專利名稱：肝細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)和凍存的裝置的制作方法
肝細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)和凍存的裝置

本發(fā)明涉及一種裝置，特別是一種主要用于進(jìn)行肝細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)和冷凍的裝置，屬于專用于醫(yī)學(xué)目的的容器。
背景技術(shù)：
慢性肝炎肝硬化、中晚期肝癌的病人常常死于終末期肝功能衰竭，應(yīng)用生物人工肝以及肝臟移植等療法來(lái)治療肝臟衰竭最近幾年來(lái)取得了顯著的成就。生物人工肝支持系統(tǒng)借助體外循環(huán)裝置清除體內(nèi)各種有害物質(zhì)并且補(bǔ)充體內(nèi)必需的蛋白質(zhì)和凝血因子，為患者提供短暫的肝功能支持；肝移植療法則是借助同種或異種肝臟移植到患者體內(nèi)發(fā)揮功能來(lái)達(dá)到治療目的。但上述兩種治療方法都面臨著缺乏理想肝細(xì)胞源的問(wèn)題，而且并不是每次獲取的肝細(xì)胞量都能達(dá)到治療的要求，因此探索一種符合實(shí)際情況的肝細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)、凍存及復(fù)蘇方法是提高肝衰患者治療效果的重要前提。目前細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)常使用生物反應(yīng)器，常見(jiàn)的有攪拌式、旋轉(zhuǎn)式、灌注式等。 但生物反應(yīng)器構(gòu)造復(fù)雜、價(jià)格昂貴、使用不方便等缺點(diǎn)使其在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用發(fā)展緩慢。在本發(fā)明之前，常規(guī)使用的細(xì)胞冷凍降溫方法大致分為三種常規(guī)冷凍、程序降溫儀冷凍、冷凍盒冷凍。其中使用常規(guī)方法(即4°C放置30min，-20°C冷凍30min，最后_80°C 過(guò)夜，次日投液氮)對(duì)原代肝細(xì)胞冷凍效果較差；而采用計(jì)算機(jī)程序降溫儀冷凍操作復(fù)雜、 費(fèi)時(shí)、費(fèi)力；采用冷凍盒進(jìn)行冷凍操作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、省時(shí)，冷凍效果與前者相近。上述幾種冷凍方法均是將細(xì)胞混于冷凍保護(hù)液并置于冷凍小管中冷凍保存，這種方法對(duì)一般分裂傳代細(xì)胞進(jìn)行少量冷凍，效果較好且方便，細(xì)胞復(fù)蘇后可傳代培養(yǎng)并用于細(xì)胞學(xué)或分子生物學(xué)研究，但針對(duì)以治療為目的的肝細(xì)胞卻存在一定缺陷。首先，肝細(xì)胞用來(lái)治療所需量大，常規(guī)采用冷凍管冷凍的方法數(shù)量少、操作過(guò)程繁瑣，無(wú)法達(dá)到大規(guī)模冷凍的要求；其次，常規(guī)采用冷凍方法無(wú)法滿足一次性急需大量肝細(xì)胞的需求，更不能達(dá)到成品化輸出的目的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就在于克服上述現(xiàn)有裝置的不足之處，為滿足肝衰患者急需大量肝細(xì)胞的要求，提供一種可作為人工肝直接用于治療或?yàn)楦嗡セ颊咛峁┐罅扛渭?xì)胞的醫(yī)院使用的結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單合理，操作使用簡(jiǎn)單方便的肝細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)和冷凍的裝置。