專利名稱：接種物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種微生物接種物，尤其是ー種用于制備微生物參照培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)化接種物。主要為了用作固態(tài)盤狀接種物而研制出了本發(fā)明，以下將根據(jù)這種應(yīng)用來描述本發(fā)明。然而，值得注意的是本發(fā)明不局限于這ー領(lǐng)域中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
本發(fā)明提及的任何已有技術(shù)，絕不等同于認(rèn)為該已有技術(shù)是廣為人知的知識或是該領(lǐng)域常見的一般知識的一部分。保持活的微生物的穩(wěn)定狀態(tài)對微生物研究至關(guān)重要。對此，微生物的冷凍干燥方法相對比較有效。因為經(jīng)冷凍干燥成功處理的細(xì)胞可以在無冷凍條件下儲存，與超冷系統(tǒng)如液態(tài)氮儲存系統(tǒng)相比，這類處理程序更為方便和便宜。為了防止細(xì)胞冷凍過程中水結(jié)晶的破壞性影響，冷凍介質(zhì)中通常包含冷凍保護劑。人們普遍認(rèn)為，在準(zhǔn)備ー份穩(wěn)定的冷干細(xì)胞接種物過程中，最主要的創(chuàng)傷往往來自冷凍和解凍過程對細(xì)胞的物理影響。改變冷凍保護劑的組成或許可以提升細(xì)胞的成活率，故而冷凍介質(zhì)成為一種冷凍保存介質(zhì)對維系ー個更穩(wěn)定的量化接種物有用。微生物實驗室常規(guī)性地應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)化參照培養(yǎng)基，為質(zhì)量控制過程提供了一定預(yù)定量的微生物，比如說在顯示測試方法和測試培養(yǎng)介質(zhì)功效性的過程中。參考培養(yǎng)基通常通過稀釋ー種微生物培養(yǎng)基制備，這樣是為了獲取每毫升含預(yù)估數(shù)目菌落形成単元(CFU/mL) 的新鮮細(xì)胞懸液。每毫升菌落形成単元數(shù)目標(biāo)定的精度通常波動較大，歸因于稀釋過程中對小的測量誤差的外推以及樣品自身生物變化。這樣，用隨后制備的新鮮的參照培養(yǎng)基自然會提高錯誤或無效結(jié)果的可能性，因為在一系列實驗中對每ー個接種物一致地標(biāo)定其每毫升菌落形成単元數(shù)目是非常困難的。微生物學(xué)界熟知的用于制備參考培養(yǎng)基的接種物包括如Bioball (BTF)等產(chǎn)品。 Bioball 提供一系列含相對精準(zhǔn)和一致數(shù)量的微生物的接種物，其具有距平均值小于兩個標(biāo)準(zhǔn)偏差的可復(fù)制變化量。然而，Bioball 的生產(chǎn)過程極為復(fù)雜，制備過程中對產(chǎn)品精準(zhǔn)度的要求使得該產(chǎn)品生產(chǎn)成本相對昂貴。本發(fā)明的目的是克服或改善至少ー項上述已有技術(shù)的弊端，或者提供一個有效的替代方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明從不同實施方面，涉及ー種固態(tài)盤狀微生物接種物、涉及冷凍保存介質(zhì)的冷凍保護劑改良配方以及可靠并簡易制備該接種物的方法。這種接種物制備成本相對低廉并以憑借其用戶友好的形式、形狀和大小，使得用戶可以方便地、準(zhǔn)確地將一定量的接種材料(比如預(yù)定量的細(xì)胞或微生物)用標(biāo)準(zhǔn)實驗器材從ー個容器轉(zhuǎn)移到另ー個容器。第一方面，本發(fā)明提供了一種固態(tài)干燥接種物，該接種物包括冷凍保存介質(zhì)和預(yù)
4CN 102533555 A
