泡騰組合物及其用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了包含選擇劑的潛泡騰體。本發(fā)明還公開了在用于選擇性富集靶微生物的方法中使用所述潛泡騰體的方法。所述方法包括提供樣品、培養(yǎng)基和所述潛泡騰體。所述方法還包括使所述樣品、所述培養(yǎng)基和所述潛泡騰體在有利于所述靶微生物生長的條件下接觸。所述方法還包括從所述潛泡騰體釋放所述選擇劑?？扇芜x地，所述方法包括檢測微生物。
【專利說明】泡騰組合物及其用途
[0001]相關(guān)申請的交叉引用
[0002]本申請要求提交于2010年12月31日的美國臨時專利申請N0.61/428，856的權(quán)益，將該申請以引用方式全文并入本文。
【背景技術(shù)】
[0003]用于檢測樣品中病原體的快速方法已受需要有利于細菌生長至可檢測水平(例如對于ELISA檢測方法，約IO6個集落形成單位(cfu)/mL)的至少一個富集步驟限制。目前的監(jiān)管方針規(guī)定必須在25克食物樣品中檢測單個cfu?？捎玫募夹g(shù)不能在如此大的樣品中即刻檢測單個細菌。因此，富集程序通常用于增加樣品中微生物的數(shù)目以利于檢測。
[0004]在產(chǎn)品的處理期間病原體通常受到損害。也就是說，病原體可能已經(jīng)歷加熱、冷凍、與化學添加劑接觸或機械加工步驟，這些可損害病原體或使之虛弱。因而，經(jīng)常需要在檢測前使病原體復蘇。
[0005]因為受脅迫的微生物可能受到通常不抑制健康微生物的選擇劑抑制，用于篩選病原體的存在的通用技術(shù)涉及使用一系列培養(yǎng)基(即營養(yǎng)流體)傳送，該培養(yǎng)基傳送開始是使用非選擇性富集培養(yǎng)基，然后使用選擇培養(yǎng)基。非選擇性富集培養(yǎng)基通常用來使?jié)撛谑軗p的病原體復蘇。一旦病原體復活，則將小量的非選擇性富集培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移進選擇培養(yǎng)基中。這項技術(shù)(經(jīng)常受人的工作模式和病原體的生長模式限定)通常耗費數(shù)天來完成。多年來，已經(jīng)進行了很多嘗試來縮短初級富集步驟的時長以減少總測定時間。一般來講，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)需要至少8至24小時的非選擇性富集以獲得足夠的活病原體用于進一步測試。
[0006]涉及預富 集步驟和選擇性富集步驟的檢測方法是費力的，并且因為它們的復雜性，可受多種人為誤差影響，這些人為誤差可能會影響結(jié)果。需要更簡單的富集程序以在樣品中獲得較大量的靶微生物，或其可檢測的生物分子組分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明整體涉及在含有或者可能含有非靶微生物的樣品中檢測靶微生物。本發(fā)明方法提供一種形成各組分的混合物的方式，所述各組分包括樣品、含水生長培養(yǎng)基和包含選擇劑和泡騰化合物的泡騰組合物，從而在該泡騰組合物與該生長培養(yǎng)基接觸后的預定時間使所述選擇劑釋放入該培養(yǎng)基中。有利的是，該方法允許操作者使樣品在形成液體混合物后的預定時間暴露于選擇劑，而不必在預定時間將該選擇劑單獨地添加至該混合物。該方法還提供用于在選擇劑從泡騰組合物釋放時使其混合至培養(yǎng)基中的手段，從不需要提供額外的混合力以使選擇劑分布遍及整個液體。
[0008]在一個方面，本公開提供一種富集靶微生物生長的方法。該方法可以包括提供培養(yǎng)基、樣品和潛泡騰體(latent effervescent body)。該潛泡騰體可以包括芯組合物設置于其中的外殼。這種芯組合物可以包含兩種或更多種泡騰組分和相對于至少一種其它微生物的生長而有利于靶微生物生長的選擇劑。該方法還可以包括使樣品、潛泡騰體和培養(yǎng)基在有利于靶微生物生長的條件下接觸。該方法還可以包括從該潛泡騰體釋放選擇劑。[0009]在所述實施例任一者中，釋放選擇劑還可以包括使選擇劑分布于培養(yǎng)基中。在上述實施例任一者中，使選擇劑分布還可以包括通過由氣體泡騰引起的混合過程使選擇劑分布。在上述實施例任一者中，使選擇劑釋放還可以包括將包含樣品和培養(yǎng)基的液體混合物置于與潛泡騰體處于流體接觸預定的一段時間后使選擇劑釋放。在上述實施例任一者中，使樣品、潛泡騰體和培養(yǎng)基接觸還可以包括使樣品與有效量的所釋放的選擇劑接觸足以允許選擇性富集靶微生物的一段時間。在上述實施例任一者中，該方法還可以包括檢測微生物。在上述實施例任一者中，檢測微生物可以包括使微生物在半固體培養(yǎng)基上或之中繁殖、通過顯微鏡觀察該微生物、檢測該微生物的代謝活動、檢測該微生物的生物分子或檢測該微生物的核酸。
[0010]在另一個方面，本公開提供潛泡騰體。潛泡騰體可以包括與含水液體接觸時崩解的外殼和設置在其中的芯組合物。該芯組合物可以包含第一和第二泡騰組分和相對于至少一種其它微生物的生長而有利于靶微生物生長的選擇劑。在所述實施例任一者中，潛泡騰體還可以包括助流劑、緩沖組分、微生物生長指示劑、營養(yǎng)物質(zhì)、粘合劑、崩解助劑、潤滑齊U、填充劑、防粘著劑或上述物質(zhì)中任意兩種或更多種的組合。在潛泡騰體的上述實施例任一者中，外殼可以包含聚乙烯醇、聚(甲基)丙烯酸酯、纖維素和甲基纖維素、任何上述物質(zhì)的衍生物以及任何上述物質(zhì)的混合物。在潛泡騰體的上述實施例任一者中，芯組合物可以包括成形組合物。在潛泡騰體的上述實施例任一者中，其中外殼可以包括小袋。在潛泡騰體的上述實施例任一者中，第一泡騰組分可以包含堿并且第二泡騰組分可以包含酸。在潛泡騰體的上述實施例任一者中，選擇劑可以包括鹽、抗生素、表面活性劑或細菌素(bacteriocin)。在潛泡騰體的上述實施例任一者中,夕卜殼可以構(gòu)造成在預定量的時間后將芯組合物釋放至含水液·體中。在潛泡騰體的上述實施例任一者中，外殼可以包含乙基纖維素和羥丙基甲基纖維素的混合物。在一些實施例中，乙基纖維素和羥丙基甲基纖維素的混合物可以包括至少約25重量百分比的羥丙基甲基纖維素。在一些實施例中，乙基纖維素和羥丙基甲基纖維素的混合物可以包括至少約33重量百分比的羥丙基甲基纖維素。在一些實施例中，乙基纖維素和羥丙基甲基纖維素的混合物可以包含至少約50重量百分比的羥丙基甲基纖維素。
[0011 ] 詞語“優(yōu)選的”和“優(yōu)選地”是指在某些情況下可以提供某些有益效果的本發(fā)明的實施例。然而，在相同的情況或其它情況下，其它實施例也可能是優(yōu)選的。此外，對一個或多個優(yōu)選實施例的表述并不暗示其它實施例是不可用的，且并非意圖將其它實施例排除在本發(fā)明范圍之外。
[0012]當術(shù)語“包括”和其變型出現(xiàn)在說明書和權(quán)利要求書中時，這些術(shù)語不具有限制性含義。
