專利名稱：從有藍(lán)藻爆發(fā)的水體中分離純化噬藻體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種分離純化噬藻體的方法，特別涉及一種從有藍(lán)藻爆發(fā)的水體中分離純化噬藻體的方法。
背景技術(shù)：
噬藻體是一類感染藍(lán)藻的病毒，形態(tài)上同噬菌體，近期的研究表明，噬藻體作為水體環(huán)境中活躍的動態(tài)因子，在控制水體初級生產(chǎn)力和有害藻類水華方面能發(fā)揮著重要的作用，甚至影響水體生態(tài)系統(tǒng)中的食物鏈，因此如何有效的分離純化出噬藻體，對于研究水體中噬藻體的生理生態(tài)學(xué)特性具有重要的意義。而天然水體中成分復(fù)雜，微生物種類繁多，如何高效的分離純化出噬藻體具有一定的難度，目前未見相關(guān)的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從有藍(lán)藻爆發(fā)的水體中分離純化噬藻體的方法，本方法的優(yōu)點是1)采用本方法能成功地從藍(lán)藻爆發(fā)水體中分離純化得到噬藻體；幻采用本方法分離純化噬藻體不會對環(huán)境造成污染。一種從有藍(lán)藻爆發(fā)的水體中分離純化噬藻體的方法，其特征在于采用如下步驟A)采集藍(lán)藻爆發(fā)天然水域表層的水樣，于冰浴條件下保存，水樣先后通過孔徑為0. 80 μ m, 0. 45 μ m，0. 22 μ m的微孔濾膜后，經(jīng)超濾系統(tǒng)濃縮成濃縮水樣，其濃縮倍數(shù)為 200 1000 倍；B)配制濃縮水樣與對數(shù)期的銅綠微囊藻液的混合液，在光照強度為20001UX，溫度為30°C，光暗周期為12h 12h條件下培養(yǎng)3 7天，得到銅綠微囊藻裂解液，當(dāng)顏色變?yōu)橥该鲿r，判定水樣中含有噬藻體；組成混合液的濃縮水樣與對數(shù)期的銅綠微囊藻液的體積比為1:9;C)將上述銅綠微囊藻裂解液經(jīng)0. 22 μ m的微孔濾膜過濾，除去銅綠微囊藻裂解碎片，經(jīng)超濾系統(tǒng)濃縮后，用CsCl密度梯度離心純化噬藻體，吸取CsCl密度梯度中的病毒條帶放在SM緩沖液中透析，此時得到的透析液即為噬藻體純化液。表層水樣是指從藍(lán)藻爆發(fā)天然水域表層深度不超過0. 5米處采集的水樣。對數(shù)期的銅綠微囊藻液指銅綠微囊藻適應(yīng)了新的環(huán)境，開始大量快速繁殖，數(shù)量快速增長，呈對數(shù)或指數(shù)曲線形狀，此時的藻細(xì)胞活力較強，是進(jìn)行試驗研究的良好材料。同現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點是1)采用本方法能成功地從藍(lán)藻爆發(fā)水體中分離純化得到噬藻體；2)采用本方法分離純化噬藻體不會對環(huán)境造成污染。


圖1為反映噬藻體感染規(guī)律的一步生長曲線圖，橫坐標(biāo)為噬藻體培養(yǎng)時間(h)，縱坐標(biāo)為嗜藻斑形成單位數(shù)(個/mL)。
具體實施例方式實施例1 一種從有藍(lán)藻爆發(fā)的水體中分離純化噬藻體的方法，其特征在于采用如下步驟A)采集藍(lán)藻爆發(fā)天然水域表層的水樣，于冰浴條件下保存，水樣先后通過孔徑為 0. 80 μ m, 0. 45 μ m，0. 22 μ m的微孔濾膜后，經(jīng)超濾系統(tǒng)濃縮成濃縮水樣，其濃縮倍數(shù)為200 倍；B)配制濃縮水樣與對數(shù)期的銅綠微囊藻液的混合液，在光照強度為20001UX，溫度為30°C，光暗周期為12h 1 條件下培養(yǎng)7天，得到銅綠微囊藻裂解液，當(dāng)顏色變?yōu)橥该鲿r，判定水樣中含有噬藻體；組成混合液的濃縮水樣與對數(shù)期的銅綠微囊藻液的體積比為 1 9 ；C)將上述銅綠微囊藻裂解液經(jīng)0. 22 μ m的微孔濾膜過濾，除去銅綠微囊藻裂解碎片，經(jīng)超濾系統(tǒng)濃縮后，用CsCl密度梯度離心純化噬藻體，吸取CsCl密度梯度中的病毒條帶放在SM緩沖液中透析，此時得到的透析液即為噬藻體純化液。表層水樣是指從藍(lán)藻爆發(fā)天然水域表層深度不超過0. 5米處采集的水樣。實施例2:一種從有藍(lán)藻爆發(fā)的水體中分離純化噬藻體的方法，其特征在于采用如下步驟A)采集藍(lán)藻爆發(fā)天然水域表層的水樣，于冰浴條件下保存，水樣先后通過孔徑為0. 80 μ m, 0. 45 μ m，0. 