專利名稱：一種聚羥基丁酸酯的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物技術領域，具體地，涉及用貪銅菌(Cupriavidus sp.)菌株sh_l 制備PHB的方法。
背景技術：
聚羥基脂肪酸酯(Polyhydroxyalkanoates，簡稱PHA)是一種可由很多種微生物合成的包內聚酯，在微生物細胞內作為一種碳源和能源的儲備物質。在營養(yǎng)匱乏的情況下， 微生物降解PHA作為碳源和能源使用。PHA是一種可以生物合成和生物降解的高分子聚合物。PHA與傳統(tǒng)的、以石油為原料合成的塑料如聚乙烯、聚丙烯等有相似的材料學性質，但可以用可再生的能源(如植物光合作用產生的碳水化合物、脂肪酸等)合成，并且可以完全降解進入自然界的生態(tài)循環(huán)，因此被認為是一種“綠色塑料”，可以替代不可降解的傳統(tǒng)塑料， 而引起世界各國科學界和產業(yè)界的廣泛重視。自上個世紀八十年代起，關于PHA的研究越來越多，涉及到的學科領域也越來越廣。近年來，研究表明，PHA具有一定的生物相容性，是有潛力的生物醫(yī)學材料。
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40—CH—(CH2)-C^式1. PHA的結構通式PHA的結構通式如式1所示。其中η = 1、2、3或4 ；通常n = 1，即為聚-3-羥基脂肪酸酯。m表示聚合度，決定分子量的大小。R是可變基團，可為飽和或不飽和、直鏈或含側鏈及取代基的烷基。PHA的單體大多數是鏈長3 14個碳原子的3_羥基脂肪酸，還有4_羥基和5_羥基脂肪酸。側鏈R是高度可變的基團，大部分是直鏈的烷基，有些含有側鏈；多數為飽和鍵， 也有不飽和鍵；此外，有些R基團還有苯環(huán)、鹵素、氰基等取代基團。根據單體的碳原子數，可將PHA分為兩類短鏈(short-chain-length，scl)PHA, 其單體由3-5個碳原子組成，如聚羥基丁酸酯(poly-hydroxybutyrate，簡稱PHB)、聚羥基戊酸酯(polyhydroxyvalerate，簡稱 PHV)等；中長鏈(medium-chain-length，mcl) PHA，其單體由6-14個碳原子組成，如聚羥基己酸酯(polyhydroxyhexanoate，簡稱PHHx)、聚羥基辛酸酯(polyhydroxyoctanoate，簡稱 ΡΗ0)等。根據單體的種類，可將PHA分為同聚物(homopolymer)和共聚物(copolymer)兩類(1)只有一種單體，如PHB、PHV等；(2)含有兩種或兩種以上的單體，如PHBHHx、以3HB和3HV為單體的聚羥基丁酸羥基戊酸酯[poly(3-hydroxybutyrate-co-3_hydroxyvalerate)，簡稱 PHBV]等。其中，PHB是由細菌合成的一種生物聚酯，在細菌胞內以內含物形式呈顆粒狀存
在。已有的生產菌株包括羅氏真養(yǎng)菌，巨大產堿菌，維氏固氮菌等，都能用于PHB的工業(yè)生
3產，但是生產的經濟效益較低。本發(fā)明的目的在于，尋找一株新的在相似的生產條件下，產量較高的PHB生產菌， 從而降低PHB的生產成本。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種用貪銅菌菌株sh-Ι制備聚羥基丁酸酯的方法。為實現上述目的，本發(fā)明采用以下技術方案一種聚羥基丁酸酯的制備方法，其特征在于，所述的制備方法是利用貪銅菌菌株 sh-Ι作為制備聚羥基丁酸酯的菌種，所述貪銅菌菌株sh-Ι的保藏編號為CGMCC No. 4815。上述貪銅菌(Cupriavidus sp.)菌株sh_l，已于2011年4月29日保藏于中國微生物菌種保藏管委理員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，保藏單位地址為中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCC No. 4815。