專利名稱：一種檢測s1核酸酶及其抑制劑的熒光方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物傳感及分析領(lǐng)域，特別涉及一種利用寡核苷酸和氧化石墨烯檢測核酸酶及其抑制劑的熒光檢測方法。
背景技術(shù)：
核酸酶是指作用于核酸的磷酸二酯鍵的酶。依據(jù)底物不同分類，可分為DNA酶和 RNA酶；依據(jù)切割部位不同，又可分為核酸內(nèi)切酶、限制性內(nèi)切酶和核酸外切酶。生物體內(nèi)的核酸酶負(fù)責(zé)細(xì)胞內(nèi)外催化核酸的降解，對生命過程起著非常重要的作用。核酸酶的用途包括參與DNA的合成與修復(fù)及RNA轉(zhuǎn)錄后的剪切、修飾和降解等重要基因復(fù)制和基因表達(dá)過程；負(fù)責(zé)清除多余的、結(jié)構(gòu)和功能異常的核酸，同時也可以清除侵入細(xì)胞的外源性核酸； 在消化液中降解食物中的核酸以利吸收；是體外重組DNA技術(shù)中的重要工具酶。由于核酸酶生理功能的重要意義，近年來受到科學(xué)家們越來越多的關(guān)注，因此迫切需要尋找快速、簡便、高靈敏度的方法來檢測核酸酶。隨之，對核酸酶的檢測材料和方法的開發(fā)研究成為一個熱點。目前針對于核酸酶檢測的新型分析方法已經(jīng)在生命科學(xué)研究和疾病分子診斷等領(lǐng)域得到迅速發(fā)展。對核酸酶研究的不斷深入，必將對生命本質(zhì)的探索和人類的未來作出更大的貢獻(xiàn)。近年來氧化石墨烯以其特殊的力學(xué)、量子學(xué)和電學(xué)性質(zhì)，頗受物理和材料學(xué)界重視。由于其具有優(yōu)異的電學(xué)性能、導(dǎo)熱性好、水溶性好、比表面積大等優(yōu)點，也為生物分子的檢測提供了新的思路。目前隨著單壁碳納米管在生物傳感中的成功應(yīng)用，氧化石墨烯也逐漸成為傳感領(lǐng)域青睞的對象。由于氧化石墨烯的特殊性質(zhì)，使得檢測過程操作簡單、反應(yīng)快速，這樣大大減少了實驗的步驟，同時可以顯著的提高檢測的靈敏度和特異性。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有的核酸酶檢測方法存在的不足， 提供一種利用寡核苷酸和氧化石墨烯檢測Si核酸酶及其抑制劑的熒光方法，其具有較高的特異性和靈敏度。技術(shù)方案本發(fā)明檢測Sl核酸酶及其抑制劑的熒光方法，其特征在于該方法包括以下步驟a.將染料標(biāo)記的寡核苷酸熒光探針加入到緩沖溶液中，以480nm為激發(fā)波長，進(jìn)行熒光檢測，記錄該探針的熒光發(fā)射譜帶；b.將氧化石墨烯加入到上述溶液中，氧化石墨烯作為固相載體吸附自由卷曲狀態(tài)的寡核苷酸探針，形成寡核苷酸/氧化石墨烯復(fù)合物，此時染料的熒光被氧化石墨烯猝滅；c.經(jīng)Sl核酸酶切割的寡核苷酸互補鏈，加入到寡核苷酸/石墨烯復(fù)合物中進(jìn)行反應(yīng)；d.寡核苷酸互補鏈經(jīng)過Sl核酸酶的特異性降解作用形成小的堿基片段，無法與氧化石墨烯表面的寡核苷酸鏈探針形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，從而寡核苷酸探針不能脫離氧化石墨烯的表面，染料的熒光信號不能恢復(fù)；根據(jù)熒光信號恢復(fù)的程度實現(xiàn)對Sl核酸酶的定性及定量檢測；e.寡核苷酸互補鏈在抑制劑腺苷三磷酸存在下經(jīng)Sl核酸酶降解作用，加入寡核苷酸/氧化石墨烯復(fù)合物中進(jìn)行反應(yīng)；f.