專利名稱：利用選擇的乳酸桿菌減少嬰兒腹痛的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明這里提供了特定的乳酸桿菌菌株，以及一種選擇這樣菌株的方法，和包含這樣菌株的產(chǎn)品；其中這些菌株由于具有提高細(xì)胞因子IL-10水平的能力而被選擇出來， 用于預(yù)防和/或治療腹痛。
背景技術(shù)：
雖然嬰兒腹痛既普遍又痛苦，但是其特性和原因仍然不清楚。一位母親對(duì)這種情況的描述是在一天中本來很高興的嬰兒，開始皺眉頭、臉開始變紅、蹬腿、尖叫并持續(xù)哭鬧2 20分鐘，然后這種襲擊突然停止。甚至對(duì)于用來描述這種情況的術(shù)語(yǔ)也有爭(zhēng)論。這些術(shù)語(yǔ)包括“嬰兒腹痛”、“傍晚腹痛”，因?yàn)檫@種疼痛主要局限于晚間，以及“三個(gè)月腹痛”籍由這種癥狀在嬰兒出生后三個(gè)月左右消失(Illingworth RS.Difficulties in breastfeeding.In Ronald S.Illingworth, ed.The Normal Child. IOth edn. Harcourt (India) Pvt. Ltd. 1997 ； 39-44)。不同的作者采用不同的定義。Wessels的定義為腹痛是在至少三個(gè)星期的每個(gè)星期中三天或者更多天中出現(xiàn)每天三個(gè)或更多小時(shí)的陣發(fā)性哭鬧，是在文獻(xiàn)中最為廣泛接受的(Sondergaard C，Skajaa E， Henriksen TB. Fetal growth and infantile colic. Arch Dis Child Fetal-Neonatal Ed 2000；83(1) :F44-47)。目前，主要的可能誘發(fā)因素被分成三組心理與社會(huì)的、腸胃的和神經(jīng)發(fā)育的疾病。心理與社會(huì)的因素包括正常哭鬧的變體、非典型的養(yǎng)育行為影響、父母與嬰兒之間交流問題的表現(xiàn)。腸胃的疾病在腹痛中被涉及到，因?yàn)榭摁[時(shí)嬰兒腿部的位置和臉部的扭曲。腸胃的因素主要有以下內(nèi)容不正確的喂養(yǎng)方法例如奶瓶喂養(yǎng)，水平位置喂養(yǎng)以及喂后缺少缺少使之打嗝的拍打被認(rèn)為是誘發(fā)原因。在開始的六個(gè)月內(nèi)母乳喂養(yǎng)被認(rèn)為是唯一的保護(hù)因素。在非母乳喂養(yǎng)的嬰兒中嬰兒的腹痛的風(fēng)險(xiǎn)性提高了 1.86倍。(Saavedra MA, Dacosta JS, Garcias G, HortaBL, Tomasi Ε, Mendoca R. Infantile colic incidence and associated riskfactors :a cohort study. Pediatr (Rio J) 2003 ；79 (2) :115-122) Lothe 等人認(rèn)為腹痛是由于對(duì)牛奶中乳清蛋白敏感(Lothe L,Lindberg T. Cow' smilk whey protein elicits symptoms of infantile colic in colicky formula-fed infants :k double-blind cross over study. Pediatrics 1989 ；83 262).在一項(xiàng)近期的研究中，得出的結(jié)論認(rèn)為食物的過敏性僅僅只是少部分嬰兒的腹 ΛM Wi^ S (Hill DJ, Hosking CS. Infantile colicand food hypersensitivity. J Pediatr Gastrenterol Nutr 2000 ；30 (Suppl) :S67_76)。近來 Buchanan 已經(jīng)顯示低過敏原牛奶在嬰兒腹痛中的實(shí)驗(yàn)沒有得到足夠的證據(jù)支持(Buchanan P. Effectiveness of treatment for infantile colic。 Trial of hypoallergenic milk is not supported by strongenough evidence. BMJ 1998 ;317 (7170) :1451-1452)?；加袐雰焊雇吹膵雰罕徽J(rèn)為具有較高的過敏性疾病風(fēng)險(xiǎn)度。然而，在一項(xiàng)近期的研究中，特應(yīng)性、過敏性鼻炎、哮喘、喘鳴和呼吸頻率變化的標(biāo)記，在患有和不患有嬰兒腹痛的嬰兒中是可比對(duì)的 (Castro-Rodriguez JA,Stern DA,Halonen Μ,Wright AL,Holberg CJ et al. Relationship between infantile colic and Asthma/atopy :A prospective study in an unselected population. Pediatrics 2001 ； 108 (4) :878-882)。乳糖吸收障礙已經(jīng)被作者基于呼吸氫檢測(cè)報(bào)道了(Hyams J，Geerstama M， Etienne N, Treem W. Colonichy drogen production in infants with colic. J Pediatr 1989 ；115 592)。在患有和不患有嬰兒腹痛的嬰兒中沒有發(fā)現(xiàn)糞便中氫濃度的差異。然而， 產(chǎn)生較高甲烷水平的嬰兒被發(fā)現(xiàn)減少了腹痛，這說明甲烷的產(chǎn)生能起到緩解作用(Belson A, Shetty AK, Yorgin PD, Bujanover Y, Peled Y, Dar MH, Riaf S. Colonichy drogen elimination and methane production in infants with and without infantile colic syndrome. Dig Dis Sci 2003 ；48 (9) :1762-1766)。腸胃的(GIT)激素例如能動(dòng)素，血管活性腸肽已經(jīng)顯示在患有腹痛的嬰兒中異常高。Lothe等人發(fā)現(xiàn)在日后發(fā)展腹痛的嬰兒從出生第一天起就顯示GIT水平增高，其說明在嬰兒腹痛患者的GIT生理狀況異常(Lothe L，Ivassson SA, Ekman R，Lindberg T. Motilin and infantile colic :A prospective study. Acta Pediatr Scand 1990 ； 79(4) :410-416)。已提出的神經(jīng)發(fā)育失調(diào)顯示腹部的痙攣和腹痛有可能是蠕動(dòng)過度的結(jié)果。