如上所述的聚羥基丁酸酯的制備方法，其中，所述的制備方法的步驟為a.將所述貪銅菌菌株sh-Ι的菌種接種于斜面培養(yǎng)基，在30°C下培養(yǎng)Mh ；b.取生長良好的斜面培養(yǎng)物接種至裝有IOOmL種子培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，在搖瓶轉速為180r/min、培養(yǎng)溫度30°C的條件下，培養(yǎng)24h 36h ；c.將步驟b中得到的種子液接種至裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的2L發(fā)酵罐中發(fā)酵，其中，發(fā)酵罐的裝液量為1 1. 8L，接種的種子液體積為加入后總體積的10% (即接種量為10% )， 攪拌轉速為300 500r/min，通氣量為50 200L/min，發(fā)酵溫度為 ；d.發(fā)酵至72小時左右，停止發(fā)酵；在所述發(fā)酵過程中，當發(fā)酵液中的溶氧量升至飽和溶氧量的80%時，向發(fā)酵液中補加濃度為10 300g/L葡萄糖溶液，當溶氧降至50%時停止流加葡萄糖溶液；所述飽和溶氧量是指所述發(fā)酵培養(yǎng)基在未接種種子液的情況下，在通氣攪拌 15min后，發(fā)酵培養(yǎng)基中的溶氧量，將其定義為100%。如上所述的聚羥基丁酸酯的制備方法，其中，所述斜面培養(yǎng)基的配方為酵母膏 5 15g/L，蛋白胨 5 15g/L，(NH4) 2SO45g/L，瓊月旨 15g/L，pH6 8 ；所述種子培養(yǎng)基的配方為酵母膏5 15g/L，蛋白胨5 15g/L，(NH4) 2S045g/L， pH6 8 ；所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為=Na2HPO4·7Η20 1 10g/L，KH2PO4 1 5g/L，MgSO4. 7H20 0. 01 lg/L，檸檬酸鐵銨 20 100mg/L，CaCl2 ·2Η20 10 30mg/L, (MM)2SO4 1 10g/L, 葡萄糖10 100g/L, pH 6 8。如上所述的聚羥基丁酸酯的制備方法，其中，所述斜面培養(yǎng)基的配方優(yōu)選為酵母膏 10g/L，蛋白胨 10g/L，(NH4)2SO4 5g/L，瓊脂 15g/L，pH7 ；所述種子培養(yǎng)基的配方優(yōu)選為酵母膏10g/L，蛋白胨10g/L，(NH4)2S045g/L，pH7 ；所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方優(yōu)選為發(fā)酵培養(yǎng)基=Na2HPO4 · 7H20 6g/L，KH2P044g/L, MgSO4 ·7Η20 0. 5g/L，檸檬酸鐵銨 75mg/L，CaCl2 · 2H20 25mg/L, (NH4) 2S047g/L，葡萄糖 IOOg/ L, pH7。一種用于制備聚羥基丁酸酯的貪銅菌菌株sh-Ι，所述貪銅菌菌株sh-Ι的保藏編號為 CGMCC No. 4815。所述菌株是從高碑店污水處理廠的活性污泥中按照下述方法分離得到a.細菌的富集將50mL細菌培養(yǎng)基加入250mL三角瓶中，再加入Ig含有細菌的活性污泥，30°C下搖瓶培養(yǎng)Mh ；b.細菌的分離純化吸取富集后的培養(yǎng)物0. 5mL,經生理鹽水梯度稀釋后，從稀釋度為10_4，10_5，10_6的稀釋液中，分別取0. ImL均勻涂布于固體細菌培養(yǎng)基平板上，放入恒溫箱。30°C培養(yǎng)24h后， 挑取單菌落，接種于固體細菌培養(yǎng)基。30°C培養(yǎng)24h后，鏡檢，若為單一形態(tài)的菌落則放入冰箱保存，若不純，則再進行劃線、分離，反復幾次后得到純培養(yǎng)菌種；c.