寡核苷酸互補鏈在抑制劑腺苷三磷酸存在下不會被Sl核酸酶降解，與寡核苷酸探針形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，寡核苷酸探針脫離氧化石墨烯的表面，染料的熒光信號得以恢復(fù)； 根據(jù)熒光信號恢復(fù)的程度實現(xiàn)對抑制劑腺苷三磷酸的定性及定量檢測。其中步驟a)所述的將染料標(biāo)記的寡核苷酸熒光探針加入到緩沖溶液中，用熒光分光光度計進(jìn)行檢測，所用染料為熒光素；染料標(biāo)記在寡核苷酸探針的5’端；寡核苷酸探針堿基組成為5，-FAM-ATCTTGACTATGTGGGTGCT-3，；所用緩沖溶液為 20mM Tris-HCl, IOOmM NaCl, 5mM KCl,5mM MgCl2, pH = 7. 4 ；所用熒光檢測方法為將探針溶液加入到1. 6mL緩沖溶液中進(jìn)行熒光發(fā)射光譜的掃描，激發(fā)波長為480nm，發(fā)射波長掃描范圍為490-650nm。步驟b)所述的寡核苷酸/氧化石墨烯復(fù)合物的形成，是通過非共價鍵相互作用使寡核苷酸探針吸附到氧化石墨烯表面；寡核苷酸吸附到氧化石墨烯表面后，染料的熒光被氧化石墨烯猝滅，將氧化石墨烯加入到含有寡核苷酸探針的緩沖溶液中后，室溫放置5分鐘，然后進(jìn)行熒光檢測，激發(fā)波長為480nm，掃描范圍為490-650nm。步驟c)經(jīng)Sl核酸酶切割的寡核苷酸互補鏈，加入到寡核苷酸/石墨烯復(fù)合物中進(jìn)行反應(yīng)，所用的寡核苷酸互補鏈探針堿基組成為5’ -AGCACCCACATAGTCAAGAT-3’ ；加入含有S 1酶的寡核苷酸互補鏈溶液或其它等體積的對照溶液后熒光信號恢復(fù)所用的時間為室溫，25分鐘左右。所述的熒光信號用熒光分光光度計進(jìn)行檢測，激發(fā)波長為480nm，發(fā)射波長掃描范圍為490-650nm。所述的熒光探針為任意一段單鏈寡核苷酸，染料標(biāo)記在5’端，或是3’端。 所述的染料標(biāo)記是熒光素或異硫氰酸熒光素。步驟d)所述的寡核苷酸互補鏈經(jīng)Sl核酸酶降解作用，是通過Sl核酸酶對單鏈 DNA或RNA特異性的降解作用，形成5’磷酸結(jié)構(gòu)。Sl核酸酶對寡核苷酸互補鏈的酶切過程所用酶切溶液為2mM CH3COONa, 15mMNaCl,0. ImMZnSO4, pH = 4. 6 ；酶切溫度為 37°C，時間為 30 分鐘。步驟e)所述的寡核苷酸互補鏈在抑制劑腺苷三磷酸存在下經(jīng)Sl核酸酶降解作用，是腺苷三磷酸能夠抑制Sl核酸酶對單鏈DNA或RNA切割的特異性降解作用；當(dāng)抑制劑腺苷三磷酸存在時，Sl核酸酶對寡核苷酸互補鏈的作用條件與上述酶切條件相同。有益效果根據(jù)本發(fā)明所述的熒光檢測方法，可同時實現(xiàn)對Sl核酸酶及其抑制劑腺苷三磷酸的檢測。當(dāng)體系中含有其它核酸酶及抑制劑時，仍然可以實現(xiàn)對其高靈敏度檢測。因此，本發(fā)明方法有望為實際臨床樣品中核酸酶的檢測提供一種簡便、快速的方法。


圖1為本發(fā)明利用寡核苷酸和氧化石墨烯檢測核酸酶及其抑制劑的熒光檢測方法的工作原理圖。圖2為本發(fā)明利用寡核苷酸和氧化石墨烯檢測檢測未經(jīng)Sl酶降解的DNA鏈的熒光檢測結(jié)果圖。a為寡核苷酸探針；b為寡核苷酸探針+氧化石墨烯；c為寡核苷酸探針+ 互補鏈+氧化石墨烯；d為寡核苷酸探針+非互補鏈+氧化石墨烯。圖3為Sl酶及其抑制劑檢測過程中不同反應(yīng)體系熒光檢測結(jié)果對比圖。a為寡核苷酸探針；b為寡核苷酸探針+氧化石墨烯；c為寡核苷酸探針+Sl核酸酶+互補鏈+氧化石墨烯；d為寡核苷酸探針+Sl核酸酶+腺苷三磷酸+互補鏈+氧化石墨烯。
