Hla基因的dna分型方法和試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明的目的是提供高精度的DNA分型方法和試劑盒，其排除了相位模糊引起的不明確。本發(fā)明提供了HLA的DNA分型方法，其特征為包含以下步驟：（1）制備對(duì)人基因組堿基序列中HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DPA1和HLA-DPB1各基因的上游區(qū)域和下游區(qū)域分別特異性退火的引物組以及對(duì)HLA-DRB1的外顯子2和3'側(cè)非翻譯區(qū)域特異性退火的引物組的步驟；（2）應(yīng)用前述引物組對(duì)被測試樣（DNA）進(jìn)行PCR擴(kuò)增的步驟；（3）確定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的堿基序列的步驟；和（4）任選地，進(jìn)行與數(shù)據(jù)庫的同源性檢索的步驟。
【專利說明】HLA基因的DNA分型方法和試劑盒
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】
本發(fā)明涉及應(yīng)用大規(guī)模平行序列分析儀進(jìn)行HLA基因的DNA分型的方法和試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]作為人主要組織相容性復(fù)合物(MHC)的人白細(xì)胞抗原(HLA)通過向T細(xì)胞呈遞衍生自病原體等外來蛋白質(zhì)的肽以及衍生自自身蛋白質(zhì)的肽而深入地牽涉免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)，有6種抗原已知為主要的HLA。即，幾乎在所有細(xì)胞中表達(dá)的I類分子(HLA-A、HLA-B,HLA-C)與主要在免疫系統(tǒng)細(xì)胞中表達(dá)的II類分子(HLA-DR、HLA-DQ、HLA-DP)。
[0003]HLA I類抗原由表現(xiàn)高度多態(tài)性的α鏈和幾乎沒有多態(tài)性的β 2_微球蛋白組成，HLA II類抗原由存在高度多態(tài)的β鏈和多態(tài)性低的α鏈組成。I類分子的α鏈由HLA-A、HLA-B, HLA-C各基因編碼，II類抗原的β鏈由HLA-DRB1、HLA-DQBU HLA-DPBl基因編碼，α鏈由HLA-DRAl、HLA-DQA1、HLA-DPA1基因編碼。在基因水平，在HLA I類抗原中，編碼α鏈的基因的外顯子2和外顯子3顯示高度多態(tài)性，在HLA II類抗原中，編碼β鏈的基因的外顯子2顯示高度多態(tài)性。
[0004]編碼HLA的基因區(qū)域位于人6號(hào)染色體短臂6ρ21.3，從端粒側(cè)至著絲粒側(cè)，以I類區(qū)域(HLA-A、HLA-C, HLA-B 等)、III 類區(qū)域、II 類區(qū)域(HLA-DRA、HLA-DRBU HLA-DQAUHLA-DQB1、HLA-DPA1、HLA-DPBI等)的順序排列，許多基因以非常高的密度編碼，這些基因與輸血、移植和各種疾病的關(guān)聯(lián)被報(bào)告。在III類區(qū)域中不存在HLA基因，存在補(bǔ)體成分、腫瘤壞死因子(TNF)等的基因。
[0005]在編碼HLA-DR抗原的β鏈的HLA-DRB基因區(qū)域中，確認(rèn)了 5種結(jié)構(gòu)多態(tài)性。在DRl型和DRlO型中，在同一染色體上，除HLA-DRBl之外還定位HLA-DRB6和HLA-DRB9等假基因。在DR2型中，在同一染色體上，除HLA-DRBl之外還定位HLA-DRB5 (DR51)基因以及HLA-DRB6和HLA-DRB9等假基因。在DR3、DR5以及DR6型中，除HLA-DRBI之外，在同一染色體上還定位HLA-DRB3 (DR52)基因以及HLA-DRB2和HLA-DRB9等假基因。在DR4、DR7以及DR9型中，除HLA-DRBl之外，在同一染色體上還定位HLA-DRB4 (DR53)基因以及HLA-DRB7、HLA-DRB8和HLA-DRB9等假基因。與這些相對(duì)，在DR8型中，在同一染色體上沒有定位HLA-DRBl之外的HLA-DRB基因。
[0006]在各等位基因的外顯子中，存在顯示多態(tài)性的多個(gè)區(qū)域，在許多情況下，特定多態(tài)區(qū)域的堿基序列(氨基酸序列)在多個(gè)等位基因中是共同的。即，各HLA等位基因通過多個(gè)多態(tài)區(qū)域的組合而指定。在HLA I類抗原中，不僅外顯子內(nèi)的多態(tài)區(qū)域、而且具有同一堿基序列的外顯子2或外顯子3有時(shí)在多個(gè)等位基因中是共同的。
