專利名稱：磷酸酶和張力蛋白同系物(pten)抑制劑組合物，用途以及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療與細胞毒性或刺激毒性應(yīng)激相關(guān)的不同適應(yīng)癥的治療法，它 們的用途以及方法。具體地是肽類以及它們的組合物，它們具有在其中使用的磷酸酶和張 力蛋白同系物(PTEN)抑制活性以及用于治療與細胞毒性或刺激毒性應(yīng)激相關(guān)適應(yīng)癥的方 法。
背景技術(shù)：
磷酸酶和張力蛋白同系物(PTEN)是據(jù)報道涉及多種癌類型進展的一種腫瘤抑制 因子(Li 等人 1997 ;Steck 等人 1997 ；Baker 2007)。PTEN 是磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/ AKT途徑的一種負調(diào)節(jié)物-失去PTEN導(dǎo)致PI3K/AKT信號級聯(lián)的活化并且導(dǎo)致增加的細胞 生長和增殖。PTEN還顯示具有與PI3K/AKT信號傳導(dǎo)不相關(guān)的其他功能-例如，在通過與著 絲粒物理地相互作用維持染色體穩(wěn)定性以及控制DNA修復(fù)方面(Shen等人2007)。PTEN已 經(jīng)隱含在多種非癌適應(yīng)癥中，例如中風，其中用siRNA下調(diào)PTEN已經(jīng)顯示在轉(zhuǎn)染的神經(jīng)元 中具有抗局部缺血神經(jīng)元損傷的神經(jīng)保護作用(Ning等人2004)。PTEN的定位和降解已經(jīng)顯示涉及翻譯后修飾，特別是泛素化作用(Trotman等人 2007 ；ffang等人2007 ；ffang等人2008)。PTEN主要定位到細胞質(zhì)中，但是已知一種獨特集 合的PTEN定位到細胞核中(綜述見(Lian和Di Cristofano 2005))。當PTEN不包含典型 的細胞核定位信號時，它的確包含兩個PEST結(jié)構(gòu)域，這些結(jié)構(gòu)域通常發(fā)現(xiàn)于靶向用于通過 泛素化作用降解的蛋白中。實際上，多泛素化作用已經(jīng)顯示主要靶向PTEN用于細胞降解 (Wang等人2007)，而單泛素化作用主要涉及PTEN核轉(zhuǎn)位(Trotman等人2007)。PTEN蛋白 序列中兩個特異性泛素化位點(K13和K289)已經(jīng)顯示直接涉及PTEN核轉(zhuǎn)位-這些位點之 一的單泛素化作用顯示足以用于核轉(zhuǎn)位。這兩個位點之一的突變顯著地抑制了 PTEN的核 轉(zhuǎn)位(Trotman 等人 2007 )。尚不清楚的是核轉(zhuǎn)位是否發(fā)生在中樞神經(jīng)細胞中，并且如果發(fā)生的話，用于PTEN 的這種核轉(zhuǎn)位的機理是否與至今已經(jīng)試驗過的其他細胞中的相同。發(fā)明概述本發(fā)明部分地基于這種出人意料的發(fā)現(xiàn)，即在神經(jīng)元細胞中PTEN的K13泛素化位 點的突變顯著地降低了 PTEN的核轉(zhuǎn)位，而在相同細胞中PTEN的K289泛素化位點的突變未 顯著地影響PTEN的核轉(zhuǎn)位。此外，出人意料的是被設(shè)計成干擾PTEN的K13泛素化位點處 泛素化作用的某些新型肽類1)在神經(jīng)元細胞培養(yǎng)物中阻斷了 NMDA-誘導(dǎo)的PTEN核轉(zhuǎn)位； 2)在神經(jīng)元培養(yǎng)物中阻斷了 NMDA誘導(dǎo)的刺激毒性神經(jīng)元損傷；3)在大鼠局部缺血模型中 體內(nèi)地阻斷了 PTEN核轉(zhuǎn)位；4)當中風后給藥時，在大鼠局部缺血模型中體內(nèi)地減少了中風 相關(guān)梗死區(qū)；5)當中風后給藥時，在大鼠局部缺血模型中體內(nèi)地改善了中風相關(guān)長期運動行為恢復(fù)；6)在ALS的轉(zhuǎn)基因動物模型中改善了行為結(jié)果；以及7)在大鼠體內(nèi)局部腦缺血 之后促進了腦內(nèi)地移植到梗死區(qū)中的iPS-NPC (干細胞)的存活；而當與設(shè)計成在PTEN的 K289位點處干擾泛素化作用的肽類比較時，不顯示這類特性。