該理論得到的證據(jù)支持是利用抗膽堿能試劑可以減少腹痛癥狀(Gupta SK. Is colic a gastro intestinal disorder ？ Curr Opin Pediatr2002 ； 14 :588-92)。大部分嬰兒在4個(gè)月左右擺脫了腹痛困擾的事實(shí)支持了神經(jīng)發(fā)育因素誘發(fā)月復(fù)痛白勺觀(Barr RG. Colic and crying syndromes in infants. Pediatrics 1998 ； 102(5suppl E) :1282-6)。根據(jù)普遍接受的定義，益生菌是一種活的微生物飼料添加劑，其能通過改善宿主腸內(nèi)的微生物平衡而有效影響宿主動(dòng)物。雖然最初指的是用于農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物飼料的添加劑，用于人類的情況該定義也很容易被接受。人類所攝取的主要益生菌是包含腸道乳酸桿菌和雙歧桿菌菌種的乳制品形式的食品。其暗示益生菌的攝取影響腸內(nèi)微生物群落的組成。有人提出益生菌對(duì)腸內(nèi)生態(tài)系統(tǒng)的影響有益于攝取者。已經(jīng)公開的通過使用益生菌改變腸內(nèi)微生物而帶來的很多可能的益處包括提高傳染性疾病的抵抗力、尤其是腸的、 減少腹瀉的持續(xù)時(shí)間、降低血液壓力、降低血液膽固醇濃度、減少過敏、刺激外周血淋巴細(xì)胞的吞噬作用、調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的基因表達(dá)、輔助作用、腫瘤衰退、和減少致癌物或輔致癌物的產(chǎn)生。Christensen等人首先報(bào)道了益生菌乳酸桿菌的免疫調(diào)節(jié)作用，其調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞(DCs)的Thl/Th2/Th3/Trl/Treg-增強(qiáng)能力。他們展示了當(dāng)鼠科動(dòng)物細(xì)胞DCs暴露于不同乳酸桿菌種類的共培養(yǎng)物時(shí)，包括路氏乳酸桿菌，它們產(chǎn)生細(xì)胞因子11-6，IL-10，IL-12， 和TNF-α的能力和以濃度依賴的方式上調(diào)節(jié)MHC II類和CD86表面標(biāo)記的能力被不同程度地調(diào)節(jié)。所有乳酸桿菌上調(diào)節(jié)的表面MHC II類和⑶86標(biāo)記-顯示出DC成熟。在這些研究中尤其要注意到路氏乳酸桿菌(菌株12M6)是一種弱的IL-12誘導(dǎo)劑，但是當(dāng)其與約氏乳酸桿菌或干酪乳酸桿菌共培養(yǎng)時(shí)，其能不同程度地抑制前炎癥細(xì)胞因子信號(hào)IL-12，IL-6和TNF-a的產(chǎn)生，而這些物質(zhì)可被后兩種種類刺激。IL-10的產(chǎn)生在這些情況下保持不變。這些發(fā)現(xiàn)推出的結(jié)論是“路氏乳酸桿菌可能對(duì)腸內(nèi)的樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生一種環(huán)境調(diào)節(jié)作用，使其產(chǎn)生對(duì)于沒有“危險(xiǎn)信號(hào)”的抗原有益的耐受性，而同時(shí)保持了對(duì)通過危險(xiǎn)信號(hào)例如LPS所識(shí)別的病原體完好的應(yīng)答能力”，而且“路氏乳酸桿菌可能是一種潛在的精細(xì)靶向治療，能有效下調(diào)節(jié)IL-12和TNF-α (和IL-6)產(chǎn)量同時(shí)誘導(dǎo)抗炎癥因子 IL-10，這樣提供了一種替代的方法抗衡腸內(nèi)前炎癥因子微生物群落”并且因此“可能存在 Thl/Th2/Th3的腸激發(fā)作用，根據(jù)腸微生物群的組成而被調(diào)節(jié)，腸微生物群包括攝入的益生菌。，，(Christensen HR, Frokiaer H, Pestka JJ (2002) Lactobacilli differentially modulate expression ofcytokiness and maturation surface markers in murine dendritic cells. J Immunol 168171-178)。Smits等人擴(kuò)展了這些研究并且發(fā)現(xiàn)路氏乳酸桿菌能夠激活DCs以刺激T調(diào)節(jié) (TR)細(xì)胞產(chǎn)生。他們采用三種不同的乳酸桿菌在體外與人的單核細(xì)胞-來源的DCs共培養(yǎng)。其中兩種乳酸桿菌，一種人的路氏乳酸桿菌菌株(ATCC 53609)和干酪乳酸桿菌，而不是植物乳酸桿菌菌株，激活這些DCs以刺激TR細(xì)胞的發(fā)育。這些TR細(xì)胞被顯示出能產(chǎn)生水平提高了的IL-10并且能夠以一種IL-10-依賴的方式抑制旁路T細(xì)胞的增殖(Smits HH, Engering A，van der Kleij D，de Jong EC，Schipper K，van Capel TMM, Zaat BAJ. Yazdanbakhsh M， Wierenga EA, van Kooyk Y， Kapsenberg L(2005)Selective probiotic bacteria induce IL-10-producing regulatory T cells in votro by modulating dendritic cell function through dendritic cell-specific intercellular adhesion molecule3-grabbing nonintegrin. J Allergy Clin Immunol 115 1260-1267)。關(guān)于口服路氏乳酸桿菌對(duì)宿主自身的效果第一方面的證據(jù)是雞回腸中觀察到 CD4+/CD8+T 細(xì)胞比例上升(Walter J. Dobrogosz，NUTRAfoods 20054 0/3)15-28)。Valeur 等人近來將這項(xiàng)研究擴(kuò)展到人的回腸。他們?cè)谌祟悓?duì)象中獲得原位證據(jù)顯示(a)人特異性的路氏乳酸桿菌ATCC 55730個(gè)體細(xì)胞分布在整個(gè)人的腸中并且(b)路氏乳酸桿菌ATCC 55730參與特異地存在于腸的回腸區(qū)域CD4+T細(xì)胞的募集和/或增殖。他們總結(jié)認(rèn)為“路氏乳酸桿菌的施用誘導(dǎo)CD4+T-輔助細(xì)胞募集到人的上皮。