[0007]由于HLA中存在高度多態(tài)，已知等位基因的種類極多，它們的表示法也得到確定。也即，辨別血清學(xué)HLA型的第I領(lǐng)域(2位數(shù)(two-digit)水平)、辨別同一血清學(xué)HLA型內(nèi)伴有氨基酸置換的等位基因的第2領(lǐng)域(4位數(shù)水平)、辨別具有不伴有氨基酸突變的堿基置換的等位基因的第3領(lǐng)域 (6位數(shù)水平)、和辨別編碼HLA分子的基因區(qū)域外(內(nèi)含子)中伴有堿基置換的等位基因的第4領(lǐng)域(8位數(shù)水平)。[0008]認(rèn)為在骨髓移植時(shí)，如果希望移植者與供體的HLA型在4位數(shù)水平完全匹配，移植的成功率提高，重度GVHD頻率降低。相反，如果HLA型在4位數(shù)水平不匹配，產(chǎn)生引起排斥反應(yīng)等失敗的風(fēng)險(xiǎn)增加。因此，準(zhǔn)確且高精度地進(jìn)行HLA分型在臨床上是極端重要的。
[0009]作為HLA基因中的DNA分型法，基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的SBT(基于序列分型)法和SSO (序列特異性寡核苷酸)-Luminex法是主流。
[0010]這些常規(guī)的DNA分型法具有可以對(duì)多數(shù)樣品迅速分型的優(yōu)勢，但是，有時(shí)不能準(zhǔn)確確定多態(tài)區(qū)域和I類基因情況下外顯子在染色體上的順反位置關(guān)系，因此，產(chǎn)生相位模糊(phase ambiguity),有時(shí)難以進(jìn)行高精度的HLA分型。
[0011]另外，常規(guī)方法是以各基因外顯子區(qū)域?yàn)橹行膽?yīng)用PCR的DNA分型法，因此，忽略了內(nèi)含子區(qū)域和啟動(dòng)子區(qū)域中的堿基置換，其結(jié)果是，對(duì)基因結(jié)構(gòu)與其它表達(dá)HLA基因一樣但表達(dá)抑制的無效等位基因的檢測有可能失敗。
[0012]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn) 專利文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn)1:特開平11-216000號(hào)公報(bào) 非專利文獻(xiàn)
非專利文獻(xiàn) 1: Lind C.等，Human Immunology,第 71 卷，1033-1042 頁(2010 年)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013]發(fā)明要解決的課題
本發(fā)明的課題是，提供高精度的DNA分型方法和試劑盒，其排除了相位模糊引起的不明確。
[0014]解決課題的手段
本發(fā)明人基于新想法反復(fù)研究上述課題，從而完成本發(fā)明，所述新想法為，新設(shè)計(jì)能夠特異性擴(kuò)增 I 類 HLA 分子 HLA-A、HLA-B 和 HLA-C 以及 II 類 HLA 分子 HLA-DRBl、HLA-DQA1、HLA-DQBU HLA-DPAl和HLA-DPBl這些HLA基因的PCR引物，設(shè)定合適的PCR條件，應(yīng)用大規(guī)模平行測序技術(shù)。
[0015]也即，本發(fā)明提供了包含以下步驟的HLA的DNA分型方法。
[0016](I)制備對(duì)人基因組堿基序列中 HLA-A、HLA-B, HLA-C, HLA-DQAl、HLA-DQBl、HLA-DPAl和HLA-DPBl各基因的上游區(qū)域和下游區(qū)域分別特異性退火的引物組以及對(duì)HLA-DRBl的外顯子2和3’側(cè)非翻譯區(qū)域特異性退火的引物組的步驟；
(2)應(yīng)用前述引物組對(duì)被測試樣(DNA)進(jìn)行PCR擴(kuò)增的步驟；
(3)確定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的堿基序列的步驟；和
(4)進(jìn)行與數(shù)據(jù)庫的同源性檢索的步驟。
[0017]發(fā)明效果
本發(fā)明方法得到對(duì)來自I分子的HLA基因進(jìn)行DNA分型所需的全部堿基序列，因此為排除了順反位置關(guān)系不清楚的相位模糊的最終DNA分型法。通過該方法，實(shí)現(xiàn)了移植時(shí)希望移植者與供體候選者之間高精度的HLA匹配。
