專利名稱：一種低值淡水魚蛋白質的提取方法
技術領域：
本發(fā)明涉及水產品加工領域，具體涉及一種低值淡水魚蛋白質的提取方法。
背景技術：
我國是淡水漁業(yè)大國，2009年，全國淡水產品總產量達2434. 85萬噸，約占全國水產品總產量的48%。然而，我國淡水魚加工率低下(不足10%)，目前市場上仍以鮮銷為主，鮮銷過程中腐敗率達30%以上，造成了極大的資源浪費。因此，通過發(fā)展淡水魚精深加工，實現(xiàn)淡水魚的二次、三次加工增值，使淡水魚加工向系列化、多樣化和高附加值方向發(fā)展，成為淡水魚加工利用的一個重要研究方向。淡水魚由于具有水分含量高、PH接近中性， 肌肉組織細嫩，組織蛋白酶作用旺盛、體表粘液多等特點，而且魚體內(頭、鰓、內臟)攜帶有大量細菌，在貯藏、運輸、加工處理及銷售過程中極易腐敗，這給淡水魚的加工產業(yè)帶來了極大的困難，因此，提取其肌肉蛋白質是解決淡水魚加工難，實現(xiàn)淡水魚增值的一條重要途徑。此外，我國低值魚類產量(如鰱魚、小雜魚等)占淡水魚總產量的60%以上，其易飼養(yǎng)、生長快、成本低，因而產量巨大；但其肉薄、魚刺多、風味不及其他淡水魚，價格低廉，在市場上不受歡迎，所以每年都會有大量低值淡水魚因為滯銷而腐敗，造成巨大資源浪費和環(huán)境污染。因此，提取低值淡水魚蛋白質，將其加工成營養(yǎng)豐富、易消化的魚蛋白系列深加工產品，不僅意義重大，而且非常迫切。

發(fā)明內容
為解決低值淡水魚加工難、產品附加值低的問題，通過開發(fā)魚蛋白質系列產品實現(xiàn)低值淡水魚增值，本發(fā)明提出了一種低值淡水魚蛋白質的提取方法，其提取工藝簡單，蛋白質提取率高。本發(fā)明的技術路線為低值淡水魚一洗凈一碎肉成糜一第一次抽提一離心一第二次抽提一離心一合并上清液一抽濾除脂一透析、濃縮。本發(fā)明的一種低值淡水魚蛋白質的提取方法，包括如下步驟(1)將洗凈后的新鮮低值淡水魚整條投入碎肉機或組織搗碎機，絞(搗)碎，制成魚肉糜；(2)第一次抽提在魚肉糜中按固液比1 9 15加入SDS抽提液，均質后于37 42°C抽提50 90min，離心，取上清液；其中，所述固液比中固體(魚肉糜)的單位為g，液體(SDS抽提液)的單位為mL ；(3)第二次抽提將經過步驟(2)抽提所得沉淀用堿液制成懸液，懸液中沉淀的含量為75 150g/L，超聲波處理懸液30 45min，4°C，10000r/min離心lOmin，取上清液；(4)合并步驟(2)和(3)所述的上清液，過濾除去脂類等雜質；(5)將步驟⑷所述的濾液透析，濃縮。其中，步驟C3)所述的SDS抽提液的制備方法為以蒸餾水溶解十二烷基磺酸鈉 (SDS)制成4 10%的SDS溶液；以蒸餾水溶解二硫蘇糖醇(DTT)制成0. 2% 0. 6%的DTT溶液；然后以體積比1 1混合，制成DTT終濃度為0. 1 % 0. 3 %，SDS終濃度為2 5 %的SDS抽提液，優(yōu)選地，制成DTT終濃度為0.2%，SDS終濃度為2 %的SDS抽提液；其中，步驟(3)所述的堿液的制備方法為用10%的NaOH溶液調節(jié)蒸餾水至pH為 11 12，制得堿液；其中，步驟C3)所述的超聲波處理懸液是將盛裝懸液的容器置于冰水浴中，以超聲波細胞粉碎機進行處理，程序為工作30s，間隙lmin，工作20 30次，使沉淀充分分散， 蛋白質盡量溶出；其中，步驟(4)所述的過濾是指用真空抽濾的方法除去上清液表面的脂類等白色懸浮物質；其中，步驟(5)所述的透析、濃縮，是用截留分子量IOOODa的透析袋透析，再用旋轉蒸發(fā)儀或冷凍干燥機進行真空濃縮，用于后續(xù)加工；上述百分含量均為質量百分含量。