專利名稱：具有降低血中尿酸值作用的乳酸菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有降低血中尿酸值作用的乳酸菌及其利用方法，并涉及含有乳酸菌的用于預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的食品或藥品。
背景技術(shù)：
高尿酸血癥是在環(huán)境因素(生活習(xí)慣)和遺傳因素的影響下，發(fā)生尿酸排泄減少或尿酸產(chǎn)生過剩，從而導(dǎo)致的血中的尿酸過剩的狀態(tài)。雖然高尿酸血癥有時(shí)沒有自覺癥狀，但也可引起痛風(fēng)、腎功能障礙、尿路結(jié)石癥、動(dòng)脈硬化癥等嚴(yán)重的并發(fā)癥。作為高尿酸血癥的代表性并發(fā)癥痛風(fēng)，其表現(xiàn)的主要癥狀是伴隨劇烈疼痛的急性關(guān)節(jié)炎。過去，痛風(fēng)被稱為“帝王之病”，是頻繁且大量攝取肉、魚或酒等的階層的“奢侈病”，但近年來，隨著飲食生活的變化，這種病的發(fā)生呈逐年增加趨勢(shì)。據(jù)說現(xiàn)在在日本，痛風(fēng)患者數(shù)達(dá)30 40萬人，高尿酸血癥患者數(shù)估計(jì)在600萬人，因此對(duì)高尿酸血癥的預(yù)防和治療的關(guān)注增加。高尿酸血癥的預(yù)防及治療可以利用飲食療法、運(yùn)動(dòng)療法、藥品以及這幾種方法的組合、通過控制血中的尿酸值來進(jìn)行。特別是，限制熱量的攝取是高尿酸血癥預(yù)防及治療方法中最經(jīng)常被選擇的方法之一，但持續(xù)進(jìn)行嚴(yán)格的熱量限制并不容易。作為改善這種狀況的方法，提出了下述方法經(jīng)口(例如以藥品、飲食品的形式)攝取分解嘌呤體的乳酸菌、酵母等微生物，在腸道中分解由食物中攝取來的嘌呤體，減少其向體內(nèi)的吸收，從而降低血清尿酸值(專利文獻(xiàn)I、非專利文獻(xiàn)I)。乳酸菌自古以來就被作為食品和藥品使用，其對(duì)人體的安全性高，因此攝取乳酸菌產(chǎn)生副作用的擔(dān)憂小，能夠成為用于預(yù)防、治療高尿酸血癥的有效方法。另外，如上所述，高尿酸血癥的預(yù)防及治療方法的第一選擇是飲食療法，如果把能夠控制尿酸值的乳酸菌作為食品攝入，則能夠成為非常實(shí)際而且有力的新型的預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的方法。但是，上述文獻(xiàn)中報(bào)告的具有嘌呤體分解能力的乳酸菌發(fā)酵乳桿菌(lactobacillus fermentum)、戍糖乳桿菌(Lactobacillus pentosus)具有氣體產(chǎn)生能力，從應(yīng)用于飲食品及藥品的觀點(diǎn)出發(fā)，不能說是合適的菌種。專利文獻(xiàn)I :W02004/112809非專利文獻(xiàn)I :日本農(nóng)蕓化學(xué)會(huì)*一 ^ 一'/日本農(nóng)蕓化學(xué)會(huì)年次大會(huì)講演発表〒'一夕《一 ^ (http://isbba.bioweb.ne.jp/jsbba_db/index.html)「日本農(nóng)蕓化學(xué)會(huì)2004. 03. 30 —般講演、池永武、久米村恵他食事性高尿酸血癥* 7〃卜乃血中尿酸値(二及$ t乳酸菌O影響」

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是鑒于上述狀況而完成的，本發(fā)明要解決的課題是提供適合飲食品和藥品用途的能夠預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的乳酸菌，而且同時(shí)提供利用了上述乳酸菌的用于、預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的組合物。為了解決上述課題，本發(fā)明人等進(jìn)行了堅(jiān)持不懈的努力。首先，在肌苷和鳥苷存在下培養(yǎng)各種乳酸菌，測(cè)定上述核苷的消耗量和分解產(chǎn)物(次黃嘌呤、鳥嘌呤)的產(chǎn)生量，挑選核苷分解能力顯著的多種乳酸菌。將通過上述挑選被判斷為核苷分解能力高的乳酸菌經(jīng)口給予用含有嘌呤體的飼料喂養(yǎng)的大鼠，測(cè)定該大鼠的一般狀況和血清尿酸值，觀察給予乳酸菌對(duì)血清尿酸值的影響。其結(jié)果發(fā)現(xiàn)了能夠顯著抑制血清尿酸值上升的乳酸菌口乳桿菌 0LL2779 (Lactobacillus oris 0LL2779)和格氏乳桿菌 0LL2959 (Lactobacillusgasseri 0LL2959)。本發(fā)明人等進(jìn)一步利用上述乳酸菌制備酸奶,并確認(rèn)了上述乳酸菌適用于含有酸奶的食品的加工。本發(fā)明的乳酸菌由于能夠抑制血清尿酸值的上升，因此可以有效地用作用于預(yù)防和/或治療高尿酸血癥或痛風(fēng)的藥品。另外，本發(fā)明的乳酸菌通過經(jīng)口給予的實(shí)驗(yàn)確認(rèn)了其具有抑制血清尿酸值上升的效果，而且確認(rèn)了也適于實(shí)際的食品加工，因此在可以用作食品方面具有很高的實(shí)用性。