[0013]本文所用的“一種(個)”、“所述(該)”、“至少一種(個)”以及“一種或多種(一個或多個)”可互換使用。因而，例如，一種微生物可以解釋為意指“一種或多種”微生物。
[0014]術(shù)語“和/或”意指所列要素的一個或全部，或所列要素的任何兩個或兩個以上的組合。
[0015]本文所用的“選擇劑”是指當與敏感微生物處于流體接觸時，會相對于該敏感微生物在不存在該選擇劑時在類似條件下的生長，延遲或防止該敏感微生物生長的化學或生物學化合物或分子。應該認識到，敏感性為相對條件并且微生物(例如靶微生物)雖然在一定程度上對選擇劑敏感，但可能比其它微生物(例如非靶微生物)對該選擇劑較不敏感。
[0016]另外，本文通過端點表述的數(shù)值范圍包括所述范圍內(nèi)包含的所有數(shù)值(例如，I到5 包括 1,1.5、2、2.75,3,3.80、4、5 等)。
[0017]本發(fā)明的上述
【發(fā)明內(nèi)容】
并不意圖描述本發(fā)明的每個公開的實施例或每種實施方式。以下描述更具體地舉例說明了示例性實施例。在整個申請的若干地方，通過實例清單提供了指導，所述實例可以按多種組合方式來使用。在各情形下，所列舉的清單僅僅作為代表性群組，而不應被理解為排他性清單。
[0018]上述及其它實施例的更多細節(jié)在下面的描述中陳述。根據(jù)該描述和權(quán)利要求書，其它特征、目標和優(yōu)點將變得顯而易見。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1為根據(jù)本公開的富集微生物的方法的一個實施例的框圖。
[0020]圖2為已將本公開的泡騰組合物的不同實施例添加至其中的各水溶液在一段時間內(nèi)的可見光吸光度的圖。
【具體實施方式】
[0021]本公開涉及檢測樣品中的靶微生物。具體地講，本公開涉及在可能包含非靶微生物的樣品中檢測靶微生物，所述非靶微生物在一些情況下可能以比靶微生物顯著更大的數(shù)目存在于樣品中。另外，本公開涉及檢測可能存在于包含非靶微生物的樣品中的受脅迫微生物。
[0022]本公開認識到，伴隨選擇性富集以檢測病原微生物的傳統(tǒng)方法的一個問題是，為了檢測受脅迫的或受損害的微生物，必須使用兩種類型的培養(yǎng)基，即非選擇營養(yǎng)培養(yǎng)基(以允許受損害的靶微生物復 蘇)和選擇營養(yǎng)培養(yǎng)基(殺死或抑制非靶微生物生長)。另外，該方法通常在規(guī)定時間需要人為干預以I)添加一種或多種外來選擇劑至富集批料(例如食品樣品、富集肉湯和微生物的混合物)，或者2)將包括一部分微生物的富集批料的等分試樣從非選擇培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至選擇培養(yǎng)基用于進一步溫育。在任一種情況下，最終的富集培養(yǎng)物需要機械混合以使樣品有效分布或以確保充分代表所富集的食品樣品。
[0023]本公開提供用于富集靶微生物的方法的潛泡騰體。該潛泡騰體用于本發(fā)明的方法中，所述方法允許操作者使用單種營養(yǎng)培養(yǎng)基來完成復蘇步驟和選擇步驟二者，從而避免需要上述的時間敏感性和勞動密集型干預。本發(fā)明的潛泡騰體允許操作者添加高度選擇性的選擇劑至非選擇營養(yǎng)培養(yǎng)基，其中所述選擇劑在預定的一段時間內(nèi)不對該培養(yǎng)基中存在的微生物發(fā)揮作用。本發(fā)明的潛泡騰體還提供在不需要人為或外部機械干預的情況下將選擇劑的成分瞬時混合入營養(yǎng)培養(yǎng)基中的手段。該潛泡騰體和方法可以用于檢測靶微生物的方法中。
[0024]本公開提供潛泡騰體。根據(jù)本公開，潛泡騰體包括外殼和設置于其中的芯組合物。根據(jù)本公開，芯組合物包含相對于至少一種其它微生物而有利于預定靶微生物的生長的選擇劑和至少兩種泡騰組分。
[0025]用于芯組合物中的選擇劑可以是本領域已知可用于選擇性富集靶微生物的任何選擇劑，只要該選擇劑不實質(zhì)地干擾該潛泡騰體的外殼的功能(例如實質(zhì)性地加速或?qū)嵸|(zhì)性地抑制該外殼的崩解)。干擾外殼可以輕易地檢測到，例如通過監(jiān)測(例如目視觀測)和/或測量(例如通過光譜學測量有色試劑的釋放，如實例4中所述)在使用或不使用該選擇劑的情況下所制備的潛泡騰體的崩解進行檢測。優(yōu)選地，該選擇劑不會實質(zhì)性地干擾泡騰組分的穩(wěn)定性和/或功能。干擾泡騰組分可以例如通過監(jiān)測(目視監(jiān)測)由使用或不使用該選擇劑的情況下所制備的潛泡騰體釋放的泡騰進行監(jiān)測。選擇劑的類別的非限制性例子包括抗生素(吖啶黃)、殺生物劑、鹽(例如LiCl)、表面活性劑(例如膽汁鹽)、染料、細菌素和噬菌體?？梢詫⑦x擇劑(例如吖啶黃、LiCl)以可以用來遞送有效濃度(例如0.6 μ g/mL吖啶黃、3mg/mL LiCl)的選擇劑至富集培養(yǎng)物中的量配混入該潛泡騰體中，如隨附的實例中所示。其它合適的選擇劑的例子包括但不限于新生霉素、青霉素、吖啶黃、萘啶酸(naladixicacid)、環(huán)己酰亞胺、兩性霉素B、鏈霉素、頭孢他啶水合物、氨芐青霉素、粘菌素、乳鏈菌肽、四環(huán)素、苯乙醇、去氧膽酸鹽、膽汁鹽、牛膽汁、硫代硫酸鈉、NaCl、亞甲藍、亮綠染料、結(jié)晶紫和孔雀石綠。
[0026]芯組合物中所用的泡騰組分包括至少兩種組分，當合并于水溶液中時，這兩種組分起反應以形成氣體產(chǎn)物(例如二氧化碳)。優(yōu)選地，芯組合物中所用的泡騰組分是干燥試齊IJ(例如顆?；蚍勰胁怀^約環(huán)境水分)。芯組合物中的泡騰組分中的至少一者包含酸，并且芯組合物中的泡騰組分中的至少一者包含堿。合適的酸泡騰組分的非限制性例子包括檸檬酸、酒石酸、衣康酸和與堿泡騰組分反應并且不會實質(zhì)性地抑制靶微生物生長的任何其它有機酸。合適的堿泡騰組分的非限制性例子包括碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀、碳酸鋰、碳酸氫鋰和與酸泡騰組分反應并且不會實質(zhì)性地抑制靶微生物生長的任何其它金屬碳酸鹽或金屬碳酸氫鹽。優(yōu)選地，泡騰組分不會實質(zhì)性地干擾選擇劑的穩(wěn)定性和/或功能。
[0027]除了選擇劑和泡騰組分外，芯組合物任選還可以包含其它試劑例如助流劑、緩沖組分、微生物生長指示劑、營養(yǎng)物質(zhì)、粘合劑、崩解助劑、潤滑劑、填充劑、防粘著劑或上述物質(zhì)任意兩種或更多種的組合。
