005]葉綠素的降解是作物衰老階段明顯的生理現(xiàn)象之一。目前認(rèn)為葉綠素的降解途徑從葉綠素a、脫鎂葉綠酸a (pheophorbide a pheide)、紅色葉綠素降解物到非突光葉綠素降解物(NCC)。其中脫鎂葉綠酸a加氧酶(pheophorbide a monooxy-genase, PaO)起到了關(guān)鍵作用，因而該途徑又被稱為PaO途徑。PaO通過催化兩個(gè)氧原子的加入，使葉綠素的卟啉環(huán)開環(huán)，成為四元線性吡咯衍生物即紅色葉綠素降解物，導(dǎo)致綠色的最終消失。大量的實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明:在衰老的葉片中，抑制PaO的活力，將導(dǎo)致脫鎂葉綠酸a的積累和葉綠素降解的抑制(ffirtensteiner S，et al, J Biol Chem，273 (25): 15335-15339，1998)。
[0006]本發(fā)明為源于水稻的受衰老信號(hào)誘導(dǎo)的啟動(dòng)子片段分離和功能驗(yàn)證。這一啟動(dòng)子片段可被用于構(gòu)建驅(qū)動(dòng)產(chǎn)量、品質(zhì)和抗逆性相關(guān)基因在衰老階段的特異表達(dá)體系。這一表達(dá)體系的優(yōu)勢(shì)是使得目的基因在植物衰老時(shí)表現(xiàn)出顯著的高活性，在未衰老時(shí)期表現(xiàn)出低的活性，即為條件式的基因表達(dá)調(diào)控方式。因此，這一誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)在大田作物的轉(zhuǎn)基因改良中有顯而易見的應(yīng)用潛力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種來源于水稻的受衰老信號(hào)誘導(dǎo)的啟動(dòng)子及其應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明提供的來源于水稻的受衰老信號(hào)誘導(dǎo)的啟動(dòng)子，具體來源于水稻葉片衰老相關(guān)基因(水稻脫鎂葉綠酸a加氧酶)OsPaO,其DNA序列為SEQ ID NO:1所示。
[0009]本發(fā)明還提供一種包含有SEQ ID NO:1所示的DNA序列的重組DNA載體。該重組DNA載體含有所述的核苷酸序列作為啟動(dòng)子、與該啟動(dòng)子相連的是編碼目的基因的DNA序列。
[0010]本發(fā)明還提供所述包含有SEQ ID NO:1所示的DNA序列的重組DNA載體的細(xì)胞
系O
[0011]本發(fā)明還提供所 述啟動(dòng)子的應(yīng)用，即將編碼目的產(chǎn)物基因的核酸序列與上述啟動(dòng)子片段融合得到重組DNA，用該種重組DNA轉(zhuǎn)化獲得的轉(zhuǎn)基因植株中，目的基因的表達(dá)受衰老信號(hào)的誘導(dǎo)表達(dá)。具體來說，本發(fā)明還提供一種在植物中引起目的基因產(chǎn)物表達(dá)增高的方法，具體步驟為:
a)用所述的重組DNA載體轉(zhuǎn)化植物；
b)利用衰老信號(hào)使得轉(zhuǎn)基因植物在期望的時(shí)空中增加目的基因產(chǎn)物的表達(dá)。
[0012]本發(fā)明還提供所述水稻脫鎂葉綠酸a加氧酶啟動(dòng)子在調(diào)控葉片衰老啟動(dòng)與進(jìn)程，以及驅(qū)動(dòng)衰老階段特異表達(dá)的與作物產(chǎn)量品質(zhì)性狀改良相關(guān)基因表達(dá)方面的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的啟動(dòng)子在延緩葉片衰老從而改良作物產(chǎn)量和品質(zhì)性狀，驅(qū)動(dòng)高附加值產(chǎn)物基因在衰老階段的特異表達(dá)，以及改良綠葉菜采后貯藏等方面有很大的應(yīng)用價(jià)值。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1基因上游啟動(dòng)子序列的順式元件分析。
[0014]圖2水稻葉片的離體暗處理的表型。
[0015]圖3水稻葉片離體暗處理過程中OsPaO的基因表達(dá)情況。
[0016]圖4自然衰老下，啟動(dòng)子活性的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化驗(yàn)證。
[0017]圖5 pBIA121~0sPa0系列載體構(gòu)建示意圖。
[0018]圖6不同長度片段的啟動(dòng)子的構(gòu)建?！揪唧w實(shí)施方式】