產PHA菌株的篩選將細菌接種至篩選培養(yǎng)基，30°C下培養(yǎng)48h，經蘇丹黑染色液染色后，用顯微鏡觀察。若細胞內有藍黑色顆粒，即為產PHA菌株。將篩選標準定為顯微鏡視野中60%以上的細胞內含有藍黑色顆粒的菌株入選；d.利用氣相色譜鑒定菌株所產PHA的種類，挑選所產PHA為PHB且產量較高的菌株，得到本發(fā)明的貪銅菌菌株sh-Ι ；其中，所述細菌培養(yǎng)基的配方為牛肉膏0.5%，蛋白胨1.0%，NaCl 0.5%, pH7. 0 ；所述固體細菌培養(yǎng)基的配方為牛肉膏0. 5%，蛋白胨1. 0%,NaCl 0. 5%，瓊脂粉 1. 5%, pH7. 0 ；所述篩選培養(yǎng)基的配方為牛肉膏0.5%，蛋白胨1.0%，NaCl 0.5%，葡萄糖 0. 5%, pH7. 0 7. 2。如上所述的貪銅菌菌株sh-Ι用于制備聚羥基丁酸酯的用途。如上所述的聚羥基丁酸酯的制備方法，在停止發(fā)酵后，從發(fā)酵液中提取聚羥基丁酸酯的方法如下離心發(fā)酵液，去除上清，取沉淀部分的濕細胞，加入等重量的丙酮，在常溫下攪拌 3 5分鐘，加入異戊醇，所加異戊醇的體積為加入丙酮攪拌后液體體積的4倍，50°C下攪拌 30分鐘后，90°C充分攪拌3小時，保溫、靜止分層，取上清液，冷卻至4°C，離心取沉淀的PHB， 加入無水乙醇洗滌，干燥后得到PHB。如上所述的聚羥基丁酸酯的制備方法，聚羥基丁酸酯的分析方法如下發(fā)酵停止后離心收集菌體，冰凍干燥，計算細胞干重(CDW)。取80mg左右的干細胞于酯化管中，加入2mL酯化液及2mL氯仿，加蓋密閉；所述酯化液是以lg/L苯甲酸作為內標，溶解于97%體積的甲醇和3%體積的濃硫酸中。在烘箱中100°C酯化4h。冷卻至室溫后，加入ImL蒸餾水，充分振蕩混勻，靜置分層。待氯仿相與水相完全分離后，取氯仿相進行氣相色譜分析。設定柱溫為200°C，進樣器溫度為200°C，檢測器溫度為220°C，柱頭壓力為 0. 25MPa。程序升溫條件為80°C保持1. 5min,以30°C /min的速度升溫至140°C，以40°C / min的速度升溫至220°C并保溫0. 5min。氣相色譜柱長30m，固定相厚度為0. 25 μ m,初始柱壓為lOpsi，停留1.5min后，以2. 5psi/min的速度升壓至20psi，停留0. 5min。樣品的進樣量為lyL。本發(fā)明的有益效果如下經過本發(fā)明方法發(fā)酵后，發(fā)酵液中的細胞干重最高可達41. 5g/L，PHB重量可達 35. lg/L，達到細胞干重的84. 7 %，經過提取后，可得到^g/L的PHB，提取率達83%。該產量達到國內先進水平。


圖1為本發(fā)明實施例1所得到的聚羥基丁酸酯的氣相色譜圖。圖2為本發(fā)明實施例2所得到的聚羥基丁酸酯的氣相色譜圖。
具體實施例方式本中所使用的菌種為貪銅菌(Cupriavidus sp.)菌株sh_l，于2011年4月四日保藏于中國微生物菌種保藏管委理員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，保藏單位地址為 中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCCNo. 4815。所述菌株是從高碑店污水處理廠的活性污泥中分離得到。所述菌株分離培養(yǎng)過程中所使用培養(yǎng)基的配方為細菌培養(yǎng)基牛肉膏0. 5%，蛋白胨1. 0%，NaCl 0. 5%, pH7. 0 ；固體細菌培養(yǎng)基牛肉膏0.5%，蛋白胨1.0%，NaCl 0. 5 %，瓊脂粉1. 5 %， pH7. 0 ；篩選培養(yǎng)基牛肉膏0.5%，蛋白胨1.0%，NaCl 0. 5%，葡萄糖0. 5%，pH7. 0 7. 2。所述菌株的獲得方法為a.細菌的富集將50mL細菌培養(yǎng)基加入250mL三角瓶中，再加入Ig含有細菌的活性污泥，30°C下搖瓶培養(yǎng)Mh。