具體實施例方式一種利用寡核苷酸和氧化石墨烯檢測Sl核酸酶及其抑制劑的熒光檢測方法，包括以下步驟1)將染料標(biāo)記的寡核苷酸探針加入到緩沖溶液中，對溶液進(jìn)行熒光檢測，記錄該探針的熒光發(fā)射譜帶；該探針為任意序列的一段單鏈核酸，一端標(biāo)記有熒光素。2)將氧化石墨烯作為固相載體加入到緩沖溶液中，由于氧化石墨烯表面具有能與寡核苷酸探針進(jìn)行非共價鍵結(jié)合的化學(xué)基團，可以使染料標(biāo)記的寡核苷酸探針吸附到氧化石墨烯的表面，從而形成寡核苷酸/氧化石墨烯復(fù)合物，此時染料與氧化石墨烯之間發(fā)生高效的能量轉(zhuǎn)移，染料的熒光被氧化石墨烯有效猝滅。3)在寡核苷酸/氧化石墨烯復(fù)合物中加入寡核苷酸互補鏈進(jìn)行反應(yīng)，通過堿基互補配對作用，兩條單鏈核苷酸雜交形成雙螺旋結(jié)構(gòu)。4)互補鏈介導(dǎo)的雙螺旋結(jié)構(gòu)的形成使其從氧化石墨烯表面脫離，此時染料基團與氧化石墨烯之間的距離較遠(yuǎn)，不能發(fā)生有效的能量轉(zhuǎn)移，標(biāo)記在探針末端的染料的熒光信號得到恢復(fù)，可以檢測到較強的熒光信號。5)當(dāng)寡核苷酸互補鏈經(jīng)Sl核酸酶降解形成小的堿基片段后，加入到寡核苷酸/石墨烯復(fù)合物中進(jìn)行反應(yīng)，降解后的堿基片段不能與寡核苷酸鏈形成雙螺旋結(jié)構(gòu)。6)寡核苷酸互補鏈由于受到Sl核酸酶降解作用無法與寡核苷酸形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，從而寡核苷酸探針不能從氧化石墨烯的表面脫離，染料的熒光信號也不能恢復(fù)。7)當(dāng)寡核苷酸互補鏈在抑制劑腺苷三磷酸存在下經(jīng)Sl核酸酶作用后，加入到寡核苷酸/石墨烯復(fù)合物中進(jìn)行反應(yīng)，互補鏈在抑制劑腺苷三磷酸存在下不會被Si核酸酶降解，因此能夠與寡核苷酸形成雙螺旋結(jié)構(gòu)。8)寡核苷酸互補鏈由于在抑制劑腺苷三磷酸作用下不被Sl核酸酶降解，能夠與寡核苷酸探針形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，從而使寡核苷酸探針脫離氧化石墨烯的表面，染料的熒光信號得以恢復(fù)。根據(jù)本發(fā)明，步驟1)為將染料標(biāo)記的寡核苷酸探針加入到緩沖溶液中，對溶液進(jìn)行熒光檢測；其中，本發(fā)明所述的寡核苷酸探針是任意序列的一段單鏈核酸。根據(jù)本發(fā)明，步驟2、中所述的將氧化石墨烯作為固相載體加入到緩沖溶液中，染料標(biāo)記寡核苷酸探針吸附到氧化石墨烯表面的溫度可以是室溫，優(yōu)選的是25°C。根據(jù)本發(fā)明，步驟2、中所述的寡核苷酸探針吸附到氧化石墨烯表面的速度非?？欤^察到熒光猝滅的時間約為2分鐘。根據(jù)本發(fā)明，步驟幻中所述的在寡核苷酸/氧化石墨烯復(fù)合物中加入互補鏈進(jìn)行反應(yīng)的溫度可以是室溫，優(yōu)選的是25°C。通過堿基互補配對作用，形成雙螺旋結(jié)構(gòu)。根據(jù)本發(fā)明，步驟4)中所述的寡核苷酸與其互補鏈形成雙螺旋結(jié)構(gòu)后，從氧化石墨烯表面脫離的時間約為25分鐘。根據(jù)本發(fā)明，步驟5)中所述的寡核苷酸互補鏈經(jīng)Sl核酸酶的降解作用的反應(yīng)溫度可以是四°C 39 °C，優(yōu)選的是37 °C。根據(jù)本發(fā)明，步驟幻中所述的寡核苷酸互補鏈經(jīng)過Sl核酸酶的降解作用的時間為30分鐘。根據(jù)本發(fā)明，步驟6)中所述的經(jīng)過Sl核酸酶降解后的寡核苷酸互補鏈，加入寡核苷酸/石墨烯復(fù)合物中進(jìn)行反應(yīng)的時間為25分鐘。