定量的接種材料，其中接種物是基本上盤狀的。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，基本上盤狀的接種物優(yōu)選為半球型并包括與相應(yīng)的凹表面相對的凸表面，故而便于容易地以標(biāo)準(zhǔn)實驗室接種環(huán)從ー個容器轉(zhuǎn)移到另ー個。方便的是，這種接種物是由冷凍干燥法制備的。冷凍保存介質(zhì)通常包括牛血清白蛋白、肌肉肌醇、牛肉膏、細(xì)菌蛋白胨、明膠、活性炭和水。特別是，優(yōu)選的冷凍保存介質(zhì)配方包括大約等配比(即以大約1 1比例)配制的牛血清白蛋白和明膠。接種材料通常是細(xì)胞，該細(xì)胞可以是微生物例如細(xì)菌或真菌，每個接種物含有大約0至大約IO8個細(xì)胞。細(xì)菌細(xì)胞可以非限制性地選自于以下組蠟樣芽胞桿菌(Bacillus cereus)、短小芽胞桿菌(B. pumilus)、枯草芽孢桿菌(B. subtilis)、脆弱擬桿菌(Bacteroides fragilis)、缺陷短波單胞菌(Brevundimonas diminuta)、支氣管炎博
(Bordetella bronchiseptica)、洋蔥イ日克恵囷(Burkholderia cepacia) 莢膜極菌(Clostridium perfrmgens)、生抱梭菌(C. sporogenes)、獎腸球菌(Enterococcus faecalis)、希拉腸球菌(E. hirae)、大腸桿菌(Escherichia coli)、嗜熱脂肪土芽孢桿菌(Geobacillus stearothermophi Ius)、月市炎克 It イ白氏菌(Klebsiell apneumoma)、嗜根考克氏菌(Kocuria rhizophila)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、李斯特囷(Listeria monocytogenes)、藤黃微球菌(Micrococcus luteus)、銅綠假單胞菌 (Pseudom onas aeruginosa)、腸道沙門氏菌亞種(Salmonella enterica subsp. ノ、拜!j佚桿-囷(Shigella flexneri)、金黃色葡萄球|6|亞種(Staphylococcus aureus subsp.)禾ロ 化膿性鏈球菌(Sti^ptococcus pyogenes)。當(dāng)細(xì)胞為真菌細(xì)胞時，該真菌可以非限制性地選自于黑曲霉(Aspergillus niger)、白念珠菌(Candida albicans)和釀酒酵母菌 (Saccharomyces cerevisiae;。第二方面，本發(fā)明提供制備這種固態(tài)干燥接種物的方法，包括下面幾個步驟a)將含預(yù)定量接種材料的多個等份的液體冷凍保存介質(zhì)沉積在表面上；b)對沉積在所述表面上的每ー個所述等份的液體冷凍保存介質(zhì)進行干燥以獲得多個固態(tài)干燥的接種物；以及c)將所述接種物從所述表面移除，其中每個所述接種物是基本上盤狀的。干燥步驟后，接種物優(yōu)選是半球形形狀。優(yōu)選地通過對沉積的等份的液體冷凍保存介質(zhì)進行冷凍干燥來實現(xiàn)干燥。為制備所需的接種物，等份的液體冷凍保存介質(zhì)通常體積范圍在大約10微升到大約100微升，優(yōu)選在15微升到60微升之間；并含大約O到IO8個微生物細(xì)胞作為接種物。表面通常為塑料表面，優(yōu)選是標(biāo)準(zhǔn)的實驗室聚苯乙烯皿或托盤的聚苯乙烯表面， 標(biāo)準(zhǔn)的實驗室聚苯乙烯皿或托盤例如為皮氏培養(yǎng)皿(Petri dish)或類似。第三方面，本發(fā)明涉及ー種以第二方面闡述的方法制備得到的固態(tài)干燥接種物。第四方面，本發(fā)明提供ー種包含根據(jù)第一或第三方面的多個固態(tài)干燥接種物的容
器/包。除非特殊要求或標(biāo)明，本專利權(quán)利要求和說明書通篇涉及的“包含”、“包括”以及類似詞語要按照與“排他的”或“窮盡的”意義相反的包含性的意義理解，解釋為“包含但不