[0028]例如，可以將助流劑添加至芯組合物以助于混合芯組合物的組分以及助于使該混合物分散入例如片劑模具中。合適的助流劑的非限制性例子包括L-亮氨酸和親水性(例如熔融的)和/或疏水性二氧 化硅粒子(包括納米粒子，例如如共同待審的專利申請美國專利申請N0.61/384574的實例I中所公開的用異辛基三甲氧基硅烷和甲基三甲氧基硅烷改性的納米粒子，將該專利以引用的方式全文并入本文)。緩沖組分包括可以維持培養(yǎng)基處于最佳PH以支持靶微生物生長的緩沖劑。合適的緩沖組分的非限制性例子包括碳酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸氫鈉、磷酸氫二鉀、磷酸氫鉀、MOPS、Tris和HEPES。微生物生長指示劑包括例如PH指示劑(例如中性紅、氯酚紅、溴甲酚紫)或酶底物(例如發(fā)色酶底物如鄰硝基苯基- a -D-吡喃葡萄糖苷或?qū)ο趸交?β -D-吡喃半乳糖苷)。可以將潤滑劑添加至芯組合物以降低片劑形成期間的摩擦力以及降低從片劑形成模腔彈出組合物期間的摩擦力。潤滑劑可以是水溶性的或水不溶性的。合適的水溶性潤滑劑的非限制性例子包括硼酸、油酸鈉和醋酸鈉。合適的水不溶性潤滑劑的非限制性例子包括滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鈉、蠟和硬脂醇富馬酸酯鈉。可以將填充劑添加至芯組合物，例如以便提供將有助于處理包含該芯組合物的混合物的本體。合適的填料的非限制性例子包括乳糖、山梨醇、甘露糖醇、纖維素和蔗糖?？梢蕴砑诱澈蟿┮源龠M芯組合物的組分在加工期間或之后(例如在形成成形組合物(如片劑)的工過程期間或之后)的內(nèi)聚力。合適的粘合劑的非限制性例子包括聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇(PEG)6000、羥丙基甲基纖維素(HPMC)和羥丙基纖維素(HPC)。
[0029]崩解助劑可以有利于潛泡騰體的快速崩解。有利的是，這可以通過有利于含水培養(yǎng)基滲透進部分崩解的外殼而允許選擇劑快速分布遍及整個培養(yǎng)基。不受理論的約束，據(jù)認為，含水培養(yǎng)基最初突破外殼時，該液體與崩解助劑接觸，引起崩解助劑吸收該液體并引起其溶脹。崩解助劑溶脹對削弱的外殼施加額外的壓力(即除了來自氣體泡騰的壓力外)，從而引起其比這種額外壓力不存在的情況下更快地裂開。合適的崩解助劑的非限制性例子包括例如，水可溶脹的聚合物如羧甲基纖維素(例如可得自賓西法尼亞州費城的FMC生物聚合物公司(FMC Biopolymer, Philadelphia, PA)的AC-D1-SOL交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)、交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮(例如，可得自新澤西州韋恩的國際特殊品公司(InternationalSpecialty Products, Wayne, NJ)的 POLYPLASDONE XL-10)和羧甲淀粉鈉(例如可得自新澤西州普林斯頓的 DMV-Fonterra 賦形劑公司(DMV-Fonterra Excipients, Princeton, NJ)的PRM0JEL羧甲淀粉鈉)。
[0030]在一些實施例中，芯組合物的組分可以用來制備成形組合物(片劑)。用于制備具有總體均一尺寸和形狀的組合物的工藝是本領域已知的并且包括例如使用制片沖模(例如單頭沖模)。沖?？梢耘c機械壓力機一起使用，以便獲得每個片劑的均一壓實度。在一些實施例中，可以將芯組合物在形成成形組合物之前研磨，以便獲得所述組分的均質(zhì)混合物。
[0031]將潛泡騰體的外殼構(gòu)造成在預定量的時間后將芯組合物釋放入含水液體(例如水、含水緩沖液、培養(yǎng)基)中。也就是說，外殼包含部分而不完全耐受含水液體向其滲透的材料(聚合材料)。然而，一段時間后，含水液體可以完全滲透外殼并與芯組合物反應。
[0032]在一些實施例中，外殼的耐水性可以通過用對水的滲透和/或崩解具有預定敏感性的材料制造外殼來進行控制。例如，可以例如從德州休斯敦的美國可樂麗公司(KurarayAmerica, Houston, TX)以若干等級獲得在水中具有相對慢或相對快的溶解速率的聚乙烯醇(“PVA”)(例如分別為Kuraray等級28-99和30-92)。在這些實施例中，可以將聚合物溶解于水中、澆注于載體( 例如塑料膜)上、干燥，并可以將干燥的PVA膜從載體取下。可以將干燥的膜用來通過以下方式制備潛泡騰體:將芯組合物的組分(其可以是成形組合物的形式)沉積于第一 PVA膜的中部，用第二 PVA膜覆蓋在該第一 PVA膜(芯組合物處于其上)上，并將膜密封(例如通過粘結(jié)密封或加熱密封)在一起以形成容納芯組合物的小袋。可以在加熱密封過程期間小心以盡可能多地從該小袋除去空氣，從而使芯組合物與PVA外殼之間的接觸最佳。設想用于形成潛泡騰體的小袋構(gòu)造的干燥膜可用包含兩種或多種獨特的聚合物的共混物形成。也可以購買可以用來形成潛泡騰體的小袋構(gòu)造的聚合物膜。這類膜的例子包括例如S0LUBL0N等級EF-30、BP-26和KA-40，全部可得自日本愛知縣的Aicello化學品公司(Aicello Chemical C0.，Aichi, JP)。
[0033]在一些實施例中，外殼的耐水性可以通過用兩種或更多種材料(第一材料是實質(zhì)上耐水的并且第二材料相對較不耐水)的混合物制造外殼來控制。通過調(diào)節(jié)這兩種或更多種材料在外殼中的比例和/或通過調(diào)節(jié)外殼的厚度，操作者可以制造被構(gòu)造成將芯組合物釋放入含水液體中的潛泡騰體。通常，在混合物中具有的第一材料越多，則水溶液滲透外殼所需的時間越長。在一些實施例中，第一和第二材料為聚合材料。在任何實施例中，例如，第一材料可以是乙基纖維素(下文中的“ETC”)(例如10cp，48%乙氧基化的乙基纖維素；可得自密蘇里州圣路易斯的西格瑪奧德里奇公司(Sigma-Aldrich; St.Louis MO))或Eudragit RS/R0 (可得自特拉華州紐瓦克的贏創(chuàng)德固賽國際公司(Evonik DegussaInternational; Newark, DE)的聚丙烯酸酯聚合物)。在任何實施例中，例如，第二材料可以是羥丙基纖維素(下文中的“HPC”)(例如細磨Klucel EXF羥丙基纖維素；可得自特拉華州威爾明頓的Hercules公司(Hercules Inc.; WiIlmington DE))、輕丙基甲基纖維素(可得自特拉華州紐瓦克的陶氏化學公司(Dow Chemical Company, Newark, DE))或甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯的陰離子共聚物(例如EUDRAGIT L-100，可得自特拉華州紐瓦克的贏創(chuàng)德固賽國際公司)?？梢詫⒌谝缓偷诙牧?例如分別是ETC和HPC)合并于混合物中，其中所述混合物包含小于或等于約75重量百分比的ETC、小于或等于約67重量百分比的ETC、小于或等于約50重量百分比的ETC。第一和第二材料的各種比例對潛泡騰體崩解的影響以及測量崩解速率的簡單方法在圖2中顯示并在下面實例4中描述?？梢詫煞N或更多種外殼材料的混合物溶解、澆注成膜并用來制備潛泡騰體的小袋構(gòu)造，如上所述。另外，可以將兩種或更多種聚合物的混合物用于下述的備選外殼形成工藝。