根據(jù)本發(fā)明，步驟7)中所述的當(dāng)抑制劑腺苷三磷酸存在時，在寡核苷酸互補鏈中加入Sl核酸酶進(jìn)行作用，反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間同步驟5)。根據(jù)本發(fā)明，步驟8)中所述的當(dāng)抑制劑腺苷三磷酸存在時，經(jīng)過Sl核酸酶作用后的寡核苷酸互補鏈，加入寡核苷酸/石墨烯復(fù)合物中進(jìn)行反應(yīng)的時間約為25分鐘。下面結(jié)合附圖，用Sl核酸酶的檢測實施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明。但本發(fā)明并不僅限于檢測核酸酶及其抑制劑，也并不受實施例中其他條件的限制。熒光檢測所用的儀器為熒光分光度計(RF-5301，日本)。熒光光譜測量條件氙燈激發(fā)，激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度為5. Onm和10. Onm,電壓為950V，響應(yīng)時間2S，激發(fā)波長為 480nm，發(fā)射波長掃描范圍490 650nm ；用3mL石英比色皿進(jìn)行測量，樣品體積1. 60mL ；室本發(fā)明實施例中所用的氧化石墨烯是根據(jù)文獻(xiàn)(W. S. Hummers, R. Ε. Offeman， J. Am. Chem. Soc. 1958，80，1339-1339)中 Hummers 的方法合成的。本發(fā)明實施例中所用的寡核苷酸探針及互補鏈均購自上海生物工程技術(shù)有限公司，序列分別為(5，-FAM-ATCTTGACTATGTGGGTGCT-3，)和(5，-AGCACCCACATAGTCAAGAT-3，)； Sl核酸酶和腺苷三磷酸購自上海生物工程技術(shù)有限公司；酶切液成分為OmM CH3COONa, 15mM NaCl,0. ImMZnSO4, pH 4. 6 ；所用的緩沖溶液成分為20mM Tris-HCl, IOOmM NaCl, 5mMKCl,5mM MgCl2, pH 7· 4。實施例1制備寡核苷酸/氧化石墨烯復(fù)合物將1 μ L濃度為2 μ M的熒光素標(biāo)記的寡核核苷酸探針加入到ImL的Tris-HCl緩沖溶液中，再加入0. 6mL水進(jìn)行熒光檢測；然后再加入1. 8 μ L濃度為lmg/mL的氧化石墨烯溶液，該探針會迅速吸附到氧化石墨烯表面，并將熒光素的信號猝滅。實施例2寡核苷酸互補鏈的檢測檢測1 將1 μ L濃度為30 μ M的寡核苷酸互補鏈加入到寡核苷酸/氧化石墨烯復(fù)合物中，互補鏈與寡核苷酸探針形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，從氧化石墨烯表面脫離，進(jìn)行熒光檢測 (激發(fā)波長480nm，發(fā)射波長490 650nm)，可以觀察到熒光的恢復(fù)現(xiàn)象。同時將1 μ L濃度為50μΜ的非互補鏈加入作為對照，其它條件相同。實施例3核酸酶及其抑制劑的檢測檢測2 將IyL濃度為1.6μ M的熒光素標(biāo)記的寡核核苷酸探針加入到ImL的 Tris-HCl緩沖溶液中，再加入0. 6mL的水進(jìn)行熒光檢測；然后再加入1. 5 μ L濃度為lmg/mL 的氧化石墨烯溶液，該探針會迅速吸附到氧化石墨烯表面，并將熒光素的信號猝滅。將3uL濃度為0. OlU的Sl核酸酶和1 μ L濃度為30 μ M的寡核苷酸互補鏈加入到 3uL 酶切液 QmM CH3COONa, 15mM NaCl, 0. ImM ZnSO4,pH 4.6)中，37°C下反應(yīng) 30 分鐘；再將反應(yīng)后的混合液加入到寡核苷酸/氧化石墨烯復(fù)合物中，作為對照，其它條件與檢測1中相同。同時，做如下試驗作為對比。檢測3 將2. 