限干”。
在本發(fā)明的上下文中，詞語“接種物”指的是由對等份的含預(yù)定量接種材料的冷凍保存介質(zhì)進行干燥而獲得的物質(zhì)體。根據(jù)本發(fā)明的一種或多種優(yōu)選實施方案的接種物由它們的半球形的基本上盤狀的主體所限定并用于接種培養(yǎng)介質(zhì)，這使得可以用標(biāo)準(zhǔn)實驗室設(shè)備方便地進行處理。根據(jù)本發(fā)明的一種或多種優(yōu)選實施方案的“干燥”的接種物已經(jīng)基本上移除了全部的液體。作為選擇，當(dāng)詞語“干燥”指的是根據(jù)本發(fā)明的一種或多種優(yōu)選實施方案的接種物時，這意味著該接種物可能含有殘留水分但是達到充分干燥以至于可以方便地以標(biāo)準(zhǔn)實驗室設(shè)備來處理。根據(jù)本發(fā)明的一種或多種優(yōu)選實施方案的“固態(tài)”接種物即非液體也非氣體并且不能在其自身重力作用下流動。作為選擇，當(dāng)詞語“固態(tài)”指的是根據(jù)本發(fā)明的ー種或多種優(yōu)選實施方案的接種物時，這意味著該接種物足夠堅實使得其保持其盤狀形體可以方便地以標(biāo)準(zhǔn)實驗室設(shè)備來處理。本發(fā)明的上下文中的“冷凍保存介質(zhì)”指的是能夠保護包含在介質(zhì)中的接種材料免受在冷凍和解凍過程中物理沖擊的損害和/或最大限度地減小在冷凍和解凍過程中物理沖擊對包含在介質(zhì)中的接種材料的損害的液體組合物。


下面參照附圖僅通過舉例描述本發(fā)明的最佳實施方式，其中圖1是根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案的包含與相應(yīng)的凹表面相對的凸表面的多個基本上半球形盤狀接種物的頂視圖。圖2A是顯示根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案的半球形盤狀接種物側(cè)面的與厘米/毫米刻度相比較的照片，該接種物包括與相應(yīng)的凹表面相對的凸表面。圖2B是圖2A所示接種物的頂視圖。圖3A是顯示根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案的接種物頂視圖的照片，顯示該接種物正被用塑料細(xì)菌環(huán)進行轉(zhuǎn)移，其中凹表面向上。圖加是與圖3A類似的頂視圖，顯示與圖3A中環(huán)相鄰的空細(xì)菌環(huán)。圖4是顯示數(shù)個根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案的接種物在它們的凹表面向上狀態(tài)下的透視圖的照片。
具體實施例方式參照附圖，根據(jù)本發(fā)明的固態(tài)干燥接種物是基本上盤狀主體，該主體包括與相應(yīng)的凹表面相對的凸表面。在一個優(yōu)化實施方案中，如圖中顯示，接種物的特殊形狀便于用戶在無菌條件下處理接種物。例如，該形狀允許用標(biāo)準(zhǔn)微生物接種環(huán)，如圖3A和:3B顯示，容易地處理接種物，故而便于容器間轉(zhuǎn)移該接種物。而且，在優(yōu)化實施方案中，接種物包括預(yù)定量的接種材料，優(yōu)選為如細(xì)菌或真菌的細(xì)胞微生物，其濃度多達大約IO8細(xì)胞每個接種物；和用于保護和保存這些細(xì)胞使之在干燥和后續(xù)接種物儲存過程中處于活力狀態(tài)的冷凍保存介質(zhì)。因此，冷凍保存介質(zhì)優(yōu)選包括大約等配比的牛血清白蛋白(BSA)和明膠，并含有肌肉肌醇、牛肉膏、細(xì)菌蛋白胨、活性炭和水。