b.細菌的分離純化吸取富集后的培養(yǎng)物0. 5mL,經生理鹽水梯度稀釋后，從稀釋度為10_4，10_5，10_6的稀釋液中，分別取0. ImL均勻涂布于固體細菌培養(yǎng)基平板上，放入恒溫箱。30°C培養(yǎng)24h后， 挑取單菌落，接種于固體細菌培養(yǎng)基。30°C培養(yǎng)24h后，鏡檢，若為單一形態(tài)的菌落則放入冰箱保存，若不純，則再進行劃線、分離，反復幾次后得到純培養(yǎng)菌種。c.產PHA菌株的篩選將細菌接種至篩選培養(yǎng)基，30°C下培養(yǎng)48h，經蘇丹黑染色液染色后，用顯微鏡觀察。若細胞內有藍黑色顆粒，即為產PHA菌株。將篩選標準定為顯微鏡視野中60%以上的細胞內含有藍黑色顆粒的菌株入選。d.利用氣相色譜鑒定菌株所產PHA的種類，挑選所產PHA為PHB且產量較高的菌株，得到本發(fā)明的貪銅菌菌株sh-1。實施例1本實施例中所使用培養(yǎng)基的配方為斜面培養(yǎng)基酵母膏10g/L，蛋白胨 10g/L，(NH4)2S045g/L，瓊脂 15g/L，pH7。
種子培養(yǎng)基酵母膏10g/L，蛋白胨 10g/L，(NH4)2S045g/L，pH7。發(fā)酵培養(yǎng)基=Na2HPO4· 7H20 2g/L，KH2P042g/L，MgSO4 · 7H20 0. 2g/L，檸檬酸鐵銨 50mg/L，CaCl2 · 2H20 10mg/L，(NH4)2SO4 2g/L，葡萄糖 60g/L，pH7。一、PHB 的生產a.將菌種接種于斜面培養(yǎng)基，在30°C下培養(yǎng)Mh ；b.接種一環(huán)生長良好的斜面培養(yǎng)物至裝有IOOmL種子培養(yǎng)基的500mL三角瓶中， 搖瓶轉速為180r/min，溫度30°C下，培養(yǎng)Mh ；c.按10%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵罐容量為2L，裝液量為1. 5L，發(fā)酵罐中攪拌轉速為400r/min，通氣量為lOOL/min，發(fā)酵溫度為30°C ；d.發(fā)酵至72小時，停止發(fā)酵。在發(fā)酵過程中，利用溶氧控制葡萄糖的流加，當發(fā)酵液溶氧升至飽和溶氧的80% 時，向發(fā)酵液中補加濃度為250g/L葡萄糖溶液，當溶氧降至50%時停止流加葡萄糖溶液。 所述飽和溶氧量是指所述發(fā)酵培養(yǎng)基在未接種種子液的情況下，在通氣攪拌15min后，發(fā)酵培養(yǎng)基中的溶氧量，將其定義為100%。二、PHB 的提取以8000r/min的轉速離心發(fā)酵液5分鐘，取沉淀部分的濕細胞，稱重后加入等重量丙酮，常溫攪拌3 5分鐘，之后加入液體4倍體積的異戊醇，50°C下攪拌30分鐘后，90°C 充分攪拌提取3小時，保溫、靜止分層，取上清液，冷卻至4°C保持30分鐘，SOOOr/min離心5 分鐘，收集沉淀PHB，加入與沉淀等體積的無水乙醇，混勻，8000r/min離心5分鐘，去上清， 干燥得到PHB。三、PHB的分析采用Agilent公司的GC6820氣相色譜儀對PHB進行分析。發(fā)酵停止后離心收集菌體，冰凍干燥，計算細胞干重(CDW)。取80mg左右的干細胞于酯化管中，加入2mL酯化液及2mL氯仿，加蓋密閉；所述酯化液是以lg/L苯甲酸作為內標，溶解于97%體積的甲醇和3%體積的濃硫酸中。在烘箱中100°C酯化4h。冷卻至室溫后，加入ImL蒸餾水，充分振蕩混勻，靜置分層。待氯仿相與水相完全分離后，取氯仿相進行氣相色譜分析。用電子天平精確稱量并記錄約IOmg左右的PHB標樣(Sigma)，加入2mL酯化液及 2mL氯仿，加蓋密閉。在烘箱中100°C酯化4h。冷卻至室溫后，加入ImL蒸餾水，充分振蕩混勻，靜置分層。待氯仿相與水相完全分離后，取氯仿相進行氣相色譜分析。