在本發(fā)明的某些方面中，提供了一種分離的多肽組合物，該多肽組合物具有基本 上類似于SEQ ID N0:1或SEQ ID N0:2或SEQ ID N0:5或SEQ ID NO:6的氨基酸組成。其 中基本上類似是指當比較等效區(qū)域時(即約14個氨基酸)，包括一種序列一致性程度。此 夕卜，基本上類似是指包括保守取代以及修飾的氨基酸，其條件是針對PTEN K-13在此說明的 PTEN抑制活性或其他活性得以維持。根據(jù)一個實施方案，提供了包括SEQ ID N0:1的一種分離的多肽或包括與SEQ ID NO: 1具有至少90% —致性的8-14個氨基酸序列的一種多肽，或包括與SEQ ID NO: 1的對應(yīng) 氨基酸具有至少90% —致性的8-14個氨基酸序列的一種多肽，其條件是SEQ ID N0:1的位 置8是賴氨酸(K)，并且其中該多肽具有磷酸酶和張力蛋白同系物(PTEN)抑制活性。分離 的多肽可以進一步包括結(jié)合到分離的多肽上的一個遞送和靶向(dat)部分。該dat部分可 以是選自下面的一項或多項配體類、受體類、蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域類(PTD)、或抗體類。該dat 部分可以是一種PTD。該分離的多肽可以包括選自SEQ ID NO:2, SEQ ID N0:5或SEQ ID N0:6的一種氨基酸序列。該dat部分可以是選自觸角足同源結(jié)構(gòu)域、白喉毒素易位結(jié)構(gòu) 域、炭疽毒素易位結(jié)構(gòu)域、假單胞菌外毒素a易位結(jié)構(gòu)域、皮抑菌肽s4、hsv_l vp22、pep_l、 tat蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域、聚-1-賴氨酸、以及聚-d-賴氨酸。該多肽可以包括SEQ ID N0:2。根據(jù)一個實施方案，提供了包括SEQ ID N0:1的一種分離的多肽或包括與SEQ ID NO: 1具有至少90% —致性的8-14個氨基酸序列的一種多肽，或包括與SEQ ID NO: 1的對應(yīng) 氨基酸具有至少90% —致性的8-14個氨基酸序列的一種多肽，其條件是SEQ ID N0:1的位 置8是賴氨酸(K)，并且其中該多肽保護細胞免受細胞毒性應(yīng)激或刺激毒性應(yīng)激。分離的多 肽可以進一步包括結(jié)合到分離的多肽上的一個遞送和靶向(dat)部分。該dat部分可以是 選自下面的一項或多項配體類、受體類、蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域類(PTD)、或抗體類。該dat部分 可以是一種PTD。該分離的多肽可以包括選自SEQ ID NO:2, SEQ ID N0:5或SEQ ID NO:6 的一種氨基酸序列。該dat部分可以是選自觸角足同源結(jié)構(gòu)域、白喉毒素易位結(jié)構(gòu)域、炭 疽毒素易位結(jié)構(gòu)域、假單胞菌外毒素a易位結(jié)構(gòu)域、皮抑菌肽s4、hsv_l vp22、pep_l、tat蛋 白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域、聚-1-賴氨酸、以及聚-d-賴氨酸。