本發(fā)明的肝細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)和冷凍的裝置，主要由培養(yǎng)盒和冷凍盒組成，所述培養(yǎng)盒包括盒體、至少2層平板、殼聚糖納米纖維膜、平板小孔、上塞蓋、支架管、支架側(cè)孔和下塞蓋，其中，支架管裝在盒體的上口與下口之間，平板經(jīng)中心孔分別安裝在支架管上，殼聚糖納米纖維膜貼在平板上，平板小孔分布在平板上，支架側(cè)孔分布在支架管壁上，上塞蓋和下塞蓋分別裝在盒體的上口與下口上；所述冷凍盒包括冷凍盒體、冷凍劑和冷凍盒蓋，冷凍劑裝在冷凍盒體內(nèi)，冷凍盒蓋蓋裝在冷凍盒體的盒口上；所述培養(yǎng)盒置于冷凍盒內(nèi)的冷凍液中。為了便于將裝有培養(yǎng)盒的冷凍盒吊于液氮罐中冷凍，可在冷凍盒蓋上設(shè)有吊耳和吊繩，吊耳安裝在冷凍盒蓋上，吊繩系扣在吊耳上，為了提高密封性能，可在冷凍盒蓋與冷凍盒體之間裝有耐低溫密封圈。上述培養(yǎng)盒體選用耐低溫的PIR聚異氰脲酸酯泡沫盒，冷凍液選用異丙醇或丙二醇，耐低溫密封圈選用硅橡膠密封圈。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和效果在于能將一次分離所獲肝細(xì)胞按要求直接接種于培養(yǎng)盒中的殼聚糖多層平板上進(jìn)行擴(kuò)增，實(shí)現(xiàn)大規(guī)模培養(yǎng)，大幅度減少了每次分離肝細(xì)胞的浪費(fèi)，而且培養(yǎng)盒直接放入盛有異丙醇或丙二醇的冷凍盒中凍存，培養(yǎng)盒內(nèi)的多層平板表面上的殼聚糖納米纖維充分模擬體內(nèi)微環(huán)境能促進(jìn)肝細(xì)胞粘附，并能提高解凍后肝細(xì)胞的細(xì)胞活力和功能，解決了常規(guī)冷凍肝細(xì)胞裝置使細(xì)胞貼壁不穩(wěn)定而容易脫落和難以提供大量肝細(xì)胞等問(wèn)題。還具有結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)合理，操作使用簡(jiǎn)單方便易行等優(yōu)點(diǎn)，可作為人工肝直接用于治療或?yàn)楦嗡セ颊咛峁┐罅扛渭?xì)胞的醫(yī)院使用。


圖1是本發(fā)明的一種結(jié)構(gòu)示意圖； 圖2是本發(fā)明的另一種結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施例方式參見(jiàn)附圖1和2，本發(fā)明的肝細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)和冷凍的裝置，主要由培養(yǎng)盒和冷凍盒組成，所述培養(yǎng)盒包括盒體1、至少2層平板2、殼聚糖納米纖維膜3、平板小孔4、上塞蓋 5、支架管6、支架側(cè)孔7和下塞蓋8，其中，支架管6裝在盒體1的上口與下口之間，平板2經(jīng)中心孔分別安裝在支架管6上，殼聚糖納米纖維膜3貼在平板2上，平板小孔4分布在平板 2上，支架側(cè)孔7分布在支架管6壁上，上塞蓋5和下塞蓋8分別裝在盒體1的上口與下口上；所述冷凍盒包括冷凍盒體11、冷凍劑10和冷凍盒蓋9，冷凍劑10裝在冷凍盒體11內(nèi)， 冷凍盒蓋9蓋裝在冷凍盒體11的盒口上；所述培養(yǎng)盒置于冷凍盒內(nèi)的冷凍液中。為了便于將裝有培養(yǎng)盒的冷凍盒吊于液氮罐中冷凍，可在冷凍盒蓋9上設(shè)有吊耳 12 (如圖2所示)和吊繩(圖中未畫(huà))，吊耳12安裝在冷凍盒蓋9上，吊繩系在吊耳12上，為了提高密封性能，可在冷凍盒蓋9與冷凍盒體11之間裝有耐低溫密封圈13，其結(jié)構(gòu)如圖2 所示。上述培養(yǎng)盒體1選用耐低溫的PIR聚異氰脲酸酯泡沫盒，冷凍液10選用異丙醇或丙二醇，耐低溫密封圈13選用硅橡膠密封圈。培養(yǎng)盒和冷凍盒的形狀選用方形或圓形。