即，本發(fā)明涉及可預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的乳酸菌及其應(yīng)用，具體而言，提供下述發(fā)明(I) 一種乳桿菌(Lactobacillus)屬乳酸菌,其具有嘌呤體分解能力且不具有氣 體產(chǎn)生能力。(2)上述(I)所述的乳酸菌，其為格氏乳桿菌。(3) 一種口乳桿菌乳酸菌，其具有嘌呤體分解能力。(4)上述⑵所述的乳桿菌屬乳酸菌，其為格氏乳桿菌0LL2959(保藏號(hào)NITEBP-224)。(5)上述(3)所述的乳桿菌屬乳酸菌，其為口乳桿菌0LL2779(保藏號(hào)NITEBP-223)。(6) 一種用于抑制血中尿酸值上升的飲食品，其含有上述(I) (5)任一項(xiàng)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物。(7) 一種用于抑制血中尿酸值上升的藥品，其含有上述(I) (5)任一項(xiàng)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物。(8) 一種用于預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的藥品，其含有上述(I) (5)任一項(xiàng)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物。(9) 一種用于預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的飲食品，其含有上述(I) (5)任一項(xiàng)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物。(10) 一種抑制從食品中攝取的嘌呤體量的方法，其特征在于，給予上述(I) (5)任一項(xiàng)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物。(11) 一種抑制血中尿酸值上升的方法，其特征在于，給予上述(I) (5)任一項(xiàng)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物。(12) 一種嘌呤體量降低了的飲食品的制造方法，其包括使飲食品的原料或中間產(chǎn)品與上述(I) (5)任一項(xiàng)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物接觸的工序。(13) 一種治療和/或預(yù)防高尿酸血癥、痛風(fēng)、腎功能障礙、尿路結(jié)石癥和動(dòng)脈硬化癥中的任一種以上的疾病或癥狀的方法，其特征在于，給予上述(I) (5)任一項(xiàng)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物。(14)上述⑴ (5)任一項(xiàng)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物在制造用于抑制給予對(duì)象的血中尿酸值上升的飲食品和/或藥品中的用途。


圖I為表示在嘌呤體(肌苷)存在下培養(yǎng)各種乳酸菌時(shí)各乳酸菌的嘌呤體分解能力的圖。將確認(rèn)嘌呤體分解率高的菌株(星號(hào))作為動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)對(duì)象。圖2為表示在嘌呤體(鳥苷)存在下培養(yǎng)各種乳酸菌時(shí)各乳酸菌的嘌呤體分解能力的圖。將確認(rèn)嘌呤體分解率高的菌株(星號(hào))作為動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)對(duì)象。圖3為用(次黃嘌呤量+鳥嘌呤量)/5_溴尿嘧啶量評(píng)價(jià)發(fā)酵乳桿菌(L. fermentum)和短乳桿菌(L. brevis)乳酸菌的嘌呤體分解能力的圖。圖4為表示對(duì)飲食性高尿酸血癥動(dòng)物模型經(jīng)口給予嘌呤體分解能力高的乳酸菌(L. fermentum、L. brevis)并測(cè)定血清尿酸值而得到的結(jié)果的圖。 圖5為表示對(duì)飲食性高尿酸血癥動(dòng)物模型經(jīng)口給予嘌呤體分解能力高的乳酸菌(L. oris、L. gasseri)并測(cè)定血清尿酸值而得到的圖。L. oris0LL2779菌株給予組(第7組)在給予開始后第2天和第5天，觀察到對(duì)血清尿酸值上升的顯著抑制(圖中的#)；L. gasseri0LL2959菌株給予組(第9組)在給予開始后第5天,觀察到對(duì)血清尿酸值上升的顯著抑制(圖中的#)。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明涉及具有嘌呤體分解能力且不具有氣體產(chǎn)生能力的乳桿菌屬乳酸菌。