專利名稱：一種基于羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的組織工程材料構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種干細(xì)胞的組織工程材料，尤其是涉及一種基于羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的組織工程材料構(gòu)建方法。
背景技術(shù)：
間充質(zhì)干細(xì)胞廣泛存在于各種成體組織中，大量研究證實(shí)，間充質(zhì)干細(xì)胞可以向多種體細(xì)胞分化，并可以用于臨床治療多種疾病。當(dāng)前，人們主要從骨髓、脂肪等組織中獲得間充質(zhì)干細(xì)胞，但存在一些缺陷:或者獲取干細(xì)胞的過程造成對機(jī)體的機(jī)械侵入式損傷(比如骨髓)，或者得到的干細(xì)胞其增殖分化能力有限(比如脂肪)，或者材料來源不足(比如牙髓)。這些缺陷限制了間充質(zhì)干細(xì)胞的臨床應(yīng)用。羊膜是胎兒胎膜中最里的一層，為無血管、無神經(jīng)、無淋巴的透明光滑薄層，厚度為0.02 0.05mm,由羊膜上皮、基·底膜和基質(zhì)三個(gè)部分組成。羊膜組織細(xì)胞主要由來源于外胚層的羊膜上皮和來源于中胚層的羊膜基質(zhì)(間充質(zhì))兩類細(xì)胞組成，開始形成于受精第8天，保持有前原腸胚胚胎細(xì)胞的可塑性。人們已經(jīng)從胎盤獲得多種干細(xì)胞，如臍血干細(xì)胞、絨毛膜干細(xì)胞和羊膜基質(zhì)細(xì)胞(羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞)，對其研究也遵循一般的干細(xì)胞研究方法。羊膜基質(zhì)里面有大量活細(xì)胞，這些細(xì)胞包含大量間充質(zhì)干細(xì)胞，稱為羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞(AM-MSCs),也稱為羊膜基質(zhì)細(xì)胞。與其他間充質(zhì)干細(xì)胞一樣，羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞能向脂肪細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等多個(gè)方向分化。羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源于中胚層，在體外擴(kuò)增培養(yǎng)至少可以傳15代，形態(tài)不發(fā)生明顯改變，其在體外擴(kuò)增的潛能遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞不表達(dá)端粒酶，這將排除細(xì)胞移植后腫瘤形成的風(fēng)險(xiǎn)；也不表達(dá)白細(xì)胞抗原，因此術(shù)后一般不發(fā)生移植免疫排斥反應(yīng)。與其他成體組織間充質(zhì)干細(xì)胞比較起來，胎盤材料來源充足，獲取過程沒有侵入式損傷，細(xì)胞增殖分化能力強(qiáng)，因此是較為理想的材料來源。目前，基于羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的研究都是將羊膜組織酶解消化，分離獲得單個(gè)細(xì)胞懸液，再進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，然后誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向特定方向分化。這種方法雖然可以獲得較大量的細(xì)胞，但是存在兩個(gè)方面的問題。一是間充質(zhì)干細(xì)胞離開了它們原來存在的微環(huán)境，體外擴(kuò)增過程中其干細(xì)胞特性容易發(fā)生改變，導(dǎo)致細(xì)胞的終末分化；二是間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行單細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增以后，如果要進(jìn)行體內(nèi)移植，往往需要進(jìn)一步構(gòu)建組織工程化的產(chǎn)品，如骨組織、軟骨組織、肌肉組織、肌腱組織、神經(jīng)組織等等，給這類細(xì)胞的應(yīng)用造成較大困難。到目前為止，還未見研究成功構(gòu)建羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源的組織工程產(chǎn)品有關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種基于羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的組織工程材料構(gòu)建方法。該方法采用體外組織培養(yǎng)技術(shù)大量原位擴(kuò)增羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞，并誘導(dǎo)其向特定類型細(xì)胞分化，最終構(gòu)建相應(yīng)細(xì)胞類型的組織工程材料。本發(fā)明包括以下步驟:
I)新鮮人羊膜的獲取和分離；2)將獲得的羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的原位擴(kuò)增；3)采用不同的細(xì)胞分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向特定類型細(xì)胞的分化；4)構(gòu)建不同形態(tài)的組織工程材料。在步驟I)中，所述新鮮人羊膜的獲取和分離的具體方法可為:(I)羊膜組織取自已簽訂知情同意書的HIV-Ι、乙肝、丙肝、梅毒均陰性的健康剖宮產(chǎn)婦獲得的胎盤；(2)在超凈工作臺(tái)下，把帶有絨毛膜的羊膜組織從胎盤上剪下并剪成不同規(guī)格、不同大小以及不同形狀的片狀，用Hanks’平衡鹽溶液(HBSS)漂洗2次，去除血跡，然后撕除絨毛膜，再用I XHBSS漂洗，直至羊膜組織無血潰，光滑透明，放置于培養(yǎng)基中。在步驟(I)中，羊膜組織可以為完整的包含上皮細(xì)胞的羊膜組織，或除去上皮細(xì)胞的羊膜組織，所述上皮細(xì)胞可以在培養(yǎng)之前予以除去，或在培養(yǎng)之后予以除去，羊膜基質(zhì)成分予以保留，并在所有操作中盡量保持羊膜基質(zhì)細(xì)胞的活性，同時(shí)通過培養(yǎng)，使基質(zhì)內(nèi)的細(xì)胞得以大量擴(kuò)增。在步驟2)中，經(jīng)過原位擴(kuò)增的羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞，可以用酶消化方法進(jìn)行分離，以獲取單個(gè)細(xì)胞懸液。在步驟3)中，所述采用不同的細(xì)胞分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向特定類型細(xì)胞的分化的具體方法可為:采用不同的培養(yǎng)基，原位誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞、肝臟細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞、 軟骨細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、肌腱細(xì)胞、韌帶、心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等多種類型細(xì)胞轉(zhuǎn)化分化；根據(jù)不同的分化細(xì)胞類型，培養(yǎng)的時(shí)間可以從2周到16周不等；在羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向特定類型細(xì)胞成功分化以后，可以形成具有不同形態(tài)和一定功能的組織工程材料，并有可能用于移植治療相應(yīng)疾病。本發(fā)明采用體外組織培養(yǎng)技術(shù)原位擴(kuò)增羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞，并誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞、肝臟細(xì)胞等多種類型細(xì)胞分化，構(gòu)建相應(yīng)細(xì)胞類型的組織工程材料，并可用于相應(yīng)疾病的治療。在本發(fā)明中，采用組織培養(yǎng)法，即不采用單細(xì)胞培養(yǎng)而直接取羊膜組織培養(yǎng)，建立一個(gè)更加接近體內(nèi)環(huán)境的條件，一則有利于間充質(zhì)干細(xì)胞的擴(kuò)增，干細(xì)胞特性的維持。二則原位擴(kuò)增以后，誘導(dǎo)其向特定方向分化，利用羊膜的細(xì)胞外間質(zhì)成分直接構(gòu)建組織工程化的骨組織、軟骨組織、肌肉組織、肌腱組織、神經(jīng)組織等，而無需利用其它細(xì)胞載體進(jìn)行二次組織工程化構(gòu)建。羊膜基質(zhì)里面有大量活細(xì)胞,這些細(xì)胞包含大量間充質(zhì)干細(xì)胞,與其他成體組織間充質(zhì)干細(xì)胞比較起來，胎盤材料來源充足，獲取過程沒有侵入式損傷，細(xì)胞增殖分化能力強(qiáng)，因此是較為理想的材料來源。采用組織培養(yǎng)法，即不采用單細(xì)胞培養(yǎng)而直接取羊膜組織培養(yǎng)，建立一個(gè)可能更加接近體內(nèi)環(huán)境的條件，對間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增，然后通過特定的細(xì)胞分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向特定類型細(xì)胞分化，最終構(gòu)建成為含特定類型細(xì)胞的組織工程產(chǎn)品。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:1、羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源于中胚層，其擴(kuò)增潛能遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞不表達(dá)端粒酶，這將排除細(xì)胞移植后腫瘤形成的風(fēng)險(xiǎn)；也不表達(dá)白細(xì)胞抗原，因此術(shù)后一般不發(fā)生移植免疫排斥反應(yīng)。與其他成體組織間充質(zhì)干細(xì)胞比較起來，胎盤材料來源充足，獲取過程沒有侵入式損傷，細(xì)胞增殖分化能力強(qiáng)，因此是較為理想的材料來源。2、羊膜基質(zhì)可以給基質(zhì)中的間充質(zhì)干細(xì)胞提供一個(gè)更加接近于體內(nèi)的微環(huán)境，更有利于間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖與分化。3、間充質(zhì)干細(xì)胞在羊膜基質(zhì)原位分化后可以形成具有相應(yīng)功能的組織工程產(chǎn)品，無需再進(jìn)行二次組織工程化構(gòu)建，直接用于臨床移植來治療相應(yīng)疾病。本發(fā)明的重要用途:1、通過羊膜組織培養(yǎng)法誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞分化形成多種功能細(xì)胞，可以用于治療相應(yīng)疾病。2、原位分化形成的組織工程產(chǎn)品可以直接移植，減少了間充質(zhì)干細(xì)胞體外構(gòu)建組織工程產(chǎn)品的環(huán)節(jié)，方便臨床移植。