在一種優(yōu)化實施方案中，接種物包括選自于以下組的細(xì)菌蠟樣芽胞桿菌，短小芽胞桿菌、枯草芽孢桿菌、脆弱擬桿菌、缺陷短波假單胞菌、支氣管炎博德特菌、洋蔥伯克霍爾德菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、生孢梭菌、糞腸球菌、希拉腸球菌、大腸桿菌、嗜熱脂肪土芽孢桿菌、肺炎克雷伯氏菌、嗜根考克氏菌、發(fā)酵乳桿菌、李斯特菌、藤黃微球菌、銅綠假單胞菌、腸道沙門氏菌亞種、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌亞種和化膿性鏈球菌。在另ー種優(yōu)化實施方案中，接種物包括選自于以下組的真菌黑曲霉、白念珠菌和釀酒酵母菌。根據(jù)本發(fā)明的另ー優(yōu)化實施方案，干燥后的接種物在數(shù)月內(nèi)保持一致的細(xì)菌或真菌細(xì)胞的成活度。細(xì)胞的成活度可以以每個接種物在4°C下的特定儲存時期后產(chǎn)生的菌落形成単元的數(shù)量來評價。依此，細(xì)胞的成活度的下降會體現(xiàn)在每個接種物生成的菌落形成単元數(shù)的減少上。(見下面表1)。根據(jù)本發(fā)明的另ー個優(yōu)化實施方案的接種物為培養(yǎng)介質(zhì)的一致和標(biāo)準(zhǔn)化接種提供了一種量化的穩(wěn)定的接種物，以便一致地制備新鮮等同的參照培養(yǎng)基。這類參照培養(yǎng)基可以在微生物質(zhì)量控制過程中常規(guī)地使用。在另ー個優(yōu)化實施方案中，本發(fā)明涉及ー種制備多個如上所述基本上固態(tài)，基本上干燥的接種物的方法。該多個接種物是通過把相應(yīng)的多個等份的含大約IO8細(xì)菌或真菌細(xì)胞的液體冷凍保存介質(zhì)以大約10微升到大約100微升、優(yōu)選是大約15微升到大約60微升液滴形式沉積在標(biāo)準(zhǔn)實驗用聚苯乙烯皮氏培養(yǎng)皿上制備的?？梢岳斫獾氖墙臃N物中細(xì)菌或真菌數(shù)量可能高些或低些，取決于對接種物的期望應(yīng)用。然后在聚苯乙烯表面上對每個液滴進行冷凍并接下來進行冷凍干燥以獲取固態(tài)的干燥的接種物，該接種物為盤狀以便于以標(biāo)準(zhǔn)微生物接種環(huán)處理。具體的說，把接種物從皮氏培養(yǎng)皿的聚苯乙烯表面上移除后，接種物包含與相應(yīng)的基本上凹的表面相対的基本上凸的表面，并能夠借以上文提及的無菌接種環(huán)很容易地在容器間轉(zhuǎn)移。固態(tài)的干燥的接種物的最終直徑很大程度上由所用液滴的大小決定。在一個或多個優(yōu)化實施方案中，以以上方法制備的固態(tài)干燥的接種物可以被包裝以便儲存和銷售。盡管制備相對簡單和便宜，包含這種包裝中的每ー份接種物提供含有基本上等同的預(yù)定量的接種材料的穩(wěn)定、量化的接種物。接下來，我們參照非限制性實施例更詳細(xì)地描述本發(fā)明。實施例1.冷凍保存介質(zhì)(CM)冷凍保存介質(zhì)的成分 牛血清白蛋白(BSA) (Sigma, A9056) 5.0 %
參肌肉肌醇 (Sigma, 15125) 拳牛肉膏 (BD, 2I23O3) 參細(xì)菌蛋白胨(Oxoid, LP0037)
0.5 %
0.3 %
10.0 %
明膠(&gma, G9382) 活性炭(&gma, C9157)
0.3 %
5.0 %冷凍保存介質(zhì)的制備CM 部分 A 肌醇溶液
肌肉肌醇參牛肉膏 細(xì)菌蛋白胨參去離子水
IOg 0.3g 0.5g 40ml混合物被在121°C下加熱15分鐘(pH 7. 4 士 0. 2)。牛血清白蛋白溶液 牛血清白蛋白5g 去離子水30ml溶液經(jīng)0. 22微米級過濾消毒。40毫升肌醇溶液和30毫升牛血清白蛋白溶液混合以制備CM的A部分7毫升CM的A部分被分配在消毒后的塑料瓶中并在零下20攝氏度儲存。CM 部分 B 明膠 5g 活性炭 0.3g 去離子水30ml混合物在121°C下加熱15分鐘。3毫升CM的B部分被分配在消毒后的塑料瓶中并于零下20攝氏度儲存。2.制備在冷凍保存介質(zhì)中的用于再懸浮的細(xì)胞泡IIIII盧求胃^ttMffffM 胞力fe金黃色葡萄球菌綠膿桿菌將這些生物體置于蛋白胨大豆瓊脂(TSA，CM1310xoid)板上，對金黃色葡萄球菌在37°C下培養(yǎng)M小吋，對綠膿桿菌在30°C下培養(yǎng)M小吋，以制取每種微生物的細(xì)菌菌苔。每板(標(biāo)準(zhǔn)90毫米聚苯乙烯皮氏培養(yǎng)皿)用5毫升蛋白胨水(Oxoid)清洗每個細(xì)菌菌苔，懸浮液轉(zhuǎn)移至離心管并在4500rpm離心6分鐘。將清液倒出(并丟棄)。
