亚洲成年人黄色一级片,日本香港三级亚洲三级,黄色成人小视频,国产青草视频,国产一区二区久久精品,91在线免费公开视频,成年轻人网站色直接看

一種無色素普魯蘭多糖的發(fā)酵生產方法

文檔序號:508250閱讀:428來源:國知局
一種無色素普魯蘭多糖的發(fā)酵生產方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種無色素普魯蘭多糖的發(fā)酵生產方法,其特點在于在發(fā)酵過程中添加微量復合氨基酸,氨基酸的添加量為0-0.5%,使發(fā)酵液色素含量低,發(fā)酵周期僅為50-55h,后續(xù)處理工藝簡單,生產出的普魯蘭多糖無色素,品質好。本方法的實施步驟如下:1)制備種子培養(yǎng)基;2)制備發(fā)酵培養(yǎng)基;3)將液體種子接入到一級種子罐,接種量為3-5%,發(fā)酵培養(yǎng)24h,轉入二級種子罐中培養(yǎng)12h,將種子培養(yǎng)基轉入所述發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng),控制發(fā)酵溫度為29℃±1℃,罐壓為0.08MPa,初始pH為6.5-6.7,發(fā)酵培養(yǎng)50-55h;4)將上述發(fā)酵液經過濾,酒精沉淀,干燥得到無色素的普魯蘭多糖。
【專利說明】一種無色素普魯蘭多糖的發(fā)酵生產方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種微生物發(fā)酵生產生物多糖的方法,更具體的說是普魯蘭多糖的發(fā)酵方法,屬于生物工程領域。
【背景技術】
[0002]普魯蘭多糖(Pullulan)又稱短梗霉多糖,是出芽短梗霉的發(fā)酵產物,是一種水溶性的細胞外中性大分子多糖。早在1936年人們就發(fā)現(xiàn)了普魯蘭多糖,1958年Bernier再次從發(fā)酵液中發(fā)現(xiàn)該多糖,次年Bender等人將之命名為短梗霉多糖。到二十世紀六十年代,人們開始對其發(fā)酵、提取和應用等方面進行研究,1978年日本林原公司實現(xiàn)了工業(yè)化生產普魯蘭多糖。普魯蘭多糖是一種以麥芽三糖為單元,以α-1,6鍵重復連接而成的線狀高分子多糖,分子量一般在5.0X 104-5.0X 106dol.之間,它無色無味,無毒無害,對人體無任何副作用。并具有極佳的成膜性、氧氣不滲透性、成纖維性、可塑性、粘結性和易自然降解等許多獨特的物理化學和生物學特性,故可以被廣泛的應用到醫(yī)藥制造業(yè)、食品工業(yè)、化妝品工業(yè)和農業(yè)等多個領域,是一種具有極大的應用價值和巨大開發(fā)潛力的多功能新型生物產品。目前,國內外用于普魯蘭生產的菌種均為出芽短梗霉,以蔗糖、葡萄糖等多種小分子糖類及可溶性淀粉做碳源,以酵母膏、玉米漿為有機氮源,進行發(fā)酵;下游處理時目前的普遍采用的方法為:發(fā)酵液稀釋、離心、脫色、濃縮、酒精沉淀或者噴霧干燥。發(fā)酵時間一般在120-153小時,耗時比較長,得率低;發(fā)酵液為深褐色,含有的色素較多且難以除掉,使產品最終呈現(xiàn)不正常的顏色,影響產品品質;在下游處理時工序太多,耗費大量的酒精,且需要重復提純、溶解、沉 降以除去雜質,相應地會延長生產周期,產品的損失量較大,使得生產成本大大增加。
[0003]因此,研究出一種節(jié)能高效的生產高品質無色素的普魯蘭多糖的發(fā)酵方法是該領域科研人員急待解決的問題。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的目的在于克服上述不足之處,提供一種有效提高產品質量、工藝簡單的無色素普魯蘭多糖的發(fā)酵方法以解決生產和應用的問題。
[0005]為實現(xiàn)上述目的,本發(fā)明通過下述步驟予以實現(xiàn):
O制備種子培養(yǎng)基,其水溶液組成為(g/L):蔗糖40.0-60.0,氯化鈉1.0-2.0,硫酸鎂
0.1-0.4,磷酸氫二鉀 5.0-8.0,硫酸銨 0.5-1.0,酵母膏 2.0-5.0,調 pH 為 6.5-6.7 之間,121°C 滅菌 20min ;