[0034]或者，可以使用與用來形成成形芯組合物的工藝類似的工藝，在芯組合物周圍形成外殼。在這種備選工藝中，例如，使用第一制片沖模將芯組合物的組分用來形成成形組合物，如上所述。將第一部分(例如約50%)的外殼材料置于第二較大的沖模腔中。將來自第一沖模的成形組合物置于第二沖模腔中(例如大概在中央)，處于外殼材料的頂部上。將外殼材料的其余部分沉積于第二沖模中的成形組合物的頂部上并施加適當壓力(例如約1360kg)至沖模，以使?jié)撆蒡v體具有芯組合物和外殼。
[0035]或者，可以使用涂布工藝，在芯組合物周圍形成外殼。在這種備選工藝中，例如，可以使用第一制片沖模將芯組合物的組分用來形成成形組合物，如上所述。然后，成形組合物可以用液體溶液涂覆，所述溶液含有形成外殼的材料(例如甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯的陰離子共聚物、乙基纖維素、羥`丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯醇等或它們的組合)。例如，可以使用本領域已知的任何液體涂布工藝如浸涂、簾式涂布或噴涂，涂覆成形組合物。涂層的組成以及涂層的厚度將控制含水液體滲透和/或崩解外殼并釋放芯組合物所耗費的時間量。因而，為了將芯組合物的釋放延遲更長的周期，設想可以施加若干層(例如2層、3層、4層、5層)涂層。還設想，多層外殼的每層可以包含相同的材料或者它們可以包含不同的材料，以便控制芯組合物的釋放。
[0036]或者，在一些實施例中，本公開的潛泡騰體可以通過將芯組合物裝填進預成形的膠囊(例如用來封裝藥物的膠囊類型)中來制備。該預成形膠囊可以從纖維素基材料形成并且可以按兩個長方形半塊提供，在每一端具有允許所述半塊通過摩擦配合接合的互補開口，如制藥工業(yè)中裝填有粉末藥物的膠囊所慣用的。可以將包含泡騰組分(例如碳酸氫鈉和檸檬酸)、選擇劑(例如鹽酸吖啶黃)和助流劑(例如熔融二氧化硅粒子)的粉末的芯組合物裝填進膠囊的一半中，并且裝填的一半可以通過摩擦配合接合至膠囊的另一半。任選地，可以使用由Qualicaps Group公司制造的膠囊?guī)芊庋b置(Capsule Band-sealing equipment)用液體溶液(例如羥丙基甲基纖維素)密封填充的組裝好的膠囊的邊緣，并且可以將涂料溶液(例如乙基纖維素和HPMC，或者Eudragit SlOO或LlOO在乙醇或異丙醇中的混合物)噴涂至膠囊上，如本文中所述。涂層的厚度可以通過增重來測量，并可以實現(xiàn)芯組合物釋放的預定延遲時間。[0037]噴涂是片劑的優(yōu)選液體涂布方法。通常，將一批至少600g片劑(每片大約250mg)放入旋轉(zhuǎn)包衣鍋中。通過噴嘴噴灑水性溶劑或有機溶劑中的涂料溶液以在包衣鍋附近產(chǎn)生霧化的薄霧，其中在通風系統(tǒng)下維持所述包衣鍋處于高溫以干燥包衣片劑。等于片劑重量的約2-20%的干涂層重量可以使該包衣片劑的芯組合物具有有用的延遲釋放時間。示例性的包衣機為可得自艾奧瓦州馬里恩的向量公司(Vector Corporation, Marion, IA)的H1-coater 包衣機。
[0038]本公開提供選擇性富集靶微生物的方法。應當理解，這種靶微生物是預定微生物(即由進行該方法的操作者預定)并且該方法的許多方面(例如培養(yǎng)基或介質(zhì)的類型、配方和供應商、選擇劑、溫育時間和溫度)由操作者選擇和/或由參考方法規(guī)定以有利于從給定樣品材料富集特定靶微生物。圖1顯示根據(jù)本公開的選擇性富集微生物的方法的一個實施例的框圖。該方法包括提供樣品、培養(yǎng)基和潛泡騰體的步驟120。
[0039]本文所用的“選擇性富集”是指使樣品經(jīng)受有利于預定靶微生物生長的條件(包括添加選擇劑至樣品)的過程。這些條件包括但不限于具有足夠水活度以促進靶微生物生長的營養(yǎng)環(huán)境、支持靶微生物生長的溫度和經(jīng)選擇以相對于至少一種非靶微生物而言增強靶微生物生長的選擇劑。
[0040]樣品可以是可能含有待選擇性富集的靶微生物的任何樣品。合適的樣品的非限制性例子包括環(huán)境樣品(例如表面拭子/海綿、污垢、沉積物、污染物)、食物(例如原材料、加工中的樣品和成品樣品)、起子培養(yǎng)物、飲料、臨床/獸醫(yī)樣品(例如血液、血清、血漿、尿液、痰、組織、粘液、糞便、傷口滲出物、膿汁、腦脊液)和水(例如表面水、飲用水、工藝用水)。
[0041]在一些實施例中，靶微生物可以使用源自多種食物、飲料或食物或飲料加工環(huán)境來源的樣品來富集。食物來源的非限制性例子包括生肉或經(jīng)加工過的肉、生的或經(jīng)加工過的水果或蔬菜、非流體乳制品(例如奶酪、奶油和冰淇淋)、起子培養(yǎng)物、堅果、調(diào)味料、作料和漿料。飲料的非限制性例子包括飲用水、水果或蔬菜汁、牛奶和發(fā)酵飲料。經(jīng)巴氏消毒的食物或飲料也可以是合適的來源。食物或飲料加工環(huán)境樣品的非限制性例子包括食物處理表面樣品(例如傳送帶、刀片、切割表面、混合裝置表面、過濾器、存儲容器)、室內(nèi)樣品(例如墻壁、地板、排水溝、通風裝 置)和清潔裝置(例如軟管、清潔工具)。
[0042]在一些實施例中，可以使用源于多種人或動物來源的樣品富集靶微生物，例如生理流體，如血液、唾液、眼晶體液、滑液、腦脊液、膿汁、汗液、滲出物、尿液、粘液、哺乳期乳汁等。此外，測試樣品可以源自身體部位，例如傷口、皮膚、鼻孔、頭皮、指/趾甲等。
[0043]來自人或動物來源的特別關(guān)注的樣品包括糞便樣品以及含有粘液的樣品和來自粘膜組織、外耳、中耳、口、直腸、陰道或其它類似組織的樣品。具體的粘膜組織的例子包括口腔、齒銀、鼻、眼、氣管、支氣管、胃腸、直腸、尿道、輸尿管、陰道、子宮頸和子宮的粘膜。
[0044]除了生理流體外，其它測試樣品可以包括其它液體以及溶于液體介質(zhì)的固體。所關(guān)注的樣品可以包括工藝流、水、土壤、植物或其它植被、空氣、表面(例如被污染的表面)等。樣品還可以包括經(jīng)培養(yǎng)的細胞。樣品可以還包括在包含細胞、孢子或酶的裝置(例如生物指示裝置)上或之中的樣品。
[0045]用于本公開的方法的合適樣品可以包括某些固體樣品。可以將固體樣品分解(例如通過共混、超聲處理、均化)以及可以將其懸浮于液體(例如水、緩沖液、肉湯)中。在一些實施例中，可以將容納有樣品材料的樣品收集裝置(例如拭子、海綿)用于該方法?；蛘?，可在將樣品材料用于該方法之前，將樣品材料從樣品收集裝置洗脫(例如沖洗、刮擦、表達)。在一些實施例中，可以將液體或固體樣品在液體(例如水、緩沖液、肉湯)中稀釋。
