專利名稱：聯(lián)用熒光底物和pH-敏感性熒光團(tuán)用于熒光法檢測(cè)微生物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于測(cè)試特別是在藥學(xué)產(chǎn)品和裝置的制造中所使用的含水的或氣態(tài)流體的無菌度的方法和裝置。具體地，本發(fā)明涉及包含熒光底物和pH-敏感性熒光團(tuán)(特別是4-甲基傘形酮(4-MU)和熒光素衍生物的組合)的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，其用于通過熒光，特別通過結(jié)合有關(guān)pH-敏感性熒光團(tuán)的熒光檢測(cè)和有關(guān)熒光底物受微生物激活的熒光檢測(cè)，進(jìn)行檢測(cè)微生物。
背景技術(shù)：
醫(yī)藥業(yè)是無菌度限制非常高的那些領(lǐng)域之一，迫使持續(xù)監(jiān)測(cè)產(chǎn)品質(zhì)量和這些產(chǎn)品相關(guān)的所有活動(dòng)。對(duì)于微生物污染，按照藥典中規(guī)定的法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)利用微生物學(xué)方法進(jìn)行測(cè)試。歐洲或美國(guó)藥典定義了藥物制劑的幾種微生物學(xué)質(zhì)量水平。要求無菌的產(chǎn)品如胃腸外制劑(可注射產(chǎn)品、灌注用制劑等)和眼部產(chǎn)品的特點(diǎn)在于總體上沒有能夠自身繁殖或在宿主體內(nèi)繁殖的微生物。不要求無菌的產(chǎn)品可包含一定量的微生物，只要所含的微生物污染低于藥典標(biāo)準(zhǔn)所限定的特定限值。這些微生物的存在并不代表對(duì)病患的任何危險(xiǎn)，由于其涉及例如口服或直腸給藥的藥物。微生物菌落和胃部的酸性PH阻止微生物的生長(zhǎng)，只要其數(shù)量不超過所述藥典建議的標(biāo)準(zhǔn)。在藥典中限定了各類非無菌性產(chǎn)品，按照它們的最終目的，在微生物學(xué)測(cè)試上各具有它們自身的要求。此外，待測(cè)試的產(chǎn)品處于各種固體或液體形式，并且還處于各種體積和包裝。就此而言，在可過濾性產(chǎn)品和不可過濾性產(chǎn)品之間可產(chǎn)生區(qū)別，可過濾性產(chǎn)品的微生物學(xué)測(cè)試可通過膜過濾進(jìn)行，對(duì)于不可過濾性產(chǎn)品，藥典推薦將測(cè)試對(duì)象直接接種入生長(zhǎng)培養(yǎng)基的 技術(shù)。可通過生長(zhǎng)培養(yǎng)基的直接接種進(jìn)行測(cè)試的制劑一般是固體，但還可以是具有稠度的流體，例如，油狀液劑，向其加入添加有10g/l聚山梨醇酯80的培養(yǎng)基；以及油膏劑和霜齊U，向其加入合適的稀釋劑或乳化劑。通常對(duì)象體積不大于生長(zhǎng)培養(yǎng)基體積的10%。根據(jù)法定要求，可進(jìn)行各種類型的微生物學(xué)質(zhì)量測(cè)試，從嚴(yán)格的無菌度測(cè)試至主要的需氧型和厭氧型微生物的特異性計(jì)數(shù)，還包括特定微生物的針對(duì)性檢測(cè)。通常，當(dāng)希望相當(dāng)準(zhǔn)確地了解所遇到的微生物類型時(shí)，微生物學(xué)家優(yōu)選在瓊脂生長(zhǎng)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，由此可視覺觀察在瓊脂之中或之上形成微菌落的微生物的存在。如需要，該方法允許對(duì)形成這些菌落的微生物取樣，并進(jìn)行其他分析以進(jìn)行驗(yàn)證。由此，當(dāng)微生物性質(zhì)不同時(shí)，能夠在一定程度上確定遇到的各種類型微生物的相對(duì)比例。盡管如此，在瓊脂生長(zhǎng)培養(yǎng)基上培養(yǎng)需要時(shí)間和人力。由此，為使微生物生長(zhǎng)受氯處理抑制，在生長(zhǎng)培養(yǎng)基，例如R2A培養(yǎng)基上緩慢生長(zhǎng)的微生物，例如Methylobacter sp.的分裂時(shí)間可能為 48_72h [ (Gallego V. , GarciaM. T.