專利名稱：一種利用蝦殼制備抗氧化肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用蝦殼制備抗氧化肽的方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
隨著科學(xué)研究的發(fā)展，尤其是自由基理論的提出，人類對(duì)于機(jī)體的衰老有了更加 深入的了解，認(rèn)識(shí)到自由基過(guò)量不僅能夠?qū)е聶C(jī)體老化，而且還會(huì)導(dǎo)致多種疾病。利用抗氧化物質(zhì)來(lái)消除自由基，可以延緩衰老，增強(qiáng)免疫力，預(yù)防疾病的發(fā)生。因此，抗氧化物質(zhì)近年來(lái)已成各國(guó)科研人員研究的熱點(diǎn)?？寡趸氖强寡趸镔|(zhì)中一大門類，通常把具有抑制生物大分子過(guò)氧化或清除體內(nèi)自由及功能的生物活性肽成為抗氧化肽?？寡趸囊苑腔钚誀顟B(tài)存在于蛋白質(zhì)長(zhǎng)鏈中，采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄋ獾鞍踪|(zhì)可以得到這些寡肽，而且它們具有原蛋白質(zhì)或組成氨基酸所沒(méi)有的功能，與機(jī)體的代謝調(diào)節(jié)、免疫、內(nèi)分泌、衰老等有著十分密切的關(guān)系，在生命活動(dòng)中起著非常重要的作用。近些年來(lái)，隨著人們對(duì)合成抗氧化劑安全問(wèn)題的日益重視，天然抗氧化肽因?yàn)槠漭^強(qiáng)的抗氧化性和高安全性，正受到越來(lái)越多的關(guān)注。國(guó)內(nèi)外對(duì)天然抗氧化肽進(jìn)行了大量研究，已有多種保健產(chǎn)品和藥物推向市場(chǎng)，市場(chǎng)前景十分可觀?？寡趸闹饕傻鞍踪|(zhì)經(jīng)蛋白酶水解產(chǎn)生，采用的蛋白質(zhì)種類很多，其中主要是陸地蛋白質(zhì)資源，包括等大米蛋白、玉米蛋白、乳清蛋白、酪蛋白等。此外，從海洋生物中提取蛋白制備抗氧化肽也越來(lái)越受到人們的關(guān)注，例如利用地鱉、扇貝、鯊魚皮等制備抗氧化肽。對(duì)蝦養(yǎng)殖是我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖中一個(gè)很重要的領(lǐng)域。在對(duì)蝦加工過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的蝦頭和蝦殼下腳料，占整個(gè)蝦重量的30% 40%，其中大部分沒(méi)有被充分利用，這樣既造成浪費(fèi)，又污染了環(huán)境，因而對(duì)于蝦類加工副產(chǎn)物的綜合利用顯得十分迫切。蝦殼中富含多種營(yíng)養(yǎng)成分，幾丁質(zhì)含量為10% 20%，蛋白質(zhì)含量為20% 40%?，F(xiàn)有的蝦殼綜合利用研究主要集中在分離提取甲殼素、殼聚糖、蝦青素等活性物質(zhì)，而蝦殼中的蛋白質(zhì)資源尚未得到充分利用。國(guó)內(nèi)關(guān)于利用蛋白酶水解蝦殼制取抗氧化肽的研究未見(jiàn)報(bào)道。來(lái)自蝦殼的抗氧化肽，安全性高，無(wú)毒副作用。利用蝦殼開發(fā)具有清除自由基、延緩衰老作用的抗氧化肽具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種利用蝦殼制備抗氧化肽的方法，該制備方法工藝簡(jiǎn)單、反應(yīng)溫度低，以蝦類產(chǎn)品加工的副產(chǎn)物蝦殼為原料，成本低廉，在避免對(duì)環(huán)境污染的同時(shí)，加強(qiáng)了對(duì)蝦殼中蛋白質(zhì)資源的綜合利用，制得的抗氧化肽安全性高，無(wú)毒副作用，清除自由基能力強(qiáng)，具有很好的保健功效。一種利用蝦殼制備抗氧化肽的方法的步驟如下
A)將蝦殼清洗除雜，在40 60°C下烘干20 26小時(shí)，用粉碎機(jī)磨粉，過(guò)40 100目篩，制成蝦殼粉，然后加水配制成質(zhì)量百分比為4 8%的蝦殼粉溶液；B)將蝦殼粉溶液的pH調(diào)節(jié)到8.O 12. O，然后加入蛋白酶1000 5000U/g，在20 80°C水浴中水解I 4小時(shí)，水解在攪拌狀態(tài)下進(jìn)行，并保持溫度和pH恒定，得到蝦殼蛋白水解液；
