專利名稱：芽胞桿菌Gxw4-2培育及其防治害蟲方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從罹病死亡的植物害蟲體內(nèi)提取芽胞桿菌GXW4-2 (拉丁文名稱為Bacillus sp.GXW4-2)、采用二級培養(yǎng)法培育芽胞桿菌Gxw4_2獲得一種生物殺蟲劑、經(jīng)稀釋后噴施于植物表皮用于植物鱗翅目害蟲防治的方法。
背景技術(shù)：
小菜蛾、斜紋夜蛾、水稻縱卷葉螟、林木刺蛾等重大鱗翅目害蟲是作物常見抗藥性較強(qiáng)的害蟲，危害輕者造成農(nóng)作物生物產(chǎn)量和經(jīng)濟(jì)產(chǎn)量下降，危害重者導(dǎo)致農(nóng)作物顆粒無收。近年來，國際上很多發(fā)達(dá)國家投入相當(dāng)大的人力、財力研制生物農(nóng)藥，但生物殺菌劑產(chǎn)品開發(fā)的較多，生物殺蟲劑新產(chǎn)品的開發(fā)進(jìn)展不快。就對化學(xué)農(nóng)藥抗藥性較強(qiáng)的小菜蛾、斜紋夜蛾、水稻縱卷葉螟 、林木刺蛾等重大鱗翅目害蟲的生物農(nóng)藥應(yīng)用而言，目前市場上的主要產(chǎn)品仍然是蘇云金桿菌(BT)及其與化學(xué)農(nóng)藥的復(fù)配品。由于長期使用化學(xué)殺蟲劑，導(dǎo)致目前作物害蟲的抗藥性逐漸增強(qiáng)，同時對環(huán)境生態(tài)造成負(fù)面影響。微生物殺蟲劑主要抑制鱗翅目害蟲體內(nèi)的新陳代謝、干擾生物合成和破壞鱗翅目害蟲細(xì)胞結(jié)構(gòu)，殺蟲速度快、防效高、毒性低，兼有刺激植物生長的作用。小菜蛾、斜紋夜蛾、水稻縱卷葉螟、林木刺蛾等重大鱗翅目害蟲屬常發(fā)性害蟲，抗藥性較強(qiáng)，采用一般藥劑防治效果較差。采用芽胞桿菌gxw4-2防治重大鱗翅目害蟲，是克服農(nóng)產(chǎn)品化學(xué)農(nóng)藥負(fù)面效應(yīng)的有效途徑之一。

發(fā)明內(nèi)容
針對目前農(nóng)作物生產(chǎn)中危害性大、抗藥性強(qiáng)、一般藥劑防治效果差的小菜蛾、斜紋夜蛾、水稻縱卷葉螟、林木刺蛾等重大鱗翅目害蟲，提出芽胞桿菌gxw4-2培育及其防治害蟲方法，創(chuàng)制一種新的生物殺蟲劑。該生物殺蟲劑可以高效殺滅小菜蛾、斜紋夜蛾、水稻縱卷葉螟、林木刺蛾等重大鱗翅目害蟲，并且安全環(huán)保。本發(fā)明涉及的芽胞桿菌GXW4_2(拉丁文名稱為Bacillus sp.GXW4-2)是申請人從罹病死亡的害蟲尸體中發(fā)現(xiàn)的。該菌株于2011年I月21日在武漢中國典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC保藏，保藏編號為:CCTCC NO:M2011027o芽胞桿菌gxw4-2再生能力強(qiáng)，可在工廠化條件下大量繁殖，主要基質(zhì)原料是可再生農(nóng)產(chǎn)品資源，且國內(nèi)外市場上貨源豐富，完全可以滿足產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的需要。本發(fā)明的最終產(chǎn)品是生物殺蟲劑，包括芽胞桿菌gxw4-2懸浮劑和芽胞桿菌gxw4-2 母藥。芽胞桿菌gxw4_2殺蟲劑防治植物害蟲的機(jī)理是經(jīng)害蟲的口器進(jìn)入體內(nèi)，在害蟲腹、血腔組織等靶標(biāo)處大量增殖，產(chǎn)生生化病變、生理病變、細(xì)胞學(xué)病變，致使腸道上出現(xiàn)許多小紅點(diǎn)并導(dǎo)致腸組織溶解。經(jīng)試，用藥后24小時，害蟲腹腔組織發(fā)生病變，并伴隨其代謝過程釋放出異味(氟)氣體和組織溶解酶，最后導(dǎo)致害蟲窒息死亡直至解體。國內(nèi)外尚未有用芽胞桿菌gXW4-2制造植物害蟲殺蟲劑的先例。