依照Agilent公司GC6820氣相色譜儀的說明書操作氣相色譜儀。設定柱溫為 200°C，進樣器溫度為200°C，檢測器溫度為220°C，柱頭壓力為0. 25MPa。程序升溫條件為 80°C保持1. 5min,以30°C /min的速度升溫至140°C，以40°C /min的速度升溫至220°C并在此溫度保持0. 5min。氣相色譜柱長30m，固定相厚度為0. 25 μ m，初始柱壓為lOpsi，停留 1. 5min后，以2. 5psi/min的速度升壓至20psi，停留0. 5min。樣品的進樣量為1 μ L，進樣時使用Agilent微量進樣器。如圖1所示的氣相色譜圖，第一個峰為溶劑氯仿的峰，第二個峰為PHB單體甲酯化后得到的3-羥基丁酸甲酯(3HB)的峰，第三個峰為苯甲酸甲酯的峰。以苯甲酸作為內標來定量PHB標準品，可以得到PHB的單體3_羥基丁酸甲酯化后
7色譜峰面積相對于苯甲酸甲酯化后峰面積的相對校正因子。經氣相色譜工作站計算后得到樣品中PHB的含量。發(fā)酵液中的細胞干重為34. 5g/L，PHB重量可達28. 2g/L，經過提取后，可得到 23. 2g/L 的 PHB。實施例2本實施例中所使用培養(yǎng)基的配方為斜面培養(yǎng)基酵母膏10g/L，蛋白胨 10g/L，(NH4)2S045g/L,瓊脂 15g/L，pH7。種子培養(yǎng)基酵母膏10g/L，蛋白胨 10g/L，(NH4)2SO4 5g/L，pH7。發(fā)酵培養(yǎng)基=Na2HPO4· 7H20 6g/L，KH2PO4 4g/L，MgSO4 · 7H20 0. 5g/L，檸檬酸鐵銨 75mg/L，CaCl2 · 2H20 25mg/L，(NH4)2SO4 7g/L，葡萄糖 100g/L，pH7。一、PHB 的生產a.將菌種接種于斜面培養(yǎng)基，在30°C下培養(yǎng)Mh ；b.接種一環(huán)生長良好的斜面培養(yǎng)物至裝有IOOmL種子培養(yǎng)基的500mL三角瓶中， 搖瓶轉速為180r/min，溫度30°C下，培養(yǎng)Mh ；c.按10%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵罐容量為2L，裝液量為1. 5L，發(fā)酵罐中攪拌轉速為400r/min，通氣量為180L/min，發(fā)酵溫度為；d.發(fā)酵至72小時，停止發(fā)酵。在發(fā)酵過程中，利用溶氧控制葡萄糖的流加，當發(fā)酵液溶氧升至飽和溶氧的80% 時，向發(fā)酵液中補加濃度為200g/L葡萄糖溶液，當溶氧降至50%時停止流加葡萄糖溶液。二、PHB 的提取PHB的提取方法同實施例1。三、PHB的分析PHB的分析方法同實施例1。如圖2所示的氣相色譜圖，第一個峰為溶劑氯仿的峰，第二個峰為PHB單體甲酯化后得到的3-羥基丁酸甲酯(3HB)的峰，第三個峰為苯甲酸甲酯的峰。以苯甲酸作為內標來定量PHB標準品，可以得到PHB的單體3-羥基丁酸甲酯化后色譜峰面積相對于苯甲酸甲酯化后峰面積的相對校正因子。經氣相色譜工作站計算后得到樣品中PHB的含量。發(fā)酵液中的細胞干重為41. 5g/L，PHB重量可達35. lg/L，達到細胞干重的84. 7% ； 經過提取后，可得到^g/L的PHB，提取率可達83%。
權利要求
1.一種聚羥基丁酸酯的制備方法，其特征在于，所述的制備方法是利用貪銅菌菌株 sh-Ι作為制備聚羥基丁酸酯的菌種，所述貪銅菌菌株sh-Ι的保藏編號為CGMCC No. 4815。