2)取一環(huán)出芽短梗霉菌種接入在上述種子培養(yǎng)基中,經一級種子、二級種子種子罐逐步擴大培養(yǎng)后,作為液體種子;
3)制備發(fā)酵初始培養(yǎng)基,其水溶液組成為(g/L):蔗糖100.0-150.0,氯化鈉1.0-2.0,硫酸鎂0.5-1.0,磷酸氫二鉀5.0-8.0,硫酸銨1.0-2.0,復合氨基酸0_5.0,酵母膏
2.0-5.0,,消泡劑 0.3-0.5,調 pH 到 6.5-6.7 之間,121°C滅菌 20min ;4)將上述液體種子接入所述發(fā)酵培養(yǎng)基中,接種量為3%-5%,控制發(fā)酵溫度為29 0C ±1°C,發(fā)酵培養(yǎng) 50-55h ;
5)將上述發(fā)酵液過濾,酒精沉淀,干燥得到白色的普魯蘭多糖。
[0006]本發(fā)明的有益效果是:在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加了不同組成的復合氨基酸作為添加氮源,使得菌種在此條件下發(fā)酵的發(fā)酵液顏色淺,產量高,且發(fā)酵周期為50-55h,時間明顯縮短,后期處理工序簡單,使得生產更高效并節(jié)省了能源。在此條件下生產的普魯蘭多糖,顏色潔白,收率高。
【具體實施方式】
[0007]以下結合較佳實施例,【具體實施方式】詳述如下。
[0008]對照例
1)制備種子培養(yǎng)基,其水溶液組成為(g/L):蔗糖40.0,氯化鈉1.0,硫酸鎂0.2,磷酸氫二鉀6.0,硫酸銨1.0,酵母膏4.0,調Ph到6.5,121°C滅菌20min ;
2)取一環(huán)出芽短梗霉菌種接入在上述種子培養(yǎng)基中,經一級種子、二級種子種子罐逐步擴大培養(yǎng)后,作為液體種子;
3)制備發(fā)酵初始培養(yǎng)基,其水溶液組成為(g/L):蔗糖100.0,氯化鈉1.0,硫酸鎂0.2,磷酸氫二鉀6.0,硫酸銨1.06,酵母膏2.0,調PH到6.5之間,121。。滅菌20min ;
4)將上述液體種子接入所述發(fā)酵培養(yǎng)基中,接種量為3%,控制發(fā)酵溫度為29°C,發(fā)酵培養(yǎng)74h,發(fā)酵結束發(fā)酵液中多糖含量為64g/L ;
5)將上述發(fā)酵液過濾,酒精沉淀,干燥得到分子量為15萬道爾頓的普魯蘭多糖,產品為淺黃色粉末,白度為58.9%,溶解后黃色透明。
[0009]比較例I
1)制備種子培養(yǎng)基,其水溶液組成為(g/L):蔗糖40.0,氯化鈉1.0,硫酸鎂0.2,磷酸氫二鉀6.0,硫酸銨1.0,酵母膏4.0,調PH到6.5,121°C滅菌20min ;
2)取一環(huán)出芽短梗霉菌種接入在上述種子培養(yǎng)基中,經一級種子、二級種子種子罐逐步擴大培養(yǎng)后,作為液體種子;
3)制備發(fā)酵初始培養(yǎng)基,其水溶液組成為(g/L):蔗糖100.0,氯化鈉1.0,硫酸鎂0.2,磷酸氫二鉀6.0,硫酸銨1.06,谷氨酸0.6,纈氨酸0.4,絡氨酸0.3,絲氨酸0.4,酵母膏2.0,,調 PH 到 6.5 之間,121°C滅菌 20min ;
4)將上述液體種子接入所述發(fā)酵培養(yǎng)基中,接種量為3%,控制發(fā)酵溫度為29°C,發(fā)酵培養(yǎng)51h,發(fā)酵結束發(fā)酵液中多糖含量為74g/L ;
5)將上述發(fā)酵液過濾,酒精沉淀,干燥得到分子量為18萬道爾頓的普魯蘭多糖,產品為白色粉末,白度達98.9%,溶解后無色透明。
[0010]比較例2
1)制備種子培養(yǎng)基,其水溶液組成為(g/L):蔗糖50.0,氯化鈉1.5,硫酸鎂0.3,磷酸氫二鉀7.0,硫酸銨0.8,酵母膏5.0,調PH到6.5之間,121。。滅菌20min ;
2)取一環(huán)出芽短梗霉菌種接入在上述種子培養(yǎng)基中,經一級種子、二級種子種子罐逐步擴大培養(yǎng)后,作為液體種子;
3)制備發(fā)酵初始培養(yǎng)基,其水溶液組成為(g/L):蔗糖120.0,氯化鈉1.5,硫酸鎂0.3,磷酸氫二鉀7.0,硫酸銨0.8,谷氨酸0.1,蛋氨酸0.8,賴氨酸0.7,天冬氨酸0.8,酵母膏3.0,調 PH 到 6.5 之間,121°C滅菌 20min ;