該多肽可以包括SEQ ID NO: 2。根據(jù)另一個實施方案，提供了一種分離的多核苷酸，該多核苷酸包括對在此所述 多肽進行編碼的一種核苷酸序列。該多核苷酸可以編碼包括SEQ ID NO: 1的一種分離的多 肽或包括與SEQ ID NO: 1具有至少90% —致性的8-14個氨基酸序列的一種多肽，或包括 與SEQ ID NO: 1的對應(yīng)氨基酸具有至少90% —致性的8-14個氨基酸序列的一種多肽，其條 件是SEQ ID NO: 1的位置8是賴氨酸(K)，并且其中該多肽具有磷酸酶和張力蛋白同系物 (PTEN)抑制活性。根據(jù)另一個實施方案，提供了一種組合物，該組合物包括在此所述的一種多肽和 一種載體。該多肽可以包括選自下面一項或多項的一種多肽SEQ ID NO: 1, SEQ ID N0:2、 SEQ ID N0:5、以及SEQ ID N0:6，或與其基本上類似的一種氨基酸組合物。該載體可以是選 自下組一種固相支撐體、一種穩(wěn)定劑、一種防腐劑、以及一種藥學(xué)上可接受的載體。根據(jù)另一個實施方案，提供了在此所述的一種分離的多肽，該多肽已經(jīng)被重組地生產(chǎn)并且從細胞中分離。根據(jù)另一個實施方案，提供了包含一種分離多核苷酸的載體，該多核苷酸包括對 在此所述多肽進行編碼的一種核苷酸序列。該多核苷酸可以編碼包括SEQ ID NO: 1的一種 分離的多肽或包括與SEQ ID NO: 1具有至少90% —致性的8-14個氨基酸序列的一種多肽， 或包括與SEQ ID NO: 1的對應(yīng)氨基酸具有至少90% —致性的8-14個氨基酸序列的一種多 肽，其條件是SEQ ID NO: 1的位置8是賴氨酸(K)，并且其中該多肽具有磷酸酶和張力蛋白 同系物(PTEN)抑制活性。根據(jù)另一個實施方案，提供了包括在此所述的一種多核苷酸或在此所述的一種載 體的一種細胞，其中該核苷酸可操作地連接到一個表達控制序列上。根據(jù)另一個實施方案，提供了保護細胞免受細胞毒性應(yīng)激或刺激毒性應(yīng)激的一種 方法，該方法包括將選自下面一項或多項的一種多肽遞送到細胞中SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID N0:5、以及 SEQ ID N0:6。根據(jù)另一個實施方案，提供了保護細胞免受細胞毒性應(yīng)激或刺激毒性應(yīng)激的一種 方法，該方法包括(a)將包括如權(quán)利要求13所述多核苷酸的載體遞送到細胞中；以及(b) 表達由該載體攜帶的序列。根據(jù)另一個實施方案，提供了表達一種多肽的方法，包括(a)提供對該多肽進行 編碼的一種表達載體，其中該多肽是選自下面一項或多項SEQ ID NO: 1,SEQ ID NO:2,SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6 ；(b)將該載體引入到細胞中；以及(c)在允許表達的條件下維持細 胞。將載體引入到細胞中可以體內(nèi)進行。將載體引入到細胞中可以離體進行。將載體引入 到細胞中可以體外進行。根據(jù)另一個實施方案，提供了用于治療與細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病的一種方法，包 括將一個生物學(xué)有效量的PTEN抑制劑施用到需要它的受試者體內(nèi)，該抑制劑包括SEQ ID NO: 1的一種分離的多肽，或包括與SEQ ID NO: 1具有至少90% —致性的14個氨基酸序列的 一種多肽或包括與SEQ ID NO: 1具有至少90% —致性的8-14個氨基酸序列的一種多肽，或 包括與SEQ ID NO: 1的相應(yīng)氨基酸具有至少90% —致性的8-14個氨基酸序列的一種多肽， 其條件是SEQ ID N0:1的位置8是賴氨酸(K)，并且其中該多肽具有磷酸酶以及張力蛋白 同系物(PTEN)抑制活性。