8
沉積物重懸于10毫升蛋白胨水中再次旋轉(zhuǎn)，該過程重復(fù)兩次。第二次清洗后，清液倒出，收集的細(xì)胞總數(shù)由照片-光譜法確定；這些細(xì)胞在冷凍保存介質(zhì)中保存以備再懸浮制備下面所述的液滴。制備白念珠菌細(xì)胞的方法白念珠菌將該生物體置于沙氏葡萄糖瓊脂(SDA，CM410xoid)板上，并在30°C下培養(yǎng)M小時。每板以5毫升蛋白胨水(Oxoid)清洗真菌菌苔，懸浮液轉(zhuǎn)移至離心管并在4500rpm 離心6分鐘。將清液倒出(并丟棄)。沉積物重懸于10毫升蛋白胨水中再次旋轉(zhuǎn)，該過程重復(fù)兩次。第二次清洗后，清液倒出，收集的細(xì)胞總數(shù)由照片-光譜法確定；這些細(xì)胞在冷凍保存介質(zhì)中保存以備再懸浮制備下面所述的液滴。吿Ulfemヰ 包ホ干胃，-胃包 包〒^Itfe枯草芽孢桿菌生孢梭菌枯草芽孢桿菌置于含0. 3%硫酸錳的蛋白胨大豆瓊脂(TSA，CM1310xoid)板上，在 27°C下培養(yǎng)9天。梭菌生孢置于增強梭菌瓊脂(RCA，CM1510xoid)板上，在厭氧條件下于37°C下培養(yǎng)14天。每板以5毫升蛋白胨水(Oxoid)清洗真菌菌苔，懸浮液轉(zhuǎn)移至離心管并在4500rpm 離心6分鐘。將清液倒出(并丟棄)。沉積物重懸于10毫升蛋白胨水中再次旋轉(zhuǎn)，該過程重復(fù)兩次。第二次清洗后，清液倒出，接下來在80°C加熱沉積物20分鐘，繼而在冰水中冷卻 20分鐘。孢子制備由孢子染色法檢驗(642頁，默克(Merk)；微生物手冊(Microbiology Manual)第12版)。抱子形成百分比經(jīng)目測確定大于90%，保存孢子以備制備下面所述的液滴。制備黑曲霉孢子的方法黑曲霉該生物體生長在沙氏葡萄糖瓊脂(SDA，CM410xoid)斜面上(在100毫升醫(yī)用瓶中，Schott-Duran)；在30°C下培養(yǎng)直至培養(yǎng)基整個表面呈黑色。每瓶以5毫升蛋白胨水(Oxoid)清洗去除自瓶的匯合生長，懸浮液轉(zhuǎn)移至麥卡特尼瓶(Techno Plas，澳大利亞)。懸浮液經(jīng)過紙過濾(Whatman，二號過濾紙)，過濾液轉(zhuǎn)移至離心管并在4500rpm離心6分鐘。將清液倒出(并丟棄)。沉積物重懸于10毫升蛋白胨水中再次旋轉(zhuǎn)，該過程重復(fù)兩次。第二次清洗后清液倒出，收集的細(xì)胞總數(shù)由照片-光譜法確定，這些細(xì)胞在冷凍保存介質(zhì)中保存以備再懸浮制備下面所述的液滴。3.液滴制備實驗儀器和材料皮氏培養(yǎng)皿聚苯乙烯(PS)，經(jīng)環(huán)氧乙烷消毒(EO)
移液器Eppendorf公司，多部加和重復(fù)移液器(Multipartite Plus Repeater Pipette)移液尖500微升05x20微升)方法將一定量的細(xì)胞懸浮液加入到7毫升CM的A部分中并再次懸浮。細(xì)胞懸浮液在多達2毫升的體積中包含從大約0至大約IO8個通過如上所述的方法收集的細(xì)菌或真菌細(xì)胞(最初收集的細(xì)胞按需要以蛋白胨水稀釋)。將3毫升CM的B部分加入到混合物中通過震動充分混合。將Eppendorf多部加和重復(fù)移液器設(shè)置為20微升容積，并使用500微升的移液尖。將20微升細(xì)菌CM懸浮液垂直地持續(xù)地分散到聚苯乙烯皮氏培養(yǎng)皿上，每個液滴間保持合適的距離以避免液滴間的意外混合。