專利名稱：一株降解大豆主要過敏原的芽孢桿菌及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一株芽孢桿菌及其應用，特別是一株能降解大豆主要過敏原Gly m Bd60K芽孢桿菌及其應用。
背景技術：
目前，90%以上的過敏反應是蛋、魚、貝殼、奶、花生、大豆、堅果和小麥八類食物引起的。根據(jù)估計全世界人口將近有O. 5%對大豆過敏，大豆繼牛奶、雞蛋、花生后，是第四種導致幼兒過敏的常見致敏食物。上述八大致敏原中，大豆是我國種植最廣且消費最多的植物蛋白，這是由其營養(yǎng)性及其在食品加工過程中的功能性所決定的。我國是大豆的故鄉(xiāng)，各類大豆制品也是中國的主要營養(yǎng)來源。而且隨著中國加入WT0，人們生活水平的提高，食品エ業(yè)的發(fā)展也必將與國際接軌，這就需要我們必須重視食品中蛋白質的過敏問題，規(guī)范產(chǎn)品標簽，同時研究開發(fā)低致敏性食品?！?br> 大豆蛋白中較為突出的3種致敏蛋白分別為Gly m Bd 30K、Gly m Bd 28K、Glym Bd60K。Gly m Bd 60K即是β-伴大豆球蛋白的α-亞基。它能被25%的對大豆敏感的過敏性皮炎患者的血清識別。大豆β -伴大豆球蛋白約占大豆籽粒總蛋白含量的25%，是影響大豆籽粒蛋白營養(yǎng)品質及加工品質的重要組分。大豆伴大豆球蛋白由α ’ _(76kDa)，a-(72kDa)和β -(52 54kDa)亞基組成的分子量為150kDa的三聚體化合物。α -亞基與α ’ -亞基和β-亞基在氨基酸序列上有高度的同源性，其中α亞基與α ’亞基的相似性更是超過90%。他們都是潛在的過敏原。大豆所含的致敏蛋白是限制大豆在食品和飼料加工中廣泛利用的關鍵因素，因此，能降低、去除大豆致敏蛋白就成為提高大豆蛋白品質，是保障大豆制品在人類食品和畜禽飼料中安全與高效利用的關鍵性問題。

發(fā)明內容
本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種降解大豆主要過敏原Gly m Bd 60K的芽孢桿菌BBE201108，篩選自預制備豆制品原料(大豆粉糟)，其分類學命名為芽孢桿菌Bacillussp.BBE201108，于2012年5月14日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO :M2012165，保藏地址中國武漢、武漢大學。16SrDNA結果鑒定其為芽孢桿菌。所述芽孢桿菌能夠降解大豆分離蛋白的菌株。所述芽孢桿菌應用于降解大豆蛋白主要過敏原也是本發(fā)明要求保護的范圍。降解過敏原的方案為將菌株發(fā)酵上清應用于含1%大豆分離蛋白O. IM pH 8. OPB緩沖液，經(jīng)SDS-PAGE檢驗，能夠有效的降解大豆蛋白主要過敏原Gly m Bd 60K。本發(fā)明提供的芽孢桿菌BBE201108發(fā)酵24小時后蛋白酶活最高可達10. 5U/mL，收集發(fā)酵上清液，能在Omin到2h時間段內降解大豆蛋白主要過敏原Gly m Bd 60K。


圖I芽孢桿菌BBE201108在大豆分離蛋白培養(yǎng)基上產(chǎn)生透明圈(大豆分離蛋白培養(yǎng)基組成為大豆分離蛋白3. 5%，氯化鈉1%,瓊脂2%)圖2定時取發(fā)酵液上清進行SDS-PAGE圖(I泳道標準分子量蛋白；2泳道SPI-PB液未添加發(fā)酵上清液；3、泳道=SPI-PB液添加發(fā)酵上清液，酶解反應時間依次為 2h、lh、50min、40min、30min、20min、IOmin0 )
具體實施例方式實施例I 一株降解大豆主要過敏原Gly m Bd 60K芽孢桿菌的定性初篩方法(一)樣品來源
采樣來源為預制備豆制品的原料(大豆粉糟)(ニ)培養(yǎng)方法取采樣所得大豆粉糟IOg,加入90mL的無菌生理鹽水,搖床(200rpm)震蕩2h。(三)定性初篩采用大豆分離蛋白平板法。組成如下大豆分離蛋白3. 5%，氯化鈉1%，瓊脂2%。將富集培養(yǎng)后的懸液稀釋至不同的梯度10' 10_2、10' 10_4、10_5、10_6、10'涂布大豆分離蛋白平板，37°C培養(yǎng)2天，挑取能產(chǎn)生透明圈的單菌落。效果如圖I實施例2酶活測定(一)酪氨酸標準曲線的繪制按下表配制各種不同濃度的酪氨酸溶液。表I配制各種不同濃度的酪氨酸溶液
權利要求
1.一株降解大豆主要過敏原的芽孢桿菌，于2012年5月14日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:M 2012165。
2.權利要求I所述的芽孢桿菌，其特征在于篩選自預制備豆制品原料。
3.權利要求I所述的芽孢桿菌應用于篩選能夠降解大豆分離蛋白的菌株。
4.權利要求I所述的芽孢桿菌應用于降解大豆蛋白主要過敏原Glym Bd 60K。
5.根據(jù)權利要求4所述的應用，其特征在于該菌株發(fā)酵上清應用于含1%大豆分離蛋白0. IM pH 8. OPB緩沖液，經(jīng)SDS-PAGE檢驗，能夠有效的降解大豆蛋白主要過敏原Gly mBd60K。
全文摘要
本發(fā)明公開了一株降解大豆主要過敏原的芽孢桿菌，本發(fā)明的降解菌Bacillus sp.BBE201108是從預制備豆制品原料(大豆粉糟)中篩選所得。其篩選步驟為微生物的富集，微生物的分離，透明圈法，SDS-PAGE驗證，得到一株降解性能較好的菌株。該菌株能有效降解大豆主要過敏原Gly m Bd 60K。因此，能在一定程度上降低大豆蛋白致敏性，為保障大豆制品在人類食品和畜禽飼料中安全與高效利用提供參考。
文檔編號A23L1/211GK102827788SQ201210193348
公開日2012年12月19日 申請日期2012年6月13日 優(yōu)先權日2012年6月13日
發(fā)明者陳堅, 張娟, 朱婷, 堵國成, 談銘 申請人:江南大學