專利名稱：一種大量提取活性上皮細(xì)胞的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種大量提取活性上皮細(xì)胞的方法。
背景技術(shù)：
皮膚是人體最大的器官，除了各種生理功能之外還直接關(guān)系到人的形象、美麗與健康。因此，對(duì)皮膚上皮細(xì)胞的研究既是醫(yī)學(xué)工程也是美麗工程。做為皮膚的最外層，除了掌跖部位之外，上皮一般分為四層，從外向里依次為:(I)失去活性的角質(zhì)層，隨年齡、性別、人種而略有不同，一般為5-10層，掌跖部位可厚達(dá)40-50層；(2)處于活性上皮細(xì)胞與死亡的角質(zhì)細(xì)胞過渡時(shí)期的顆粒層，一般約2-4層；(3)仍具備分裂增殖能力的棘細(xì)胞層，由4-8層棘細(xì)胞組成；(4)分裂增殖能力最為旺盛的基底層，也稱為生發(fā)層，由單層圓柱狀基底細(xì)胞組成。以往采集上皮細(xì)胞的方法一般是取全層或中厚層皮膚然后再用機(jī)械的方法或酶切的方法去除各種不需要的組織結(jié)構(gòu)，篩選出有活性的上皮細(xì)胞(即基底層細(xì)胞或棘層細(xì)胞)，不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力、勞民傷財(cái)，而且大量活性上皮細(xì)胞在采集過程中受到傷害，影響它的成活率，使活性上皮細(xì)胞的數(shù)目大大下降，同時(shí)取皮部位也會(huì)留下不同程度的瘢痕，不適于上皮細(xì)胞的商業(yè)化運(yùn)用。

發(fā)明內(nèi)容
為了有效的解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的難題，本發(fā)明提供了一種大量提取活性上皮細(xì)胞的方法，所述的方法包括如下步驟:第一步:首先用磨皮的方法去掉角質(zhì)層以及部分顆粒層細(xì)胞；第二步:以滾軸取皮刀取刃厚皮片；第三步:將取下的刃厚皮片平鋪于大硅膠板上；第四步:采用微粒切割刀將刃厚皮片切割成微型組織塊；第五步:將微型組織塊放入胰酶中在0-40攝氏度消化1-10分鐘，使組織松散成細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)狀；第六步:中和胰酶并離心清洗,0-40攝氏度保存待用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:1、首先去除了無活性的角質(zhì)上皮與少量缺乏活性的顆粒細(xì)胞；2、刃厚皮片取皮又減少了皮下組織，使得所取皮膚90%以上是活性上皮組織；3、用特制的微型切皮刀銳性的將活性上皮塊迅速切割成微型上皮組織，大大減少了活性上皮組織的損傷；4、用胰酶將微型上皮消化成活性上皮細(xì)胞及細(xì)胞團(tuán)，又避免了過渡酶切造成的傷害， 提升了活性上皮細(xì)胞及細(xì)胞團(tuán)的活性；
5、根據(jù)理論和實(shí)踐研究，上皮細(xì)胞團(tuán)的活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于單個(gè)上皮細(xì)胞的活性，更具有商業(yè)運(yùn)用價(jià)值。


圖1是本 發(fā)明的大量提取活性上皮細(xì)胞的方法的流程圖；圖2a是本發(fā)明中采用的微粒切割刀的截面示意圖；圖2b是本發(fā)明中采用的微粒切割刀的切刀設(shè)計(jì)示意圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。本發(fā)明提供一種大量提取活性上皮細(xì)胞的方法，如圖1所示流程，具體包括如下步驟:第一步:首先用磨皮的方法輕輕去掉角質(zhì)層以及部分顆粒層細(xì)胞，以皮膚露出粉紅色為度；所述的磨皮的方法包括機(jī)械、激光或化學(xué)磨皮等方法。一般去除顆粒層I 3層。第二步:以滾軸取皮刀按所需大小取刃厚皮片；所述滾軸取皮刀設(shè)定厚度為
0.15 0.25mm,最薄的厚度約0.2mm,所取皮膚的厚度設(shè)定為0.15 0.25mm。第三步:將取下的刃厚皮片平鋪于大硅膠板上。所述的大硅膠板尺寸約為IOX 10cm2，用以承載取下的皮片，硅膠板可以采用塑料、木質(zhì)或橡膠、硅膠等材料，硬度小于金屬材料的硬度，但是又能承載切割和滿足容易切割的要求。第四步:采用微粒切割刀將刃厚皮片切割成微型組織塊。所述的微粒切割刀如圖2a和圖2b所示，厚度為0.5 2cm。包括一體成型加工的切割面2和錘擊面I兩部分，所述的切割面2為網(wǎng)格設(shè)計(jì)的切刀，切刀具有非常銳利的刀鋒，為切刀的刀刃，如圖1所示，切刀設(shè)計(jì)成細(xì)密的網(wǎng)格狀；每個(gè)網(wǎng)格的尺寸0.02 2mm，尺寸越小越好,一般優(yōu)選為0.02 1mm。所述的錘擊面I為非切割面,相對(duì)切割面較厚鈍,用于承載敲擊力,錘擊面I 一般為2 X 2cm的鈍型方塊。切割時(shí)，只需把取下的刃厚皮片平鋪于大塊硅膠板上，以小塊硅膠板平置錘擊面上，切刀對(duì)準(zhǔn)要切割的大塊硅膠板上的刃厚皮片，適度錘擊即能得到微型組織塊。