操作時(shí)，將體外分離的肝細(xì)胞經(jīng)純化離心后，調(diào)節(jié)細(xì)胞至合適密度，一般為1*107 ml左右，取若干毫升該濃度的細(xì)胞，將其從培養(yǎng)盒上口接種至多層平板上的殼聚糖納米纖維膜上，將接種肝細(xì)胞的培養(yǎng)盒置37°C培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)一段時(shí)間，待細(xì)胞貼壁后從培養(yǎng)盒上口添加新鮮培養(yǎng)液使其沒(méi)過(guò)支架管，此時(shí)即可將培養(yǎng)液換成冷凍保存液，并將培養(yǎng)盒置入盛有異丙醇或丙二醇的冷凍盒內(nèi)后再放入-80°C過(guò)夜，次日再將裝有培養(yǎng)盒的冷凍盒吊于液氮罐中冷凍待用。需要使用時(shí)，可將冷凍盒從液氮中取出，置于37°C水浴復(fù)溫后，將培養(yǎng)盒從冷凍盒中取出，從培養(yǎng)盒底部出口打開(kāi)下塞蓋，放出冷凍培養(yǎng)液，換成新鮮培養(yǎng)液孵育一段時(shí)間，待細(xì)胞活力恢復(fù)后，可作為人工肝直接用于治療使用或加入胰酶消化即可收集所需肝細(xì)胞。
權(quán)利要求
1.一種肝細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)和冷凍的裝置，其特征在于包括培養(yǎng)盒和冷凍盒，所述培養(yǎng)盒包括盒體、至少2層平板、殼聚糖納米纖維膜、平板小孔、上塞蓋、支架管、支架側(cè)孔和下塞蓋，其中，支架管裝在盒體的上口與下口之間，平板經(jīng)中心孔分別安裝在支架管上，殼聚糖納米纖維膜貼在平板上，平板小孔分布在平板上，支架側(cè)孔分布在支架管壁上，上塞蓋和下塞蓋分別裝在盒體的上口與下口上；所述冷凍盒包括冷凍盒體、冷凍劑和冷凍盒蓋，冷凍劑裝在冷凍盒體內(nèi)，冷凍盒蓋蓋裝在冷凍盒體的盒口上；所述培養(yǎng)盒置于冷凍盒內(nèi)的冷凍液中。
2.如權(quán)利要求1所述的肝細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)和冷凍的裝置，其特征在于所述冷凍盒蓋上設(shè)有吊耳和吊繩，吊耳安裝在冷凍盒蓋上，吊繩系扣在吊耳上，冷凍盒蓋與冷凍盒體之間裝有耐低溫密封圈。
3.如權(quán)利要求1或2所述的肝細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)和冷凍的裝置，其特征在于所述培養(yǎng)盒體選用耐低溫的PIR聚異氰脲酸酯泡沫盒，冷凍液選用異丙醇或丙二醇，耐低溫密封圈選用硅橡膠密封圈。
全文摘要
本發(fā)明的肝細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)和冷凍的裝置，包括培養(yǎng)盒和冷凍盒，所述培養(yǎng)盒包括盒體、至少2層平板、殼聚糖納米纖維膜、平板小孔、上塞蓋、支架管、支架側(cè)孔和下塞蓋，所述冷凍盒包括冷凍盒體、冷凍劑和冷凍盒蓋，所述培養(yǎng)盒置于冷凍盒內(nèi)的冷凍液中。能將一次分離所獲肝細(xì)胞按要求直接接種于培養(yǎng)盒中的殼聚糖多層平板上進(jìn)行擴(kuò)增，實(shí)現(xiàn)大規(guī)模培養(yǎng)，培養(yǎng)盒內(nèi)的多層平板表面上的殼聚糖納米纖維充分模擬體內(nèi)微環(huán)境能促進(jìn)肝細(xì)胞粘附，并能提高解凍后肝細(xì)胞的細(xì)胞活力和功能，還具有結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)合理，操作使用簡(jiǎn)單方便易行等優(yōu)點(diǎn)，適合需要為肝衰患者提供大量肝細(xì)胞的醫(yī)院使用。
文檔編號(hào)C12M3/00GK102250766SQ201110168648
公開(kāi)日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2011年6月22日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月22日
發(fā)明者卞建民, 杭化蓮, 禹亞彬 申請(qǐng)人:南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京第一醫(yī)院