本發(fā)明是基于由本發(fā)明人等首次發(fā)現(xiàn)的具有嘌呤體分解能力且不具有氣體產(chǎn)生能力的乳桿菌屬乳酸菌(以下稱“本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌)的發(fā)明。乳桿菌(Lactobacillus)屬是乳酸菌中具有代表性的菌屬之一，其包含80種以上的菌種。作為乳桿菌屬中包含的菌種的例子，可列舉出德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp. burgalicus)、德氏乳桿菌乳亞種(Lactobacillusdelbrueckii subsp. lactis)、副干酪乳桿菌副干酪亞種(Lactobacillus paracaseisubsp. paracasei)、瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)、瑞士乳桿菌約古特亞種(Lactobacillus helveticus subsp. jugurti)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)、卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、嗜淀粉乳桿菌(Lactobacillusamylovorus)、雞乳桿菌(Lactobacillus gal I inarum)、格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)、口乳桿菌(Lactobacillus oris)、干釀乳桿菌鼠李糖亞種(Lactobacilluscasei subsp. rhamnosus)、約氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、短乳桿菌(Lactobacillus brevis)。本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌只要是具有嘌呤體分解能力且不具有氣體產(chǎn)生能力的乳桿菌屬乳酸菌，則可以是任一菌種，但優(yōu)選是格氏乳桿菌。嘌呤體是構(gòu)成核酸的成分，通過嘌呤的從頭(de novo)合成途徑、補(bǔ)救合成途徑、及膳食中的核蛋白等提供給機(jī)體，不需要的嘌呤體則在肝臟中被代謝排出。在人類、高等靈長類動(dòng)物、鳥類、爬行動(dòng)物等中，尿酸是嘌呤體的最終代謝產(chǎn)物。 本說明書中的嘌呤體是指具有嘌呤骨架的化合物。作為嘌呤體的代表例子，可列舉出嘌呤核苷酸(腺苷酸、脫氧腺苷酸、鳥苷酸、脫氧鳥苷酸)，嘌呤核苷(腺苷、脫氧腺苷、鳥苷、脫氧鳥苷)，嘌呤堿基(腺嘌呤、鳥嘌呤)，含有嘌呤堿基的寡核苷酸和多核苷酸。嘌呤堿基除了構(gòu)成核酸以外，還可構(gòu)成ATP、GTP、cAMP、cGMP、輔酶A、FAD、NAD等多種生物體成分。本說明書中，只要具有嘌呤骨架，則這樣的生物體成分全部包含在嘌呤體中。生物體內(nèi)的嘌呤體代謝為尿酸。從嘌呤體到尿酸的代謝路徑已廣為人知。AMP在5'-核苷酸酶的作用下變成腺苷，腺苷經(jīng)過肌苷轉(zhuǎn)變?yōu)榇吸S嘌呤。GMP在5'-核苷酸酶的作用下變成鳥苷后，轉(zhuǎn)變成鳥嘌呤。次黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶的作用下、鳥嘌呤在鳥嘌呤脫氨酶的作用下均代謝為黃嘌呤，黃嘌呤進(jìn)一步在黃嘌呤氧化酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)槟蛩?。本發(fā)明中的嘌呤體分解能力是 指分解至少一種嘌呤體的能力，而不管分解產(chǎn)物是否具有嘌呤骨架。即，將某嘌呤體分解成不具有嘌呤骨架的化合物的能力及將某嘌呤體分解成其他嘌呤體(具有嘌呤骨架的化合物)的能力都屬于本發(fā)明的嘌呤體分解能力。本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌可采用公知的方法進(jìn)行分離。例如可通過下述方法進(jìn)行分離利用人等哺乳類的糞便培養(yǎng)細(xì)菌，根據(jù)培養(yǎng)出的細(xì)菌的形態(tài)、生物學(xué)特征等分離出乳桿菌屬，檢測(cè)有無嘌呤體分解能力和氣體產(chǎn)生能力，選擇具有嘌呤體分解能力且不具有氣體產(chǎn)生能力的乳桿菌屬。嘌呤體分解能力和氣體產(chǎn)生能力的檢測(cè)可采用公知的方法，作為一個(gè)例子，可采用本實(shí)施例的方法。為了培養(yǎng)本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌，可以采用通常適用于乳酸桿菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基，也可以采用含有葡萄糖、乳糖、半乳糖、果糖、海藻糖、蔗糖、甘露糖、纖維二糖等碳源，肉提取物、蛋白胨、酵母提取物、酪蛋白、乳清蛋白質(zhì)等氮源，硫酸鎂、硫酸鐵、硫酸錳等無機(jī)營養(yǎng)素的培養(yǎng)基。作為合適的一個(gè)例子，可列舉出Lactobacilli MRS Broth(Difco)。