圖1為羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞原位培養(yǎng)不同時(shí)間的形態(tài)學(xué)觀察圖。在圖1中，(A)，培養(yǎng)一周的去上皮羊膜；(B)，培養(yǎng)兩周的去上皮羊膜；(C)，培養(yǎng)三周的去上皮羊膜；(D)，培養(yǎng)四周的去上皮羊膜。Magnification:400X。圖2為羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元定向分化后的TUBB3實(shí)時(shí)定量PCR檢測結(jié)果。圖3為羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元定向分化后的TUBB3Western blotting檢測結(jié)
果O圖4為羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元定向分化后的TUBB3免疫熒光染色結(jié)果。圖5為羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)干細(xì)胞定向分化后的Nestin實(shí)時(shí)定量PCR檢測結(jié)果。圖6為羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)干細(xì)胞定向分化后的Nestin Western blotting檢測結(jié)果。圖7為羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)干細(xì)胞定向分化后的Nestin免疫熒光染色結(jié)果。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例將結(jié)合附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。本發(fā)明采用體外組織培養(yǎng)技術(shù)大量原位擴(kuò)增羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞，并誘導(dǎo)其向神經(jīng)細(xì)胞、肝臟細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、肌腱細(xì)胞、韌帶、心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等多種類型細(xì)胞定向分化，最終構(gòu)建相應(yīng)細(xì)胞類型的組織工程材料。本發(fā)明的具體實(shí)施方式
采用體外羊膜組織培養(yǎng)原位擴(kuò)增羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞，并誘導(dǎo)其向神經(jīng)細(xì)胞方向分化作為實(shí)施例進(jìn)一步說明，但該實(shí)施例的目的僅是闡明本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。1、活羊膜的獲取和分離:
I)從醫(yī)院已簽訂知情同意書的健康剖宮產(chǎn)婦(HIV-Ι、乙肝、丙肝、梅毒均陰性)獲得胎盤；2)在超凈工作臺(tái)中，把帶有絨毛膜的羊膜從胎盤上剪下并剪成大小約3X3cm，用Hanks’平衡鹽溶液(HBSS)漂洗2次，以去除血跡，然后撕除絨毛膜，再用IXHBSS漂洗，直至羊膜無血潰，光滑透明，放置于DMEM培養(yǎng)基中。2、將活羊膜安裝在培養(yǎng)插件上:I)在超凈工作臺(tái)中把干凈的固定羊膜的培養(yǎng)插件浸泡在75%酒精至少5min ；2)用滅菌的去離子水漂洗環(huán)和底座，洗去沾有的酒精；3)在解剖顯微鏡下，確定羊膜的上皮面和基底面；4)以羊膜上皮面朝上固定于培養(yǎng)插件上，放入六孔板中。3、去上皮羊膜的制備:I)在每個(gè)安裝固定有羊膜的培養(yǎng)插件環(huán)內(nèi)加入2mg/ml的Dispase ΙΙ200μ1于37 0C IOmin ；2)消化后，用IXPBS反復(fù)漂洗，把Dispase II洗去；3)在解剖顯微鏡下，用上皮刮刀小心刮除羊膜上皮，并用IXPBS反復(fù)清洗除去多余的上皮。4、采用間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM+10%FBS在37°C，5%C02條件下進(jìn)行羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞原位擴(kuò)增。根據(jù)需要，氧氣的濃度可以從2%到20%。培養(yǎng)時(shí)間可以從I周到4周，以將羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞擴(kuò)增到不同數(shù)量。