和 VentosaA. (2006)，Methylobacterium adhaesivum sp.nov.,amethylotrophic bacteriumisolated from drinking water. Int. J. Syst. Evol Microbiol 56,339-342)]。此外，研究表明，為了真實(shí)驗(yàn)證樣品中不存在微生物，需要最短14天的孵育時(shí)間[Bathgate，H.等人· (1993) Journal of Parenteral Science and Technology 47 (5) : 254-257]。在工業(yè)生產(chǎn)鏈中進(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)試的情境中，該時(shí)間段過長(zhǎng)而難以快速地處理污染。這是因?yàn)槿绻诋a(chǎn)品生產(chǎn)之后數(shù)日確定污染，則召回該產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)可能造成高額經(jīng)濟(jì)損失。問題之一還可能是公眾衛(wèi)生健康，涉及在處理后快速分配的飲用水質(zhì)量的測(cè)試。在液體培養(yǎng)基中的培養(yǎng)物(就它們而言)能夠在一定程度上減少培養(yǎng)微生物的人力和時(shí)間。但是，與濾膜和/或瓊脂培養(yǎng)皿操作相關(guān)的假陽性的風(fēng)險(xiǎn)也更高。在液體或氣體樣品過濾后進(jìn)行無菌度測(cè)試的透明無菌制備單元已存在多年，例如本申請(qǐng)人(Steritest EZ, Millipore Corporation, Billerica, MA 01821，USA)研發(fā)的那些。其原理是在膜表面上保留被過濾樣品中所含的可能污染物，然后一旦已進(jìn)行樣品過濾， 在充有無菌生長(zhǎng)培養(yǎng)基的過濾單元內(nèi)孵育濾膜。在存在一種或多種污染物的情況中，透明的培養(yǎng)基由于細(xì)胞生長(zhǎng)而變得混濁。由此可視覺確定過濾單元中微生物的存在。在液體培養(yǎng)基中檢測(cè)與在瓊脂生長(zhǎng)培養(yǎng)基上檢測(cè)相比通常需要略微更長(zhǎng)的時(shí)間，因?yàn)樵谏L(zhǎng)培養(yǎng)基中細(xì)胞濃度需要達(dá)到足以使生長(zhǎng)培養(yǎng)基變混濁。但是，液體培養(yǎng)基中的培養(yǎng)物通常更有利于需氧型或厭氧型微生物的生長(zhǎng)。另一方面，在液體培養(yǎng)基中測(cè)試存在一定的限制，特別是不能估計(jì)初始存在于待測(cè)樣品中的污染物的數(shù)量、性質(zhì)和比例。就此而言，在液體生長(zhǎng)培養(yǎng)基中進(jìn)行的測(cè)試僅可提供警告信息，但不提供關(guān)于所含微生物的性質(zhì)的信息。出于這些不同原因，希望能夠具有可采用的在液體介質(zhì)中進(jìn)行的測(cè)試，其更快速，并能夠給出關(guān)于所鑒別的微生物性質(zhì)的第一手信息。至少，在早期得到的關(guān)于所遇到的微生物類型的信息(一種或多種物種、需氧型或厭氧型、慢速生長(zhǎng)或快速生長(zhǎng)、革蘭氏陽性或革蘭氏陰性等)是有利的，使得技術(shù)人員可了解污染的程度，并確定其來源。為了更快速地檢測(cè)污染物，一些方法利用加入生長(zhǎng)培養(yǎng)基中的熒光底物。熒光底物是復(fù)合分子，其在接觸微生物合成的酶時(shí)斷裂，并顯現(xiàn)熒光。在細(xì)胞密度足以使生長(zhǎng)培養(yǎng)基混濁之前，利用在UV或可見光譜的輻射，通過照射生長(zhǎng)培養(yǎng)基，利用分光光度計(jì)可容易地檢測(cè)發(fā)出的熒光。因此它們可更快速檢測(cè)污染物。存在數(shù)種熒光底物類型。但是，這些底物類型存在它們特有的缺點(diǎn)，并且限制它們?cè)跓o菌度測(cè)試的情境中的使用。熒光素衍生物(CFA、CFDA)是例如被寬范圍的微生物激活的熒光底物；CFDA由此通常被認(rèn)為是用于原核或真核細(xì)胞的成活力標(biāo)記物。這些底物對(duì)存在于大多數(shù)微生物中的酶的酯酶活性敏感。但是，該酯酶活性在由藥典規(guī)定的許多生長(zhǎng)培養(yǎng)基中以殘余性地表達(dá)，特別是在包含酵母提取物或蛋白提取物的那些中。