5 μ L濃度為150mM的腺苷三磷酸和1 μ L濃度為30 μ M的寡核苷酸互補鏈加入到 3uL 酶切液中(pH 4. 6,2mM CH3COONa, 15mM NaCl，0. ImM ZnSO4)，再加入 3uL 濃度為0. OlU的Sl核酸酶，37°C下反應(yīng)30分鐘；將反應(yīng)后的混合液加入到寡核苷酸/氧化石墨烯復(fù)合物中，作為對照，其它條件與檢測1中相同。結(jié)果檢測1中寡核苷酸互補鏈和非互補鏈的熒光信號恢復(fù)強度相比相差很大?？梢妼嶒灥倪x擇性很強。檢測2和3中寡核苷酸互補鏈經(jīng)Sl核酸酶降解作用及當(dāng)腺苷三磷酸存在時的降解作用相比，熒光強度相差很大?？梢姳景l(fā)明對核酸酶及其抑制劑的檢測具有高度的特異性。
權(quán)利要求
1.一種檢測Sl核酸酶及其抑制劑的熒光方法，其特征在于該方法包括以下步驟a.將染料標(biāo)記的寡核苷酸熒光探針加入到緩沖溶液中，以480nm為激發(fā)波長，進(jìn)行熒光檢測，記錄該探針的熒光發(fā)射譜帶；b.將氧化石墨烯加入到上述溶液中，氧化石墨烯作為固相載體吸附自由卷曲狀態(tài)的寡核苷酸探針，形成寡核苷酸/氧化石墨烯復(fù)合物，此時染料的熒光被氧化石墨烯猝滅；c.經(jīng)Sl核酸酶切割的寡核苷酸互補鏈，加入到寡核苷酸/石墨烯復(fù)合物中進(jìn)行反應(yīng)；d.寡核苷酸互補鏈經(jīng)過Sl核酸酶的特異性降解作用形成小的堿基片段，無法與氧化石墨烯表面的寡核苷酸鏈探針形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，從而寡核苷酸探針不能脫離氧化石墨烯的表面，染料的熒光信號不能恢復(fù)；根據(jù)熒光信號恢復(fù)的程度實現(xiàn)對Si核酸酶的定性及定量檢測；e.寡核苷酸互補鏈在抑制劑腺苷三磷酸存在下經(jīng)Sl核酸酶降解作用，加入寡核苷酸/ 氧化石墨烯復(fù)合物中進(jìn)行反應(yīng)；f.寡核苷酸互補鏈在抑制劑腺苷三磷酸存在下不會被Sl核酸酶降解，與寡核苷酸探針形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，寡核苷酸探針脫離氧化石墨烯的表面，染料的熒光信號得以恢復(fù)；根據(jù)熒光信號恢復(fù)的程度實現(xiàn)對抑制劑腺苷三磷酸的定性及定量檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測Sl核酸酶及其抑制劑的熒光方法，其特征是步驟a) 所述的將染料標(biāo)記的寡核苷酸熒光探針加入到緩沖溶液中，用熒光分光光度計進(jìn)行檢測，所用染料為熒光素；染料標(biāo)記在寡核苷酸探針的5’端；寡核苷酸探針堿基組成為 5，-FAM-ATCTTGACTATGTGGGTGCT-3，；所用緩沖溶液為 20mOTris-HCl，IOOmM NaCl, 5mM KCl, 5mM MgCl2,pH = 7.4 ；所用熒光檢測方法為將探針溶液加入到1. 6mL緩沖溶液中進(jìn)行熒光發(fā)射光譜的掃描，激發(fā)波長為480nm，發(fā)射波長掃描范圍為490-650nm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測Sl核酸酶及其抑制劑的熒光方法，其特征是步驟b)所述的寡核苷酸/氧化石墨烯復(fù)合物的形成，是通過非共價鍵相互作用使寡核苷酸探針吸附到氧化石墨烯表面；寡核苷酸吸附到氧化石墨烯表面后，染料的熒光被氧化石墨烯猝滅，將氧化石墨烯加入到含有寡核苷酸探針的緩沖溶液中后，室溫放置5分鐘，然后進(jìn)行熒光檢測，激發(fā)波長為480nm，掃描范圍為490-650nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測Sl核酸酶及其抑制劑的熒光方法，其特征是步驟c)經(jīng) Sl核酸酶切割的寡核苷酸互補鏈，加入到寡核苷酸/石墨烯復(fù)合物中進(jìn)行反應(yīng)，所用的寡核苷酸互補鏈探針堿基組成為5’ -AGCACCCACATAGTCAAGAT-3’ ；加入含有S 1酶的寡核苷酸互補鏈溶液或其它等體積的對照溶液后熒光信號恢復(fù)所用的時間為室溫，25分鐘左右。