[0018]由于含有HLA基因 的啟動(dòng)子區(qū)域、外顯子區(qū)域、內(nèi)含子區(qū)域等周邊區(qū)域的基因全部喊基序列得到確定，可以檢測出完全不表達(dá)或表達(dá)抑制的無效等位基因和新穎的等位基因。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0019][圖1](a)示出HLA I類基因結(jié)構(gòu)與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)聯(lián)性的圖。(b)示出HLA I類基因的啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)構(gòu)的圖。引用自Transplantation/transfusion Examination,Hidetoshi Inoko、Takehiko Sasazuki 和 Takeo Juuji 編輯,Kodan-sha Scientific, 2004年，第35頁。
[0020][圖2](a)示出HLA II類基因結(jié)構(gòu)與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)聯(lián)性的圖。(b)示出HLA II類基因的啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)構(gòu)的圖。引用自Transplantation/transfusion Examination,Hidetoshi Inoko、Takehiko Sasazuki 和 Takeo Juuji 編輯,Kodan-sha Scientific, 2004年，第46頁至第47頁。
[0021][圖 3]不出 HLA-DR 基因區(qū)域的圖。引用自 Transplantation/transfusionExamination, Hidetoshi Inoko>Takehiko Sasazuki 和 Takeo Juuji 編輯，Kodan-shaScientific，2004 年，第 48 頁。
[0022][圖4]示出實(shí)施例1中擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物的擴(kuò)增狀況的瓊脂糖凝膠電泳圖。
[0023][圖5]示出HLA基因的基因結(jié)構(gòu)與設(shè)計(jì)PCR引物的位置的示意圖(括號(hào)內(nèi)指明在該區(qū)域設(shè)計(jì)的引物的序列編號(hào))。
[0024][圖6]示出實(shí)施例2中擴(kuò)增的HLA基因的PCR擴(kuò)增狀況的瓊脂糖凝膠電泳圖。
[0025][圖7]示出實(shí)施例3中3種DNA提取法得到的各PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖。
【具體實(shí)施方式】
[0026]下文對(duì)本發(fā)明DNA分型方法按步驟詳細(xì)說明。
[0027](I)引物組制備步驟
在本發(fā)明的DNA分型方法中，首先，制備對(duì)人基因組堿基序列中HLA-A、HLA-B, HLA-C,HLA-DQAl、HLA-DQB1、HLA-DPAI和HLA-DPBl各基因的上游區(qū)域和下游區(qū)域分別特異性退火的引物組，以及對(duì)HLA-DRBl的外顯子2和3’側(cè)的非翻譯區(qū)域特異性退火的引物組。
[0028]包含HLA基因存在的區(qū)域的人第6號(hào)染色體(6p21.3)的基因組堿基序列已經(jīng)闡明，其基因結(jié)構(gòu)與表達(dá)產(chǎn)物(HLA分子)的結(jié)構(gòu)的關(guān)聯(lián)也是已知的(參考圖1和圖2)。
[0029]也即，稱為經(jīng)典HLA I類分子的HLA-A、HLA-B和HLA-C的基因含有7個(gè)或8個(gè)外顯子(圖1 (a))，外顯子I的外側(cè)有2種增強(qiáng)子和啟動(dòng)子區(qū)域調(diào)節(jié)表達(dá)(圖1 (b))。
[0030]進(jìn)一步地，外顯子2、3和4中存在多個(gè)多態(tài)區(qū)域也是已知的，因此，在常規(guī)的DNA分型方法中，應(yīng)用尤其基于外顯子2和3制備的引物進(jìn)行PCR，隨之產(chǎn)生如上述的相位模糊問題。
`[0031]另外，稱為經(jīng)典的HLA II類分子的HLA-DR、HLA-DQ和HLA-DP由α鏈與β鏈構(gòu)成，其各自基因包含5個(gè)或6個(gè)外顯子(圖2 (a))，外顯子I的外側(cè)有啟動(dòng)子區(qū)域調(diào)節(jié)表達(dá)(圖 2 (b))。