因此，這些底物常進(jìn)行不可忽略的非生物性水解[Clarke, J. M.等人，2001，Journal of microbiological methods, 46:261-267],故此并不是非常適用于液體培養(yǎng)基中的檢測(cè)測(cè)試。此外，由這些底物發(fā)出的熒光強(qiáng)度對(duì)生長(zhǎng)培養(yǎng)基的特定物理參數(shù)，特別是PH敏感，其可對(duì)檢測(cè)的可靠性產(chǎn)生影響。甲基傘形酮衍生物(甲基傘形酮基(methylumbelliferyl)),除了一些它們的乙酸酯或丁酸酯衍生物之外，較之熒光素衍生物，對(duì)非生物性水解的敏感性低得多，但具有窄得多的范圍(spectrum)。但是，對(duì)于適合于一定數(shù)量的常見菌株的特異性檢測(cè)的不同底物有相對(duì)寬的選擇[Manafi, M. , Kneifel, W.和 Bascomb, S. (1991) Fluorogenicand chromogenic substrates used in bacterial diagnostics. Microbiol Mol BiolRev. 55(3) :335-348]。但是，這些不同的甲基傘形酮基底物的熒光發(fā)射光譜易于相互重疊，限制了它們一起用于鑒別相同生長(zhǎng)培養(yǎng)基中同時(shí)存在的不同類型微生物。由Biosynth公司最近研發(fā)的另一類熒光底物是Aldols 。這些底物具有與甲基傘形酮衍生物相似的性質(zhì)。 具體地，aldols具有與甲基傘形酮化合物非常接近的熒光發(fā)射光譜。由此，它們不能區(qū)別相同生長(zhǎng)培養(yǎng)基中存在的微生物，也不能確定其相對(duì)比例。為了改善液體培養(yǎng)基中進(jìn)行的無菌度測(cè)試的特異性和速度，本發(fā)明人想到利用上述各類底物的特異性，并將它們組合，從而快速實(shí)施無菌度測(cè)試并且可獲得關(guān)于所檢測(cè)的微生物類型的信息。為此，本發(fā)明人選擇并同時(shí)使用在常規(guī)生長(zhǎng)培養(yǎng)基中穩(wěn)定的Aldol或甲基傘形酮基熒光底物，并將它們與相反地對(duì)生長(zhǎng)培養(yǎng)基的PH變化敏感的底物如熒光素衍生物或HPTS組合。出人意料地是，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，一方面通過熒光底物(甲基傘形酮基或Aldol衍生物)，并且另一方面通過PH-敏感性熒光團(tuán)(熒光素或HPTS)，測(cè)定發(fā)出的熒光，可檢測(cè)早期的污染物，并在一定程度下評(píng)價(jià)污染所涉及的微生物類型。因此，在一般原理下，本發(fā)明包括同時(shí)使用pH-敏感性和非pH-敏感性熒光團(tuán)以達(dá)到微生物的早期通用性檢測(cè)，分別針對(duì)PH-敏感性熒光團(tuán)和受活細(xì)胞激活的熒光團(tuán)得到的熒光測(cè)量的結(jié)合，使得可以獲得遇到的微生物的識(shí)別特征。


圖I :本發(fā)明初步試驗(yàn)結(jié)果。各圖表示有關(guān)各種pH-敏感性熒光團(tuán)的熒光測(cè)量結(jié)果，該測(cè)試在使用不同濃度的各分子培養(yǎng)大腸桿菌(E. coli)、金黃色葡萄球菌(S. aureus)、白色念珠菌(C. albicans) 24小時(shí)的過程中進(jìn)行。IA =HPTS0 IB :萘并熒光素。1C:熒光素。ID :羧基萘并熒光素。圖2 :本發(fā)明的初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果。該圖給出在24小時(shí)的培養(yǎng)中，在不同微生物存在下，由HPTS發(fā)出的熒光。圖3 :匯總本發(fā)明進(jìn)行的各培養(yǎng)測(cè)試的表格以得到圖4-7中的圖表中顯示的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。圖4-7 :圖4-7的圖表示對(duì)應(yīng)于所用的熒光化合物的不同組合隨著時(shí)間的熒光測(cè)量結(jié)果，分別是4-4MU-HPTS 組合；
