專利名稱：一種通過(guò)添加谷氨酰胺提高林可霉素產(chǎn)量的生產(chǎn)方法
一種通過(guò)添加谷氨酰胺提高林可霉素產(chǎn)量的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，是一種在發(fā)酵過(guò)程中通過(guò)添加谷氨酰胺來(lái)提高林可霉素產(chǎn)量的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
林可霉素(Lincomycin，簡(jiǎn)稱LCM)又稱潔霉素，屬于林可胺類抗生素，是1962年從內(nèi)布拉斯加州林肯市附近土壤中分離得到一種放線菌，并從該菌的培養(yǎng)液中分離出林可酰胺類抗菌劑。林可霉素對(duì)革蘭氏陽(yáng)性需氧菌的抗性較強(qiáng)，對(duì)已存在的抗生素不存在交叉感染，而且毒性較低，因此，在臨床上被用作治療革蘭氏陽(yáng)性菌引起的疾病的重要藥物。林可霉素的主要成分為林可霉素A、林可霉素B、林可霉素C、林可霉素D和林可霉素S，一般所說(shuō)的林可霉素指的是其A組分，其化學(xué)名稱為6-[1-甲基-反-4-丙基-L-2-批咯烷甲酰胺基]-1-硫代_6，8- 二脫氧-D-赤式-a-D-半乳辛吡喃糖苷。其分子結(jié)構(gòu)是由一分子的丙基脯氨酸(PPL)和一分子的甲硫基林可糖胺(MTL)通過(guò)一個(gè)肽鍵連接起來(lái)的。 其分子結(jié)構(gòu)如圖1所示，其合成途徑如圖2所示。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)，在發(fā)酵過(guò)程中添加林可霉素的關(guān)鍵前體，例如丙基脯氨酸，可以明顯提高林可霉素A組分的產(chǎn)量，并且減少了林可霉素B組分的產(chǎn)量。同時(shí)，國(guó)內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)， 在發(fā)酵過(guò)程中添加生長(zhǎng)代謝或生產(chǎn)代謝過(guò)程中的關(guān)鍵物質(zhì)，例如金屬離子、氨基酸、生物素等，可明顯提高林可霉素的產(chǎn)量。但對(duì)于在發(fā)酵過(guò)程中添加的谷氨酰胺，能否提高林可霉素的產(chǎn)量卻未有報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種通過(guò)添加谷氨酰胺來(lái)提高林可
霉素產(chǎn)量的生產(chǎn)方法。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的—種通過(guò)添加谷氨酰胺來(lái)提高林可霉素產(chǎn)量的生產(chǎn)方法，其特征在于，在發(fā)酵過(guò)程中加入谷氨酰胺；谷氨酰胺加入量為0. 04 0. 06%，是指谷氨酰胺占培養(yǎng)基的重量百分比，加入時(shí)間為72 96h，發(fā)酵周期為168h，從發(fā)酵開(kāi)始時(shí)算起。一種通過(guò)添加谷氨酰胺來(lái)提高林可霉素產(chǎn)量的生產(chǎn)方法，配制發(fā)酵培養(yǎng)基，按一定的接種量向發(fā)酵瓶中接入種子液，放在搖床上進(jìn)行發(fā)酵，共需發(fā)酵168h，在發(fā)酵過(guò)程中 (即0 168h)添加一定濃度的谷氨酰胺，考察其對(duì)林可霉素產(chǎn)量的影響。發(fā)酵結(jié)束后，離心得到上清液，用杯碟法進(jìn)行林可霉素產(chǎn)量的測(cè)定。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的積極效果是使用本發(fā)明所提供的方法，通過(guò)在發(fā)酵過(guò)程中添加并不作為林可霉素合成前體物質(zhì)的谷氨酰胺可明顯提高林可霉素的產(chǎn)量。


圖1是林可霉素的分子結(jié)構(gòu)；圖2是林可霉素的合成方法示意圖。
具體實(shí)施方式以下提供本發(fā)明一種通過(guò)添加谷氨酰胺來(lái)提高林可霉素產(chǎn)量的生產(chǎn)方法的具體實(shí)施方式