[0046]特別關(guān)注的靶微生物包括原核和真核生物體，特別是革蘭氏陽性菌細菌、革蘭氏陰性細菌、真菌、支原體和酵母。特別相關(guān)的生物體包括腸桿菌科(Enterobacteriaceae)或微球菌科(Micrococcaceae)或葡萄球菌屬(Staphylococcus spp.)、鏈球菌屬(Streptococcus spp.)、假單胞菌屬(Pseudomonas spp.)、腸球菌屬(Enterococcusspp.)、沙門氏菌屬(Salmonella spp.)、軍團菌屬(Legionella spp.)、志賀氏菌屬(Shigella spp.)、耶爾森菌屬(Yersinia spp.)、腸桿菌屬(Enterobacter spp.)、埃希桿菌屬(Escherichia spp.)、芽抱桿菌屬(Bacillus spp.)、李斯特菌屬(Listeriaspp.)、弧菌屬(Vibrio spp.)、棒狀桿菌屬(Corynebacteria spp.)以及皰疫病毒、曲霉菌屬(Aspergillus spp.)、鐮刀菌屬(Fusarium spp.)和念珠菌屬(Candida spp.)的成員。毒力特別強的生物體包括金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(包括耐藥菌株例如耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA))、表皮葡萄球菌(S.印idermidis)、肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)、無乳鏈球菌(S.agalactiae)、產(chǎn)胺鏈球菌(S.pyogenes)、糞腸球菌(Enterococcus faecalis)、耐萬古霉素腸球菌(VRE)、耐萬古霉素金黃色葡萄球菌(VRSA)、萬古霉素中度耐藥金黃色葡萄球菌(VISA)、炭疽芽孢桿菌(Bacillusanthracis)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、大腸桿菌(Escherichia coli)、黑曲霉(Aspergillus niger)、煙曲霉(A.fumigatus)、棒曲霉(A.clavatus)、爺病鐮刀菌(Fusarium solani)、·尖抱鍵刀菌(F.0xysporum)、厚抱鍵刀菌(F.chIamydosporum)、單核細胞增多性李斯特菌、依氏李斯特菌(Listeria ivanovii)、霍亂弧菌(Vibrio cholera)、副溶血性弧菌(V.parahemolyticus)、豬霍亂沙門氏菌(Salmonella cholerasuis)、傷寒沙門氏菌(S.typhi)、鼠傷寒沙門氏菌(S.typhimurium)、白色念珠菌(Candida albicans)、光滑假絲酵母(C.glabrata)、克魯斯假絲酵母(C.krusei)、坂崎腸桿菌(Cronobactersakazakii)、腸桿菌0157和多重耐藥性革蘭氏陰性桿菌(MDR)。
[0047]革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌是特別關(guān)注的。特別要關(guān)注的是革蘭氏陽性細菌，如單核細胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogeness)。另外,特別要關(guān)注的是抗生素抗性微生物，包括MRSA、VRSA, VISA、VRE和MDR微生物。
[0048]除了提供樣品外，該方法還包括提供培養(yǎng)基。對培養(yǎng)基進行選擇以有利于靶微生物的生長?！吧L”在本文中以最廣的意義使用并且指同化細胞活動，包括例如蛋白質(zhì)合成、核酸合成、細胞膜合成、細胞壁合成、細胞分裂或上述細胞活動中的兩種或更多種的任何組合。一般來講，培養(yǎng)基包含水、必需礦物質(zhì)和營養(yǎng)物質(zhì)以支持祀微生物的生長?？梢曰诖患陌形⑸镞x擇特定的細胞培養(yǎng)基并且選擇恰當?shù)呐囵B(yǎng)基完全處于本領域普通技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)。
[0049]重新參考圖1，本公開的方法還包括使樣品、潛泡騰體和培養(yǎng)基在有利于靶微生物生長的條件下接觸的步驟122。通常，培養(yǎng)基是含水液體。在一些實施例中，培養(yǎng)基容納于容器，例如燒瓶、燒杯、袋子、管、培養(yǎng)皿、多孔板等中。優(yōu)選地，將該容器在培養(yǎng)基置于其中之前進行滅菌或?qū)⑷萜麟S培養(yǎng)基一起原位滅菌?？梢酝ㄟ^將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至裝有樣品的容器中或通過將樣品轉(zhuǎn)移至裝有培養(yǎng)基的容器來實現(xiàn)樣品與培養(yǎng)基接觸。在一些實施例中，可以使樣品和培養(yǎng)基在第一容器(攪拌杯、樣品袋或3?袋(stomacher bag))中實現(xiàn)相互接觸，隨后，可以將樣品/培養(yǎng)基混合物的全部或一部分轉(zhuǎn)移至第二容器(例如管或燒瓶)用于溫育。可以按多種方式實現(xiàn)潛泡騰體與樣品和培養(yǎng)基的接觸。可以將潛泡騰體沉積進空的容器中，可以將培養(yǎng)基和樣品依次(以任何順序)、同時或作為混合物添加至該容器?；蛘?，可以將潛泡騰體轉(zhuǎn)移至裝有樣品、培養(yǎng)基或培養(yǎng)基和樣品的容器；隨后，添加還未加入的其它組分(樣品或培養(yǎng)基)。在一個優(yōu)選的實施例中，使樣品和培養(yǎng)基在容器中實現(xiàn)接觸，并在之后不久將潛泡騰體轉(zhuǎn)移至該容器。在一些實施例中，可以使培養(yǎng)基與樣品實現(xiàn)接觸并可以將所得的復合混合物溫育一段時間，然后使?jié)撆蒡v體與該混合物接觸。
[0050]本領域普通技術(shù)人員認識到有利于靶微生物生長的條件并且可以包括但不限于溫育階段(例如在培養(yǎng)箱中)期間培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)組成、培養(yǎng)基pH、培養(yǎng)基的離子強度、培養(yǎng)基對光的暴露、培養(yǎng)基的氧張力和培養(yǎng)基的溫度。將認識到，這些條件中的一些(例如pH、溫度)還可以影響潛泡騰體崩解耗費的時間量。這可以通過根據(jù)實例4中所述的簡單程序，篩選外殼材料(在類似的PH和溫度條件下)來測定。