[0019]實(shí)施例1 'OsPaO基因上游啟動(dòng)子片段的元件分析
我們通過 PlantCARE(http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/ plantcare/html/)在線分析工具對(duì)所克隆的啟動(dòng)子片段做順式元件分析。根據(jù)PlantCARE的分析結(jié)果，所克隆的2004bp啟動(dòng)子序列中含有多種順式調(diào)控元件(圖1)，其中主要包括光響應(yīng)元件(如 G-Box、GTl-motif、GTGGC-motif、MNFU Spl、3_AFl binding site、GAG-motif等)，與脫落酸有關(guān)的元件如ABRE，與茉莉酸甲酯(MeJA)相關(guān)的元件(如CGTCA-motif、TGACG-motif等),與水楊酸相關(guān)的元件如SARE-element,高溫應(yīng)答(HSE等)等。
[0020]實(shí)施例2:水稻OsPaO基因上游啟動(dòng)子片段的獲得
2.1水稻葉片的離體暗處理
取在16h L/8h D光照，28°C條件下培養(yǎng)40天的水稻葉片，分別在暗處理0、1、2、4、6、8天取樣(圖2)。
[0021]2.2 RNA 提取
取水稻材料約0.lg。液氮充分研磨后，轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管，加Iml TRIzol (invitrogen公司),混勻后,室溫放置15分鐘,加0.2ml氯仿:異戍醇(24:1),劇烈搖動(dòng)15秒后室溫放置5分鐘，13000rpm，4°C離心15分鐘。取上清液并加入等體積異丙醇，小心混勻，室溫放置15分鐘，13000rpm，4°C離心15分鐘。70%乙醇洗滌沉淀，室溫干燥15分鐘。溶解于適量的經(jīng)0.1% DEPC處理過的ddH20水中，貯存于_80°C備用。
[0022]2.3 cDNA第一鏈合成和反轉(zhuǎn)錄PCR
采用上海申能博彩生物技術(shù)公司(SHBC)的cDNA第一鏈合成試劑盒，按照操作指南將總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。反應(yīng)體系和反應(yīng)條件分別為:2Pg制備的總RNA，0.5μ1 Rnaseinhibitor,加 DEPC 處理過的去離子水至 8.5M-1, 2M-1 的 Oligo (dT) 18 primer, 65°C，5min,室溫放置 I0min, 13000rpm 簡短離心 5s。再依次加入 4μ1 5 XFirst-Strand buffer, 0.5M-1RNase Inhibitor, 2μ1 IOOmM DTT, 2M-1 dNTP, IM-1 MMLV Reverse Transcriptase。小心混勻；37°C反轉(zhuǎn)錄I小時(shí)，90°C 5分鐘；冰上冷卻；13000rpm短暫離心5秒鐘，存放于-200C0獲得的cDNA可用于相關(guān)基因表達(dá)量的檢測(cè)。
[0023]2.4水稻葉片離體暗處理過程中OsPaO基因表達(dá)情況
我們利用 RT-PCR 檢測(cè)基因的表達(dá)情況[OsPaO S 5’ CCGACGAGAATGGGTGGGAGAA3’ (SEQ ID NO:2),OsPaO AS 5’ CCAGTGACCTTGTGGTGAGCAA 3’(SEQ ID NO:3)]。圖 3 顯示OsPaO基因表達(dá)水平在水稻葉片離體暗處理過程中大幅度上升。
[0024]2.5基因啟動(dòng)子的載體構(gòu)建
設(shè)計(jì)引物:OsPaO S 5’ GCACCAGGGTAAAGCA 3’ (SEQ ID NO:4), OsPaO AS 5’TTTCGTCGACTCGCTT 3’ (SEQ ID NO:5)，以水稻野生型的基因組DNA為模板，擴(kuò)增對(duì)應(yīng)長度片段的啟動(dòng)子，將PCR產(chǎn)物接入T載體，測(cè)序正確后，用BamHI和HindIII將其從T載體上切下，與同樣經(jīng)過BamHI和HindIII雙酶切的pCAMBIA1301雙元載體進(jìn)行連接并轉(zhuǎn)化大腸桿菌，挑選陽性克隆，抽提質(zhì)粒后，用電擊法將陽性克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌(GV3101)，并鑒定陽性轉(zhuǎn)化子，挑選陽性轉(zhuǎn)化子在三抗(Rif+Gent+Kan)的YEB液體培養(yǎng)基中搖菌，用30%的甘油以體積比1:1進(jìn)行保菌，存放于_80°C備用。[0025]2.6載體構(gòu)建中常用實(shí)驗(yàn)方法