5-4MI-CF 組合；6-Aldol-HPTS 組合；7-Aldol-CF 組合。在這些圖表中給出的測(cè)試為L(zhǎng)ml相當(dāng)于由Aldol發(fā)出的熒光Lm2相當(dāng)于由HPTS發(fā)出的熒光Lm3相當(dāng)于由4-MU發(fā)出的熒光Lm4相當(dāng)于由羧基熒光素(CF)發(fā)出的熒光。 各圖A-F相當(dāng)于以下所述的微生物的培養(yǎng)A-大腸桿菌B-銅綠假單胞菌(P. aeruginosa)C-枯草芽胞桿菌(B. subtilis)D-金黃色葡萄球菌E-巴西放線菌(A. brasiliensis) F-白色念珠菌圖G相當(dāng)于對(duì)照測(cè)試(包含上述組合的未受污染的生長(zhǎng)培養(yǎng)基)。圖4 :對(duì)比在甲基傘形酮基衍生物(4-MU磷酸酯、4-Μυβ -吡喃葡糖苷、4_MUa -吡喃葡糖苷、4-MU β -吡喃半乳糖苷)和8-羥基芘-1，3，6-三磺酸的混合物存在下各種微生物的生長(zhǎng)。(4-MU-HPTS 組合)。圖5 :在甲基傘形酮衍生物(4-MU磷酸酯、4-MU β -吡喃葡糖苷、4_MU a -吡喃葡糖苷、4-MU β -批喃半乳糖苷)和5，6-羧基突光素的混合物的存在下的各種微生物的生長(zhǎng)對(duì)比。(4MU - CF 組合)圖6 :在 Aldol 衍生物(Aldol 470 磷酸酯、Aldol 470 乙酸酯、Aldol455 β -吡喃葡糖苷、Aldol 455 β -吡喃半乳糖苷)和8-羥基芘-1，3，6-三磺酸(HPTS)的混合物存在下的各種微生物的生長(zhǎng)對(duì)比。(Aldol-HPTS 組合)圖7 :在 Aldol 衍生物(Aldol 470 磷酸酯、Aldol 470 乙酸酯、Aldol 455 β -吡喃葡糖苷、Aldol 455 β -卩比喃半乳糖苷)和5，6-羧基突光素的混合物存在下的各種微生物的生長(zhǎng)對(duì)比。(Aldol-CF 組合)

發(fā)明內(nèi)容
由此本發(fā)明包括用于檢測(cè)微生物的方法，其特別用于在液體生長(zhǎng)培養(yǎng)基中進(jìn)行無菌度測(cè)試，其特征在于它包括在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)要確定它是否被活微生物污染的樣品O該方法適用于任何形式的可過濾或不可過濾的樣品，具體地通過將所述樣品直接接種于上述的無菌生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。
就此而言，可使用膜來過濾液體樣品如水、或氣體如空氣。然后將該膜接種于液體生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，如同形成固體樣品。根據(jù)本發(fā)明，所述檢測(cè)方法包括以下步驟中的一步或多步(i)在允許待測(cè)微生物生長(zhǎng)的條件下將如上定義的樣品放置在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基包含 -至少一種熒光底物或熒光底物的組合，其可被微生物的至少一種酶激活，和
-至少一種熒光團(tuán)，其熒光指示所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基的pH；(ii)根據(jù)熒光分析所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基，以測(cè)定與所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基中所含的熒光底物被所述微生物激活相關(guān)的熒光，并且測(cè)定由其熒光指示生長(zhǎng)培養(yǎng)基的PH的熒光團(tuán)所發(fā)出的突光；(iii)分析由其熒光指示pH的熒光團(tuán)的熒光測(cè)量結(jié)果以及熒光底物的熒光測(cè)量結(jié)果，以確定在所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基中待測(cè)的微生物類型存在或不存在。術(shù)語“熒光底物”是指包含能夠吸收光能并以熒光發(fā)射光譜的形式釋放全部或部分的該能量的熒光基團(tuán)的分子，其還包含掩蔽所述熒光基團(tuán)的熒光的“淬滅劑”基團(tuán)。在與微生物的特定酶接觸時(shí)，所述熒光底物采用不同形式，其能使熒光團(tuán)發(fā)出熒光。該激活導(dǎo)致形成底物的分子的構(gòu)象改變，或者導(dǎo)致形成熒光殘基的所述分子分解。根據(jù)本發(fā)明可想到各種熒光底物。本發(fā)明優(yōu)選的熒光底物在酶促激活之后產(chǎn)生4-甲基傘形酮化合物，對(duì)于約360±10nm的激發(fā)波長(zhǎng)，其熒光發(fā)射在約460±10nm。本發(fā)明優(yōu)選的該類熒光底物是例如甲基傘形酮(4-MU)衍生物，特別是選自以下的一種或多種底物4-甲基傘形酮基乙酸酯(CAS:2747-05-9)