[0032]進(jìn)一步地，外顯子2和3中存在多個(gè)多態(tài)區(qū)域也是已知的，因此，在常規(guī)的DNA分型方法中，應(yīng)用尤其基于外顯子2制備的引物進(jìn)行PCR，隨之產(chǎn)生如上述的相位模糊問題。
[0033]本發(fā)明中，制備引物組，其能夠PCR擴(kuò)增經(jīng)典的I類分子(HLA-A，HLA_B，HLA-OW及經(jīng)典的II類分子的HLA-DQAl、HLA-DQB1、HLA-DPAI和HLA-DPBl的基因區(qū)域的全部(不僅包含外顯子，也包含內(nèi)含子、5’側(cè)與3’側(cè)非翻譯區(qū)域、啟動(dòng)子區(qū)域)、HLA-DRBl的含有外顯子2至3’側(cè)非翻譯區(qū)域的基因區(qū)域，應(yīng)用該引物組PCR擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物接受下述下一代測序(next-generation sequencing),因此能夠排除相位模糊等的不確定性，也能夠正確檢測無效等位基因的有無。
[0034]具體地，制備下述表1至表4中列出的PCR引物組。
[0035]表1中序列編號(hào)I至3是特異性擴(kuò)增作為MHC I類α鏈的HLA-A基因的PCR引物組。這些引物組是在下列位直存在的喊基序列，其將人基因組喊基序列(參考序列:hgl9)中HLA-A基因全部區(qū)域(包含啟動(dòng)子、外顯子和內(nèi)含子)從上游側(cè)和下游側(cè)夾入(挾?込tr)。
[0036]序列編號(hào)I具有相應(yīng)于人基因組堿基序列(參考序列:hgl9)中第29，909，487號(hào)至第29，909，514號(hào)的堿基序列。
[0037]序列編號(hào)2具有相應(yīng)于人基因組堿基序列(參考序列:hgl9)中第29，909，487號(hào)至第29，909，514號(hào)的堿基序列。
[0038]序列編號(hào)3具有與相應(yīng)于人基因組堿基序列(參考序列:1^19)中第29，914，925號(hào)至第29，914，952號(hào)的堿基序列互補(bǔ)的堿基序列。
[0039]應(yīng)用這些引物組得到的PCR產(chǎn)物的預(yù)測長度是約5，500個(gè)堿基(bp)。
[0040]表1中序列編號(hào)4至5是特異性擴(kuò)增作為MHC I類α鏈的HLA-B基因的PCR引物組。這些引物組是在下列位直存在的喊基序列，其將人基因組喊基序列(參考序列:hgl9)中HLA-B基因全部區(qū)域(包含啟動(dòng)子、外顯子和內(nèi)含子)從上游側(cè)和下游側(cè)夾入。
[0041]序列編號(hào)4具有 與相應(yīng)于人基因組堿基序列(參考序列:hgl9)中第31，325，796號(hào)至第31，325，820號(hào)的堿基序列互補(bǔ)的堿基序列。
[0042]序列編號(hào)5具有相應(yīng)于人基因組堿基序列(參考序列:hgl9)中第31，321，212號(hào)至第31，321，235號(hào)的堿基序列。
[0043]應(yīng)用這些引物組得到的PCR產(chǎn)物的預(yù)測長度是約4，600個(gè)堿基(bp)。
[0044]表1中序列編號(hào)6至8是特異性擴(kuò)增作為MHC I類α鏈的HLA-C基因的PCR引物組。這些引物組是在下列位直存在的喊基序列，其將人基因組喊基序列(參考序列:hgl9)中HLA-C基因全部區(qū)域(包含啟動(dòng)子、外顯子和內(nèi)含子)從上游側(cè)和下游側(cè)夾入。
[0045]序列編號(hào)6具有與相應(yīng)于人基因組堿基序列(參考序列:1^19)中第31，240，868號(hào)至第31，240，892號(hào)的堿基序列互補(bǔ)的堿基序列。
[0046]序列編號(hào)7具有與相應(yīng)于人基因組堿基序列(參考序列:1^19)中第31，240，868號(hào)至第31，240，892號(hào)的堿基序列互補(bǔ)的堿基序列。
[0047]序列編號(hào)8具有相應(yīng)于人基因組堿基序列(參考序列:hgl9)中第31，236，991號(hào)至第31，236，114號(hào)的堿基序列。
[0048]應(yīng)用這些引物組得到的PCR產(chǎn)物的預(yù)測長度是約4，800個(gè)堿基(bp)。
[0049][表 I]
【權(quán)利要求】