2.6.1 DNA限制性內(nèi)切酶酶切
(1)20μ I酶切體系，2 μ I DNA，適量的酶切緩沖液(參見Takara目錄)，酶量(0.2 μ I酶用于酶切鑒定，0.5μ I酶用于酶切克隆)。體系擴(kuò)大，按比例增大各成分體積；
(2)按以下次序添加水，^^€61*、0嫩、酶，混勻，371:反應(yīng)1.5-311。(最后添加內(nèi)切酶)。
[0026]2.6.2玻璃粉制作以及玻璃粉回收DNA片斷 玻璃粉制作
(1)用干凈的研缽將石英砂磨到足夠細(xì)，用篩子篩取大小合適的玻璃粉顆粒；
(2)用一倍體積的無菌水懸浮玻璃粉，靜置片刻；
(3)當(dāng)出現(xiàn)分層時(shí)，吸取上層混濁液到新的離心管，下層沉淀重復(fù)2，3操作；
(4)2000-3000rpm, Imin 離心，去掉上清；
(5)無菌水清洗除菌后，以1:1比例用無菌水懸浮玻璃粉。
[0027]玻璃粉回收DNA片斷
(1)稱空離心管重量，切膠后，再稱重，計(jì)算膠的重量；
(2)以Img膠中加入3ul體積6mol/LNaI比例加入Nal，55°C烘箱或者水浴中充分溶
解；
(3)加入5-10ul玻璃粉，充分懸浮混勻；
(4)冰浴15min，中間每隔5min輕彈離心管，使沉淀的玻璃粉懸浮起來；
(5)7000rpm, Imin 離心，棄上清；
(6)50倍玻璃粉體積加入Rince buffer充分吹打洗滌；
(7)5000rpm, Imin離心，再重復(fù)6、7兩次；
(8)去盡buffer，55°C水浴或者烘箱中揮發(fā)乙醇5_10min；
(9)10-20ulMil1-Q水吹打懸浮，Votex充分振蕩；
(10)55度烘箱或者水浴中溶解DNA 15min,每隔5min輕輕混勻；
(11)13000rpm, 2min 離心后，取上清。
[0028]New wash stock solution: 20Xrince buffer:H20:無水乙醇=1:9:10
20Xrince buffer: 0.2mol/L Tris-Cl (pH7.5)，lmol/L NaCl, 20mmol/L EDTA
乙醇沉淀回收DNA片斷
(1)加入1/10體積的3MNaAc (酶切體系先用等體積酚:氯仿抽提蛋白)；
(2)加入2V-20°C預(yù)冷乙醇，置于冰上30 min ；
(3)12000 rpm,離心 10 min ；
(4)1ml 70%乙醇洗滌沉淀，55°C烘干，溶于TE。
[0029]2.6.3載體與基因片段連接 連接緩沖液5.5μ1
插入片段3.Ομ?
Τ4連接酶1.Ομ?
酶切后載體0.5μ1
16 °C連接過夜。、
[0030]2.6.4感受態(tài)細(xì)胞制備以及轉(zhuǎn)化大管制備感受態(tài)細(xì)胞
(1)以1:100的比例轉(zhuǎn)接前晚活化的菌種，在37°C搖床中280rpm培養(yǎng)到OD值0.3，本實(shí)驗(yàn)采用的是大腸桿菌ToplO株系；
(2)將培養(yǎng)液倒入50ml離心管，冰上稍微預(yù)冷，4000rpm，IOmin離心；
(3)倒掉上清，加入10ml0.lmol/L CaCl2的氯化鈣，輕輕打散菌塊；
(4)冰上放置30min,2500rpm, IOmin離心(離心后沉淀出現(xiàn)環(huán)狀為佳)；
(5)倒掉上清，快速放置到冰上，加入2ml0.lmol/L CaC12，輕輕懸浮菌體；
(6)放置在冰上，2小時(shí)后即可用來轉(zhuǎn)化。
[0031]轉(zhuǎn)化
(1)準(zhǔn)備42°C水浴；
(2)將200ul感受態(tài)細(xì)胞和連接液(5-10ul)或者質(zhì)粒(Iul)加入到離心管中，混勻；
(3)冰浴30min后，42°C熱激90s，放置在冰上5min；
(4)轉(zhuǎn)化質(zhì)粒直接涂板；
(5)轉(zhuǎn)化連接液加入2倍細(xì)胞體積的SOC培養(yǎng)液，37°C搖床50-100rpm預(yù)培養(yǎng)(Amp抗性I小時(shí)，Kan、Cm抗性2小時(shí)),本實(shí)驗(yàn)采用的是Kan抗性平板；
(6)取200ul混合物涂在含一定量抗生素的LB平板上，37°C倒置培養(yǎng)過夜；
(7)次日早上通過抗性篩選獲得陽性克隆。
[0032]2.6.5質(zhì)粒抽提
(1)挑單菌落到含一定量抗生素的LB液體培養(yǎng)基中37°C搖菌過夜；
(2)取Iml菌液，12000rpm30秒收集菌體，收集兩次；
(3)加IOOul冰預(yù)冷的溶液I懸浮菌體，加入200ul溶液II，上下顛倒混勻，再加入150ul預(yù)冷的溶液III,上下顛倒混勻，置于冰上5分鐘；
(4)12000rpm離心3分鐘，轉(zhuǎn)移上清到新的1.5ml離心管中；
(5)加等體積酹:氯仿抽提一次，12000rpm,3分鐘,取上相；