本發(fā)明以整條低值淡水魚為原料，經魚肉絞碎、兩次抽提、離心等工序提取分離到低值淡水魚蛋白質，整個提取工藝無需原料預處理，提取程序簡化，條件溫和，無需有機溶齊 ，采用的SDS抽提液和NaOH溶液簡單易得，成本低廉，有利于工業(yè)化推廣；提取過程采用不同抽提液分兩次抽提，并借助高速均質、超聲波細胞破碎等輔助手段，能最大可能的提取出不同性質的魚肌肉蛋白質，提取率高；高速離心后上清液經抽濾除去脂類等雜質，經透析除去殘留SDS和NaOH，可直接用于后續(xù)魚蛋白質系列產品的加工。該提取工藝的主要指標有低值淡水魚肌肉蛋白質提取率(凱氏定氮法)>95%，純度>90%。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明方法有如下優(yōu)點(1)原料選用整條低值淡水魚，無需預處理，省時省力。(2)采用SDS溶液和NaOH溶液按優(yōu)化條件分兩次提取，最大可能的提取出不同性質蛋白質，提取率高達95%以上。(3)該提取工藝操作簡單，條件溫和，提取試劑常規(guī)易得，成本低廉，特別適于大規(guī)模工業(yè)化提取。(4)提取液經抽濾除去脂類等雜質，經透析除去殘留SDS和NaOH，濃縮后可直接用于后續(xù)魚蛋白質系列產品的加工。
具體實施例方式下面結合具體實施例來進一步解釋和說明本發(fā)明，但是本發(fā)明的保護范圍不僅僅限定在實施例所列舉的范圍。實施例中所述百分含量除特別說明外均指質量百分含量；所述固液比中固體的單位為g，液體的單位為mL。實施例1 取新鮮低值淡水魚，整條投入機械碎肉機中絞碎制成魚肉糜，在魚肉糜中按固液比1 15加入含DTT終濃度為0. 2%，SDS終濃度為2%的SDS抽提液，混合均勻，轉入高速均質機中均質15min，取出于37水浴中抽提60min，抽提過程中以攪拌器不斷攪拌；然后以4°C，lOOOOr/min離心lOmin，上清液轉入另一容器命名為上清液A ；離心所得沉淀加入 PH12的NaOH溶液，按80g沉淀/升NaOH溶液制成懸液，超聲波處理懸液30min，程序為工作30s，間隙lmin，工作20次，使沉淀充分分散；4°C，10000r/min離心lOmin，取上清液合并入上清液A獲得上清液B，即為魚蛋白質提取液。蛋白質提取液經真空抽濾，除去懸浮于表面的脂類等白色物質，再以截留分子量IOOODa的透析袋透析，最后經旋轉蒸發(fā)儀真空濃縮即可進行后續(xù)加工。以本方法提取低值淡水魚肌肉蛋白質，提取率(凱氏定氮法)>95%， 純度彡90%。實施例2 取新鮮低值淡水魚，根據大小簡單分段后投入組織搗碎機中搗碎制成魚肉糜，在魚肉糜中按固液比1 12加入含DTT終濃度為0. 1%，SDS終濃度為3%的SDS抽提液，混合均勻，轉入高速均質機中均質lOmin，取出于40°C水浴中抽提90min，抽提過程中以攪拌器不斷攪拌；然后以4°C，10000r/min離心15min，上清液轉入另一容器命名為上清液A ；離心所得沉淀加入PHll的NaOH溶液，按IOOg沉淀/升NaOH溶液制成懸液，超聲波處理懸液45min,程序為工作30s,間隙Imin,工作30次，使沉淀充分分散；4°C, 10000r/min離心 lOmin，取上清液合并入上清液A獲得上清液B，即為魚蛋白質提取液。蛋白質提取液經真空抽濾，除去懸浮于表面的脂類等白色物質，再以截留分子量IOOODa的透析袋透析，最后經旋轉蒸發(fā)儀真空濃縮即可進行后續(xù)加工。以本方法提取低值淡水魚肌肉蛋白質，提取率 (凱氏定氮法)彡95%，純度彡90%。
權利要求