關(guān)于培養(yǎng)條件，只要是腸內(nèi)乳酸菌能夠生長的條件，則沒有特殊限制，優(yōu)選的條件例如為pH5. 0 pH8. O、溫度20°C 45°C;更優(yōu)選的條件為厭氧條件、pH5. 0 pH7. O、溫度30°C 40。。。本發(fā)明人等如后文所述將本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌經(jīng)口給予動(dòng)物模型，并確認(rèn)了該乳酸菌具有抑制血中尿酸值上升的效果。因此，本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌可用于抑制血中尿酸值的上升或用于預(yù)防和/或治療高尿酸血癥。此外，也可以考慮利用本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌的嘌呤體分解能力，制造嘌呤體量降低了的食品。作為本發(fā)明的“具有嘌呤體分解能力且不具有氣體產(chǎn)生能力的乳桿菌屬乳酸菌”的具體例子，可列舉出以保藏號(hào)NITE BP-224特定的格氏乳桿菌0LL2959。本發(fā)明人等對(duì)多種乳酸菌進(jìn)行了有無嘌呤體分解能力和氣體產(chǎn)生能力的研究，具體地發(fā)現(xiàn)了命名為格氏乳桿菌0LL2959的乳桿菌屬乳酸菌具有嘌呤體分解能力且不具有氣體產(chǎn)生能力。此外，通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)了格氏乳桿菌0LL2959能夠顯著抑制血中尿酸值的上升。本發(fā)明人等將上述菌株保藏于日本獨(dú)立行政法人產(chǎn)品評(píng)價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)專利微生物保藏中心。以下記載了特定保藏的內(nèi)容。(I)保藏機(jī)構(gòu)日本獨(dú)立行政法人產(chǎn)品評(píng)價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)專利微生物保藏中心(NPMD)(2)聯(lián)系地址日本國千葉県木更津市力、f芒鎌足2-5-8郵便番號(hào)292-0818(3)原保藏日2006年3月31日(4)從國內(nèi)保藏向根據(jù)布達(dá)佩斯條約的保藏的移管日2007年11月21日(5)保藏號(hào)格氏乳桿菌0LL2959菌株(保藏號(hào)NITE BP-224)
另外，本發(fā)明還涉及具有嘌呤體分解能力的口乳桿菌(Lactobacillus oris)乳酸菌。本發(fā)明是基于本發(fā)明人等首次發(fā)現(xiàn)的具有嘌呤體分解能力的口乳桿菌乳酸菌(以下也稱為“本發(fā)明的口乳桿菌乳酸菌”)的發(fā)明。本發(fā)明的口乳桿菌乳酸菌的分離和培養(yǎng)可采用與上文說明的本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌的分離和培養(yǎng)相同的方法。另外，本發(fā)明的口乳桿菌乳酸菌也可用于抑制血中尿酸值的上升和用于預(yù)防和/或治療高尿酸血癥。作為本發(fā)明的“具有嘌呤體分解能力的口乳桿菌乳酸菌”的具體例子，可列舉出以保藏號(hào)NITE BP-223特定的口乳桿菌0LL2779。本發(fā)明人等從多種乳酸菌中發(fā)現(xiàn)口乳桿菌0LL2779是具有嘌呤體分解能力的乳酸菌。另外，通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)了口乳桿菌0LL2779能夠顯著抑制血中尿酸值的上升。本發(fā)明人等將上述菌株保藏于日本獨(dú)立行政法人產(chǎn)品評(píng)價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)專利微生物保藏中心。以下記載了特定保藏的內(nèi)容。
(I)保藏機(jī)構(gòu)日本獨(dú)立行政法人產(chǎn)品評(píng)價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)專利微生物保藏中心(NPMD)(2)聯(lián)系地址日本國千葉県木更津市力、f芒鎌足2-5-8郵便番號(hào)292-0818(3)原保藏日2006年3月31日(4)從國內(nèi)保藏向根據(jù)布達(dá)佩斯條約的保藏的移管日2007年11月21日(5)保藏號(hào)口乳桿菌0LL2779菌株(保藏號(hào)NITE BP-223) 本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌以及本發(fā)明的口乳桿菌乳酸菌可用于制造用于抑制血中尿酸值上升的飲食品或藥品、用于預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的藥品或飲食品。利用本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌以及本發(fā)明的口乳桿菌乳酸菌制作的飲食品的種類和類別沒有限制，可以是功能性食品、特定保健用食品、健康食品、護(hù)理用食品，也可以是點(diǎn)心、乳酸菌飲料、奶酪和酸奶等乳制品，調(diào)味料等。