專利名稱：腫瘤干細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養(yǎng)容器的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及國際專利分類C12N微生物或酶繁殖變異或遺傳工程技術領域，尤其是腫瘤干細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養(yǎng)容器。
背景技術：
目前，腫瘤干細胞的定義之一是:腫瘤中具有自我更新能力并能產生異質性腫瘤細胞的細胞。傳統(tǒng)觀念認為，腫瘤是由體細胞突變而成，每個腫瘤細胞都可以無限制地生長。但這無法解釋腫瘤細胞似乎具有無限的生命力以及并非所有腫瘤細胞都能無限制生長的現象。腫瘤細胞生長、轉移和復發(fā)的特點與干細胞的基本特性十分相似，因此，有學者提出腫瘤干細胞的理論。這一理論為重新認識腫瘤的起源和本質，以及臨床腫瘤治療提供了新的方向和視覺角度。腫瘤干細胞對腫瘤的存活、增殖、轉移及復發(fā)有著重要作用。從本質上講，腫瘤干細胞通過自我更新和無限增值維持著腫瘤細胞群的生命力；腫瘤干細胞的運動和遷徙能力又使腫瘤細胞的轉移成為可能；腫瘤干細胞可以長時間處于休眠狀態(tài)并具有多種耐藥分子而對殺傷腫瘤細胞的外界理化因素不敏感，因此腫瘤往往在常規(guī)腫瘤治療方法消滅大部分普通腫瘤細胞后一段時間復發(fā)。培養(yǎng)即將取得的組織細胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個小時后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基。如系細胞培養(yǎng)，一般應在接入培養(yǎng)器皿之前進行細胞計數，按要求以一定的量，以每毫升細胞數表示，接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細胞進入培養(yǎng)器皿后，立即放入培養(yǎng)箱中，使細胞盡早進入生長狀態(tài)。正在培養(yǎng)中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內容包括細胞是否生長良好，形態(tài)是否正常，有無污染，培養(yǎng)基的PH是否太酸或太堿，由酚紅指示劑指示，此外對培養(yǎng)溫度和CO2濃度也要定時檢查。一般原代培養(yǎng)進入培養(yǎng)后有一段潛伏期，數小時到數十天不等，在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和游走。過了潛伏期后細胞進入旺盛的分裂生長期。細胞長滿瓶底后要進行傳代培養(yǎng)，將一瓶中的細胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng)。每傳代一次稱為“一代”。二倍體細胞一般只能傳幾十代，而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質，也可能僅有不死性而無惡性。培養(yǎng)正在生長中的細胞是進行各種生物醫(yī)學實驗的良好材料。在腫瘤干細胞研究中應用軟性接觸鏡材料是新的發(fā)展，而軟性接觸鏡材料中，應用最廣泛的是由甲基丙烯酸-2-羥基乙酯HEMA單體為主組成的共聚物水凝膠。近年來的研究進行綜述公開了相應的知識，總結了 HEMA類接觸鏡的發(fā)展和分類，HEMA單體的共聚、材料性能及其在藥物緩釋中的應用，尤其是新近公開的文獻認為poly-hema聚甲基丙烯酸羥乙基酯應用特性更為突出。鑒于此，建立一種能夠快速有效的、且能夠降低成本的檢測方法十分必要。中國專利申請200410084407涉及細胞的分離培養(yǎng)方法及其應用，具體涉及一種脂肪間充質干細胞的分離培養(yǎng)方法及其應用。它包括取人體脂肪組織，用膠原酶消化，經梯度離心、過濾，隨后在體外培養(yǎng)體系中進行擴增培養(yǎng)，其中所述體外培養(yǎng)體系含有D M EM / F 12、E F G和 F C S。中國專利申請201120530645 —種細菌培養(yǎng)瓶，包括瓶身、設于瓶身頂端的瓶口和設于瓶身下端的瓶底、以及瓶蓋，所述瓶身的橫截面為矩形，所述瓶底為斜面，所述瓶底斜面與所述瓶身中的兩個相對的側面相垂直。
發(fā)明內容本實用新型的發(fā)明目的在于提供一種腫瘤干細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養(yǎng)容器。實現本實用新型的發(fā)明目的措施在于:培養(yǎng)容器內具有底部聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理涂層，培養(yǎng)容器上部有器蓋。本實用新型的優(yōu)點在于，通過設置在培養(yǎng)基瓶內壁設置優(yōu)化涂層，可以節(jié)約培養(yǎng)基的使用量，以促進培養(yǎng)基保持活性，可防止培養(yǎng)基中多余水分和菌液對培養(yǎng)的干擾，使培養(yǎng)結果的讀值更加可靠，且生物安全性優(yōu)異。降低了實驗成本且簡化了操作步驟；操作方便、省時省力、能夠快速滅菌、利于生物制品的生產，便于監(jiān)控檢測，便于研究細胞代謝、物理、化學、生物因素的影響，顯著提高研究工作效率。

圖1是本實用新型中一種的培養(yǎng)皿容器結構示意圖圖2是本實用新型中的另一種的培養(yǎng)板容器結構示意圖附圖標記包括:培養(yǎng)容器1，底部聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理涂層2，器蓋3，板孔4，板座5。
具體實施方式
以下通過實施例進一步說明。培養(yǎng)容器I內具有底部聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理涂層2，培養(yǎng)容器I上部有器蓋3。前述中，培養(yǎng)容器I為培養(yǎng)皿，該培養(yǎng)皿培養(yǎng)容器I內具有底部聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理涂層2 ;另外，培養(yǎng)容器I上部有器蓋3，該器蓋3開口與培養(yǎng)容器I培養(yǎng)皿上部配