然后將聚苯乙烯皮氏培養(yǎng)皿立刻移到零下20攝氏度的冷凍箱，預(yù)冷凍30分鐘。預(yù)冷凍結(jié)束后，將聚苯乙烯皮氏培養(yǎng)皿立刻轉(zhuǎn)移到零下80攝氏度的冷凍箱，整夜冷凍。4.冷凍干燥冷干機(FD-1B-50，Bi Yi Kang，中國)冷干循環(huán)開始前，將冷凝器溫度降至零下 50攝氏度并持續(xù)30分鐘。將帶有冷凍液滴的聚苯乙烯皮氏培養(yǎng)皿放入冷干機內(nèi)。冷干循環(huán)設(shè)定為冷干機板層溫度梯度為零下10攝氏度至零上25攝氏度，并加以最大真空。這ー 循環(huán)在達到最大真空值(低于20Pa)時結(jié)束。通過敲打皮氏培養(yǎng)皿的背面把凍干盤(盤狀接種物)從表面移除。接下來用ー個消毒后的金屬或塑料細(xì)菌環(huán)(Techno Plas，澳大利亞)將所有凍干盤收集到消毒后的玻璃瓶中。凍干盤分散至單個的消毒小瓶中，將凍干活塞(預(yù)先消毒的)仔細(xì)的放置在每個小瓶ロ并確?；钊麤]有密封小瓶。然后，將整個小瓶放置到凍干機中并施以最大真空。當(dāng)最大真空條件達到時(低于201 ),小瓶在凍干機內(nèi)被加蓋。儲存前，用鋁卷邊壓封這些小瓶。
權(quán)利要求
1.一種固態(tài)干燥接種物，所述接種物包括冷凍保存介質(zhì)和預(yù)定量的接種材料，其中，所述接種物是基本上盤狀的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的接種物，其中，所述接種物包括凸表面。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的接種物，其中，所述凸表面與相應(yīng)的凹表面相対。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的接種物，其中，所述接種物的大小和形狀被設(shè)計成便于使用微生物接種環(huán)在容器間轉(zhuǎn)移所述接種物。
5.根據(jù)前述任ー權(quán)利要求所述的接種物，其中，所述接種物是冷凍干燥的接種物。
6.根據(jù)前述任ー權(quán)利要求所述的接種物，其中，所述冷凍保存介質(zhì)含有大約等配比的牛血清白蛋白和明膠。
7.根據(jù)前述任ー權(quán)利要求所述的接種物，其中，所述接種物冷凍保存介質(zhì)含有牛血清白蛋白、肌肉肌醇、牛肉膏、細(xì)菌蛋白胨、明膠、活性炭和水。
8.根據(jù)前述任ー權(quán)利要求所述的接種物，其中，所述接種材料為細(xì)胞。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的接種物，其中，所述接種物包括大約108個細(xì)胞。
10.根據(jù)前述任ー權(quán)利要求所述的接種物，其中，所述接種材料為微生物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的接種物，其中，所述微生物選自于細(xì)菌和真菌。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的接種物，其中，所述細(xì)菌選自于蠟樣芽胞桿菌、短小芽胞桿菌、枯草芽孢桿菌、脆弱擬桿菌、缺陷短波單胞菌、支氣管炎博德特菌、洋蔥伯克霍爾德菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、生孢梭菌、糞腸球菌、希拉腸球菌、大腸桿菌、嗜熱脂肪土芽孢桿菌、肺炎克雷伯氏菌、嗜根考克氏菌、發(fā)酵乳桿菌、李斯特菌、藤黃微球菌、銅綠假單胞菌、腸道沙門氏菌亞種、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌亞種和化膿性鏈球菌。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的接種物，其中，所述真菌選自于黑曲霉、白念珠菌和釀酒酵母菌。
