專利名稱：：miRNA分子及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)材料
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體是涉及一種miRNA分子及其應(yīng)用
背景技術(shù)：
：微RNA(miRNA)是一類自然存在的長度約17_25個堿基，非編碼小RNA，在生物中是保守的，小鼠的miRNA序列約三分之一與人的miRNA序列完全一致。miRNA基因在核內(nèi)經(jīng)過RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄為初級前體miRNA(pri-miRNA)，經(jīng)過初步加工成為前體miRNA(pre-miRNA)，再經(jīng)過轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的協(xié)助從細(xì)胞核進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，在胞質(zhì)中經(jīng)過進(jìn)一步加工，成為長度約23個堿基的成熟miRNA，成熟miRNA與相關(guān)蛋白形成miRISC復(fù)合物調(diào)控相關(guān)蛋白的表達(dá)。miRNA廣泛參與從細(xì)胞到整體的生命全過程，估計(jì)超過三分之一的人類基因受miRNA調(diào)控。miRNA統(tǒng)一收錄在英國Sanger中心的miRNA數(shù)據(jù)庫中(http://www.sanger.ac.ck/),目前在該數(shù)據(jù)庫中注冊的人類(Homosapiens)miRNA為1921條，小鼠(Musmusculus)的為1151,大鼠(Rattusnorvegicus)的為680條(Griffiths-JonesS,SainiHK，vanDongenS，EnrightAJ.2008.miRBasetoolsformicroRNAgenomics.NucleicAcidsRes36:D154_158)。腫瘤是嚴(yán)重影響人們生活的重大疾病，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，根據(jù)目前癌癥的發(fā)病趨勢，2020年全世界癌癥發(fā)病率將比現(xiàn)在增加50%，全球每年新增癌癥患者人數(shù)將達(dá)到1500萬人。我國衛(wèi)生部2008年4月29日公布的第三次全國居民死亡原因調(diào)查結(jié)果顯示，中國每年癌癥新發(fā)病例為220萬人，因癌癥死亡人數(shù)為160萬人。近20年來，中國每4-5個死亡者中就有一個死于癌癥，居各種因素導(dǎo)致的死亡原因之首，肺癌已取代肝癌成為我國首位惡性腫瘤死亡原因；也是全世界癌癥患者的主要死因，近10年來肺癌的治療未能取得突破性進(jìn)展，處于平臺期(JemalA，SiegelR，WardE，etal.Cancerstatistics，(2008)CACancerJClin.58(2):71-96.；GilliganDiNicolsonMiSmithLetal.(2007)Preoperativechemotherapyinpatientswithresectablenon-smallcelllungcancerresultsoftheMRCLU22/NVALT2/E0RTC08012multicentrerandomisedtrialandupdateofsystematicreview.Lancet.369(9577):1929-37.)。早發(fā)現(xiàn)、早治療是減少癌癥死亡率最有效的方法，實(shí)施對腸癌、宮頸癌、乳腺癌等的普查制度，可使全世界癌癥死亡人數(shù)減少三分之一，目前在發(fā)展中國家，80%的癌癥患者都是在患病晚期才被發(fā)現(xiàn)，喪失了最佳治療時(shí)間。成熟miR-139_5p的序列是通過克隆測序獲得(LandgrafP，RusuM，SheridanR，SewerA，IovinoN，AravinA，PfefferS，RiceA，KamphorstA0,LandthalerM，LinC，SocciND，HermidaL，F(xiàn)ulciV，ChiarettiS，F(xiàn)oaR，SchliwkaJ，F(xiàn)uchsU，NovoselA，MullerRU，SchermerB，BisselsU，InmanJ，PhanQ，Chien，(2007)AmammalianmicroRNAexpressionatlasbasedonsmallRNAlibrarysequencing，MCell.1291401-1414·)，miR-139_5p在結(jié)腸癌(ChangKH,MillerN，KheirelseidEA,LemetreC，BallGR,SmithMJ,ReganM，McAnena0J,KerinMJ.MicroRNAsignatureanalysisincolorectalcancer!identificationofexpressionprofilesinstageIItumorsassociatedwithaggressivedisease.IntJColorectalDis.Inpress)、前列腺癌(YoshinoH，ChiyomaruT，EnokidaH，KawakamiK，TataranoS，NishiyamaK，NohataN，SekiN，NakagawaM.2011Thetumour-suppressivefunctionofmiR—1andmiR_133atargetingTAGLN2inbladdercancer.BrJCancer.INpress)、腎臟癌(FridmanEiDotanZ，BarshackI，DavidMB，DovA，TabakS，Zion0，BenjaminS，BenjaminH，KukerH，AviviC，RosenblattK，Polak-CharconS，RamonJ，RosenfeldN，SpectorY.201IAccuratemolecularclassificationofrenaltumorsusingmicroRNAexpression.JMolDiagn.INpress.)