圖1為芽胞桿菌GXW4-2殺蟲劑制造工藝圖。實(shí)施例1、芽胞桿菌gXW4-2 二級培育步驟(I)解剖罹病死亡的害蟲尸體，分離、提取芽胞桿菌Gxw4_2菌株。(2)將LB培養(yǎng)基裝入容器中，加入重量百分比為2%的鈣粉，滅菌。當(dāng)培養(yǎng)容器溫度為28-32°C時，將芽胞桿菌Gxw4-2接種于培養(yǎng)容器中，在28_32°C生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時獲得芽胞桿菌GXW4-2菌落。(3)將不加瓊脂的LB培養(yǎng)基煮沸后過濾，在濾液中加入重量百分比為2%的鈣粉，滅菌后得到培養(yǎng)液。待培養(yǎng)液冷卻至32-36°C時，將步驟(2)所得胞子在無菌條件下接種至培養(yǎng)液中，在溶氧13-15%、PH6-8、溫度范圍32-36°C的環(huán)境下發(fā)酵36-38小時，得到彡105億個胞子/ml芽胞桿菌GXW4-2懸浮液。(4)將培養(yǎng)的105億個胞子/ml芽胞桿菌GXW4-2懸浮液離心脫水后轉(zhuǎn)至冷凍干燥箱內(nèi)，經(jīng)-5°C、-15°C、_75°C條件下冷凍干燥，使其水份含量小于3%，經(jīng)200目粉碎后，得到生物殺蟲劑> 500億個胞子/g芽胞桿菌GXW4-2菌種(原藥)。2、芽胞桿菌gxw4-2毒力及殺蟲效果(I)芽胞桿菌gxw4_2之105億個胞子/ml懸浮劑室內(nèi)毒力測定結(jié)果見表1、表2。表I芽胞桿菌gxw4_2對小菜蛾的室內(nèi)毒力測定原始數(shù)據(jù)記載表(浸葉法3齡幼蟲)
權(quán)利要求
1.芽胞桿菌GXW4-2培育及其防治害蟲方法包括芽胞桿菌GXW4-2的培育和芽胞桿菌Gxw4-2用于害蟲防治的方法。其特征在于:采用二級培養(yǎng)法培育芽胞桿菌Gxw4-2，獲得一種生物殺蟲劑，經(jīng)稀釋后噴施于植物表皮，用于植物鱗翅目害蟲的防治。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芽胞桿菌(拉丁文學(xué)名為Bacillussp) gxw4_2,是解剖摧病死亡的植物害蟲尸體提取、篩選的一種植物害蟲病原菌，該菌種于2011年I月26日在中國典型微生物保藏中心(cctcc)保藏，保藏編號為:cctcc no:m2011027o
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芽胞桿菌Gxw4-2培育，其特征包括以下步驟: (1)解剖罹病死亡的害蟲尸體，分離、提取芽胞桿菌Gxw4-2菌株。
(2)將LB培養(yǎng)基裝入容器中，加入重量百分比為2%的鈣粉，滅菌。當(dāng)培養(yǎng)容器溫度為28-32°C時，將芽胞桿菌Gxw4-2接種于培養(yǎng)容器中，在28-32 °C生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時獲得芽胞桿菌GXW4-2菌落。
(3)將不加瓊脂的LB培養(yǎng)基煮沸后過濾，在濾液中加入重量百分比為2%的鈣粉，滅菌后得到培養(yǎng)液。待培養(yǎng)液冷卻至32-36°C時，將步驟(2)所得胞子在無菌條件下接種至培養(yǎng)液中，在溶氧13-15%、PH6-8、溫度范圍32-36°C的環(huán)境下發(fā)酵36-38小時，得到彡105億個胞子/ml芽胞桿菌GXW4-2懸浮液。
(4)將培養(yǎng)的105億個胞子/ml芽胞桿菌GXW4-2懸浮液離心脫水后移至冷凍干燥箱內(nèi)，經(jīng)_5°C、_15°C、_75°C條件下冷凍干燥，使其水份含量小于3%，經(jīng)200目粉碎后，得到生物殺蟲劑> 500億個胞子/g芽胞桿菌GXW4-2菌種(原藥)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芽胞桿菌Gxw4-2防治害蟲方法，其特征在于:將芽胞桿菌GXW4-2懸浮液或者芽胞桿菌 GXW4-2原藥用一定量的清水稀釋后均勻噴施于植物表皮用于鱗翅目害蟲的防治。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種有抑蟲、殺蟲作用的芽胞桿菌gxw4-2的培育及其防治害蟲方法，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明通過二級培養(yǎng)法培育芽胞桿菌gxw4-2并作為殺蟲劑使用。試驗(yàn)結(jié)果表明，芽胞桿菌gxw4-2可有效抑制和防治鱗翅目害蟲對作物產(chǎn)生的危害，是一種理想的微生物殺蟲劑，具有殺蟲速度快、防治效果高、對環(huán)境無污染、對靶標(biāo)以外的生物無毒害的特點(diǎn)，而且菌種培育速度快、制劑生產(chǎn)成本低、無三廢排放，環(huán)保、安全。
文檔編號C12R1/07GK103173370SQ201110409360
公開日2013年6月26日 申請日期2011年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月6日
發(fā)明者高小文 申請人:高小文