該細胞毒性應(yīng)激可以是刺激毒性應(yīng)激。根據(jù)另一個實施方案，提供了用于在干細胞移植之后增強干細胞存活的一種方 法，包括將一個生物學(xué)有效量的下面各項施用到需要它的受試者體內(nèi)包括SEQ ID N0:1的 一種分離的多肽，或包括與SEQID NO: 1具有至少90% —致性的14個氨基酸序列的一種多 肽或包括與SEQ ID NO: 1具有至少90% —致性的8-14個氨基酸序列的一種多肽，或包括與 SEQ ID NO: 1的相應(yīng)氨基酸具有至少90% —致性的8-14個氨基酸序列的一種多肽，其條件 是SEQ ID NO: 1的位置8是賴氨酸(K)，并且其中該多肽具有磷酸酶以及張力蛋白同系物 (PTEN)抑制活性。根據(jù)另一個實施方案，提供了用于治療與細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病一種藥用組合 物，該組合物包括在此所述的一種多肽以及一種藥學(xué)上可接受的載體。與細胞毒性應(yīng)激相 關(guān)的疾病可以是選自脊髓損傷、中風、創(chuàng)傷性腦損傷、多發(fā)性硬化癥、阿耳茨海默病、肌萎縮 性側(cè)索硬(ALS)、帕金森病、以及亨延頓病。該細胞毒性應(yīng)激可以是刺激毒性應(yīng)激。根據(jù)另一個實施方案，提供了在此所述的多肽用于制備治療細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病藥物的用途。該細胞毒性應(yīng)激可以是刺激毒性應(yīng)激。根據(jù)另一個實施方案，提供了在此所述的多肽用于治療細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病的 用途。根據(jù)另一個實施方案，提供了包括在此所述的一種多肽以及一種藥學(xué)上可接受的 載體的一種藥用組合物用于治療細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病的用途。該細胞毒性應(yīng)激可以是刺 激毒性應(yīng)激。根據(jù)另一個實施方案，提供了一個商業(yè)包，包括(a)所述的一種多肽；以及(b)它 的用于治療細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病的使用說明書。該細胞毒性應(yīng)激可以是刺激毒性應(yīng)激。根據(jù)另一個實施方案，提供了一個商業(yè)包，包括(a)在此所述的一種多肽以及一 種藥學(xué)上可接受的載體；以及(b)它的用于治療細胞毒性或刺激毒性應(yīng)激相關(guān)疾病的使用 說明書。根據(jù)另一個實施方案，提供了一個商業(yè)包，包括(a)在此所述的一種藥用組合物； 以及(b)它的用于治療細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病的使用說明書。該細胞毒性應(yīng)激可以是刺激 毒性應(yīng)激。在其他實施方案中，提供了用于防止、抑制或減少細胞中PTEN的泛素化作用的方 法，該方法包括使細胞與具有基本上類似于SEQ ID N0:1或SEQ ID N0:2*SEQ ID NO:5或 SEQ ID N0:6的氨基酸組成的多肽相接觸。在其他實施方案中，提供了治療患有或懷疑患 有神經(jīng)疾病或病癥的受試者的方法，該方法包括將一個治療有效量的能夠防止或抑制PTEN 的泛素化作用的分離的多肽施用到受試者體內(nèi)。該分離的多肽可以進一步包括一個蛋白轉(zhuǎn) 導(dǎo)結(jié)構(gòu)域或其他dat部分。