C)將蝦殼蛋白水解液于85 100°C水浴滅活蛋白酶10 20分鐘，冷卻至室溫后，在2000 6000r/min轉(zhuǎn)速下離心10 20分鐘，取上清液，用截留分子量< IOOOODa的超濾膜進(jìn)行超濾，得到蝦殼多肽超濾液；
D)將蝦殼多肽超濾液進(jìn)行減壓 蒸發(fā)濃縮和真空冷凍干燥，得到蝦殼抗氧化肽產(chǎn)品。所述的蛋白酶為堿性蛋白酶。另一種利用蝦殼制備抗氧化肽的方法的步驟如下
A)將蝦殼清洗除雜，在50°C下烘干24小時(shí)，用粉碎機(jī)磨粉，過(guò)60目篩，制成蝦殼粉，然后加水配制成質(zhì)量百分比為6. 5%的蝦殼粉溶液；
B)將蝦殼粉溶液的pH調(diào)節(jié)到10，然后加入堿性蛋白酶3500U/g，在50°C水浴中水解2. 5小時(shí)，水解在攪拌狀態(tài)下進(jìn)行，并保持溫度和pH恒定，得到蝦殼蛋白水解液；
C)將蝦殼蛋白水解液于95°C水浴滅活堿性蛋白酶15分鐘，冷卻至室溫后，在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心15分鐘，取上清液，用截留分子量為5000Da的超濾膜進(jìn)行超濾，得到蝦殼多肽超濾液；
D)將蝦殼多肽超濾液進(jìn)行減壓蒸發(fā)濃縮和真空冷凍干燥，得到蝦殼抗氧化肽產(chǎn)品。本發(fā)明制備的具有清除自由基功能的抗氧化肽分子量較低，極易被人體吸收和利用，活性比較穩(wěn)定，能夠有效地延緩衰老，提高免疫力，在保健產(chǎn)品領(lǐng)域有著廣闊的市場(chǎng)前
旦
O同現(xiàn)有的抗氧化劑比較，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1)制備方法簡(jiǎn)單，原料豐富易得，所用蝦殼為蝦類加工的副產(chǎn)物，成本低廉，增加了蝦類產(chǎn)品的附加值，并且避免了對(duì)環(huán)境造成污染；2)制得的抗氧化肽分子量較低，可快速進(jìn)入血液循環(huán)被人體吸收和利用，活性穩(wěn)定；3)產(chǎn)品抗氧化效果好，清除自由基能力強(qiáng)，能有效延緩衰老，增強(qiáng)人體免疫力；4)抗氧化肽是采用食用級(jí)酶在溫和條件下獲得的，安全性高，無(wú)毒副作用，為食品、化妝品、醫(yī)藥等行業(yè)提供優(yōu)質(zhì)的抗氧化肽。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :
A)將蝦殼清洗除雜，在40°C下烘干20小時(shí)，用粉碎機(jī)磨粉，過(guò)40目篩，制成蝦殼粉，然后加水配制成質(zhì)量百分比為6. 5%的蝦殼粉溶液；
B)將蝦殼粉溶液的pH調(diào)節(jié)到11.0，然后加入蛋白酶3500U/g，在55°C水浴中水解I小時(shí)，水解在攪拌狀態(tài)下進(jìn)行，并保持溫度和PH恒定，得到蝦殼蛋白水解液；
C)將蝦殼蛋白水解液于85°C水浴滅活蛋白酶10分鐘，冷卻至室溫后，在3000r/min轉(zhuǎn)速下離心10分鐘，取上清液，用截留分子量5000Da的超濾膜進(jìn)行超濾，得到蝦殼多肽超濾液；
D)將蝦殼多肽超濾液進(jìn)行減壓蒸發(fā)濃縮和真空冷凍干燥，得到蝦殼抗氧化肽產(chǎn)品。通過(guò)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，所制得的蝦殼多肽超濾液中多肽含量可達(dá)0. 646mg/mL, FRAP還原能力為 I. 379nmol/mL。
實(shí)施例2
A)將蝦殼清洗除雜，在60°C下烘干26小時(shí)，用粉碎機(jī)磨粉，過(guò)100目篩，制成蝦殼粉，然后加水配制成質(zhì)量百分比為6%的蝦殼粉溶液；
B)將蝦殼粉溶液的pH調(diào)節(jié)到10.5，然后加入蛋白酶3500U/g，在50°C水浴中水解4小時(shí)，水解在攪拌狀態(tài)下進(jìn)行，并保持溫度和PH恒定，得到蝦殼蛋白水解液；
C)將蝦殼蛋白水解液于100°C水浴滅活蛋白酶20分鐘，冷卻至室溫后，在6000r/min轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，取上清液，用截留分子量5000Da的超濾膜進(jìn)行超濾，得到蝦殼多肽超濾液；
D)將蝦殼多肽超濾液進(jìn)行減壓蒸發(fā)濃縮和真空冷凍干燥，得到蝦殼抗氧化肽產(chǎn)品。通過(guò)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，所制得的蝦殼多肽超濾液中多肽含量可達(dá)0. 692mg/mL, FRAP還原能力為 I. 315nmol/mL。實(shí)施例3:
