一種天蠶素抗菌肽生產(chǎn)工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種天蠶素抗菌肽生產(chǎn)工藝，它的步驟如下：（1）攜帶天蠶素抗菌肽的枯草芽孢桿菌基因工程菌復(fù)壯：從-70℃冰箱取出凍干粉保存的攜帶天蠶素抗菌肽的枯草芽孢桿菌種，以斜面培養(yǎng)方式復(fù)活菌種，接種于斜面培養(yǎng)基上，在斜面生長條件下生長；（2）種子培養(yǎng)與擴(kuò)大：將斜面上活化好的菌種接種于250ml的錐形瓶上，裝30ml搖瓶培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)條件下培養(yǎng)；（3）枯草芽孢桿菌的發(fā)酵。本發(fā)明工藝簡單，使生產(chǎn)天蠶素抗菌膚的工藝流程縮短，簡便，節(jié)約耗料量40%以上，大大降低了原材料的消耗，節(jié)約了成本。
【專利說明】一種天蠶素抗菌肽生產(chǎn)工藝
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種天蠶素抗菌肽生產(chǎn)工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]天蠶素(cecropins)是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的動(dòng)物抗菌肽，1980年，由Boman等從天蠶蛹中分離得到。該類多肽抗生素一般含有37~39個(gè)氨基酸殘基，不含半胱氨酸，其N端區(qū)域具有強(qiáng)堿性，可形成近乎完美的雙親螺旋結(jié)構(gòu)，而在C端區(qū)域可形成疏水螺旋，兩者之間有甘氨酸和脯氨酸形成的鉸鏈區(qū)，多數(shù)多肽的C端被酰胺化，酰胺化對(duì)其抗菌活性具有重要作用。
[0003]此后，人們相繼從家蠶、昨蠶、果蠅、麻蠅中分離到了 cecropins類抗菌肽。1989年,Lee等人從豬小腸中分高到了 cecropin Pl,說明了 cecropins可能在動(dòng)物中廣泛存在。天蠶素(cecropins)對(duì)革蘭氏陽性菌、部分革蘭氏陰性菌具有很強(qiáng)的殺傷力，而對(duì)真菌和真核細(xì)胞沒有毒性。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種天蠶素抗菌肽生產(chǎn)工藝。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種天蠶素抗菌肽生產(chǎn)工藝，它的步驟如下:
(O攜帶天蠶素抗菌肽的枯草芽孢桿菌基因工程菌復(fù)壯:從-70°C冰箱取出凍干粉保存的攜帶天蠶素抗菌肽的枯草芽孢桿菌種，以斜面培養(yǎng)方式復(fù)活菌種，接種于斜面培養(yǎng)基上，在斜面生長條件下生長；
(2)種子培養(yǎng)與擴(kuò)大:將斜面上活化好的菌種接種于250ml的錐形瓶上，裝30 ml搖瓶培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)條件下培養(yǎng)；
(3)枯草芽孢桿菌的發(fā)酵:從種子培養(yǎng)到最后30M3發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)需要3級(jí)種子擴(kuò)大，一級(jí)種子擴(kuò)大:將搖瓶培養(yǎng)好的種子按1:100分別擴(kuò)大于3個(gè)500 ml的錐形瓶，裝50 ml種子培養(yǎng)基，種子培養(yǎng)條件下培養(yǎng)；二級(jí)種子擴(kuò)大:將一級(jí)種子擴(kuò)大的種子按1:100比例擴(kuò)大于30 L種子發(fā)酵罐，裝15 L種子培養(yǎng)基，種子培養(yǎng)條件下培養(yǎng)；三級(jí)種子擴(kuò)大:將二級(jí)擴(kuò)大的種子按1:100擴(kuò)大于3 M3種子發(fā)酵罐,裝1.5 M3種子培養(yǎng)基,種子培養(yǎng)條件下培養(yǎng),將二級(jí)種子擴(kuò)大培養(yǎng)好的種子按1:20接種于30M3發(fā)酵罐，裝21M3發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。