該多肽可以具有基本上類似于SEQ ID NO: 1或SEQ ID N0:2或 SEQ ID N0:5或SEQ ID NO:6的氨基酸組成。該神經(jīng)疾病或病癥可以是與細胞毒性應(yīng)激或 細胞死亡相關(guān)聯(lián)的一種。該神經(jīng)疾病或病癥可以是選自下組的一種中風、腦損傷、神經(jīng)退 行性疾病、阿耳茨海默病、帕金森病、亨延頓病、以及ALS。生物學(xué)有效量可以是足以防止細胞死亡的一個數(shù)量。與細胞毒性或刺激毒性應(yīng)激 相關(guān)的疾病可以是選自脊髓損傷、中風、創(chuàng)傷性腦損傷、多發(fā)性硬化癥、阿耳茨海默病、肌萎 縮性側(cè)索硬(ALS)、帕金森病、以及亨延頓病。該細胞毒性或刺激毒性應(yīng)激相關(guān)疾病可以是 中風。該PTEN抑制劑可以是包括SEQ ID N0:1的一種多肽。分離的多肽可以進一步包括結(jié) 合到分離的多肽上的一個遞送和靶向(dat)部分。該dat部分可以是選自下面的一項或多 項配體類、受體類、蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域類(PTD)、或抗體類。該dat部分可以是一種PTD。該 PTEN抑制劑可以是一種多肽，包括選自SEQ ID NO:2,SEQ ID N0:5或SEQ ID NO:6的一種 氨基酸序列。該dat部分可以是選自觸角足同源結(jié)構(gòu)域、白喉毒素易位結(jié)構(gòu)域、炭疽毒素 易位結(jié)構(gòu)域、假單胞菌外毒素a易位結(jié)構(gòu)域、皮抑菌肽s4、hsv-1 vp22、pep_l、tat蛋白轉(zhuǎn) 導(dǎo)結(jié)構(gòu)域、聚-1-賴氨酸、以及聚_d-賴氨酸。治療的可以是一種動物。該動物可以是一種哺乳動物。該動物可以是人類。對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言，通過結(jié)合附圖查看下面本發(fā)明具體實施方案的說 明，本發(fā)明的其他方面和特征將變得清楚。附圖簡要說明

圖1顯示了 NMDAR活化增強了 PTEN核轉(zhuǎn)位。(a, b) LDH測定(西格瑪，#T0X7)和核 染色(赫斯特33342)兩者的結(jié)果。(c，d，e)內(nèi)源性PTEN的免疫染色以及亞細胞部分的蛋白質(zhì)印跡。針對對應(yīng)的亞細胞標志物蛋白通過探查每個部分來證實不同細胞部分的純度。 (f)核PIP3的水平，PIP3是核PTEN的底物。(g，h)PTEN的兩個突變體過表達于培養(yǎng)的海 馬神經(jīng)元中。一個是磷酸酶死亡突變體PTENC124S-GFP，并且另一個是野生型PTENGFP，這 時它們兩者都與核定位信號(NLS)融合。圖2顯示了通過干擾肽K13阻斷PTEN核轉(zhuǎn)位來拯救NMDAR介導(dǎo)的刺激毒性。(a, b) 對應(yīng)地構(gòu)建兩個PTEN突變體，PTENK13R-GFP和PTENK289R-GFP，并且轉(zhuǎn)染到培養(yǎng)的海馬神 經(jīng)元中。對每一項的核對細胞質(zhì)定位進行測量(c, d)。合成對應(yīng)地位于K13和K289位點側(cè) 翼的兩個肽，其中肽e-K289作為肽-K13的對照起作用。對每一項的核對細胞質(zhì)定位進行 測量，其中使用或不使用NMDA進行刺激。(e，f)具有或不具有NMDA刺激下來自用肽-K13 和肽-K289處理的培養(yǎng)神經(jīng)元的核部分的蛋白質(zhì)印跡結(jié)果。(g，h，i). NMDAR介導(dǎo)的細胞死 亡，通過(g，h)核染色(赫斯特33342)和(i)LDH測定(西格瑪，#T0X7)兩者來確定。