、胃癌(GuoJ，MiaoY，XiaoB，HuanR，JiangZ，MengD，WangY.2009DifferentialexpressionofmicroRNAspeciesinhumangastriccancerversusnon-tumoroustissues.JGastroenterolHepatol.24(4):652-7)等組織中低表達(dá)，其表達(dá)量與這些疾病有一定的相關(guān)性。DNA是脫氧核糖核酸組成的，4種主要的組成核酸包括脫氧腺嘌呤核苷酸(dA)，脫氧鳥嘌呤核苷酸(dG)，脫氧胸腺嘧啶核苷酸(dT)，脫氧胞嘧啶核苷酸(dC);RNA是由核糖核酸組成的，4種主要組成核酸包括腺嘌呤核苷酸(A)，鳥嘌呤核苷酸(G)，尿嘧啶核苷酸(U)，胞嘧啶核苷酸(C).DNA與RNA在堿基組成上的主要區(qū)別是DNA用的是dT，而RNA用的是U,另外dA,dC，dG分別比A，C，G堿基在核糖2位上少一個羥基-0H.自然存在的核苷酸是由三部分組成的堿基，核糖，磷酸.在分子生物學(xué)應(yīng)用中堿基，核糖，磷酸可以分別被修飾或集團(tuán)替換，在提高核苷酸的穩(wěn)定性的同時(shí)，而不影響該核苷酸發(fā)揮生物學(xué)功能.自然存在的RNA形式及常見的修飾方法見下圖.權(quán)利要求1.一種miRNA分子，其特征在于，其堿基組成為SEQIDNO.I、或SEQIDNO.I和SEQIDNO.2、或SEQIDNO.3、或SEQIDNO.4或SEQIDNO.10。2.一種miRNA分子，其特征在于，其堿基組成為SEQIDNO.I、或SEQIDNO.I和SEQIDNO.2、或SEQIDNO.3、或SEQIDNO.4，且含有修飾的核苷酸類似物，該修飾的核苷酸類似物為糖基修飾或骨架修飾或堿基修飾或末端修飾的核苷酸。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的miRNA分子，其特征在于，所述核苷酸類似物是糖基修飾的核糖核苷酸，核糖核苷酸的2’-羥基被置換為H、OR、R、鹵素、SH、SRI、NH2、NHR、NR2或CN，其中R是C1-C20的烷基、烯基、共軛基、或炔基，所述鹵素是F、Cl、Br或I。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的miRNA分子，其特征在于，所述核苷酸類似物是糖基修飾的核糖核苷酸，核糖被置換為核糖類似物結(jié)構(gòu)為C3_3(l02_15N1^15Sh8Xu，該結(jié)構(gòu)中包括雙環(huán)或多環(huán)核糖，無環(huán)核糖，或肽核苷酸，其中X是F、Cl、Br或I。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的miRNA分子，其特征在于，所述修飾核苷酸類似物是含有修飾的非天然堿基的核苷酸，其堿基結(jié)構(gòu)為(VmOuNuSuXu，該結(jié)構(gòu)中包括有含嘌呤堿基類似物、嘧啶堿基類似物、化學(xué)或光交聯(lián)基團(tuán)，其中X是F、Cl、Br或I。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的miRNA分子，其特征在于，所述末端修飾飾的核苷酸的結(jié)構(gòu)為該結(jié)構(gòu)中包括有膽固醇、生物素、膽酸、葉酸、維生素、或熒光分子，其中X是F、Cl、Br或I。7.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的miRNA分子在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，所述腫瘤為肺癌、肝癌、乳腺癌、子宮頸癌、結(jié)腸直腸癌。9.利要求1-6任一項(xiàng)所述的miRNA分子作為腫瘤診斷標(biāo)記物的應(yīng)用。10.一種治療腫瘤的藥用組合物，其活性成包括有權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的核酸分子。全文摘要本發(fā)明提供一種miRNA分子，其堿基組成為SEQIDNO.1、或SEQIDNO.1和SEQIDNO.2、或SEQIDNO.3、或SEQIDNO.4或SEQIDNO.10；或其堿基組成為SEQIDNO.1、或SEQIDNO.1和SEQIDNO.2、或SEQIDNO.3、或SEQIDNO.4，且含有修飾的核苷酸類似物，該修飾的核苷酸類似物為糖基修飾或骨架修飾或堿基修飾或末端修飾的核苷酸。用該miRNA分子制備得到的治療腫瘤的藥用組合物，能有效抑制腫瘤的形成和發(fā)展。文檔編號C12Q1/68GK102604952SQ20121007225公開日2012年7月25日申請日期2012年3月16日優(yōu)先權(quán)日2012年3月16日發(fā)明者何建行,馮世鵬,張必良,張鑫,王瑋申請人:廣州市銳博生物科技有限公司