[0006]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明工藝簡單，使生產(chǎn)天蠶素抗菌膚的工藝流程縮短，簡便，節(jié)約耗料量40%以上，大大降低了原材料的消耗，節(jié)約了成本。
【具體實(shí)施方式】
[0007]—種天蠶素抗菌肽生產(chǎn)工藝，它的步驟如下:
(O攜帶天蠶素抗菌肽的枯草芽孢桿菌基因工程菌復(fù)壯:從_7(TC冰箱取出凍干粉保存的攜帶天蠶素抗菌肽的枯草芽孢桿菌種，以斜面培養(yǎng)方式復(fù)活菌種，接種于斜面培養(yǎng)基上，在斜面生長條件下生長；
(2)種子培養(yǎng)與擴(kuò)大:將斜面上活化好的菌種接種于250ml的錐形瓶上，裝30 ml搖瓶培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)條件下培養(yǎng)；
(3)枯草芽孢桿菌的發(fā)酵:從種子培養(yǎng)到最后30M3發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)需要3級(jí)種子擴(kuò)大，一級(jí)種子擴(kuò)大:將搖瓶培養(yǎng)好的種子按1:100分別擴(kuò)大于3個(gè)500 ml的錐形瓶，裝50 ml種子培養(yǎng)基，種子培養(yǎng)條件下培養(yǎng)；二級(jí)種子擴(kuò)大:將一級(jí)種子擴(kuò)大的種子按1:100比例擴(kuò)大于30 L種子發(fā)酵罐，裝15 L種子培養(yǎng)基，種子培養(yǎng)條件下培養(yǎng)；三級(jí)種子擴(kuò)大:將二級(jí)擴(kuò)大的種子按1:100擴(kuò)大于3 M3種子發(fā)酵罐,裝1.5 M3種子培養(yǎng)基,種子培養(yǎng)條件下培養(yǎng),將二級(jí)種子擴(kuò)大培養(yǎng)好的種子按1:20接種于30M3發(fā)酵罐，裝21M3發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。`
【權(quán)利要求】
1.一種天蠶素抗菌肽生產(chǎn)工藝，其特征在于，它的步驟如下: (O攜帶天蠶素抗菌肽的枯草芽孢桿菌基因工程菌復(fù)壯:從-70°C冰箱取出凍干粉保存的攜帶天蠶素抗菌肽的枯草芽孢桿菌種，以斜面培養(yǎng)方式復(fù)活菌種，接種于斜面培養(yǎng)基上，在斜面生長條件下生長； (2)種子培養(yǎng)與擴(kuò)大:將斜面上活化好的菌種接種于250ml的錐形瓶上，裝30 ml搖瓶培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)條件下培養(yǎng)； (3)枯草芽孢桿菌的發(fā)酵:從種子培養(yǎng)到最后30M3發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)需要3級(jí)種子擴(kuò)大，一級(jí)種子擴(kuò)大:將搖瓶培養(yǎng)好的種子按1:100分別擴(kuò)大于3個(gè)500 ml的錐形瓶，裝50 ml種子培養(yǎng)基，種子培養(yǎng)條件下培養(yǎng)；二級(jí)種子擴(kuò)大:將一級(jí)種子擴(kuò)大的種子按1:100比例擴(kuò)大于30 L種子發(fā)酵罐，裝15 L種子培養(yǎng)基，種子培養(yǎng)條件下培養(yǎng)；三級(jí)種子擴(kuò)大:將二級(jí)擴(kuò)大的種子按1:100擴(kuò)大于3 M3種子發(fā)酵罐,裝1.5 M3種子培養(yǎng)基,種子培養(yǎng)條件下培養(yǎng),將二級(jí)種子擴(kuò)大培養(yǎng)好的種子按1:20接種于30M3發(fā)酵罐，裝21M3發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)條件下培養(yǎng) 。
【文檔編號(hào)】C12P21/00GK103849667SQ201210502586
【公開日】2014年6月11日 申請(qǐng)日期:2012年11月30日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月30日
【發(fā)明者】郭文江 申請(qǐng)人:中農(nóng)穎泰林州生物科園有限公司