5、采用神經(jīng)細(xì)胞分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的定向分化；I )Neuro-medium (500ml)培養(yǎng)基配制:將 IOml B27、5ml Ν2、0.2ml25y g/ml bFGF依次加入500ml Neurobasal medium中，每加一個(gè)成分混勻一次，最后充分混勻，4°C保存。2)用微量移液器加入2.5ml Neuro-medium,前后左右輕輕搖動(dòng)6孔板，使培養(yǎng)基充分浸沒羊膜。3)連續(xù)培養(yǎng)4周，每3天換液一次。6、羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞方向分化后的表型鑒定:采用real-time PCR、Western blotting、免疫熒光染色等方法檢測TUBB3、Nestin等基因的表達(dá)情況。羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞原位培養(yǎng)不同時(shí)間的形態(tài)學(xué)觀察圖參見圖1。在圖1中，(A),培養(yǎng)一周的去上皮羊膜；(B)，培養(yǎng)兩周的去上皮羊膜；(C)，培養(yǎng)三周的去上皮羊膜；(D)，培養(yǎng)四周的去上皮羊膜。放大倍數(shù):40X。羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元定向分化后的TUBB3實(shí)時(shí)定量PCR檢測結(jié)果參見圖2。羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元定向分化后的TUBB3Western blotting檢測結(jié)果參見圖3。羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元定向分化后的TUBB3免疫熒光染色結(jié)果參見圖4。羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)干細(xì)胞定向分化后的Nestin實(shí)時(shí)定量PCR檢測結(jié)果參見圖5。羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)干細(xì)胞定向分化后的Nestin Western blotting檢測結(jié)果參見圖6。羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)干細(xì)胞定向分化后的Nestin免疫熒光染色結(jié)果參見圖7。本發(fā)明首先提供一種原位擴(kuò)增羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的體外組織培養(yǎng)方法，其中:所述的步驟I)是從已簽訂知情同意書的健康剖宮產(chǎn)婦(HIV-Ι、乙肝、丙肝、梅毒均陰性)獲得胎盤。在超凈工作臺(tái)中把帶有絨毛膜的羊膜從胎盤上剪下并剪成不同規(guī)格大小的圓形或正方形。用Hanks’平衡鹽溶液(HBSS)漂洗2次，去除血跡，然后撕除絨毛膜，再用IXHBSS漂洗，直至羊膜無血潰，光滑透明，放置于培養(yǎng)基中。本發(fā)明首先提供一種原位擴(kuò)增羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的體外組織培養(yǎng)方法，其中:所述的步驟2)是羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的原位擴(kuò)增。采用間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基在37°C，5%C02條件下進(jìn)行培養(yǎng)。根據(jù)需要，氧氣的濃度可以從1% 20%。培養(yǎng)時(shí)間可以從I周到4周，以將羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞擴(kuò)增到不同數(shù)量。本發(fā)明在原位擴(kuò)增獲得一定數(shù)量的羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞之后，可以采用膠原酶聯(lián)合胰蛋白酶的酶解方法收取單個(gè)細(xì)胞懸液。收取時(shí)先用膠原酶在37°C消化2 5h，離心收取細(xì)胞團(tuán)塊，然后用0.05% 0.25%胰蛋白酶在37°C消化15 20min，形成單個(gè)細(xì)胞懸液，即可用于其它用途。本發(fā)明在原位擴(kuò)增獲得一定數(shù)量的羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞之后，也可以采用不同的細(xì)胞分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞在培養(yǎng)的羊膜組織內(nèi)原位向特定類型細(xì)胞的分化。其中:所述的步驟3)是誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的定向分化。根據(jù)構(gòu)建組織工程產(chǎn)品的需要，采用不同的培養(yǎng)基，誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞、肝臟細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、肌腱細(xì)胞、韌帶、心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等多種類型細(xì)胞轉(zhuǎn)化分化。分化培養(yǎng)基采用目前常用的培養(yǎng)基，可·以進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。分化培養(yǎng)的時(shí)間可以從2周到8周不等。本發(fā)明在采用不同的細(xì)胞分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向特定類型細(xì)胞分化的同時(shí)，可以根據(jù)不同的細(xì)胞類型以及臨床需要，構(gòu)建不同形態(tài)的組織工程材料。所述的步驟4)是采用不同的培養(yǎng)插件、生物反應(yīng)器或特定形狀的生物模具界定羊膜的形態(tài)結(jié)構(gòu)，用以構(gòu)建不同形態(tài)的組織工程材料。在羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向特定類型細(xì)胞成功分化以后，可以形成具有一定功能的組織工程材料，可以用于移植治療相應(yīng)疾病。