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測Sl核酸酶及其抑制劑的熒光方法，其特征是所述的熒光信號用熒光分光光度計進(jìn)行檢測，激發(fā)波長為480nm，發(fā)射波長掃描范圍為490-650nm。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測Sl核酸酶及其抑制劑的熒光方法，其特征是所述的熒光探針為任意一段單鏈寡核苷酸，染料標(biāo)記在5’端，或是3’端。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測Sl核酸酶及其抑制劑的熒光方法，其特征是所述的染料標(biāo)記是熒光素或異硫氰酸熒光素。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測Sl核酸酶及其抑制劑的熒光方法，其特征是步驟d)所述的寡核苷酸互補鏈經(jīng)Sl核酸酶降解作用，是通過Sl核酸酶對單鏈DNA或RNA特異性的降解作用，形成5’磷酸結(jié)構(gòu)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測Sl核酸酶及其抑制劑的熒光方法，其特征是Sl核酸酶對寡核苷酸互補鏈的酶切過程所用酶切溶液為2mM CH3COONa, 15mMNaCl,0. ImM ZnSO4,pH = 4. 6 ；酶切溫度為37°C，時間為30分鐘。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測Sl核酸酶及其抑制劑的熒光方法，其特征是步驟e)所述的寡核苷酸互補鏈在抑制劑腺苷三磷酸存在下經(jīng)Si核酸酶降解作用，是腺苷三磷酸能夠抑制Sl核酸酶對單鏈DNA或RNA切割的特異性降解作用；當(dāng)抑制劑腺苷三磷酸存在時， Sl核酸酶對寡核苷酸互補鏈的作用條件與上述酶切條件相同。
全文摘要
本發(fā)明是一種利用寡核苷酸和氧化石墨烯檢測S1核酸酶及其抑制劑的熒光方法。該方法以氧化石墨烯為固相載體，通過其與核酸堿基之間的相互作用使染料標(biāo)記的寡核苷酸探針吸附在表面并將其熒光猝滅。未被降解的互補鏈可以與探針雜交形成雙螺旋結(jié)構(gòu)并從氧化石墨烯表面脫離，體系熒光得以恢復(fù)；當(dāng)有S1核酸酶存在時，互補鏈被降解成小的堿基片段，不能與探針形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，探針仍然吸附在氧化石墨烯表面，熒光呈猝滅狀態(tài)；腺苷三磷酸可有效抑制核酸酶對互補鏈的降解作用，從而使體系的熒光恢復(fù)。因此，通過檢測體系熒光強度的變化即可實現(xiàn)對S1核酸酶及其抑制劑的檢測。本發(fā)明方法簡便、快速、具有較高的靈敏度和選擇性，在核酸酶檢測方面具有重要的意義。
文檔編號C12Q1/44GK102321759SQ20111024534
公開日2012年1月18日 申請日期2011年8月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月25日
發(fā)明者劉興奮, 苗麗坤, 范曲立, 馬延文, 黃維 申請人:南京郵電大學(xué)