圖3顯示了在腦缺血之后施用PTEN肽減少了梗死體積(MRI)并且提高了葡萄糖代 謝活性(FDG-PET )。為了選擇PTEN肽的最有效治療，用不同類型的肽治療(靜脈注射8. 4mg/ kg)將斯普拉_道來大鼠(約200g)分成5組，(1)局部缺血發(fā)生后2小時給予肽-K13，(2) 局部缺血發(fā)生之后6小時給予肽-K13，(3)局部缺血發(fā)生之后2小時給予肽-K13R，(4)局 部缺血發(fā)生之后2小時給予肽-K289，以及(5)局部缺血發(fā)生之后2小時給予鹽水。每組 n=10o (a)在腦缺血之后七天時，通過MRI對梗死體積進行評估。(b)在治療后一周通過 FDG-PET對皮層葡萄糖代謝進行檢驗。圖4顯示了在腦缺血之后靜脈內(nèi)注射PTEN肽改善了移動行為性能。在肽_K13_(2 小時和6小時)、肽-K13R- (2小時)、肽-K289- (2小時)以及鹽水-(2小時)治療的大 鼠(n=10/組)中使用身體不對稱性、自發(fā)活動測試以及握力測量對神經(jīng)缺陷恢復(fù)進行評 估。(a)與用肽-K13R、或肽-K289、或鹽水用處理的大鼠相比較，身體擺動試驗中的恢復(fù)。 (b, c, d)在接收肽-K13治療、肽-K289、或鹽水(2小時和6小時)的大鼠中在自發(fā)活動(包 括在垂直活動性、垂直時間、以及垂直移動數(shù)量)方面的測量。(e)針對肽-K13-治療組、 肽-K289組或鹽水組(2小時和6小時)局部缺血之前和局部缺血后28天前肢握力的比較。圖5顯示了在腦缺血之后施用PTEN肽減少了梗死體積。與鹽水對照相比較以3 種不同劑量(10mg/kg、1.0mg/kg、以及0. lmg/kg)用PTEN肽來治療斯普拉-道來大鼠(約 200g)，其中給藥是缺血發(fā)生之后2小時以及腦缺血之后7天，通過MRI對梗死體積進行評 估。圖6A和6B顯示了對應(yīng)地針對雌性和雄性小鼠將Tat_K13 PTEN肽施用到ALS的 轉(zhuǎn)基因小鼠模型中。圖7顯示在移植之后7天完成的凋亡標志物TUNEL的免疫熒光共區(qū)域化證明與鹽 處理的大鼠(iPS-NPC)相比較，Tat-K13治療的大鼠(iPS_NPCs+PTENK13)含有顯著地更少 的TUNEL陽性移植的iPS-NPSc。詳細說明中樞神經(jīng)系統(tǒng)中PTEN的核轉(zhuǎn)位機制以及這些過程干擾的說明可以提供用于治療 不同細胞毒性應(yīng)激或刺激毒性應(yīng)激相關(guān)疾病的策略。例如，中風、阿耳茨海默病、帕金森病、 亨延頓病、綠內(nèi)障、糖尿病性神經(jīng)病變、視黃醛退行性疾病、以及類似疾病。在此提供了多種 肽、多肽以及它們的組合物用于治療與神經(jīng)元休克、損傷和/或降解相關(guān)或與細胞毒性或刺激毒性相關(guān)的疾病。刺激毒性或細胞毒性可以涉及脊髓損傷、中風、創(chuàng)傷性腦損傷以及中 樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的神經(jīng)退行性疾病，例如多發(fā)性硬化癥、阿耳茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬 (ALS)、帕金森病、酒精中毒或戒酒以及亨延頓病。在神經(jīng)元周圍引起過多谷氨酸酯濃度的 其他常見病癥是低血糖以及療癇狀態(tài)。以合理地有效方式將生物活性分子例如在此所述的多肽類或肽類遞送到一個或 多個細胞中可能需要將多于剛好的裸肽“傾卸”到細胞上，或?qū)⒃撀汶氖┯玫讲∪嘶驕y試受 試者體內(nèi)。能夠以適當方式將生物活性分子遞送或靶向到細胞中從而提供一個有效量例如 一個藥理學(xué)有效量的試劑是本領(lǐng)域已知的，并且在例如Dietz等人2004.《分子細胞神經(jīng)科 學(xué)》(Mol Cell.Neurosci)27:85-131中進行說明。