[0051]本公開的方法還包括從潛泡騰體釋放選擇劑的步驟124。優(yōu)選地，在將包含樣品和培養(yǎng)基的液體混合物置于與潛泡騰體處于流體接觸預定的一段時間后釋放選擇劑。潛泡騰體與含水流體之間的接觸引發(fā)外殼崩解的過程，這最終導致芯組合物釋放。有利的是，通過將選擇劑釋放延遲預定的一段時間，原始樣品中的任何受損或受脅迫的靶微生物將有時間在選擇劑釋放前在培養(yǎng)基中充分地復蘇和生長。在一些實施例中，預定時間為樣品、培養(yǎng)基和潛泡騰體之間接觸后小于或等于約24小時。在一些實施例中，預定時間為樣品、培養(yǎng)基和潛泡騰體之間接觸后約30分鐘或更長，但小于約24小時。在一些實施例中，預定時間為樣品、培養(yǎng)基和潛泡騰體之間接觸后約30分鐘或更長，但小于或等于約2小時。在一些實施例中，預定時間為樣品、培養(yǎng)基和潛泡騰體之間接觸后約2小時或更長，但小于或等于約6小時。在一些實施例中，預定時間為樣品、培養(yǎng)基和潛泡騰體之間接觸后小于約2小時。在一些實施例中，預定時間為樣品、培養(yǎng)基和潛泡騰體之間接觸后約2小時或更長，但小于或等于約12小時。
[0052]通常，從潛泡騰組合物釋放選擇劑后，使包含樣品樣品、培養(yǎng)基和選擇劑的混合物接觸(例如溫育)一段時間 。額外的接觸時間允許有效量的選擇劑從潛泡騰體釋放，并因而抑制或阻止至少一種非靶微生物的生長。額外的接觸時間還可以允許培養(yǎng)基中靶微生物或其生物分子(例如核酸分子、蛋白質(zhì)、多糖、脂質(zhì)、酶、抗原)的數(shù)目增加。
[0053]本公開的方法還包括檢測微生物的可選步驟126。在一些實施例中，檢測微生物可以包括檢測靶微生物。在一些實施例中，檢測微生物可以包括檢測非靶微生物。可以通過本領域已知的任何微生物檢測手段檢測微生物，所述檢測手段包括但不限于光學(例如顯微鏡法、流式細胞術(shù))檢測、涂布接種技術(shù)(例如使用瓊脂培養(yǎng)基或基于干燥的可復水膜的培養(yǎng)裝置等)、免疫測定技術(shù)(例如ELISA、凝集、側(cè)流免疫測定法)、酶測定法、分子遺傳技術(shù)(例如等溫核酸擴增方法、PCR、LCR、NASBA, PFGE)和噬菌體分型。
[0054]實施例
[0055]實施例1為增進靶微生物的生長的方法，該方法包括:
[0056]提供培養(yǎng)基、可能包括靶微生物的樣品和潛泡騰體；
[0057]其中所述潛泡騰體包括芯組合物設置于其中的外殼；
[0058]其中所述芯組合物包含兩種或更多種泡騰組分和相對于至少一種其它微生物的生長而有利于靶微生物生長的選擇劑；
[0059]使所述樣品、所述潛泡騰體和所述培養(yǎng)基在有利于所述靶微生物生長的條件下接觸；以及
[0060]從所述潛泡騰體釋放選擇劑。
[0061]實施例2為實施例1的方法，其中釋放所述選擇劑還包括使所述選擇劑分布于所
述培養(yǎng)基中。
[0062]實施例3為實施例2的方法，其中使所述選擇劑分布還包括通過氣體泡騰引起的混合過程使所述選擇劑分布。
[0063]實施例4為實施例1至3中任一項的方法，其中釋放所述選擇劑還包括在將包含所述樣品和所述培養(yǎng)基的含水混合物置于與所述潛泡騰體處于流體接觸預定的一段時間后釋放所述選擇劑。
[0064]實施例5為前述實施例中任一項的方法，其中所述預定時間小于或等于24小時。
[0065]實施例6為實施例5的方法，其中預定時間為約30分鐘至約24小時。
[0066]實施例7為實施例6的方法，其中預定時間為約30分鐘至約2小時。
[0067]實施例8為實施例6的方法，其中預定時間為約2至約6小時。
[0068]實施例9為實施例5的方法，其中預定時間小于2小時。
[0069]實施例10為前述實施例中任一項的方法，其中使所述樣品、所述潛泡騰體和所述培養(yǎng)基接觸還包括使所 述樣品與有效量的所釋放的選擇劑接觸足以允許選擇性富集所述革巴微生物的一段時間。
[0070]實施例11為前述實施例中任一項所述的方法，該方法還包括檢測微生物。
[0071]實施例12為實施例11的方法，其中檢測所述微生物包括使所述微生物在半固體培養(yǎng)基上或之中繁殖、通過顯微鏡觀察所述微生物、檢測所述微生物的代謝活動、檢測所述微生物的生物分子或檢測所述微生物的核酸。
[0072]實施例13為潛泡騰體，其包括:
[0073]當與含水液體接觸時崩解的外殼；和
[0074]設置于外殼中的芯組合物；
[0075]其中所述芯組合物包含第一和第二泡騰組分和相對于至少一種其它微生物的生長而有利于靶微生物生長的選擇劑；
[0076]實施例14為實施例12的潛泡騰體，其還包含助流劑、緩沖組分、微生物生長指示齊U、營養(yǎng)物質(zhì)、粘合劑、崩解助劑、潤滑劑、填充劑、防粘著劑或上述物質(zhì)任意兩種或更多種的組合。
[0077]實施例15為實施例12的潛泡騰體，其中所述芯組合物包含所述崩解助劑。
[0078]實施例16為實施例12至14中任一項的潛泡騰體，其中所述外殼包含聚乙烯醇、聚(甲基)丙烯酸酯、纖維素和甲基纖維素、丙基纖維素、任何上述物質(zhì)的衍生物或任何上述物質(zhì)的混合物。
[0079]實施例17為實施例12至15中任一項的潛泡騰體，其中所述芯組合物包括成形組合物。
[0080]實施例18為實施例12至16中任一項的潛泡騰體，其中所述外殼包括小袋。
[0081]實施例19為實施例17的潛泡騰體，其中所述外殼貼合所述成形組合物的形狀。[0082]實施例20為實施例12至18中任一項的潛泡騰體,其中第一泡騰組分包含堿而第二泡騰組分包含酸。
[0083]實施例21為實施例12至19中任一項的潛泡騰體，其中第一泡騰組分包含碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀、碳酸鋰、碳酸氫鋰或前述物質(zhì)任意兩種或更多種的混合物。
[0084]實施例22為實施例12至20中任一項的潛泡騰體，其中第二泡騰組分包含檸檬酸、酒石酸、衣康酸或前述物質(zhì)任意兩種或更多種的混合物。
[0085]實施例23為實施例13至22中任一項的潛泡騰體，其中所述微生物生長指示劑包含PH指示劑、酶底物或氧化還原指示劑。
[0086]實施例24為實施例12至23中任一項的潛泡騰體，其中所述選擇劑包含鹽、抗生素、表面活性劑、染料或細菌素。
[0087]實施例25為實施例24的潛泡騰體，其中所述選擇劑選自新生霉素、青霉素、鹽酸吖啶黃、萘啶酸、環(huán)己酰亞胺、兩性霉素B、鏈霉素、頭孢他啶水合物、氨芐青霉素、粘菌素、乳鏈菌肽、四環(huán)素、苯乙醇、去氧膽酸鈉、十二烷基硫酸鈉、膽汁鹽、牛膽汁、硫代硫酸鈉、NaCl、氯化鋰、碳酸鋰、亞甲藍、亮綠染料、結(jié)晶紫和孔雀石綠。
[0088]實施例26為實施例13至25中任一項的潛泡騰體，其中所述外殼被構(gòu)造成在預定量的時間后將所述芯組合物釋放入所述含水液體中。
[0089]實施例27為實施例26的潛泡騰體，其中所述外殼包含乙基纖維素和羥丙基甲基纖維素或羥丙基纖維素的混合物。
[0090]實施例28為實施例27的潛泡騰體，其中所述乙基纖維素和羥丙基甲基纖維素的混合物包含至少約25重量百分比的羥丙基甲基纖維素。
[0091]實施例29為實施例28的潛泡騰體，其中所述乙基纖維素和羥丙基甲基纖維素的混合物包含至少約33重量百分比的羥丙基甲基纖維素。
[0092]實施例30為實施例29的潛泡騰體，其中所述乙基纖維素和羥丙基甲基纖維素的混合物包含至少約50重量百分比的羥丙基甲基纖維素。
[0093]實魁