2.如權利要求1所述的聚羥基丁酸酯的制備方法，其特征在于，所述的制備方法的步驟為a.將所述貪銅菌菌株sh-Ι的菌種接種于斜面培養(yǎng)基，在30°C下培養(yǎng)Mh；b.取斜面培養(yǎng)物接種至裝有IOOmL種子培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，在搖瓶轉速為 180r/min、培養(yǎng)溫度30°C的條件下，培養(yǎng)24h 36h ；c.將步驟b中得到的種子液接種至裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的2L發(fā)酵罐中發(fā)酵，其中，發(fā)酵罐的裝液量為1 1. 8L，接種的種子液體積為加入后總體積的10%，攪拌轉速為300 500r/ min，通氣量為50 200L/min，發(fā)酵溫度為 ；d.發(fā)酵至72小時，停止發(fā)酵；在所述發(fā)酵過程中，當發(fā)酵液中的溶氧量升至飽和溶氧量的80%時，向發(fā)酵液中補加濃度為10 300g/L葡萄糖溶液，當溶氧降至50%時停止流加葡萄糖溶液；所述飽和溶氧量為所述發(fā)酵培養(yǎng)基在未接種種子液的情況下通氣攪拌15min后，發(fā)酵培養(yǎng)基中的溶氧量。
3.如權利要求2所述的聚羥基丁酸酯的制備方法，其特征在于，所述斜面培養(yǎng)基的配方為酵母膏5 15g/L，蛋白胨5 15g/L，(NH4) 2S045g/L，瓊月旨15g/L，pH6 8 ；所述種子培養(yǎng)基的配方為酵母膏5 15g/L，蛋白胨5 15g/L，(NH4) 2S045g/L，pH6 8 ；所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為=Na2HPO4 · 7H20 1 10g/L, KH2PO4I 5g/L，MgSO4. 7H20 0. 01 lg/L，檸檬酸鐵銨 20 100mg/L, CaCl2 · 2H20 10 30mg/L, (MM)2SO4I 10g/L, 葡萄糖10 100g/L, pH 6 8。
4.如權利要求2所述的聚羥基丁酸酯的制備方法，其特征在于，所述斜面培養(yǎng)基的配方為酵母膏 10g/L，蛋白胨 10g/L, (NH4) 2S045g/L，瓊月旨 15g/L，pH7 ；所述種子培養(yǎng)基的配方為酵母膏10g/L，蛋白胨10g/L，(NH4)2S045g/L, pH7 ；所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為發(fā)酵培養(yǎng)基=Na2HPO4 · 7H20 6g/L，KH2P044g/L, MgSO4 · 7H20 0. 5g/L，檸檬酸鐵銨 75mg/L，CaCl2 · 2H20 25mg/L，(NH4) 2S047g/L，葡萄糖 lOOg/L, pH7。
5.一種用于制備聚羥基丁酸酯的貪銅菌菌株sh-Ι，其特征在于，所述貪銅菌菌株sh-1 的保藏編號為CGMCC No. 4815。
6.權利要求5所述的貪銅菌菌株sh-Ι用于制備聚羥基丁酸酯的用途。
全文摘要
一種聚羥基丁酸酯的制備方法，是利用保藏編號為CGMCC No.4815的貪銅菌菌株sh-1作為制備聚羥基丁酸酯的菌種，該方法是將菌種接種于斜面培養(yǎng)基，30℃下培養(yǎng)24h；取斜面培養(yǎng)物接種至裝有種子培養(yǎng)基的三角瓶中，搖瓶轉速180r/min、30℃下培養(yǎng)24h～36h；按10％的接種量將得到的種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，攪拌轉速300～500r/min，通氣量50～200L/min，發(fā)酵溫度28℃～35℃，發(fā)酵至72小時停止；在發(fā)酵過程中，當發(fā)酵液中的溶氧量升至飽和溶氧量的80％時，向發(fā)酵液中補加濃度為10～300g/L葡萄糖溶液，當溶氧降至50％時停止。本發(fā)明可以實現高密度發(fā)酵和高產PHB。
文檔編號C12P7/62GK102226206SQ201110121830
公開日2011年10月26日 申請日期2011年5月11日 優(yōu)先權日2011年5月11日
發(fā)明者姜林, 田恒奇, 秦京花, 趙有璽, 龔平 申請人:北京聯合大學生物化學工程學院