對(duì)飲食品的形態(tài)也沒有限制，可以采用固體、液體、流態(tài)食品狀、果凍狀、片狀、顆粒狀、膠囊狀等可通常流通的所有的飲食品的形態(tài)。上述飲食品的制造可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員的常規(guī)方法來進(jìn)行。在上述飲食品的制造中，只要不妨礙乳酸菌的生長，還可以添加糖類、蛋白質(zhì)、脂肪、食物纖維、維生素類、生物體必需的微量金屬(硫酸錳、硫酸鋅、氯化鎂、碳酸鉀等)、香料或其他配合物。本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌以及本發(fā)明的口乳桿菌乳酸菌、這些乳酸菌的乳酸菌含有物和/或其處理物(例如培養(yǎng)物、濃縮物、糊化物、噴霧干燥物、冷凍干燥物、真空干燥物、滾筒干燥物、液態(tài)物、稀釋物、破碎物)，除了可以如上所述加工成含有乳制品和發(fā)酵乳的一般飲食品外，還可以用作制造酸奶或奶酪等乳制品、發(fā)酵乳用的引子(starters)。作為引子的時(shí)候，只要不妨礙本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌和本發(fā)明的口乳桿菌乳酸菌的生長和繁殖，并且不妨礙乳制品的制造，則也可以混合其他微生物。例如，可以與主要作為酸奶用乳酸菌的菌種的德氏乳桿菌保加利亞亞種、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、嗜酸乳桿菌等混合，另外，也可以和通常用作酸奶用或奶酪用的菌種混合作為引子使用。利用上述引子的乳制品、發(fā)酵乳的制造可以按照常規(guī)方法來進(jìn)行。例如，在加溫、混合、均質(zhì)化、殺菌處理后冷卻的乳或乳制品中混入上述引子，經(jīng)過發(fā)酵、冷卻制成純酸奶。本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌以及本發(fā)明的口乳桿菌乳酸菌可與生理學(xué)上可容許的載體、賦形劑或稀釋劑等混合，以醫(yī)藥組合物的形式經(jīng)口或非經(jīng)口給予，但優(yōu)選的給予方法是經(jīng)口給予。作為經(jīng)口給予制劑，可制成公知的各種劑型，例如顆粒劑、散劑、片劑、丸劑、膠囊劑、液體劑、糖漿劑、乳劑、懸浮劑、錠片(troche)等劑型。另外，通過利用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法制成的腸溶性制劑，可不受胃酸的影響，從而將本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌更高效地運(yùn)送到腸道。利用本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌以及本發(fā)明的口乳桿菌乳酸菌制造的藥品以及飲食品，有望憑借飲食品中上述菌的作用，發(fā)揮抑制血中尿酸值上升的效果及預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的效果。另外，利用本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌以及本發(fā)明的口乳桿菌乳酸菌的嘌呤體分解能力，可以制造嘌呤體量降低了的飲食品。本發(fā)明的嘌呤體量降低了的飲食品的制造方法包含使本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌以及本發(fā)明的口乳桿菌乳酸菌與飲食品的原料或中間產(chǎn)品接觸的工序。通過該工序，可以高效地降低該原料或中間產(chǎn)品中含有的嘌呤體的量。上述工序優(yōu)選在本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌以及本發(fā)明的口乳桿菌乳酸菌能夠生存的條件下進(jìn)行。本發(fā)明的制造方法除了上述工序外，還可包含粉碎工序、混合工序、干燥工序、殺菌以及填充工序等目標(biāo)飲食品的通常的制造工序。利用本發(fā)明的方法制造的飲食品的種類和類 別沒有限制，例如，可以是功能性食品、特定保健用食品、健康食品、護(hù)理用食品，也可以是一般的食品，例如可以是被分類為嗜好品的食品，但對(duì)于需要限制嘌呤體攝入量的疾病或癥狀的患者或上述疾病或癥狀的準(zhǔn)患者是非常有用的日常性或輔助性飲食品。本發(fā)明的方法使得需要限制嘌呤體攝入量的或希望抑制嘌呤體攝入量的人們可以攝取原本嘌呤體含量多的食品，并且享受其營養(yǎng)素和美味。需要說明的是，本說明書中引用的全部的現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)作為參考引入本說明書中。實(shí)施例以下基于實(shí)施例更加詳細(xì)地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受下述實(shí)施例的限定。