(6)加2倍體積冰預(yù)冷的無水乙醇，混勻后置于冰上30分鐘；
(7)12000rpm離心5分鐘，去上清，用70%乙醇洗滌沉淀；
(8)55°C烘干5 分鐘，溶解于 50ul TECpH 8.0)，加 0.5ugRNase，37°C消化30 分鐘。_20°C保存。
[0033]溶液1: 50 mmol /I,葡萄糖，25 mmol /T, Tris-Cl, pH 8.0 ； 10 mmol/L EDTA, pH
8.0，聞壓滅囷
溶液I1: 0.2 mo I/L NaOH, 1%SDS (現(xiàn)配現(xiàn)用，不可置于冰上)
溶液II1:每100 ml,60 ml 5 mol/L乙酸鐘，11.5 ml冰乙酸,28.5 ml去離子水 實(shí)施例3:啟動(dòng)子活性的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化驗(yàn)證
以相同生長期的光照培養(yǎng)的煙草為對(duì)照，以幼嫩煙草葉片為對(duì)照，對(duì)局部開始發(fā)黃的自然衰老葉片進(jìn)行注射，2天后取樣染色。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，瞬時(shí)轉(zhuǎn)有載體的煙草材料在自然衰老葉片中GUS染色均較深，而對(duì)照均未見有明顯的GUS染色(圖4)。根據(jù)以上結(jié)果，我們對(duì)啟動(dòng)子序列進(jìn)行了啟動(dòng)子截短片段分析(圖5，6)。
[0034]實(shí)施例4 ,OsPaO衰老誘導(dǎo)啟動(dòng)子的應(yīng)用
本發(fā)明的衰老誘導(dǎo)啟動(dòng)子可用本領(lǐng)域熟知的方法構(gòu)建到植物表達(dá)載體中。為了便于對(duì)轉(zhuǎn)誘導(dǎo)啟動(dòng)子的細(xì)胞或植株進(jìn)行鑒定及篩選，可對(duì)所使用的載體進(jìn)行加工，如加入植物可選擇性標(biāo)記(似/P基因、基因、熒光素酶基因等)。被轉(zhuǎn)化的植物宿主既可以是單子葉植物，如水稻、玉米、小麥和草坪草等，也可以是雙子葉植物，如大豆、棉花和楊樹等，但不局限于上述物種。攜帶有本發(fā)明的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的表達(dá)載體可以借助于Ti質(zhì)粒、Ri質(zhì)粒、植物病毒載體、顯微注射、電導(dǎo)和農(nóng)桿菌等方法介導(dǎo)轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞或組織，并將轉(zhuǎn)化受體培 育成植株，以獲得作物產(chǎn)量和品質(zhì)性狀得到顯著改良的育種資源材料。
【權(quán)利要求】
1.一種來源于水稻的受衰老信號(hào)誘導(dǎo)的啟動(dòng)子，其特征在于核苷酸序列為SEQID NO:1 所示。
2.一種重組DNA載體，其特征在于該重組DNA載體含有權(quán)利要求1所述的啟動(dòng)子，以及與該啟動(dòng)子相連的是編碼目的基因的DNA序列。
3.一種包含權(quán)利要求2所述重組DNA載體的細(xì)胞系。
4.一種如權(quán)利要求2所述的重組DNA載體的應(yīng)用，其特征在于所述的重組DNA載體轉(zhuǎn)化的植物材料，轉(zhuǎn)化有該重組DNA載體的植物在在衰老信號(hào)的作用下，目的基因產(chǎn)物水平上升。
5.一種在植物中引起目的基因產(chǎn)物表達(dá)增高的方法，其特征在于具體步驟為: a)用權(quán)利要求2所述的重組DNA載體轉(zhuǎn)化植物； b)利用衰老信號(hào)使得轉(zhuǎn)基因植物在期望的時(shí)空中增加目的基因產(chǎn)物的表達(dá)。
6.一種如權(quán)利要求1所述的啟動(dòng)子在調(diào)控葉片衰老啟動(dòng)與進(jìn)程，以及驅(qū)動(dòng)衰老階段特異表達(dá)的與作物產(chǎn)量品質(zhì)性 狀改良相關(guān)基因表達(dá)方面的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12N15/63GK103468679SQ201310152163
【公開日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2013年4月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月27日
【發(fā)明者】蒯本科, 高炯, 汪汪一瀾, 梁寧菁 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)