這種募集作用可以作為解釋這種路氏乳酸桿菌菌株在人體中益生菌效應(yīng)的一個(gè)因素(Valeur N, Engel P，Carbajal N， Connolly Ε, Ladefoged K(2004)Colonization andimmunomodulation by Lactobacillus reuteri ATCC 55730 in the human gastrointestinal tract, Appl Environ Microbiol 70 1176-1181)。Toll類受體(TLRs)識(shí)別微生物的結(jié)構(gòu)基序并且激活一系列引發(fā)細(xì)胞因子產(chǎn)生的基因。通常，TLRs被認(rèn)為是微生物感染的感受器，并且它們的角色是誘發(fā)炎癥應(yīng)答。然而， 能夠被TLRs識(shí)別的結(jié)構(gòu)基序并不是病原體特有的，而是所有微生物種類所共用的通用結(jié)構(gòu)基序，而且免疫系統(tǒng)怎樣通過TLRs區(qū)分共生菌和病原菌還不完全清楚。近來，數(shù)據(jù)顯示 TLRs，雖然其在誘導(dǎo)炎癥應(yīng)答中起作用，但是也通過識(shí)別共生微生物群而在維持腸內(nèi)菌群
(Rakoff-Nahoum S,Paglino J,Eslami-Varzaneh F,Edberg S,MedzhitovR. Recognition of commensal microflora by toll-like receptors is required for intestinal homeostasis. Cell. 2004 Jul 23 ；118(2) :229-41)。各種乳酸菌菌種，包括路氏乳酸桿菌已經(jīng)被用于配制益生菌制劑。路氏乳酸桿菌是動(dòng)物腸胃的道中天然發(fā)生的居住菌，并且通常發(fā)現(xiàn)于健康動(dòng)物的腸中，包括人類。已知其具有抗微生物活性。例如，參見美國(guó)專利US 5，439，678,5, 458，875,5, 534，253,5, 837，238、 和5，849，觀9。當(dāng)路氏乳酸桿菌細(xì)胞生長(zhǎng)在存在甘油的厭氧性條件下時(shí)，它們產(chǎn)生已知為 β-羥基-丙醛(3-ΗΡΑ)的抗微生物物質(zhì)。腸內(nèi)的免疫系統(tǒng)和共生菌群之間存在一個(gè)清楚而復(fù)雜的關(guān)系。近來，已經(jīng)證明腔內(nèi)生的菌群可以通過toll樣受體(TLRs)和NOD-受體起始所誘導(dǎo)的桿菌在腸上皮細(xì)胞上的內(nèi)生和適應(yīng)宿主應(yīng)答的關(guān)鍵過程(Haller D, Jobin C. Interaction between resident liminal bacteria and the host :can a healthy relationship turn sour ？ J Pediatr Gastroenterol Nutr 2004 ；38 :123-36. Rakoff-Naholm S, Paglino J, Eslami-Varzaneh F, Edberg S, Medzhitov R. Recognition of comm. ensal microflora by Toll-like receptors is required for intestinal homeostasis. Cell 2004;118:229-241)。在動(dòng)物模型中，細(xì)胞因子能夠通過神經(jīng)-和肌-免疫相互作用起始腸內(nèi)神經(jīng)肌肉的過反射應(yīng)答(Milla PJ. Inflammatory cells and theregulation of gut motility. J Pediatr Gastroenterol Nutr 2004 ；39 :S750.)。腸內(nèi)的免疫系統(tǒng)和共生菌群之間存在一個(gè)清楚而復(fù)雜的關(guān)系。近來，已經(jīng)證明腔內(nèi)生的菌群可以通過激活腸上皮細(xì)胞上的toll樣受體(TLRs)和NOD-受體而啟動(dòng)細(xì)菌誘導(dǎo)的天然和獲得性宿主應(yīng)答的關(guān)鍵過程(Haller D，Jobin C. Interaction between resident liminal bacteria and the host :can a healthy relationship turn sour ？ J Pediatr Gastroenterol Nutr 2004；38 :123-36.Rakoff-Naholm S, Paglino J, Eslami-Varzaneh F, Edberg S, Medzhitov R. Recognition of comm. ensal microflora by Toll-like receptors is required for intestinal homeostasis. Cell 2004 ; 118 : 229-241)。在動(dòng)物模型中，細(xì)胞因子能夠通過神經(jīng)-和肌-免疫相互作用啟動(dòng)腸內(nèi)神經(jīng)肌肉白勺過反身寸(Milla PJ. Inflammatory cells and the regulation of gut motility J Pediatr Gastroenterol Nutr 2004 ；39 :S750)。在實(shí)驗(yàn)和臨床研究中已經(jīng)證明特異的益生菌菌株抑制T細(xì)胞的增殖并降低Thl 和Th2兩種細(xì)胞因子的分泌，同時(shí)優(yōu)先產(chǎn)生抑制性細(xì)胞因子例如IL-IO和TGF-β (Rautava S, Kalliomaki Μ, Isolauri Ε. Probiotics during pregnancy and breast-feeding might conferimmunomodulatory protection against atopic disease in the infants. JAllergy Clin Immunol 2002;109:119-121)。而且，在人類志愿者中，路氏乳酸桿菌在人的腸胃道中群集并且能夠發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)活性，包括在人的回腸上皮募集CD4+T-輔助細(xì)胞(Valeur N, Engel P, CarbajalN, Connolly Ε, Ladefoged K. Colonization and immunomodulation by Lactobacillus reuteri ATCC 55730 in the human gastrointestinal tract. Appl Environ Microbiol 2004 ;70 :1176_81) 。 DCs 白勺)將不成熟的DCs轉(zhuǎn)變成成熟的抗原提呈細(xì)胞并移居淋巴結(jié)的過程。這一過程導(dǎo)致不成熟的DCs的特征即強(qiáng)有力的抗原攝取能力的喪失，并且上調(diào)節(jié)各種細(xì)胞因子和共刺激分子的表達(dá)(Mellman I，Steinman RM :Dendritic cells !specialized and regulated antigen processing machines. Cell 2001,106 :255-8. Banchereau J，Briere F，Caux C，Davoust J， Lebecque S， Liu YJ, Pulendran B， Palucka K Jmmunobiology of Dendritic cells. Annu Rev Immunol 2000,18:767-811)。