14.一種制備固態(tài)干燥接種物的方法，所述方法包括如下步驟a)將含預(yù)定量的接種材料的多個等份的液體冷凍保存介質(zhì)沉積在表面上；b)對所述表面上的每ー個所述等份的液體冷凍保存介質(zhì)進行干燥以獲得多個固態(tài)干燥的接種物；以及c)從所述表面移除所述接種物，其中每個所述接種物是基本上盤狀的。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，每個所述接種物包括凸表面。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，所述凸表面與相應(yīng)的凹表面相対。
17.根據(jù)權(quán)利要求14至16中任一所述的方法，其中，所述干燥是通過冷凍干燥實現(xiàn)的。
18.根據(jù)權(quán)利要求14至17中任一所述的方法，其中，每ー個所述等份的液體冷凍保存介質(zhì)具有大約10微升到大約100微升之間的體積。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中，所述每ー個所述等份的液體冷凍保存介質(zhì)具有大約15微升到大約60微升之間的體積。
20.根據(jù)權(quán)利要求14至19中任一所述的方法，其中，所述表面為塑料表面。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中，所述表面為聚苯乙烯表面。
22.根據(jù)權(quán)利要求14至21中任一所述的方法，其中，所述接種材料為細(xì)胞。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中，所述接種物含有大約108個細(xì)胞。
24.根據(jù)權(quán)利要求14至23中任一所述的方法，其中，所述接種材料為微生物。
25.根據(jù)權(quán)利要求M所述的方法，其中，所述微生物選自于細(xì)菌及真菌。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中，所述細(xì)菌選自于蠟樣芽胞桿菌、短小芽胞桿菌、枯草芽孢桿菌、脆弱擬桿菌、缺陷短波單胞菌、支氣管炎博德特菌、洋蔥伯克霍爾德菌、 產(chǎn)氣莢膜梭菌、生孢梭菌、糞腸球菌、希拉腸球菌、大腸桿菌、嗜熱脂肪土芽孢桿菌、肺炎克雷伯氏菌、嗜根考克氏菌、發(fā)酵乳桿菌、李斯特菌、藤黃微球菌、銅綠假單胞菌、腸道沙門氏菌亞種、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌亞種和化膿性鏈球菌。
27.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中，所述真菌選自于黑曲霉、白念珠菌和釀酒酵母菌。
28.根據(jù)權(quán)利要求14至27中任一項所述的方法制備的基本上固態(tài)、基本上干燥的接種物。
29.ー種包含有基本上固態(tài)、基本上干燥的根據(jù)權(quán)利要求1至13或觀中任一項所述的接種物的容器。
30.基本上如在本文中參考任意一個或多個除比較實施例外的實施例所描述的根據(jù)權(quán)利要求1或觀所述的固態(tài)干燥接種物，根據(jù)權(quán)利要求14所述方法，或根據(jù)權(quán)利要求四所述的容器。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種接種物及其制備方法。該接種物為固態(tài)干燥接種物，所述接種物包括冷凍保存介質(zhì)和預(yù)定量的接種材料，其中，所述接種物是基本上盤狀的。
文檔編號C12M1/16GK102533555SQ20111038564
公開日2012年7月4日 申請日期2011年11月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月23日
發(fā)明者保羅·普利斯科特, 王一鴻 申請人:Ams實驗室有限公司