根據(jù)需要，一般還可選擇多個(gè)微粒切割刀同時(shí)平置在大塊硅膠板上的皮膚組織上，以敲擊錘均勻而快速的敲擊小塊硅膠板，即能迅速得到大量微型上皮組織塊，可供直接或進(jìn)一步使用。所述的小硅膠板的面積尺寸與所述錘擊面大小相等。第五步:將微型組織塊放入胰酶中消化I 10分鐘，使所述微型組織塊松散成細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)狀。切忌過渡消化。第六步:用等體積中和劑中和胰酶并清洗，最大量得到活性上皮細(xì)胞及細(xì)胞團(tuán)，0-40攝氏度保存待用。所述的胰酶可以是動(dòng)物組織提取的胰酶，也可以是轉(zhuǎn)基因植物，動(dòng)物細(xì)胞和微生物提取的重組胰酶。所述的中和劑為動(dòng)物血清，或大豆蛋白酶抑制劑，或利馬豆提取物，或蛋清，或BPTI (bo vine pancreatic trypsin inhibitor)，或 aprotinin。
權(quán)利要求
1.一種大量提取活性上皮細(xì)胞的方法，其特征在于:包括如下步驟: 第一步:首先用磨皮的方法去掉角質(zhì)層以及部分顆粒層細(xì)胞； 第二步:以滾軸取皮刀取刃厚皮片； 第三步:將取下的刃厚皮片平鋪于大硅膠板上； 第四步:采用微粒切割刀將刃厚皮片切割成微型組織塊； 第五步:將微型組織塊放入胰酶中在0-40攝氏度消化1-10分鐘，以使組織松散成細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)狀； 第六步:用中和劑中和胰酶并離心清洗，在0-40攝氏度保存待用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大量提取活性上皮細(xì)胞的方法，其特征在于:所述的磨皮的方法包括機(jī)械、激光或化學(xué)磨皮。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大量提取活性上皮細(xì)胞的方法，其特征在于:第一步中去除角質(zhì)層及外表顆粒層I 3層。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大量提取活性上皮細(xì)胞的方法，其特征在于:所述滾軸取皮刀設(shè)定厚度為0.15mm 0.25mm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大量提取活性上皮細(xì)胞的方法，其特征在于:所述的大硅膠板尺寸為 οX 10cm2，用以承載取下的刃厚皮片。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大量提取活性上皮細(xì)胞的方法，其特征在于:所述的微粒切割刀的厚度為0.5 2cm，包括一體成型加工的切割面和錘擊面兩部分，所述的切割面為網(wǎng)格設(shè)計(jì)的切刀；每 個(gè)方形網(wǎng)格的切邊尺寸0.02 2mm;所述的錘擊面為非切割面，錘擊面為2 X 2cm的鈍型方塊。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大量提取活性上皮細(xì)胞的方法，其特征在于:硅膠板采用塑料、木質(zhì)、橡膠或硅膠，硬度小于金屬材料的硬度。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大量提取活性上皮細(xì)胞的方法，其特征在于:胰酶是動(dòng)物組織提取的胰酶，或者是轉(zhuǎn)基因植物，動(dòng)物細(xì)胞和微生物提取的重組胰酶。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大量提取活性上皮細(xì)胞的方法，其特征在于:所述的中和劑是動(dòng)物血清，或大豆蛋白酶抑制劑，或利馬豆提取物，或蛋清，或uBPTI,或aprotinin。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種大量提取活性上皮細(xì)胞的方法，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。所述的方法首先用磨皮的方法去掉角質(zhì)層以及部分顆粒層細(xì)胞；然后以滾軸取皮刀取刃厚皮片；將取下的刃厚皮片平鋪于大硅膠板上；采用微粒切割刀將刃厚皮片切割成微型組織塊；再將微型組織塊放入胰酶中消化1～10分鐘，使組織松散成細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)狀；最后用中和劑中和胰酶并清洗，保存待用。采用本發(fā)明提供的方法，不僅所取皮膚90%以上是活性上皮組織，而且大大減少了活性上皮組織的損傷；用胰酶將微型上皮消化成活性上皮細(xì)胞及細(xì)胞團(tuán)，又避免了過渡酶切造成的傷害，提升了活性上皮細(xì)胞及細(xì)胞團(tuán)的活性。
文檔編號(hào)C12N5/071GK103114072SQ20131001669
公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2013年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月16日
發(fā)明者王朝剛, 武子龍 申請(qǐng)人:廣東朝剛生物科技有限公司