權(quán)利要求
1.用于檢測(cè)微生物存在的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，其特征在于它由液體營(yíng)養(yǎng)載體形成，所述液體營(yíng)養(yǎng)載體中均勻溶解有 -至少一種熒光底物或熒光底物的組合，其可被微生物的至少一種酶激活，和 -至少一種熒光團(tuán)，其熒光指示所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基的PH ； 所述載體本身的熒光優(yōu)選地對(duì)所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基的PH變化不敏感，并對(duì)向所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基添加所述微生物不敏感。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，其特征在于它包含至少一種選自4-甲基傘形酮或其衍生物的熒光底物。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，其特征在于所述熒光底物由4-甲基傘形酮(4-MU)的衍生物的混合物組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，其特征在于所述一種或者多種4-甲基傘形酮的衍生物選自以下化合物4_MU磷酸酯、4-MU 丁酸酯、4-MU乙酸酯、4_MU α -葡糖苷、4-MU β -葡糖苷、4-Μυβ-半乳糖苷、4-MU隊(duì)^二乙?；鶜ざ擒铡?-1^ N，N，N-三乙酰基殼三糖苷、4-MU辛酸酯，其單獨(dú)或以混合物加入所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，其特征在于所述熒光底物由以下4-甲基傘形酮衍生物的混合物組成4-MU磷酸酯、4-MU α -葡糖苷、4_MU β -葡糖苷和4-MU β -半乳糖苷。
6.根據(jù)在前權(quán)利要求中的任一項(xiàng)所述的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，其特征在于它包含至少一種選自以下化合物的熒光底物 -I- (2-苯甲?；交?-6-氯-IH-吲哚-3-基-β -吡喃葡糖苷； -I- (2-苯甲酰基苯基)-6-氯-IH-吲哚-3-基-β -吡喃半乳糖苷； -I-(2-苯甲酰基苯基)-6-氯-IH-吲哚-3-基-乙酸酯；或 -I-(2-苯甲?；交?-6-氯-IH-吲哚-3-基-磷酸酯。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，其特征在于其熒光指示所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基的PH的所述熒光團(tuán)選自8-羥基芘-1，3，6-三磺酸(HPTS)、花菁化合物或其衍生物之一、或熒光素化合物或其衍生物、鹽或酯之一。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，其特征在于其熒光根據(jù)所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基的PH變化的所述熒光團(tuán)是羧基熒光素或其鹽或酯之一。
9.檢測(cè)微生物的方法(無菌度測(cè)試)，其特征在于它包括在根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)要確定它是否被活微生物污染的樣品。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測(cè)微生物的方法，其特征在于所述待測(cè)樣品是預(yù)先用于過濾一定體積的水或氣體的過濾器或膜。