1.HLA的DNA分型方法，其特征為包含以下步驟: (1)制備對(duì)人基因組堿基序列中HLA-A、HLA-B, HLA-C, HLA-DQAl、HLA-DQBl、HLA-DPAl和HLA-DPBl各基因的上游區(qū)域和下游區(qū)域分別特異性退火的引物組以及對(duì)HLA-DRBl的外顯子2和3’側(cè)非翻譯區(qū)域特異性退火的引物組的步驟； (2)應(yīng)用所述引物組對(duì)被測試樣(DNA)進(jìn)行PCR擴(kuò)增的步驟； (3)確定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的堿基序列的步驟；和 (4)任選地，進(jìn)行與數(shù)據(jù)庫的同源性檢索的步驟。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述基因是HLA-A基因，所述引物組選自具有序列編號(hào):1、2和3的堿基序列的寡核苷酸。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述基因是HLA-B基因，所述引物組選自具有序列編號(hào):4和5的堿基序列的寡核苷酸。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述基因是HLA-C基因，所述引物組選自具有序列編號(hào):6、7和8的堿基序列的寡核苷酸。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述基因是HLA-DRBl基因的DRl型，所述引物組選自具有序列編號(hào):9、10、11、31和32的堿基序列的寡核苷酸。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述基因是HLA-DRBl基因的DR2型，所述引物組選自具有序列編號(hào):11、12、31和33的堿基序列的寡核苷酸。
7.權(quán)利要求1的 方法，其中所述基因是HLA-DRBl基因的DR3型，所述引物組選自具有序列編號(hào):13、14、3 2和34的堿基序列的寡核苷酸。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所述基因是HLA-DRBl基因的DR4型，所述引物組選自具有序列編號(hào):15、16、31和32的堿基序列的寡核苷酸。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述基因是HLA-DRBl基因的DR5型，所述引物組選自具有序列編號(hào):13、14、31、35和36的堿基序列的寡核苷酸。
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述基因是HLA-DRBl基因的DR6型，所述引物組選自具有序列編號(hào):13、14、31、32和37的堿基序列的寡核苷酸。
11.權(quán)利要求1的方法，其中所述基因是HLA-DRBl基因的DR7型，所述引物組選自具有序列編號(hào):17、18、36和38的堿基序列的寡核苷酸。
12.權(quán)利要求1的方法，其中所述基因是HLA-DRBl基因的DR8型，所述引物組選自具有序列編號(hào):13、14、31和39的堿基序列的寡核苷酸。
13.權(quán)利要求1的方法，其中所述基因是HLA-DRBl基因的DR9型，所述引物組選自具有序列編號(hào):19、20、36和38的堿基序列的寡核苷酸。
14.權(quán)利要求1的方法，其中所述基因是HLA-DRBl基因的DRlO型，所述引物組選自具有序列編號(hào):21、22、31和32的堿基序列的寡核苷酸。
15.權(quán)利要求1的方法，其中所述基因是HLA-DPAl基因，所述引物組選自具有序列編號(hào):23、24、40和41的堿基序列的寡核苷酸。
16.權(quán)利要求1的方法，其中所述基因是HLA-DPBl基因，所述引物組選自具有序列編號(hào):25、26、42、43、44和45的堿基序列的寡核苷酸。
17.權(quán)利要求1的方法，其中所述基因是HLA-DQAl基因，所述引物組選自具有序列編號(hào):27、28、46和47的堿基序列的寡核苷酸。
18.權(quán)利要求1的方法，其中所述基因是HLA-DQBl基因，所述引物組選自具有序列編號(hào):29、30、48、49和50的堿基序列的寡核苷酸。
19.用于HLA-A基因的DNA分型的引物組，其包含正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序列編號(hào):1、2和3的堿基序列的寡核苷酸。