八
口 ο前述中，培養(yǎng)容器I為培養(yǎng)板，培養(yǎng)容器I上布均勻分布有板孔4 ;另外，培養(yǎng)容器I底部安裝板座5 ;同時，培養(yǎng)容器I上部器蓋3，該器蓋3開口與培養(yǎng)容器I培養(yǎng)板上部配
入
口 ο實施例1:如附圖1所示，培養(yǎng)容器I為培養(yǎng)皿。器蓋3與培養(yǎng)容器I培養(yǎng)皿橫截面均呈圓形。培養(yǎng)容器I為用于盛載液體培養(yǎng)液或固體瓊脂培養(yǎng)液進行細胞培養(yǎng)的玻璃或塑料圓形器皿。培養(yǎng)容器I一般由玻璃或者塑料作成。前述中，在培養(yǎng)容器I為培養(yǎng)皿應用于傳代培養(yǎng)時:I).培養(yǎng)容器I培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%_90%時要傳代。2).把原有培養(yǎng)基吸掉。[0023]3).加適當的胰蛋白酶，能覆蓋細胞就行，消化1-2分鐘。4).細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。5).用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來。6).把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉離心5分鐘。7).倒掉上清液，加l_2ml培養(yǎng)基，把細胞都吹起來。8).根據細胞種類把細胞傳到幾個培養(yǎng)容器I培養(yǎng)皿中。一般情況下，癌細胞分5個，正常細胞傳3個，然后繼續(xù)培養(yǎng)。前述中，將SW480細胞培養(yǎng)于培養(yǎng)容器I為培養(yǎng)皿底部的DMEM培養(yǎng)基內，添加10%胎牛血清，置于37°C、含5%C02的恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，每天更換一次培養(yǎng)液；待細胞培養(yǎng)至約85%貼壁時，更換培養(yǎng)液，繼續(xù)在相同條件下培養(yǎng)24小時；選擇狀態(tài)良好，95%匯合且位于指數生長期的細胞備用。加入0.25%胰酶-EDTA消化貼壁細胞；4°C下1500rpm離心5min收集細胞沉淀,用TSC Medium,即DMEM無血清培養(yǎng)基,添加10ng/ml EGF+10ng/mlbFGF+10ng/mlNoggin + 1000U/ml insulin,重懸細胞沉淀，然后放入polyhema處理的培養(yǎng)瓶中進行克隆形成培養(yǎng)。實施例2:如附圖2所示，培養(yǎng)容器I為培養(yǎng)板，培養(yǎng)容器I上布均勻分布有板孔4 ;板孔4為平底或圓底，即U型和V型；板孔4孔數為6、12、24、48或96孔；而且，根據材質的不同，培養(yǎng)容器I為培養(yǎng)板為Terasaki板和普通細胞培養(yǎng)板，培養(yǎng)板培養(yǎng)容器I上部加蓋方形器蓋3。在以上實施例中，未及敘述的涉及實施的其他必要技術等采用現有技術，不再依次列舉詳述。
權利要求1.腫瘤干細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養(yǎng)容器，其特征是:培養(yǎng)容器(I)內具有底部聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理涂層(2)，培養(yǎng)容器(I)上部有器蓋(3)。
2.如權利要求1所述的腫瘤干細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養(yǎng)容器，其特征在于，培養(yǎng)容器(I)為培養(yǎng)皿，該培養(yǎng)皿培養(yǎng)容器(I)內具有底部聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理涂層⑵。
3.如權利要求1所述的腫瘤干細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養(yǎng)容器，其特征在于，培養(yǎng)容器(I)為培養(yǎng)板，培養(yǎng)容器(I)上布均勻分布有板孔(4)。
4.如權利要求3所述的腫瘤干細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養(yǎng)容器，其特征在于，培養(yǎng)容器(I)底部安裝板座(5)。
5.如權利要求3所述的腫瘤干細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養(yǎng)容器，其特征在于，板孔(4)孔數為6、12、24、48或96孔。
專利摘要腫瘤干細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養(yǎng)容器，培養(yǎng)容器(1)內具有底部聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理涂層(2)，培養(yǎng)容器(1)上部有器蓋(3)。通過設置在培養(yǎng)基瓶內壁設置優(yōu)化涂層，可以節(jié)約培養(yǎng)基的使用量，以促進培養(yǎng)基保持活性，可防止培養(yǎng)基中多余水分和菌液對培養(yǎng)的干擾，使培養(yǎng)結果的讀值更加可靠，且生物安全性優(yōu)異。降低了實驗成本且簡化了操作步驟；操作方便、省時省力、能夠快速滅菌、利于生物制品的生產，便于監(jiān)控檢測，便于研究細胞代謝、物理、化學、生物因素的影響，顯著提高研究工作效率。
文檔編號C12M3/00GK203159624SQ20122074529
公開日2013年8月28日 申請日期2012年12月31日 優(yōu)先權日2012年12月31日
發(fā)明者黃盼華 申請人:上?；惿镝t(yī)藥科技有限公司