22 μ m的微孔濾膜后，經(jīng)超濾系統(tǒng)濃縮成濃縮水樣，其濃縮倍數(shù)為 1000 倍；B)配制濃縮水樣與對數(shù)期的銅綠微囊藻液的混合液，在光照強度為20001UX，溫度為30°C，光暗周期為12h 1 條件下培養(yǎng)3天，得到銅綠微囊藻裂解液，當(dāng)顏色變?yōu)橥该鲿r，判定水樣中含有噬藻體；組成混合液的濃縮水樣與對數(shù)期的銅綠微囊藻液的體積比為 1 9 ；C)將上述銅綠微囊藻裂解液經(jīng)0. 22 μ m的微孔濾膜過濾，除去銅綠微囊藻裂解碎片，經(jīng)超濾系統(tǒng)濃縮后，用CsCl密度梯度離心純化噬藻體，吸取CsCl密度梯度中的病毒條帶放在SM緩沖液中透析，此時得到的透析液即為噬藻體純化液。表層水樣是指從藍(lán)藻爆發(fā)天然水域表層深度不超過0. 5米處采集的水樣。實施例3 一種從有藍(lán)藻爆發(fā)的水體中分離純化噬藻體的方法，其特征在于采用如下步驟A)采集藍(lán)藻爆發(fā)天然水域表層的水樣，于冰浴條件下保存，水樣先后通過孔徑為 0. 80 μ m, 0. 45 μ m，0. 22 μ m的微孔濾膜后，經(jīng)超濾系統(tǒng)濃縮成濃縮水樣，其濃縮倍數(shù)為600 倍；B)配制濃縮水樣與對數(shù)期的銅綠微囊藻液的混合液，在光照強度為20001UX，溫度為30°C，光暗周期為12h 1 條件下培養(yǎng)5天，得到銅綠微囊藻裂解液，當(dāng)顏色變?yōu)橥该鲿r，判定水樣中含有噬藻體；組成混合液的濃縮水樣與對數(shù)期的銅綠微囊藻液的體積比為 1 9 ；C)將上述銅綠微囊藻裂解液經(jīng)0. 22 μ m的微孔濾膜過濾，除去銅綠微囊藻裂解碎片，經(jīng)超濾系統(tǒng)濃縮后，用CsCl密度梯度離心純化噬藻體，吸取CsCl密度梯度中的病毒條帶放在SM緩沖液中透析，此時得到的透析液即為噬藻體純化液。
表層水樣是指從藍(lán)藻爆發(fā)天然水域表層深度不超過0. 5米處采集的水樣。
權(quán)利要求
1.一種從有藍(lán)藻爆發(fā)的水體中分離純化噬藻體的方法，其特征在于采用如下步驟A)采集藍(lán)藻爆發(fā)天然水域表層的水樣，于冰浴條件下保存，水樣依次通過孔徑為 0. 80 μ m, 0. 45 μ m，0. 22 μ m的微孔濾膜后，經(jīng)超濾系統(tǒng)濃縮成濃縮水樣，其濃縮倍數(shù)為 200 1000 倍；B)配制濃縮水樣與對數(shù)期的銅綠微囊藻液的混合液，在光照強度為20001UX，溫度為 30°C，光暗周期為12h 12h條件下培養(yǎng)3 7天，得到銅綠微囊藻裂解液，當(dāng)顏色變?yōu)橥该鲿r，判定水樣中含有噬藻體；組成混合液的濃縮水樣與對數(shù)期的銅綠微囊藻液的體積比為 1 9 ；C)將上述銅綠微囊藻裂解液經(jīng)0.22 μ m的微孔濾膜過濾，除去銅綠微囊藻裂解碎片， 經(jīng)超濾系統(tǒng)濃縮后，用CsCl密度梯度離心純化噬藻體，吸取CsCl密度梯度中的病毒條帶放在SM緩沖液中透析，此時得到的透析液即為噬藻體純化液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從有藍(lán)藻爆發(fā)的水體中分離純化噬藻體的方法，其特征在于表層水樣是指從藍(lán)藻爆發(fā)天然水域表層深度不超過0. 5米處采集的水樣。
全文摘要
一種從有藍(lán)藻爆發(fā)的水體中分離純化噬藻體的方法，其特征在于采用如下步驟A)采集藍(lán)藻爆發(fā)天然水域表層的水樣，水樣通過微孔濾膜后，經(jīng)超濾系統(tǒng)濃縮后成濃縮水樣；B)配制濃縮水樣與對數(shù)期的銅綠微囊藻液的混合液，培養(yǎng)后得到銅綠微囊藻裂解液，當(dāng)顏色變?yōu)橥该鲿r，判定水樣中含有噬藻體；C)將上述裂解液經(jīng)微孔濾膜過濾，除去銅綠微囊藻裂解碎片，經(jīng)超濾系統(tǒng)濃縮后，用CsCl密度梯度離心純化噬藻體，吸取CsCl密度梯度中的病毒條帶放在SM緩沖液中透析，得到的透析液為噬藻體純化液。同現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點是能成功地從有藍(lán)藻爆發(fā)水體中分離純化得到噬藻體；本發(fā)明使用的方法不會對環(huán)境造成污染。
文檔編號C12R1/92GK102174482SQ20111000718
公開日2011年9月7日 申請日期2011年1月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月13日
發(fā)明者劉露, 徐立紅, 武海濤, 郭宗樓, 黃樸 申請人:浙江大學(xué)