20.用于HLA-B基因的DNA分型的引物組，其包含正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序列編號(hào):4和5的堿基序列的寡核苷酸。
21.用于HLA-C基因的DNA分型的引物組，其包含正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序列編號(hào):6、7和8的堿基序列的寡核苷酸。
22.用于HLA-DRBI基因的DRl型的DNA分型的引物組，其包含正向弓丨物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序列編號(hào):9、10、11、31和32的堿基序列的寡核苷酸。
23.用于HLA-DRBl基因的DR2型的DNA分型的引物組，其包含正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序列編號(hào):11、12、31和33的堿基序列的寡核苷酸。
24.用于HLA-DRBI基因的DR3型的DNA分型的引物組，其包含正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序列編號(hào):13、14、32和34的堿基序列的寡核苷酸。
25.用于HLA-DRBI基因的DR4型的DNA分型的引物組，其包含正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序列編號(hào):15、16、31和32的堿基序列的寡核苷酸。
26.用于HLA-DRBI基因的DR5型的DNA分型的引物組，其包含正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序列編號(hào):13、14、31、35和36的堿基序列的寡核苷酸。
27.用于HLA-DRBI基因的DR6型的DNA分型的引物組，其包含正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序 列編號(hào):13、14、31、32和37的堿基序列的寡核苷酸。
28.用于HLA-DRBI基因的DR7型的DNA分型的引物組，其包含正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序列編號(hào):17、18、36和38的堿基序列的寡核苷酸。
29.用于HLA-DRBI基因的DR8型的DNA分型的引物組，其包含正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序列編號(hào):13、14、31和39的堿基序列的寡核苷酸。
30.用于HLA-DRBI基因的DR9型的DNA分型的引物組，其包含正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序列編號(hào):19、20、36和38的堿基序列的寡核苷酸。
31.用于HLA-DRBl基因的DRlO型的DNA分型的引物組，其包含正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序列編號(hào):21、22、31和32的堿基序列的寡核苷酸。
32.用于HLA-DPAl基因的DNA分型的引物組，其包含正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序列編號(hào):23、24、40和41的堿基序列的寡核苷酸。
33.用于HLA-DPBI基因的DNA分型的引物組，其包含正向弓丨物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序列編號(hào):25、26、42、43、44和45的堿基序列的寡核苷酸。
34.用于HLA-DQAl基因的DNA分型的引物組，其包含正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序列編號(hào):27、28、46和47的堿基序列的寡核苷酸。
35.用于HLA-DQBI基因的DNA分型的引物組，其包含正向弓丨物和反向引物，所述正向引物和反向引物選自具有序列編號(hào):29、30、48、49和50的堿基序列的寡核苷酸。
【文檔編號(hào)】C12N15/09GK103890190SQ201280036108
【公開日】2014年6月25日 申請(qǐng)日期:2012年5月18日 優(yōu)先權(quán)日:2011年7月21日
【發(fā)明者】椎名隆, 鈴木進(jìn)悟, 尾崎有紀(jì), 光永滋樹, 豬子英俊 申請(qǐng)人:吉諾戴夫制藥株式會(huì)社