另夕卜，在實(shí)施例中，菌株名中記有JCM的菌株是從日本獨(dú)立行政法人理化學(xué)研究所生物資源中心的微生物材料開發(fā)室獲得的標(biāo)準(zhǔn)株、菌株名中記有ATCC的菌株是從American TypeCulture Collection獲得的標(biāo)準(zhǔn)株、菌株名中記有MEP的菌株是明治乳業(yè)株式會(huì)社擁有的菌株。[實(shí)施例I]關(guān)于乳酸菌的降低尿酸作用的體外的實(shí)驗(yàn)方法采用以下的方法對(duì)各種乳酸菌有無嘌呤體分解能力進(jìn)行研究。各種乳酸菌(菌體)采用Difco Lactobacilli MRS Broth (BD制)培養(yǎng)基，與氧吸附劑(Anaeix)Pack)(三菱氣體株式會(huì)社制)一起裝入密閉容器中，在溫度37°C下厭氧培養(yǎng)過夜。培養(yǎng)后的菌體懸浮液在轉(zhuǎn)速為3000rmp、溫度為4°C下離心10分鐘，沉淀回收(集菌)菌體。利用上述菌體，采用0. IM的磷酸鈉緩沖液制備I X 109CFU/mL的菌體懸浮液。各種菌體懸浮液制備好后，在各種菌體懸浮液中分別加入肌苷和鳥苷，使其分別達(dá)到I. 25mM。將這些菌體懸浮液放入37°C的恒溫槽內(nèi)，以水平轉(zhuǎn)速140rpm振蕩培養(yǎng)30分鐘或2小時(shí)。對(duì)振蕩培養(yǎng)后的菌體懸浮液(反應(yīng)液)，采用HPLC以5-溴尿嘧啶為內(nèi)標(biāo)測(cè)定核苷的消耗量和作為核苷分解物的堿基(次黃嘌呤和鳥嘌呤)的生成量。向流動(dòng)相A的780 ii L中加入反應(yīng)液200 u L、作為內(nèi)標(biāo)的5-溴尿嘧啶(I. 6mg/mL) 20 u L后混合。將該混合液用過濾器(孔徑為0. 45 u m)過濾后，將濾液50 i! L注入到HPLC中。HPLC的具體操作條件如下。HPLC ffaters alliance 2690色譜柱CAPCELLPAK C18 SG120、粒徑為 5iim、柱尺寸為 4. 6X250mm(資生堂)流動(dòng)相A25mM KH2PO4 (0. I % 甲醇)B 25mM KH2PO4 (0. I % 甲醇)/ 甲醇(75 25)梯度 A/B (min) : 100/0 (0)-100/0 (I0) -20/80(20)-20/80(25)-100/0(26)-100/0 (40)檢測(cè)器光電二極管陣列(Waters 996)檢測(cè)波長為254nm 流速lmL/min柱溫常溫結(jié)果示于圖I 3。各化合物的定量根據(jù)HPLC圖譜中峰面積值進(jìn)行。另外，圖I及圖2的分解率根據(jù)下式計(jì)算得出。分解率=100-(肌苷或鳥苷的量/空白中的肌苷或鳥苷的量)X 100另外，圖3的計(jì)算方法如下。(次黃嘌呤量+鳥嘌呤量)/5-溴尿嘧啶量根據(jù)圖I 3的結(jié)果，挑選可判斷為核苷分解能力顯著的乳酸菌。[實(shí)施例2]關(guān)于乳酸菌的降低尿酸作用的體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)方法按照現(xiàn)有文獻(xiàn)(非專利文獻(xiàn)I)中記載的方法，制作飲食性高尿酸血癥動(dòng)物模型，研究微生物(乳酸菌)對(duì)該動(dòng)物的血清尿酸值的影響。上述方法具體為下述方法制備含有2. 5重量％的氧嗪酸鉀和I. 0重量％的RNA的混合飼料，喂養(yǎng)大鼠，比較陰性組和對(duì)照組攝食后的血中尿酸值。本方法的動(dòng)物模型在經(jīng)口給予尿酸生成的阻滯劑別嘌呤醇后，可知該動(dòng)物模型的血中尿酸值被顯著抑制(食品機(jī)能研究二二一 * (第14號(hào))、2005年3月9日発行、(株)J \ > 夕 1Jm 環(huán)境検查七 ^ 夕一>http://www. m-cleantec. com/gizyutu/news_0503. html)。上述內(nèi)容顯示作為針對(duì)高尿酸血癥的食品的有效性的評(píng)價(jià)系統(tǒng)，上述方法是有用的。(2-1材料及實(shí)驗(yàn)步驟)(微生物)使用在上述體外實(shí)驗(yàn)中被判斷為核苷分解能力高的5個(gè)菌株Lactobacillusfermentum MEP181504 菌株(以下根據(jù)情況將 “Lactobacillus” 簡記為 “L.，，)、L. brevisMEP181507 菌株、L. gaserri JCM8787 菌株、L. gaserri 0LL2959 菌株、L. oris 0LL2779菌株。與體外實(shí)驗(yàn)同樣地利用各種乳酸菌制備菌體懸浮液。向大鼠經(jīng)口給予菌體懸浮液lX109CFU/10mL/kg。(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物)使用大鼠(Wister SPF、雄性、7周齡)。飼養(yǎng)(馴化和實(shí)驗(yàn))中使用大鼠用塑料籠，每個(gè)籠子僅收容一只大鼠。明暗周期中將明期設(shè)定為上午7點(diǎn) 下午7點(diǎn)(12小時(shí))。(預(yù)備飼養(yǎng)(馴化)和分組)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物搬入后進(jìn)行一周的預(yù)備飼養(yǎng)(馴化)。馴化中，使它們自由攝取作為餌料(飼料)的AIN-93G(Oriental酵母工業(yè)株式會(huì)社)、作為飲水的自來水。預(yù)備飼養(yǎng)后的大鼠(入選7天后、8周齡、第0天)在上午非絕食下從尾靜脈采血。該血液在室溫下放置30分鐘以上后，以轉(zhuǎn)速IOOOOrpm離心分離10分鐘，分離血清，血清中的尿酸值采用磷鎢酸
