專利名稱：生物催化法生產(chǎn)手性α-羥酸及其菌株的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株產(chǎn)(S)-扁桃酸脫氫酶的新菌株-銅綠假單胞菌(Pseudomonas
aeruginosa)ZJB1125，及其在生物拆分a-羥酸外消旋體制備相應(yīng)(R)-a-羥酸及其酮酸中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
光學(xué)活性的a -羥酸是指手性碳上帶有羥基同時(shí)帶有羧基的一類化合物，是重要的手性“砌塊”，可用于不對(duì)稱合成大量生物活性分子。在這類化合物中，光學(xué)純扁桃酸在商業(yè)角度上被認(rèn)為是最重要的代表。扁桃酸又稱a-羥基苯乙酸、苯乙醇酸、苦杏仁酸，其R型和S型的結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.一株產(chǎn)⑶-扁桃酸脫氫酶菌株-銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ZJB1125，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址中國，武漢，武漢大學(xué)，430072，保藏編號(hào) CCTCC No M 2011394，保藏日期2011 年 11 月 13 日。
2.如權(quán)利要求1所述的銅綠假單胞菌ZJB1125，其特征在于所述銅綠假單胞菌ZJB1125 的16SrDNA序列如SEQ ID NO. 1所示。
3.如權(quán)利要求1或2所述的銅綠假單胞菌ZJB1125在生物拆分式(I)所示的a-羥酸 外消旋體制備相應(yīng)(R)_ a-羥酸及其酮酸中的應(yīng)用；
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述a-羥酸為下列之一扁桃酸、2-氟扁桃 酸、2-氯扁桃酸、3-氯扁桃酸、4-氟扁桃酸、4-氯扁桃酸、4-溴扁桃酸、2，4- 二氟扁桃酸、3， 5- 二氟扁桃酸、4-甲基扁桃酸、4-輕基扁桃酸、苯基乳酸或2-輕基-4-苯基丁酸。
5.如權(quán)利要求3或4所述的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用為以式(I)所示的a-羥酸 外消旋體為底物，以銅綠假單胞菌CCTCC No M 2011394含酶菌體細(xì)胞為催化劑，在20 50°C、pH6. 0 9. 0緩沖液中進(jìn)行不對(duì)稱選擇性氧化反應(yīng)2 24小時(shí)，制得相應(yīng)(R) _ a -羥 酸及其酮酸。
6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述緩沖液為下列之一pH6. 0 6. 6的朽1檬 酸緩沖液、PH6. 5 7. 8的磷酸鹽緩沖液或pH7. 4 9. 0的Tris_HCl緩沖液。
7.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述緩沖液中，底物初始濃度為1 10g/L， 含酶菌體細(xì)胞添加量以濕重計(jì)為10 50g/L。
8.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述含酶菌體細(xì)胞由如下方法獲得將銅綠 假單胞菌CCTCC No M 2011394接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，在25 40°C、100 300rpm下培養(yǎng) 24 72小時(shí)，得到的發(fā)酵液離心分離，即得到所述含酶菌體細(xì)胞；所述發(fā)酵培養(yǎng)基終濃度 組成如下甘露醇5 25g/L、酵母浸出粉5 25g/L、K2HP04 0. 5 3. 5g/L、KH2P04 0. 5 3.5g/L、CuCl2 0. 05 0. 5g/L、NaCl 0. 5 2g/L、誘導(dǎo)劑式(I)所示 a -羥酸 0. 5 3g/ L，溶劑為水，pH5 9。
9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述誘導(dǎo)劑為鄰氯扁桃酸。
全文摘要
本發(fā)明提供了一株產(chǎn)(S)-扁桃酸脫氫酶新菌株——銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ZJB1125，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址中國，武漢，武漢大學(xué)，430072，保藏編號(hào)CCTCC NoM 2011394，保藏日期2011年11月13日。通過本發(fā)明菌株制備高光學(xué)純度的(R)-扁桃酸及其相關(guān)衍生物，光學(xué)純度＞99％，得率和相對(duì)應(yīng)的氧化產(chǎn)物酮酸得率均接近于50％；利用本發(fā)明提供的菌株來拆分α-羥基酸外消旋體，具有操作簡單安全、成本低廉、反應(yīng)條件溫和等優(yōu)點(diǎn)，更重要的是顯著提高了過程的原子經(jīng)濟(jì)性，具有很好的工業(yè)應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C12R1/385GK102660471SQ20121011008
公開日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2012年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月13日
發(fā)明者沈寅初, 王威, 薛亞平, 鄭裕國 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)