已知成熟的條件是基于DCs在暴露于抗原期間或之后與之相遇的環(huán)境。這種情況的最好實(shí)施例是利用單核細(xì)胞-條件的培養(yǎng)基(MCM)。MCM是通過培養(yǎng)的單核細(xì)胞在體外產(chǎn)生的并且隨后采用培養(yǎng)液的上層清液作為成熟因子的來源。在MCM中負(fù)責(zé)成熟的主要成分是前炎癥細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-lbetadL-Ιβ)，IL-6和TNF-α (Reddy A, Sapp Μ, Feldman Μ,Subklewe Μ,Bhardwaj N :Α monocyte conditioned medium is more effective than defined cytokines in mediating the terminal maturation of human dendritic cells. Blood 1997,90 :3640-6.)。成熟的DCs產(chǎn)生各種細(xì)胞因子，其刺激和介導(dǎo)T細(xì)胞應(yīng)答。這些細(xì)胞因子中的兩種是IL-10和IL-12。這些細(xì)胞因子在誘導(dǎo)的T細(xì)胞應(yīng)答的方面具有相反的效應(yīng)IL_12誘導(dǎo)Thl型應(yīng)答而IL-10則抑制這樣的應(yīng)答。因此，APCs的活化狀態(tài)(抗原提呈細(xì)胞)，包括DCs，決定了⑶4+T細(xì)胞應(yīng)答的類型和大小。靜止的APCs(包括胸腺中的上皮細(xì)胞)可以促進(jìn)⑶4+⑶25+TR細(xì)胞的發(fā)育。在病原體感染期間，通過TLRs識(shí)別微生物分子導(dǎo)致APCs的活化。隨后APCs產(chǎn)生IL-6和其它能一起使TR細(xì)胞抑制效應(yīng)失效的可溶性因子，以允許有效產(chǎn)生TE (T效應(yīng)細(xì)胞)細(xì)胞對(duì)抗病原體。靜止的和活化的APCs之間的動(dòng)態(tài)平衡也將受TR和TE細(xì)胞兩者活動(dòng)的影響(圖 1)。Pessi等人Q000)公開了 IL-10在特應(yīng)性兒童口服鼠李糖乳酸桿菌之后的產(chǎn)生情況。但是不像本發(fā)明，該研究沒有公開能夠產(chǎn)生高數(shù)量的IL-10的特異性菌株， 其因?yàn)閷?duì)抗能動(dòng)性失調(diào)和腹痛的效率而被選擇(Pessi T，Sutas Y，Hurme M，Isolauri E. Interleukin-IOgeneration in atopic children following oral Lactobacillus rhamnosus. GG. Clin Exp Allergy. 2000Dec ；30 (12) :1804-8)。Hermelijn等人的一項(xiàng)研究Q005)顯示路氏乳酸桿菌和干酪乳酸桿菌，但不是植物乳酸桿菌，誘發(fā)單核細(xì)胞-來源的DCs以驅(qū)動(dòng)TR細(xì)胞的發(fā)育。所產(chǎn)生的這些TR細(xì)胞產(chǎn)生水平提高了的IL-10。不象這里的本發(fā)明，該作者沒有把IL-10的提高與腸能動(dòng)性或腹痛聯(lián)系起來。即使在提到菌株時(shí)，該作者介紹了兩種能有效提高IL-10水平的不同的細(xì)菌種類。這與本發(fā)明形成了對(duì)比，本發(fā)明顯示最有效地減少腹痛的益生菌必須在菌株水平上確定和選擇，因?yàn)橄嗤N類的不同菌株有效增加IL-10水平的能力不同。目前沒有腹痛的有效療法。目前治療腹痛的范例由藥理學(xué)的和/或非-藥理學(xué)的方法組成，使癥狀減小到最低限度。通常提供給父母的腹痛治療性干預(yù)包括四個(gè)策略包括飲食的、物理的、行為的和藥理學(xué)。飲食操作法包括各種喂養(yǎng)技術(shù)的專業(yè)建議，或者采用低過敏原的牛奶，豆奶或無乳糖的配方奶，以及提早引入固體食物(Lothe， L，et al. cow' s milk formula as a cause of infantile colic :a double-blind study. Pediatrics 1982 ；70 :7-10 ；Forsyth B W C. Colic and the effect of changing formulas :a double-blind multiple-crossover study.J Pediatr 1989 ； 115，521—6 ； Treem, W R，et al. Evaluation of the effect ofa fiber-enriched formula on infant colic. J Pediatr 1991 ;119695_701)。然而，不管是釆用豆奶配方還是改變喂養(yǎng)技術(shù)并不是對(duì)各種腹痛的情況都有效。研究這些建議的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明釆用低過敏原配方奶，例如部分水解的或氨基酸基的，可能對(duì)僅僅大約25%嬰兒有益(Lucassen，P L B J， et al. infantile colic :crying time reduction with a whey hydrolysate :a double-blind,randomized placebo-controlled trial. Pediatrics 2000 ；106 :1349-54 ；Estep,D C,et al. Treatment of infant colic with amino acid-based infant formula a preliminary study. Acta Paediatr2000 ；89 :22_7)。