[0094]除非另外規(guī)定，否則所有百分比和份數(shù)均以重量計。如本文所用，崩解助劑還可稱為崩解劑。
[0095]所用的材料
[0096]"SILl-CAB-O-SIL TS-530.表面改性的熱解法二氧化硅；馬薩諸塞州波士頓的卡博特公司(Cabot Corporation; Boston MA)
[0097] SIL2-AER0SIL200熱解法二氧化硅；新澤西州帕西帕尼的贏創(chuàng)德固賽公司(Evonik DeGussa Corporation;Parsippany NJ)
[0098] 二氧化硅納米粒子-如共同待審的專利申請美國專利申請N0.61/384574的實例I中所公開的用異辛基三甲氧基硅烷和甲基三甲氧基硅烷改性的納米粒子。
[0099] 羧基與酯基比例為1:1的甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物-Eudragit? L100聚合物(新澤西州帕西帕尼的贏創(chuàng)德固賽公司)
[0100] 硬脂酸鎂NF (新澤西州吉布斯敦的EM科學公司(EM Science; Gibbstown NJ))
[0101] 碳酸鋰粉末(新澤西州菲利普斯堡的J.T.Baker公司(J.T.Baker;PhilipsburgNJ))
[0102]崩解助劑-A型交聯(lián)羧甲基纖維素(Ac-D1-Sol?聚合物；賓夕法尼亞州費城的FMC 生物聚合物公司(FMC BioPolymer;Philadelphia PA))
[0103]亮氨酸(密蘇里州圣路易斯的西格瑪奧德里奇公司(Sigma-Aldrich; St.LouisMO))
[0104]-ETCl-乙基纖維素(10cp，48%乙氧基；密蘇里州圣路易斯的西格瑪奧德里奇公司)
[0105].ETC2-乙基纖維素(乙基纖維素PlO ;賓夕法尼亞州費城的陶氏化學公司(DowChemical C0.))
[0106]bHPC-細磨羥丙基纖維素(Klucel EXF ;特拉華州威爾明頓的Hercules公司)
[0107].HPMC-羥丙基甲基纖維素(甲基纖維素E5:賓夕法尼亞州費城的陶氏化學公司)
[0108]從密蘇里州圣路易斯的西格瑪奧德里奇公司獲得的試劑:
[0109]〇鹽酸吖啶黃
[0110]O PBS緩沖液-磷酸鹽緩沖液鹽水溶液
[0111]從加利福尼亞州加迪納的光譜實驗室公司(Spectrum Laboratories;GardenaCA)獲得的試劑:
[0112]O PVP-聚乙烯吡咯烷酮(PVP K30)
[0113]O硬脂醇富馬酸酯鈉NF
[0114]〇碳酸鈉粉末
[0115]〇碳酸氫鈉粉末
[0116]〇山梨醇
[0117]〇檸檬酸粉末
[0118]〇乳糖
[0119]單核細胞增多性李斯特菌的細菌儲用培養(yǎng)物(ATCC11994)-弗吉尼亞州馬納薩斯的美國美國典型培養(yǎng)物保藏中心(The American Type CultureCollection, Manassas, VA)。通過用該儲用培養(yǎng)物對SBA板進行劃線接種并在35°C溫育過夜來制備劃線接種板。
[0120]胰酶大豆瓊脂板-獲自馬里蘭州斯帕克斯的BD公司(BectonDickinson, Sparks, MD)的Difco?胰酶大豆瓊脂，使用馬里蘭州斯帕克斯BD公司的Difco?胰酶大豆肉湯根據(jù)生產(chǎn)商的說明以3重量百分比(wt%)制備
[0121]"Butterfield磷酸鹽稀釋劑(也稱為Butterfield緩沖劑)-明尼蘇達州圣保羅的3M公司
[0122]胰酶大豆肉湯-明尼蘇達州圣保羅的3M公司
[0123]從加利福尼亞州圣瑪麗亞的哈迪診斷公司(Hardy Diagnostics; Santa MariaCA)獲得的培養(yǎng)基
[0124]O MOX板-牛津培養(yǎng)基，針對李斯特菌進行改良，瓊脂基生長培養(yǎng)基
[0125]血瓊脂板-含有5%綿羊血的胰酶大豆瓊脂；
[0126]實例1.含有崩解助劑的包衣片劑的制備
[0127]通過將表I中所列的用于實例I的材料添加至IOmL球磨管中來制備片劑組合物。該批料的總量為2.04克。該管配備有1.25cm直徑的球，將該組合物在混合磨(MM300型混合磨；賓夕法尼亞州紐敦的萊馳公司(Retsch Inc.;Newtown PA)上以16_s的頻率處理60秒。將大約20mg經(jīng)研磨的組合物放進制片沖模中的6個3_直徑的圓形腔體的每一者中。將具有對應于每個腔體的推桿的配合模設置于腔體之上并用手動壓機壓縮來形成片劑。每片重約19mg。將以這種方式制備的十片片劑放進IOmL去離子水中。全部片劑均在10-20分鐘內(nèi)完全溶解。
[0128]通過將7.5%Eudragit LlOO聚合物和3.25%ETC1溶解于乙醇中來制備涂料溶液。將片劑在一側(cè)進行浸涂，在60°C的熱風中干燥，然后在另一側(cè)浸涂和干燥，務必涂覆整個片齊U。重復該過程兩次以在片劑上提供3層涂層。放入20mL去離子水的十片包衣片劑在約3小時內(nèi)完全溶解。
[0129]實例2.泡flf片劑的制備
[0130]根據(jù)實例I中所述的程序制備具有表I中所示的用于實例2的材料的片劑組合物。片劑每片重約18mg并且在每枚片劑中含有約4.5mg吖啶黃。將10枚片劑放進IOmL去離子水中時產(chǎn)生氣泡。片劑在1-2分鐘內(nèi)溶解，在氣體冒出后得到均質(zhì)溶液。
[0131]表1.材料片劑組成-東,％ _
實例I實例2
CAB-Q-SIL TS-5300.250,25
亮試酸5.005.00
PVP5.005.00
[0132]崩解助劍__LO O__
乳糖__55.42__
山梨醇___55.00_
碳酸氫鈉___553_
檸檬酸__ 422_
德酸吖_黃__33.33__25.00_
[0133]實例3.具有各種涂層厚度的片劑的制備
[0134]通過將表2中對實例3所列的材料量添加至200mL玻璃杯中并渦旋2分鐘來制備片芯組合物。批料量為20克。將0.3125英寸直徑的制片沖模填充250mg該組合物并在半自動壓機(印第安納州瓦巴什的卡夫公司(Carver Inc.;Wabash IN))上以3，000磅的力壓縮以形成250mg片劑。
[0135]將0.5英寸直徑的第二制片沖模用于制備包衣片劑。將比例為1:2、1:1和2:1的ETCl和HPMC粉末的混合物一起攪拌。用每種混合物以及單獨用ETCl涂覆片芯。對于每枚片劑，將120mg粉末放進沖模腔中并壓平。將片芯在粉末上保持居中，添加另外120mg該混合物以覆蓋該片劑。以3000磅力壓縮該模具以形成包衣片劑。[0136]對每種粉末重復該程序。將包衣片劑放入40mL PBS緩沖液中并監(jiān)測溶解情況。比例為2:1的片劑溶解超過6小時，而比例為1:2和1:1的片劑在約3小時內(nèi)溶解。
[0137]表2.1 i if Il ill 成-}ψ..%
【權(quán)利要求】