11.檢測(cè)一種或多種微生物的方法，其特征在于它包括以下步驟 (i)在允許待測(cè)微生物生長(zhǎng)的條件下將樣品放置在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基包含: -至少一種熒光底物或熒光底物的組合，其可被微生物的至少一種酶激活，和 -至少一種熒光團(tuán)，其熒光指示所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基的PH ； ( )根據(jù)熒光分析所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基，以測(cè)定與所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基中所含的熒光底物被所述微生物激活相關(guān)的熒光，并且測(cè)定由其熒光指示生長(zhǎng)培養(yǎng)基的PH的熒光團(tuán)所發(fā)出的熒光；(iii)分析由其熒光指示PH的熒光團(tuán)的熒光測(cè)量結(jié)果以及熒光底物的熒光測(cè)量結(jié)果，以確定在所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基中待測(cè)的微生物類型存在或不存在。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其特征在于所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基由權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)限定。
13.根據(jù)權(quán)利要求11或12的檢測(cè)微生物的方法，其特征在于，在步驟i)中，在置于生長(zhǎng)培養(yǎng)基中之前將所述微生物預(yù)先過濾在膜上。
14.根據(jù)權(quán)利要求11-13中任一項(xiàng)的檢測(cè)方法，其特征在于，在步驟ii)中，以規(guī)則的間隔測(cè)量熒光以得到熒光隨著時(shí)間的變化。
15.根據(jù)權(quán)利要求11-13中任一項(xiàng)的檢測(cè)方法，其特征在于，在步驟iii)中，將熒光測(cè) 量結(jié)果與數(shù)據(jù)庫中標(biāo)注的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試結(jié)果比對(duì)。
16.用于檢測(cè)微生物的試劑盒，其特征在于它包括 -微生物用生長(zhǎng)培養(yǎng)基； -可溶于所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基的至少一種熒光底物或熒光底物的組合；和 -可溶于所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基的至少一種熒光團(tuán)，其熒光指示所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基的pH。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基以脫水形式包裝。
全文摘要
本發(fā)明涉及聯(lián)用熒光底物和pH-敏感性熒光團(tuán)(特別是4-甲基傘形酮(4-MU)和熒光素衍生物的組合)的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。該生長(zhǎng)培養(yǎng)基用于通過結(jié)合有關(guān)pH-敏感性熒光團(tuán)的熒光檢測(cè)和有關(guān)受微生物激活的熒光底物的熒光檢測(cè)進(jìn)行微生物的熒光檢測(cè)。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK102725418SQ201180007476
公開日2012年10月10日 申請(qǐng)日期2011年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月27日
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