用于治療腹痛的物理策略包括物理移動(dòng)身體位置以減輕氣體/逆流的產(chǎn)生、抱著嬰兒走、包裹、對(duì)腹部施壓、或給嬰兒按摩。其它方法包括使嬰兒分心以減輕其對(duì)腹痛的警覺性例如帶嬰兒坐車、利用坐車模擬器、利用嬰兒床振蕩或搖籃(Lipton E L. Swaddling and child care practice -historical， cultural and experimental observations. Pediatrics 1965 ；35 :521-67 ；Byrne J M，Horowitz F D. Rocking as a soothing intervention :the influence of direction and type of movement. Infant Behav Dev 1981 ；4 :207-18)。另一種方法是播放一些據(jù)說能使嬰兒放松的錄音。然而，在醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)中有證據(jù)顯示這些方法不起作用(Parkin P C，Schwartz C J，Manuel B A. Randomized controlled trial of three interventions in the management of persistent crying of infancy. Pediatrics 1993 ；92 (2) : 197-201)。這些策略，最好的情況下，只是輔助減輕腹痛的癥狀。建議進(jìn)行行為干預(yù)而治療腹痛是目前矛盾最多的療法。一些作者主張?zhí)岣吒泄儇菁?，而其它則主張降低這樣的剌激(Balon A J. Management of infantile colic. Amer Pham Physician 1997 ；55 :235-242 ；Lucassen PLB JiAssendelft W J JiGubbels J W， van Eijk T M， vanGeldrop W J， Effectiveness of treatments for infantile colic systematic review. BMJ 1998 ；316 (5) :1563-9 ；and Carey W B，“ Colic" —primary excessive crying as an infant-environmental interaction. Pediatr Clin North Am 1984 ；31 :993-1005)。其它建議包括提早對(duì)哭鬧作出反應(yīng)，或者允許嬰兒哭鬧，提供橡皮奶頭，執(zhí)行固定的喂食時(shí)間表，采用眼神交流和互動(dòng)游戲。治療腹痛的藥理干涉導(dǎo)致利用處方或非處方藥物。目前采用的處方藥物包括顛茄堿和鎮(zhèn)靜劑(鎮(zhèn)痛劑)，其可以減輕疼痛，但是伴隨的風(fēng)險(xiǎn)包括錐體外系癥狀、呼吸阻抑、 和便秘。例如，抗膽堿能的藥物，其作用類似于阿托品，例如，莨菪堿(LEVISINE ,或 GASTROSED )和雙環(huán)胺泡騰片，會(huì)加快心跳，減少唾液的產(chǎn)生，解除腸胃和尿道以及支氣管的痙攣。雖然抗膽堿能的藥物是唯一在美國(guó)市場(chǎng)上用于一直顯示對(duì)于嬰兒腹痛有效的處方藥物，不幸的是，有超過5%受治療的嬰兒產(chǎn)生副作用，包括呼吸困難、呼吸暫停、 癲癇發(fā)作、暈厥、窒息、昏迷和肌肉張力過低(Williams J，Watkin-Jones R. Dicyclomine worrying symptoms associated with its use in some small babies(BMJ 1984 ；288 901 ；Myers J H,Moro-Sutherland D,Shook J E. Anticholinergic poisoning in colicky infants treated with hyoscyamine sulfate. Am J Emerg Med 1997;15:532-5)。此夕卜， 在服用雙環(huán)胺的嬰兒中還有幾例死亡的報(bào)道(Garriott J C,Rodriguez R,Norton L E. Two cases of death involving dicyclomine ininfants. Clinical Toxicol 1984 ；22 (5) 455-462)。已報(bào)道的對(duì)于治療嬰兒腹痛有效的非處方藥物包括幾種鎮(zhèn)靜或催眠藥物，包括超藥理學(xué)劑量的(高劑量)苯海拉明(BENADRYL )、苯巴比妥、水合氯醛、甚至酒精。 然而，在患有呼吸疾病的兒童中這些物質(zhì)可能存在嚴(yán)重的副作用，因此限制了它們?cè)谥委煾雇粗械膹V泛應(yīng)用(Balon A J. Management of infantile colic. Amer Pham Physician 1997；55 :235-242 ；Gurry D.infantile colic.Australian Pham Phys 1994 ；23 (3)337-34632)。比較安全的治療腹痛的非處方藥物主要包括施用西甲硅油或者聚二甲硅氧烷，一種不易吸收的非處方藥，其能減小腸內(nèi)氣泡的大小。西甲硅油非常安全并且經(jīng)常被推薦，但是仍然有幾個(gè)研究顯示西甲硅油對(duì)于嬰兒的腹痛的效果并不比安慰劑的好(Metcalf，T J， etal. ， Pediatrics 1994 July ；94(1) :29-34. Sferra, T J, et al. ， Pediatr Clin North Am 1996 April ；43 (2) :489-510. Danielson, B. et al. ， Acta Paediatr Scand 1985 May ； 74(3) :446-50. Colon,A R，et al. ,Am Fam Physician 1989 December ；40 (6) :122-4)。因此，當(dāng)今最常用的腹痛治療只是等待嬰兒長(zhǎng)大到不會(huì)再患腹痛。因此，目前需要一種對(duì)于治療嬰兒和幼兒腹痛有效并安全的化合物和組合物以及技術(shù)。本發(fā)明的組合物和方法，符合這種需要，提供的產(chǎn)品能夠安全而有效地治療與嬰兒腹痛相關(guān)的癥狀。專利申請(qǐng)EP1364483A10公開了用于治療腸-神經(jīng)肌肉紊亂例如嬰兒腹痛的益生菌。申請(qǐng)人介紹了幾種不同的細(xì)菌種類可以作為益生菌。