1.一種增進靶微生物的生長的方法,該方法包括: 提供培養(yǎng)基、可能包括所述靶微生物的樣品和潛泡騰體； 其中所述潛泡騰體包括其中設置有芯組合物的外殼； 其中所述芯組合物包含兩種或更多種泡騰組分和相對于至少一種其它微生物的生長而有利于所述靶微生物生長的選擇劑； 使所述樣品、所述潛泡騰體和所述培養(yǎng)基在有利于所述靶微生物生長的條件下接觸；以及 從所述潛泡騰體釋放所述選擇劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中釋放所述選擇劑還包括使所述選擇劑分布于所述培養(yǎng)基中。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中使所述選擇劑分布還包括通過氣體泡騰引起的混合過程使所述選擇劑 分布。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的方法，其中釋放所述選擇劑還包括在將包含所述樣品和所述培養(yǎng)基的含水混合物置于與所述潛泡騰體處于流體接觸預定的一段時間后釋放所述選擇劑。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述預定時間小于或等于24小時。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述預定時間為約30分鐘至約24小時。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述預定時間為約30分鐘至約2小時。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述預定時間為約2至約6小時。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述預定時間小于2小時。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中使所述樣品、所述潛泡騰體和所述培養(yǎng)基接觸還包括使所述樣品與有效量的所釋放的選擇劑接觸足以允許選擇性富集所述靶微生物的一段時間。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，該方法還包括檢測微生物。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中檢測所述微生物包括使所述微生物在半固體培養(yǎng)基上或之中繁殖、通過顯微鏡觀察所述微生物、檢測所述微生物的代謝活動、檢測所述微生物的生物分子或檢測所述微生物的核酸。
13.一種潛泡騰體，其包括: 當與含水液體接觸時崩解的外殼；和 設置于其中的芯組合物； 其中所述芯組合物包含第一和第二泡騰組分和相對于至少一種其它微生物的生長而有利于靶微生物生長的選擇劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的潛泡騰體，其還包含助流劑、緩沖組分、微生物生長指示齊U、營養(yǎng)物質(zhì)、粘合劑、崩解助劑、潤滑劑、填充劑、防粘著劑或上述物質(zhì)的任意兩種或更多種的組合。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的潛泡騰體，其中所述芯組合物包含所述崩解助劑。
16.根據(jù)權(quán)利要求13至15中任一項所述的潛泡騰體，其中所述外殼包含聚乙烯醇、聚(甲基)丙烯酸酯、纖維素和甲基纖維素、丙基纖維素、任何上述物質(zhì)的衍生物或任何上述物質(zhì)的混合物。
17.根據(jù)權(quán)利要求13至16中任一項所述的潛泡騰體，其中所述芯組合物包括成形組合物。
18.根據(jù)權(quán)利要求13至17中任一項所述的潛泡騰體，其中所述外殼包括小袋。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的潛泡騰體，其中所述外殼貼合所述成形組合物的形狀。
20.根據(jù)權(quán)利要求13至19中任一項所述的潛泡騰體，其中所述第一泡騰組分包含堿并且所述第二泡騰組分包含酸。
21.根據(jù)權(quán)利要求13至20中任一項所述的潛泡騰體，其中所述第一泡騰組分包含碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀、碳酸鋰、碳酸氫鋰或前述物質(zhì)任意兩種或更多種的混合物。
22.根據(jù)權(quán)利要求13至21中任一項所述的潛泡騰體，其中所述第二泡騰組分包含檸檬酸、酒石酸、衣康酸或前述物質(zhì)任意兩種或更多種的混合物。
23.根據(jù)權(quán)利要求13至22中任一項所述的潛泡騰體，其中所述微生物生長指示劑包含pH指示劑、酶底物或氧化還原指示劑。
24.根據(jù)權(quán)利要求13至23中任一項所述的潛泡騰體，其中所述選擇劑包含鹽、抗生素、表面活性劑、染料或細菌素。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的潛泡騰體，其中所述選擇劑選自新生霉素、青霉素、鹽酸吖啶黃、萘啶酸、環(huán)己酰亞胺、兩性霉素B、頭孢他啶水合物、鏈霉素、氨芐青霉素、粘菌素、乳鏈菌肽、四環(huán)素、苯乙醇、去氧膽酸鈉、十二烷基硫酸鈉、膽汁鹽、牛膽汁、硫代硫酸鈉、NaCl、氯化鋰、碳酸鋰、亞甲藍、亮綠染料、結(jié)晶紫和孔雀石綠。
26.根據(jù)權(quán)利要 求13至25中任一項所述的潛泡騰體，其中所述外殼被構(gòu)造成在預定量的時間后將所述芯組合物釋放入所述含水液體中。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的潛泡騰體，其中所述外殼包含乙基纖維素和羥丙基甲基纖維素或羥丙基纖維素的混合物。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的潛泡騰體，其中所述乙基纖維素和羥丙基甲基纖維素的混合物包含至少約25重量百分比的羥丙基甲基纖維素。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的潛泡騰體，其中所述乙基纖維素和羥丙基甲基纖維素的混合物包含至少約33重量百分比的羥丙基甲基纖維素。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的潛泡騰體，其中所述乙基纖維素和羥丙基甲基纖維素的混合物包含至少約50重量百分比的羥丙基甲基纖維素。
【文檔編號】C12N1/00GK103443287SQ201180063615
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2011年12月22日 優(yōu)先權(quán)日:2010年12月31日
【發(fā)明者】夏文勝, 帕特里克·A·馬赫, 約瑟夫·M·博爾利納, 賈森·W·比約克, 劉杰 申請人:3M創(chuàng)新有限公司