法測(cè)定。分組時(shí)使各組的血清中尿酸值相等。實(shí)驗(yàn)中每組使用5只大鼠，設(shè)定陰性組(第
1、5組)、對(duì)照組(第2、6組)、菌體給予組(第3、4、7 9組)共9組。以下給出組名、餌料、給予物(給予用量)、只數(shù)等。 陰性組(第1、5組)給予“AIN-93G”餌料、給予“生理鹽水”(10mL/kg)、5只 對(duì)照組(第2、6組)“給予混合了 2. 5重量％的氧嗪酸鉀、L 0重量％的RNA的AIN-93G”餌料、給予“生理鹽水”(10mL/kg)、5只 菌體給予組(第3、4、7 9組)所有組都給予“混合了 2. 5重量％的氧嗪酸鉀、
I.0重量％的RNA的AIN-93G”餌料、5只。各組的給予菌體及給予量為第3 組給予 “L. fermentum MEP181504 菌株的懸浮液(I X 108CFU/mL) ” (IOmL/kg)、第4 組給予 “L. brevis MEP181507 菌株的懸浮液(I X 108CFU/mL) ” (10mL/kg)、第7 組給予 “L. oris 0LL2779 菌株的懸浮液(I X 108CFU/mL) ” (10mL/kg)、第8 組給予 “L. gaserri JCM8787 菌株的懸浮液(I X 108CFU/mL) ” (10mL/kg)、第9 組給予 “L. gaserri 0LL2959 菌株的懸浮液(I X 108CFU/mL) ” (10mL/kg)。(正式飼養(yǎng)(實(shí)驗(yàn)))
分組后第二天開始為試驗(yàn)期間，分別利用喂食器讓大鼠自由攝取“AIN-93G”飼料(陰性組)和“AIN-93G+氧嗪酸鉀+RNA”飼料(對(duì)照組、菌體給予組)8天。將正式飼料的喂食開始日作為第一天，以后按照日期來計(jì)算天數(shù)?！癆IN-93G+氧嗪酸鉀+RNA”飼料含有氧嗪酸鉀(100g、ALDRICH)2. 5 重量％和 RNA(500g、MP Biomedicals. Inc.) I. 0 重量％。以IX IO9CFU/10mL/kg向菌體給予組的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物強(qiáng)制經(jīng)口給予上述菌體懸浮液。對(duì)陰性組和對(duì)照組不給菌體懸浮液，而是以10mL/kg強(qiáng)制經(jīng)口給予生理鹽水。(測(cè)定和檢查等) 一般狀態(tài)的觀察和體重的測(cè)量所有例(所有組)從第I天開始到第8天的每一天，在給予時(shí)觀察一般狀態(tài)，第0天、第I天、第5天、第8天的上午9 10點(diǎn)定時(shí)測(cè)量體重。 攝食量和攝水量的測(cè)定所有例(所有組)的第I天(設(shè)定值)、第5天(剩余值、設(shè)定值)、第8天(剩余值)的上午9 10點(diǎn)定時(shí)測(cè)定攝食量和攝水量。 采血和生化學(xué)檢查所有例(所有組)在第0天(上午)、第2天(給予I小時(shí)后)、第5天(給予I小時(shí)后)、第8天(給予前)從尾靜脈采血。采取的血液以IOOOOrpm的轉(zhuǎn)速離心分離10分鐘，分離血清，血清中的尿酸值采用磷鎢酸法測(cè)定。如前所述，在第0天當(dāng)天測(cè)定血清中尿酸值以用來分組。 解剖和生化學(xué)檢查所有例(所有組)在第8天從尾靜脈采血后經(jīng)口給予菌體懸浮液。給予I小時(shí)后在nembutal麻醉(苯巴比妥40mg/kg)狀態(tài)下,從腹主動(dòng)脈采全部血液處死。采取的血液以3000rpm的轉(zhuǎn)速離心分離15分鐘，分離血清，測(cè)定血清中的肌酐、尿酸、尿素氮。
臟器重量的測(cè)量取大鼠的腎臟，測(cè)量濕重。(統(tǒng)計(jì)處理)結(jié)果用平均值土標(biāo)準(zhǔn)差表示，比較對(duì)照組和菌體給予組各組。對(duì)數(shù)值化的檢測(cè)值的方差比率進(jìn)彳丁 F檢驗(yàn),方差齊時(shí)進(jìn)彳丁 Student' s t-檢驗(yàn)、方差不齊時(shí)進(jìn)彳丁 Aspin-Welcht-檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)處理時(shí)使用Excel統(tǒng)計(jì)2004的統(tǒng)計(jì)分析，最低顯著水平為雙側(cè)5%。(2-2 結(jié)果)一般狀態(tài)的結(jié)果不于表I (L. fermentum和L. brevis)和表2 (L. oris和L. gasseri),血清尿酸值的變化示于圖4和5。對(duì)于給予各種乳酸菌引起的血清中尿酸值的下降，如圖5所示，在L.oris OLL·2779給予組與L. gasseri 0LL2959給予組可見顯著性差異。關(guān)于一般狀態(tài)，所有組的腎功能(肌酐值、血清中尿素氮、腎臟重量)都沒有問題，體重、攝食量、攝水量在所有組中也均沒有問題。另外，一般狀態(tài)的所見情況在各種乳酸菌之間未觀察到顯著性差異。Loris0LL2779及L. gasseri 0LL2959的科學(xué)特征示于表3。表I