這與本發(fā)明形成對(duì)比，本發(fā)明的最有效減少腹痛的益生菌是一種特異的乳酸桿菌，其因?yàn)橛行岣逫L-10的水平而被選擇，而不是一個(gè)整個(gè)的細(xì)菌種類，本發(fā)明的發(fā)明者已經(jīng)證明在相同種類的不同菌株之間在刺激IL-10產(chǎn)量上具有顯著差異。在2005年，Savino證明在7天的治療中補(bǔ)充路氏乳酸桿菌ATCC55730與采用西甲硅油的標(biāo)準(zhǔn)治療法相比能顯著改善哺乳嬰兒腹痛癥狀。采用路氏乳酸桿菌治療的有效率為95%而只采用西甲硅油的嬰兒中僅僅為7%。他在2005年8月31日至9月3日在意大利西恩那召開的會(huì)議上將結(jié)果提交給了歐洲兒科研究學(xué)會(huì)(ESPR) (Pediatr Res. 2005 ； 58(2) 411) 0雖然Mvino’ s的結(jié)果顯示出有益的效果，他不知道提高IL-10產(chǎn)量的特異菌株與降低腸能動(dòng)性并因此減少腹痛之間的關(guān)系。這里本發(fā)明提供了選擇這樣的最佳菌株的方法。Collins公開了運(yùn)動(dòng)功能失調(diào)產(chǎn)生的一系列癥狀，其能增加腸的各個(gè)區(qū)域和其附近器官的炎癥和免疫激活狀態(tài)，例如食道炎、胃炎、和自發(fā)性腸炎(IBD)。這些研究表明腸的能動(dòng)性也受免疫系統(tǒng)的影響。在這種情況下，運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)可能在腸抵抗存在于內(nèi)腔中的有害刺激的過程中起到重要作用(Collins S.，The Immunomodulation of Enteric Neuromuscular Function !Implications for Motility and Inflammatory Disorders. Gastroentrology 1996 ；111 :1683-1699)。這種觀點(diǎn)被反映，例如，通過 Vantrappen 等人的研究，其顯示細(xì)菌在小腸中過度生長(zhǎng)伴隨著小腸中消化運(yùn)動(dòng)正常循環(huán)模式的瓦角軍(Vantrappen G, Jannssens J, Hellemans J, Ghoos Y.The interdigestive motor complex of normal subjects and patients with bacterial overgrowth of the small intestine. J Clin Invest 1977;9:1158-1168)。很多年前就已知提高IL-10的水平會(huì)抑制過度活化的免疫系統(tǒng)。以前還證明了腸能動(dòng)性受神經(jīng)信號(hào)的控制，該信號(hào)與腸內(nèi)的免疫系統(tǒng)相關(guān)聯(lián)而腹痛就是腸能動(dòng)性增加了的結(jié)果，例如，由于細(xì)菌的過度生長(zhǎng)。在工業(yè)化國(guó)家，早在分娩過程就開始采取衛(wèi)生措施，其擾亂了初生兒獲取母親腸微生物菌群的能力。結(jié)果，不同的微生物菌群在嬰兒體內(nèi)建立起來。代替受到例如大腸桿菌和乳酸桿菌的保護(hù)，在新生兒身體更常有金黃色葡萄球菌和其它皮膚細(xì)菌的集群。本發(fā)明的發(fā)明者出乎意料的發(fā)現(xiàn)當(dāng)皮膚細(xì)菌過度生長(zhǎng)時(shí)會(huì)過度活化嬰兒的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致腸能動(dòng)性的過度活化并導(dǎo)致腹痛的結(jié)果，較高數(shù)量的特異腸道細(xì)菌，例如路氏乳酸桿菌DSM 17938，具有提高IL-10產(chǎn)量的能力，導(dǎo)致TR系統(tǒng)的成熟即CD4+CD25+TR細(xì)胞的增殖。CD4+CD25+細(xì)胞的上調(diào)節(jié)導(dǎo)致腸能動(dòng)性的降低從而對(duì)患有腹痛的嬰兒產(chǎn)生有益的效由于這些發(fā)現(xiàn)，非病原菌菌株因?yàn)樘岣逫L-10的特性而被選擇，并令人驚奇的發(fā)現(xiàn)具有這種特性的菌株與減少嬰兒腹痛的關(guān)系。因而，本發(fā)明涉及采用路氏乳酸桿菌DSM 17938用于制造一種用于預(yù)防和/或治療腹痛的醫(yī)藥用品，并且以相同的方法選擇的其它菌株。本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供包含所述菌株并且施用給動(dòng)物，包括人類的產(chǎn)品。其它的目標(biāo)和優(yōu)點(diǎn)將通過以下公開和附屬的權(quán)利要求而更加清楚。發(fā)明概述本發(fā)明這里提供一種特定的乳酸桿菌菌株、一種選擇這樣的菌株的方法、以及包含這樣菌株的產(chǎn)品。其中，該乳酸桿菌菌株由于具有提高IL-10的產(chǎn)量并因此促進(jìn) CD4+CD25+TR細(xì)胞增殖的能力而被選擇，用于預(yù)防和/或治療腹痛。其它的目的和特征將通過以下說明和權(quán)利要求而更加清楚。


圖1表示所選擇的特定的乳酸桿菌菌株在促進(jìn)CD4+CD25+TR發(fā)育過程中的作用。圖加表示通過DC細(xì)胞產(chǎn)生IL-10產(chǎn)量的條形圖；圖2b表示通過DC細(xì)胞產(chǎn)生IL-10產(chǎn)量的表格。
具體實(shí)施例方式皮膚細(xì)菌在腸中的集群和缺乏TR細(xì)胞而使新生兒免疫系統(tǒng)過度活化，導(dǎo)致腸能動(dòng)性的過度活化而引起腹痛。大量的特異腸桿菌細(xì)胞，例如路氏乳酸桿菌DSM 17938，具有提高IL-10產(chǎn)量的能力，導(dǎo)致TR系統(tǒng)的成熟，即CD4+CD25+TR細(xì)胞增殖。以前很多研究者曾報(bào)道的其它乳酸桿菌菌株能誘導(dǎo)IL-10的產(chǎn)量例如Rautava等人(前述)。CD4+CD25+細(xì)胞的上調(diào)節(jié)導(dǎo)致腸能動(dòng)性降低并且因而對(duì)腹痛產(chǎn)生有益的效果。令人驚奇的是發(fā)現(xiàn)引起細(xì)胞因子IL-10水平提高的菌株與能夠降低平均哭鬧時(shí)間的菌株是同一菌株(實(shí)施例2)。本發(fā)明這里包括已選擇的乳酸桿菌菌株，包括路氏乳酸桿菌(LactcAaciIlus reuteri)DSM 17938，該乳酸桿菌菌株由于具有減輕腹痛的能力而被選擇。包含取自這些菌株的整個(gè)細(xì)胞或成分的產(chǎn)品例如食物、營(yíng)養(yǎng)添加劑和組合物、藥物和醫(yī)藥設(shè)備可以通過本領(lǐng)域公知的方法制備，并且通常包括一種加入了乳酸桿菌-菌株、或者從其中獲得的成分的可吸收支持物。