1.一種低值淡水魚蛋白質的提取方法，包括如下步驟(1)將低值淡水魚絞碎，制成魚肉糜；(2)第一次抽提在魚肉糜中按固液比1 9 15加入SDS抽提液，均質后于37 42°C抽提50 90min，離心，取上清液；其中，所述固液比中固體的單位為g，液體的單位為 mL ；(3)第二次抽提將經過步驟( 抽提所得沉淀用堿液制成懸液，懸液中沉淀物的含量為75 150g/L，超聲波處理懸液30 45min，離心，取上清液；(4)合并步驟(2)和(3)所述的上清液，過濾；(5)將步驟(4)所述的濾液透析，濃縮。
2.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟(2)所述的SDS抽提液按如下方法配制用蒸餾水溶解SDS制成4 10%的SDS溶液；用蒸餾水溶解DTT制成0. 2% 0. 6% 的DTT溶液；然后以體積比1 1混合，制成DTT終濃度為0. 1 % 0. 3 %，SDS終濃度為 2 5%的SDS抽提液；其中，所述百分含量為質量百分含量。
3.如權利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步驟( 所述的SDS抽提液中，DTT 的終濃度為0. 2%, SDS的終濃度為2% ；其中，所述百分含量為質量百分含量。
4.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟(3)所述的堿液按如下方法配制 用質量百分含量為10%的NaOH溶液調節(jié)蒸餾水至pH為11 12。
5.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟C3)所述的超聲波處理懸液是將盛裝懸液的容器置于冰水浴中，以超聲波細胞粉碎機進行處理，程序為工作30s，間隙lmin， 工作20 30次。
6.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟(2)和(3)所述的離心是指4°C， 10000r/min 離心 10 15min。
7.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟(4)所述的過濾是真空抽濾。
8.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟( 所述的透析、濃縮，是用截留分子量IOOODa的透析袋透析，再用旋轉蒸發(fā)儀或冷凍干燥機進行真空濃縮。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種低值淡水魚蛋白質的提取方法，以低值淡水魚為原料，通過碎肉機絞碎后分別以2～5％SDS抽提液和pH11～12的NaOH溶液二次抽提，實現(xiàn)低值淡水魚蛋白質的高效提取。該方法的主要步驟是低值淡水魚→洗凈→魚肉糜→第一次抽提→離心→第二次抽提→離心→合并上清液→抽濾除脂→透析→濃縮。本發(fā)明的方法主要優(yōu)點在于(1)原料選用整條低值淡水魚，無需預處理，省時省力。(2)采用SDS溶液和NaOH溶液按優(yōu)化條件分兩次提取，最大可能的提取出不同性質蛋白質，提取率高達95％以上。(3)該提取工藝操作簡單，條件溫和，提取試劑常規(guī)易得，成本低廉，特別適于大規(guī)模工業(yè)化提取。
文檔編號A23J1/04GK102524512SQ20121007059
公開日2012年7月4日 申請日期2012年3月16日 優(yōu)先權日2012年3月16日
發(fā)明者俞健, 劉永樂, 李向紅, 李強, 王發(fā)祥, 王建輝, 王滿生 申請人:長沙理工大學