權(quán)利要求
1.一種乳桿菌屬乳酸菌，其是保藏號(hào)為NITE BP-223的口乳桿菌0LL2779，其具有嘌呤體分解能力。
2.一種具有嘌呤體分解能力的用于抑制血中尿酸值上升的飲食品，其含有權(quán)利要求I所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其培養(yǎng)物、濃縮物、糊化物、噴霧干燥物、冷凍干燥物、真空干燥物、滾筒干燥物、液態(tài)物、稀釋物、破碎物。
3.一種具有嘌呤體分解能力的用于抑制血中尿酸值上升的藥品，其含有權(quán)利要求I所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其培養(yǎng)物、濃縮物、糊化物、噴霧干燥物、冷凍干燥物、真空干燥物、滾筒干燥物、液態(tài)物、稀釋物、破碎物。
4.一種用于預(yù)防和/或治療高尿酸血癥且具有嘌呤體分解能力的藥品，其含有權(quán)利要求I所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其培養(yǎng)物、濃縮物、糊化物、噴霧干燥物、冷凍干燥物、真空干燥物、滾筒干燥物、液態(tài)物、稀釋物、破碎物。
5.一種用于預(yù)防和/或治療高尿酸血癥且具有嘌呤體分解能力的飲食品，其含有權(quán)利 要求I所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其培養(yǎng)物、濃縮物、糊化物、噴霧干燥物、冷凍干燥物、真空干燥物、滾筒干燥物、液態(tài)物、稀釋物、破碎物。
6.權(quán)利要求I所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其培養(yǎng)物、濃縮物、糊化物、噴霧干燥物、冷凍干燥物、真空干燥物、滾筒干燥物、液態(tài)物、稀釋物、破碎物在制造用于抑制給予對(duì)象從食品中攝取的嘌呤體量的飲食品中的用途。
7.—種嘌呤體量降低了的飲食品的制造方法，其包括使飲食品的原料或中間產(chǎn)品與權(quán)利要求I所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其培養(yǎng)物、濃縮物、糊化物、噴霧干燥物、冷凍干燥物、真空干燥物、滾筒干燥物、液態(tài)物、稀釋物、破碎物接觸的工序。
8.權(quán)利要求I所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其培養(yǎng)物、濃縮物、糊化物、噴霧干燥物、冷凍干燥物、真空干燥物、滾筒干燥物、液態(tài)物、稀釋物、破碎物在制造用于治療和/或預(yù)防給予對(duì)象的高尿酸血癥、痛風(fēng)、腎功能障礙、尿路結(jié)石癥和動(dòng)脈硬化癥中的任一種以上的疾病或癥狀且具有嘌呤體分解能力的飲食品或藥品中的用途。
9.權(quán)利要求I所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其培養(yǎng)物、濃縮物、糊化物、噴霧干燥物、冷凍干燥物、真空干燥物、滾筒干燥物、液態(tài)物、稀釋物、破碎物在制造用于抑制給予對(duì)象的血中尿酸值上升且具有嘌呤體分解能力的飲食品或藥品中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有降低血中尿酸值作用的乳酸菌。本發(fā)明在嘌呤體存在下培養(yǎng)各種乳酸菌，測(cè)定該嘌呤體的消耗量以及該嘌呤體分解物的產(chǎn)生量，挑選嘌呤體分解能力顯著的多種乳酸菌。將通過上述挑選被判斷為嘌呤體分解能力高的乳酸菌經(jīng)口給予用含有嘌呤體的飼料喂養(yǎng)的大鼠，測(cè)定該大鼠的一般狀況和血清尿酸值，研究給予乳酸菌對(duì)血清尿酸值的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)了能夠顯著抑制血清尿酸值上升的乳酸菌格氏乳桿菌OLL2959和口乳桿菌OLL2779。
文檔編號(hào)A23L1/30GK102747004SQ20111045393
公開日2012年10月24日 申請(qǐng)日期2007年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月29日
發(fā)明者佐藤秋菜, 土屋義信, 坪井洋, 金子紀(jì)子 申請(qǐng)人:株式會(huì)社明治