一種在體外的研究方法被用作選擇乳酸桿菌菌株的方法，菌株由于具有刺激 IL-10從單核細(xì)胞來源的DCs產(chǎn)生的能力而被選擇，并且因此具有誘導(dǎo)⑶4+⑶25+TR細(xì)胞發(fā)育的能力(實(shí)施例1)。數(shù)據(jù)顯示IL-10受到特異菌株路氏乳酸桿菌ATCC 55730和路氏乳酸桿菌DSM 17938的有力刺激，并且這種調(diào)節(jié)是通過這兩種特異菌株在對(duì)數(shù)/靜止生長(zhǎng)期間釋放到培養(yǎng)基中的一種物質(zhì)介導(dǎo)的。相反，兩種其它的路氏乳酸桿菌菌株不能刺激相應(yīng)的IL-10產(chǎn)量。為了確認(rèn)所選擇菌株用于防止或治療腹痛的臨床相關(guān)性，在診斷患有嬰兒腹痛的母乳喂養(yǎng)嬰兒中進(jìn)行了進(jìn)一步的研究。本發(fā)明的特征將通過參考以下的實(shí)施例而更加清楚，但這些實(shí)施例不應(yīng)該被看成是對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1益生菌菌株對(duì)于通過單核細(xì)胞來源的DC增加IL-10產(chǎn)量的能力的研究將自外周血單核細(xì)胞而產(chǎn)生的不成熟的DCs (HiIkens，C. Μ. U.，P. Kalinski， Μ. de Boer, and Kapsenberg. 1997. Human dendritic cells require exogenous interleukin-12-inducing factors to direct the development of naive T-helper cells toward the Thl phenotype. Blood90 :1920)培養(yǎng)在 IMDM 中(Life Technologies, Paisley, U.K.)，該培養(yǎng)基包含10%胎牛血清(HyClone公司，Logan, UT, USA)、重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(Recombinant Human rh GM-CSF) (500U/ml ；荷蘭于登 Schering-Plough 公司)、和重組人白介素-4Q50U/ml ；德國(guó)漢諾威Pharma Biotechnology 公司)(Kalinski, P. , J. H. N. Schuitemaker, C. M. U. Hilkens, E. A. ffierenga, and Μ. L. Kapsenberg. 1999)。最終成熟的樹枝細(xì)胞與對(duì)IFN- γ和對(duì)桿菌的IL-12誘導(dǎo)子的響應(yīng)度降低相關(guān)聯(lián)成熟樹枝細(xì)胞在與Th細(xì)胞相互作用期間產(chǎn)生IL-12的能力降低 (J. Immunol. 162 :3231)。在本實(shí)施例中被檢測(cè)的菌株是路氏乳酸桿菌ATCC 55730、路氏乳酸桿菌DSM 17938、路氏乳酸桿菌ATCC PTA 4660和路氏乳酸桿菌ATCC PTA 4964，它們均可以從 ATCC(美國(guó)弗吉尼亞州馬納薩斯)、和DSMZ(德國(guó)布朗斯威克)獲得。菌株被培養(yǎng)在包含 6. 25%綿羊血的哥倫比亞瓊脂中(英國(guó)，貝辛斯托克，Oxoid公司)。乳酸桿菌在37°C在5% CO2氣氛中孵育。3天之后，細(xì)菌的數(shù)目通過在620nm(0D620)處測(cè)量光密度而被測(cè)定。通常，對(duì)于所有待測(cè)菌株0D620值0. 35對(duì)應(yīng)著IxlO8克隆形成單位(cfu)。在第6天，由LPS(大腸桿菌，美國(guó)圣路易的Sigma-Aldrich公司)誘導(dǎo)不成熟的 DCs使其成熟，在含有細(xì)胞因子IL-I β (25ng/mL)和TNF-α (50ng/mL)組合物的存在下測(cè)試乳酸桿菌，并且全部用作成熟因子(細(xì)胞因子購(gòu)自美國(guó)新澤西洲洛基山的Peprotech公司)。正如Vieira PL等人所描述，由成熟的DCs產(chǎn)生的IL_12、IL_10、和IL-6細(xì)胞因子通過⑶40配體表達(dá)小鼠漿細(xì)胞瘤細(xì)胞刺激M小時(shí)的方式而被測(cè)定(Vieira PL,de Jong EC, ffierenga EA, Kapsenberg ML, Kalinski P. Development of Thl-inducing capacity in myeloid dendritic cells requires environmental instruction. J Immunol 2000 ； 164:4507-12)。M小時(shí)之后，收集上清液，并通過ELISA檢測(cè)IL-10的濃度。結(jié)果見圖2。 從結(jié)果可以看到，不同的乳酸桿菌菌株提高DCs產(chǎn)生IL-10的能力是具有顯著差異的。實(shí)施例2所選擇的益生菌菌株與西甲硅油在治療嬰兒腹痛的比較兒科及青少年科學(xué)部門征募診斷患有嬰兒腹痛的母乳喂養(yǎng)的嬰兒(Drottning Silvias University Hospital, Goteborg ) 0 患者年齡為 21-90 天，足月分娩，出生重量為2500至4000g，腹痛癥狀符合Vessel's標(biāo)準(zhǔn)，并且在登記之前發(fā)病差不多6士 1天，被認(rèn)為可以用于本研究(Wessel MA,Cobb JC, Jackson EB,Harris GS,Detwiler AC. Paroxismal fussing in infancy, sometimes called "colic，，tries 1954;14:421-35)。所有登記的嬰兒嚴(yán)格進(jìn)行母乳喂養(yǎng)從而減少腸內(nèi)的微生物菌群由于飲食變化而產(chǎn)生變化，這種變化可能轉(zhuǎn)而影響對(duì)益生菌的反應(yīng)。如果有臨床證據(jù)顯示嬰兒患有慢性疾病或腸胃疾病或者在征募前一個(gè)星期接受過抗生素或益生菌，他們將被排除在外。在本研究中，腹痛嬰兒在以下治療中隨機(jī)接受益生菌或西甲硅油(Pl)路氏乳酸桿菌菌株ATCC 55730也稱為SD2112，(P2)路氏乳酸桿菌菌株DSM 17938，根據(jù)布達(dá)佩斯協(xié)議于2006年01月30日保藏于德國(guó) DSMZ 微生物菌種保藏中心(Mascheroder Weg lb，D-38124 Braunschweig),(P3)路氏乳酸桿菌菌株ATCC PTA 4660以及(S)西甲硅油。路氏乳酸桿菌以IO8克隆形成單位(CFU)的計(jì)量添加在5滴有商業(yè)出售的MCT-油 (中鏈甘油三酸酯)中懸浮30分鐘之后喂食，一天一次時(shí)間為觀天。