。請(qǐng)參見(jiàn)附圖1和2，下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，如《分子克隆實(shí)驗(yàn)手冊(cè)》(New York =Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件或生產(chǎn)廠商推薦的條件下進(jìn)行。在本發(fā)明的下述實(shí)施例中，使用的林可鏈霉菌(Sti^ptomyces lincolnensis)已于2008年04月25日提交位于武漢大學(xué)的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏號(hào)為 CCTCC M 208064。除特別說(shuō)明外，以下實(shí)施例中所使用的％，％。均為重量比。在本發(fā)明的實(shí)施例中，發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為0.8% (NH4)2SO4jO. 8% NaNO3,0.5% NaCl, 0. 02% K2HPO4, 3%黃豆餅粉，0. 2%玉米漿，0. 8% CaCO3, 5%葡萄糖，pH 7. 0。在本發(fā)明的實(shí)施例中，林可霉素的效價(jià)采用杯碟法進(jìn)行檢測(cè)，中國(guó)藥典2010版 (二部)。實(shí)施例1 5谷氨酰胺的添加量對(duì)林可霉素生物合成的影響在配制林可霉素發(fā)酵培養(yǎng)基時(shí)，向培養(yǎng)基中添加重量比為0.005%、0.02%、 0. 04%,0. 06%,0. 的谷氨酰胺，并用不添加谷氨酰胺的培養(yǎng)基作為對(duì)照，即對(duì)照例1，接入林可鏈霉菌(Sti^ptomyces lincolnensis)，發(fā)酵168小時(shí)后，取樣測(cè)定林可霉素的效價(jià)，結(jié)果如表1所示。表1、谷氨酰胺的添加量對(duì)林可霉素生物合成的影響
實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例4實(shí)施例5對(duì)照例1谷氨酰胺添加ψ/%0.0050.020.040.060.1對(duì)照相對(duì)效價(jià)105107117112101100由表1的結(jié)果可見(jiàn)，向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加谷氨酰胺可明顯提高林可霉素的產(chǎn)量， 優(yōu)選的添加量為0. 04 0. 06%。實(shí)施例6 9谷氨酰胺的添加時(shí)間對(duì)林可霉素生物合成的影響配制林可霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，接入林可鏈霉菌(Sti^ptomyces lincolnensis)，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，分別在72、96、120、144小時(shí)向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加重量比為0. 04%的谷氨酰胺， 同時(shí)以不添加谷氨酰胺的培養(yǎng)基作為對(duì)照，發(fā)酵168小時(shí)后，取樣測(cè)定林可霉素的效價(jià)，結(jié)果如表2所示。表2、谷氨酰胺的添加時(shí)間對(duì)林可霉素生物合成的影響
權(quán)利要求
1.一種通過(guò)添加谷氨酰胺來(lái)提高林可霉素產(chǎn)量的生產(chǎn)方法，其特征在于，在發(fā)酵過(guò)程中加入谷氨酰胺。
2.如權(quán)利要求1所述的一種通過(guò)添加谷氨酰胺來(lái)提高林可霉素產(chǎn)量的生產(chǎn)方法，其特征在于，谷氨酰胺加入量為0. 04 0. 06%，是指谷氨酰胺占培養(yǎng)基的重量百分比。
3.如權(quán)利要求1所述的一種通過(guò)添加谷氨酰胺來(lái)提高林可霉素產(chǎn)量的生產(chǎn)方法，其特征在于，谷氨酰胺加入時(shí)間為72 96h。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種通過(guò)添加谷氨酰胺來(lái)提高林可霉素產(chǎn)量的生產(chǎn)方法，其特征在于，在發(fā)酵過(guò)程中加入谷氨酰胺，谷氨酰胺加入量為0.04～0.06％，是指谷氨酰胺占培養(yǎng)基的重量百分比；谷氨酰胺加入時(shí)間為72～96h。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)通過(guò)在發(fā)酵過(guò)程中添加并不作為林可霉素合成前體物質(zhì)的谷氨酰胺可明顯提高林可霉素的產(chǎn)量。
文檔編號(hào)C12P19/64GK102250991SQ201110184750
公開(kāi)日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2011年7月4日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月4日 公開(kāi)號(hào)201110184750.發(fā)明者喬現(xiàn)婷, 劉守強(qiáng), 葉蕊芳, 呂和平, 張宏周, 毛全貴, 王美珠 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué), 河南天方藥業(yè)股份有限公司