4)將上述液體種子接入所述發(fā)酵培養(yǎng)基中,接種量為3%,控制發(fā)酵溫度為29°C,發(fā)酵培養(yǎng)54h,發(fā)酵結束發(fā)酵液中多糖含量為82g/L ;
5)將上述發(fā)酵液過濾,酒精沉淀,干燥得到分子量為14萬道爾頓的普魯蘭多糖,產品為白色粉末,白度達98.5%,溶解后無色透明。
[0011]比較例3
1)制備種子培養(yǎng)基,其水溶液組成為(g/L):蔗糖5.0,氯化鈉1.5,硫酸鎂0.3,磷酸氫二鉀6.0,硫酸銨0.8,酵母膏3.0,調PH到6.7,121°C滅菌20min ;
2)取一環(huán)出芽短梗霉菌種接入在上述種子培養(yǎng)基中,經一級種子、二級種子種子罐逐步擴大培養(yǎng)后,作為液體種子;
3)制備發(fā)酵初始培養(yǎng)基,其水溶液組成為(g/L):蔗糖150.0,氯化鈉2.0,硫酸鎂0.3,磷酸氫二鉀6.0,硫酸銨1.5,谷氨酸0.8,色氨酸0.5,丙氨酸0.5,胱氨酸0.5,酵母膏2.0,調 PH 到 6.5,121°C 滅菌 20min ;
4)將上述液體種子接入所述發(fā)酵培養(yǎng)基中,接種量為5%,控制發(fā)酵溫度為29°C,發(fā)酵培養(yǎng)58h,發(fā)酵結束發(fā)酵液中多糖含量為112g/L ;
5)將上述發(fā)酵液過濾,酒精沉淀,干燥得到分子量為14萬道爾頓之間的普魯蘭多糖,產品為白色粉末,白度達99.3%,溶解后無色透明。
【權利要求】
1.一種無色素普魯蘭多糖的發(fā)酵生產方法,包括出芽短梗霉的發(fā)酵培養(yǎng)和普魯蘭多糖的分離純化,其特征在于在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加微量復合氨基酸,發(fā)酵培養(yǎng)50-55h后,進行發(fā)酵液后處理提取純化普魯蘭多糖。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種無色素普魯蘭多糖的發(fā)酵生產方法,其特征在于:詳細的步驟如下: (1)制備液體種子培養(yǎng)基,將出芽短梗霉菌種接到上述種子培養(yǎng)基,經一級、二級種子iil逐步擴大培養(yǎng)后,作為液體種子; (2)制備發(fā)酵培養(yǎng)基,調pH到6.5-6.7之間,121。。滅菌20min ; (3)將(I)所述液體種子接入到(2)所述發(fā)酵培養(yǎng)基中,接種量為3%-5%,控制發(fā)酵溫度為 29°C ± 1°C,罐壓為 0.08MPa,初始 pH 為 6.5-6.7,發(fā)酵培養(yǎng) 50_55h ; (4)將上述發(fā)酵液經過濾除菌,酒精沉淀,干燥得到無色素的普魯蘭多糖。
3.根據(jù)權利要求1、2所述的一種無色素普魯蘭多糖的發(fā)酵生產方法,其特征在于:種子培養(yǎng)基組成成分為(g/L):蔗糖40.0-60.0,氯化鈉1.0-2.0,硫酸鎂0.1-0.4,磷酸氫二鉀5.0-8.0,硫酸銨 0.5-1.0,酵母膏 2.0-5.0, pH 為 6.5-6.7 之間。
4.根據(jù)權利要求1、2所述的一種無色素普魯蘭多糖的發(fā)酵生產方法,其特征在于:發(fā)酵培養(yǎng)基組成成分為(g/L):蔗糖100.0-150.0,氯化鈉1.0-2.0,硫酸鎂0.5-1.0,磷酸氫二鉀5.0-8.0,硫酸銨1.0-2.0,復合氨基酸0-5.0,酵母膏2.0-5.0。
5.根據(jù)權利要求 1、4所述的一種無色素普魯蘭多糖的生產方法,其特征在于:發(fā)酵培養(yǎng)基中的復合氨基酸為蛋氨酸、絡氨酸、丙氨酸、絲氨酸、色氨酸、胱氨酸、賴氨酸、天冬氨酸、纈氨酸、絲氨酸、谷氨酸、精氨酸中的一種或幾種,每種氨基酸的濃度為0-0.5%。
【文檔編號】C12P19/04GK103805650SQ201210443725
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2012年11月9日 優(yōu)先權日:2012年11月9日
【發(fā)明者】王林, 朱希強, 蘇移山, 朱云峰, 李偉, 凌沛學 申請人:山東福瑞達生物科技有限公司
網友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
1