MCT油是天然發(fā)生的，最豐富的來源是椰子油。絕大多數(shù)MCT油是從椰子油中精煉而來。MCT油是清亮的、且無味的、低黏度的液體。這種油的懸浮液在2 8°C能穩(wěn)定21個(gè)月(根據(jù)制造商的文獻(xiàn)， 瑞典斯德哥爾摩，Biofeiia AB公司)(可替代的MCT油來源是瑞典卡爾斯哈門，Biofeiia AB 公司)。在研究過程中，父母被指導(dǎo)在不使用產(chǎn)品時(shí)將其放在冰箱中。西甲硅油(S)的施用劑量為 60mg/天，以 3mL 市售溶液(Mylicon Infants Gas Relief Drops, J&J, 7050Camp Hill Rd. ,Fort Washington，Pennsylvania，19034-2210，USA)，在喂食后施用，一天兩次共觀天。在登記冊(cè)的所有母親被要求遵守如報(bào)道的無牛奶飲食避免牛奶，酸乳酪，新鮮的和干的奶酪，奶油，黃油，餅干。在所有治療期間對(duì)食譜的堅(jiān)持通過飲食日記被監(jiān)控。在第7、 14,21和28天研究者會(huì)檢查這個(gè)食譜的堅(jiān)持情況。研究所的道德委員會(huì)同意本研究的各項(xiàng)條件而只有在獲得了父母的書面同意書之后嬰兒才參與到這項(xiàng)研究中。隨訪兒科醫(yī)生首次見到嬰兒的時(shí)間定為第一天(Day-I)。在這個(gè)場(chǎng)合，嬰兒進(jìn)行醫(yī)學(xué)檢查而父母被接見以獲得涉及分娩類型、出生體重和妊娠年齡、家族腸胃病歷史和遺傳性過敏癥等的背景數(shù)據(jù)。特別是，如果嬰兒的一個(gè)或更多家庭成員(母親、父親和/或年長(zhǎng)的兄姐)患有過敏性濕疹、過敏性鼻炎或哮喘的話，最后一項(xiàng)認(rèn)為是陽(yáng)性的。而且，在研究期間任何遺傳性過敏疾病的信號(hào)和癥狀都會(huì)被記錄。父母還被要求在征募第O天(Day 0)之后記錄每天平均哭鬧次數(shù)和腹痛情節(jié)數(shù)量。醫(yī)生將嬰兒隨機(jī)分配至任何研究小組。研究產(chǎn)品在第一天(Day 1)開始施用。父母被要求采用固定的筆記本從第0天到第觀天書面寫下研究的信息并且被要求記錄每天傷心哭鬧情節(jié)的數(shù)量和持續(xù)時(shí)間、大便粘度和頻率以及任何所觀察到的副作用 (便秘、嘔吐、感染反應(yīng)等)。為了確保所有的父母以相同的方式記錄哭鬧時(shí)間并確保嬰兒被正確的給予醫(yī)藥制品，研究者之一總是與父母保持電話聯(lián)系以幫助父母。每個(gè)患者在第1，7，14，21和觀天由同一名兒科醫(yī)生再次檢查。MM所登記的120名母乳喂養(yǎng)的腹痛嬰兒中，30名隨機(jī)的采用路氏乳酸桿菌ATCC55730 (Pl)治療，30名隨機(jī)的采用路氏乳酸桿菌DSM 17938 (P2)治療，30名隨機(jī)的采用路氏乳酸桿菌ATCC PTA4660(P3)治療并且30名隨機(jī)的采用西甲硅油(S)治療。沒有嬰兒退出，因?yàn)闆]有任何與實(shí)驗(yàn)相關(guān)的副作用。各小組的年齡、出生體重、性別、分娩類型、過敏或腸胃疾病家族史、以及被動(dòng)吸煙等方面相似。在第0和第1天，各治療小組的每天平均哭鬧時(shí)間是相似的。接受路氏乳酸桿菌 ATCC 55730 (Pl)和DSM 17938 (P2)的嬰兒在第7天的日?？摁[時(shí)間與接受ATCC PTA 4660 和西甲硅油( 的嬰兒相比顯著減少。在第14、21和觀天這四個(gè)治療組的哭鬧時(shí)間顯著不同。在觀天中，(Pl)和(S)之間平均每天哭鬧時(shí)間的差異從開始到研究結(jié)束是82分鐘，(P2)和(S)之間平均每天哭鬧時(shí)間的差異從開始到研究結(jié)束是83分鐘(表1)。從結(jié)果可以看到四個(gè)小組在接受治療產(chǎn)品之前基本上是一致的。7天之后路氏乳酸桿菌菌株 ATCC55730和DSM 17938的效果比另外兩種添加劑的具有清楚的差異。觀天之后差異更加巨大。表1.路氏乳酸桿菌和西甲硅油小組的哭鬧時(shí)間(平均分鐘/天)
權(quán)利要求
1.一種能夠促進(jìn)人體IL-10表達(dá)的乳酸桿菌菌株在制備用于減少嬰兒腹痛的含有乳酸桿菌菌株的藥物中的應(yīng)用，其中，所述乳酸桿菌菌株通過測(cè)試能夠促進(jìn)宿主細(xì)胞IL-10 表達(dá)的乳酸桿菌菌株以及通過選擇能夠提高宿主細(xì)胞IL-10水平的乳酸桿菌菌株予以鑒定；如果宿主細(xì)胞是人細(xì)胞，則是間接體內(nèi)療法。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述乳酸桿菌菌株是一種路氏乳酸桿菌菌株。
3.一種用于制備組合物的方法，所述方法包括下列步驟(a)培養(yǎng)一種乳酸桿菌菌株；(b)評(píng)價(jià)所述乳酸桿菌菌株對(duì)宿主細(xì)胞IL-10表達(dá)的效果；(c)選擇提高宿主細(xì)胞IL-10水平的乳酸桿菌菌株；以及(d)產(chǎn)生包括由步驟(c)所選擇的所述乳酸桿菌菌株的一種生物純培養(yǎng)物的組合物； 其中，所述組合物適合于給藥嬰兒，以減少嬰兒腹痛；如果宿主細(xì)胞是人細(xì)胞，則是間接體內(nèi)療法。
4.一種用于減少嬰兒腹痛的產(chǎn)品，包括一種由權(quán)利要求3獲得的組合物。
5.如權(quán)利要求4所述的產(chǎn)品，其中，在所述組合物中的乳酸桿菌菌株是路氏乳酸桿菌菌株。
6.如權(quán)利要求4或5所述的產(chǎn)品，還包括中鏈甘油三酸酯油。
7.一種用于減少嬰兒腹痛的藥用產(chǎn)品，包括能夠提高IL-10水平而被選擇的乳酸桿菌菌株。
8.如權(quán)利要求7所述的藥用產(chǎn)品，其中，所述乳酸桿菌菌株是路氏乳酸桿菌菌株。
9.一種乳酸桿菌菌株，所述乳酸桿菌菌株能夠促進(jìn)人體IL-10表達(dá)以減少嬰兒腹痛。
10.如權(quán)利要求9所述的乳酸桿菌菌株，其中，所述乳酸桿菌菌株是路氏乳酸桿菌菌株。
全文摘要
本發(fā)明提供了所選擇的特定乳酸桿菌菌株、一種選擇這樣的菌株的方法，以及包含這樣菌株的產(chǎn)品，其中，該菌株能提高IL-10的產(chǎn)量從而使CD4+CD25+TR細(xì)胞增殖而被選擇，并且用于預(yù)防和/或治療嬰兒腹痛。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK102488717SQ20111043210
公開日2012年6月13日 申請(qǐng)日期2007年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月5日
發(fā)明者埃蒙·康諾利, 布·莫爾斯泰姆 申請(qǐng)人:生命大地女神有限公司