權(quán)利要求
1.一種基于羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的組織工程材料構(gòu)建方法，其特征在于包括以下步驟: 1)新鮮人羊膜的獲取和分離； 2)將獲得的羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的原位擴(kuò)增； 3)采用不同的細(xì)胞分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向特定類型細(xì)胞的分化； 4)構(gòu)建不同形態(tài)的組織工程材料。
2.如權(quán)利要求1所述一種基于羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的組織工程材料構(gòu)建方法，其特征在于在步驟I)中，所述新鮮人羊膜的獲取和分離的具體方法為: (1)羊膜組織取自已簽訂知情同意書的HIV-Ι、乙肝、丙肝、梅毒均陰性的健康剖宮產(chǎn)婦獲得的胎盤； (2)在超凈工作臺(tái)下，把帶有絨毛膜的羊膜組織從胎盤上剪下并剪成不同規(guī)格、不同大小以及不同形狀的片狀，用Hanks’平衡鹽溶液(HBSS)漂洗2次，去除血跡，然后撕除絨毛膜，再用I XHBSS漂洗，直至羊膜組織無血潰，光滑透明，放置于培養(yǎng)基中。
3.如權(quán)利要求2所述一種基于羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的組織工程材料構(gòu)建方法，其特征在于在步驟(I)中，羊膜組織為完整的包含上皮細(xì)胞的羊膜組織，或除去上皮細(xì)胞的羊膜組織。
4.如權(quán)利要求2所述一種基于羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的組織工程材料構(gòu)建方法，其特征在于在步驟(I)中，所述上皮細(xì)胞是在培養(yǎng)之前予以除去，或在培養(yǎng)之后予以除去，羊膜基質(zhì)成分予以保留，并在所有操作 中盡量保持羊膜基質(zhì)細(xì)胞的活性，同時(shí)通過培養(yǎng)，使基質(zhì)內(nèi)的細(xì)胞得以大量擴(kuò)增。
5.如權(quán)利要求1所述一種基于羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的組織工程材料構(gòu)建方法，其特征在于在步驟2)中，經(jīng)過原位擴(kuò)增的羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞，用酶消化方法進(jìn)行分離，以獲取單個(gè)細(xì)胞懸液。
6.如權(quán)利要求1所述一種基于羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的組織工程材料構(gòu)建方法，其特征在于在步驟3)中，所述采用不同的細(xì)胞分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向特定類型細(xì)胞的分化的具體方法為:采用不同的培養(yǎng)基，原位誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞、肝臟細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、肌腱細(xì)胞、韌帶、心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等多種類型細(xì)胞轉(zhuǎn)化分化；根據(jù)不同的分化細(xì)胞類型，培養(yǎng)的時(shí)間可以從2周到16周不等；在羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向特定類型細(xì)胞成功分化以后，可以形成具有不同形態(tài)和一定功能的組織工程材料，并有可能用于移植治療相應(yīng)疾病。
全文摘要
一種基于羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的組織工程材料構(gòu)建方法，涉及一種干細(xì)胞的組織工程材料。1)新鮮人羊膜的獲取和分離；2)將獲得的羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的原位擴(kuò)增；3)采用不同的細(xì)胞分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向特定類型細(xì)胞的分化；4)構(gòu)建不同形態(tài)的組織工程材料。采用體外組織培養(yǎng)技術(shù)原位擴(kuò)增羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞，并誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞、肝臟細(xì)胞等多種類型細(xì)胞分化，構(gòu)建相應(yīng)細(xì)胞類型的組織工程材料，并可用于相應(yīng)疾病的治療。
文檔編號C12N5/079GK103224908SQ20131012622
公開日2013年7月31日 申請日期2013年4月12日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月12日
發(fā)明者李煒, 肖華強(qiáng), 張麗穎, 李三明, 劉祖國 申請人:廈門大學(xué)