A)將蝦殼清洗除雜，在50°C下烘干24小時(shí)，用粉碎機(jī)磨粉，過(guò)60目篩，制成蝦殼粉，然后加水配制成質(zhì)量百分比為6. 5%的蝦殼粉溶液；
B)將蝦殼粉溶液的pH調(diào)節(jié)到10，然后加入堿性蛋白酶4500U/g，在50°C水浴中水解
2.5小時(shí)，水解在攪拌狀態(tài)下進(jìn)行，并保持溫度和pH恒定，得到蝦殼蛋白水解液；
C)將蝦殼蛋白水解液于95°C水浴滅活堿性蛋白酶15分鐘，冷卻至室溫后，在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心15分鐘，取上清液，用截留分子量為5000Da的超濾膜進(jìn)行超濾，得到蝦殼多肽超濾液；
D)將蝦殼多肽超濾液進(jìn)行減壓蒸發(fā)濃縮和真空冷凍干燥，得到蝦殼抗氧化肽產(chǎn)品。通過(guò)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，所制得的蝦殼多肽超濾液中多肽含量可達(dá)0. 699mg/mL, FRAP還原 能力為 I. 419nmol/mL。
權(quán)利要求
1.ー種利用蝦殼制備抗氧化肽的方法，其特征在于它的步驟如下 A)將蝦殼清洗除雜，在40 60°C下烘干20 26小時(shí)，用粉碎機(jī)磨粉，過(guò)40 100目篩，制成蝦殼粉，然后加水配制成質(zhì)量百分比為4 8%的蝦殼粉溶液； B)將蝦殼粉溶液的pH調(diào)節(jié)到8.O 12. 0，然后加入蛋白酶1000 5000U/g，在20 80°C水浴中水解I 4小時(shí)，水解在攪拌狀態(tài)下進(jìn)行，并保持溫度和pH恒定，得到蝦殼蛋白水解液； C)將蝦殼蛋白水解液于85 100°C水浴滅活蛋白酶10 20分鐘，冷卻至室溫后，在2000 6000r/min轉(zhuǎn)速下離心10 20分鐘，取上清液，用截留分子量< IOOOODa的超濾膜進(jìn)行超濾，得到蝦殼多肽超濾液； D)將蝦殼多肽超濾液進(jìn)行減壓蒸發(fā)濃縮和真空冷凍干燥，得到蝦殼抗氧化肽產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求I所述的ー種利用蝦殼制備抗氧化肽的方法，其特征在于所述的蛋白酶為堿性蛋白酶。
3.ー種利用蝦殼制備抗氧化肽的方法，其特征在于它的步驟如下 A)將蝦殼清洗除雜，在50°C下烘干24小時(shí)，用粉碎機(jī)磨粉，過(guò)60目篩，制成蝦殼粉，然后加水配制成質(zhì)量百分比為6. 5%的蝦殼粉溶液； B)將蝦殼粉溶液的pH調(diào)節(jié)到10，然后加入堿性蛋白酶3500U/g，在50°C水浴中水解.2.5小時(shí)，水解在攪拌狀態(tài)下進(jìn)行，并保持溫度和pH恒定，得到蝦殼蛋白水解液； C)將蝦殼蛋白水解液于95°C水浴滅活堿性蛋白酶15分鐘，冷卻至室溫后，在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心15分鐘，取上清液，用截留分子量為5000Da的超濾膜進(jìn)行超濾，得到蝦殼多肽超濾液； D)將蝦殼多肽超濾液進(jìn)行減壓蒸發(fā)濃縮和真空冷凍干燥，得到蝦殼抗氧化肽產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用蝦殼制備抗氧化肽的方法。它以蝦類加工副產(chǎn)物蝦殼為原料，烘干后磨粉過(guò)篩，并加水配制成一定質(zhì)量分?jǐn)?shù)的蝦殼粉溶液，調(diào)節(jié)pH，加入堿性蛋白酶后在恒溫下水解，反應(yīng)結(jié)束后滅酶，冷卻離心，取上清液進(jìn)行超濾，然后經(jīng)過(guò)濃縮和冷凍干燥，得到蝦殼抗氧化肽。同現(xiàn)有的抗氧化劑比較，本發(fā)明制備方法簡(jiǎn)單，原料豐富易得，所用蝦殼為蝦類加工的副產(chǎn)物，成本低廉，制得的抗氧化肽分子量較低，可快速進(jìn)入血液循環(huán)被人體吸收和利用，抗氧化效果好，安全性高，無(wú)毒副作用，為食品、化妝品、醫(yī)藥行業(yè)提供優(yōu)質(zhì)的抗氧化肽。
文檔編號(hào)C12P21/06GK102676623SQ20121016145
公開日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月23日
發(fā)明者施旭丹, 王延圣, 羅自生 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)