在此說明的肽或多肽可以結(jié)合到這樣的 一個或多個遞送和靶向(dat)部分上。如在此使用的術(shù)語遞送和靶向(dat)部分是指包括 幫助將在此所述的肽或多肽遞送或靶向到靶細胞或組織上或靶細胞中或靶組織的細胞中 的任何一個部分。此外，一個“dat部分”可以通過促進在此所述的肽類或多肽類的生物學(xué) 療效來“幫助”遞送或靶向?！甦at部分’的實例可以包括脂質(zhì)體類、脂類顆粒類、抗體類、受體配體類、蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo) 結(jié)構(gòu)域類(PTD)、以及可以結(jié)合到在此所述的PTEN抑制肽或多肽上的病毒載體類。例如，當希望遞送到腦時，可以將在此所述的分離的肽或多肽結(jié)合到結(jié)合腦內(nèi) 皮細胞受體的抗體上，導(dǎo)致了受體和結(jié)合的配體的細胞內(nèi)吞/轉(zhuǎn)胞吞作用(例如，美國 專利7，744，879)。這些肽或多肽可以結(jié)合到PDT上，例如HIV蛋白TAT (反式激活的 轉(zhuǎn)錄激活因子蛋白)，它允許這些肽通過內(nèi)吞作用橫過細胞膜。例如，SEQ ID NO:2 (即 KEIVSRNKRRYQED-YGRKKRRQRRR),它是結(jié)合到TAT蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域上的PTEN K13干擾肽(血 下劃線)。PTD的實例包括觸角足同源結(jié)構(gòu)域(PEREZ等人1992《細胞科學(xué)期刊》(J. Cell Sci) 102:717-722)、transportan (POOGA 等人 1998FASEB J 12:67-77)、白喉毒素的易位 結(jié)構(gòu)域(STENMARK 等人 1991《細胞生物學(xué)期刊》(J Cell Biol)113:1025-1032;WIEDL0CHA 等人1994《細胞》(Cell) 76:1039-1051)、炭疽毒素(BALLARD等人1998《傳染與免 疫》(Infect. Immun) 66:615-619;BLANKE等人1996《美國國家科學(xué)院院刊》(Proc Natl Acad Sci) 93:8437-8442)以及假單胞菌外毒素A (PRIOR等人1992《生物化學(xué)》 (Biochemistry) 31:3555-3559)、protegrin 衍生物類例如皮抑菌肽 S4 (HARIT0N-GAZAL 等人 2002《生物化學(xué)》(Biochemistry) 41:9208-9214)、HSV-I VP22 (DILBER 等人 1999 《基因治療》(Gene Ther. ) 6:12-21 )、PEP-1 (MORRIS等人2001《自然生物技術(shù)》(Nature Biotechnol)19:1173-1176)、堿性肽類例如聚-L和聚-D-賴氨酸(W0LFERT等人1996《基因 治療》(Gene Ther. )3:269-273; RYSER 等人 1980《癌》(Cancer)45:1207-1211; SHEN 等人 1978《美國國家科學(xué)院院刊》(Proc Natl Acad Sci)75:1872-1876),HSP70 (FUJIHARA 等 人 1999 EMBO J 18:411-419)以及 HIV-TAT (DEMARCHI 等人 1996《病毒學(xué)期刊》(J Virol) 70:4427-4437)。這類蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的其他實例和相關(guān)細節(jié)在DIETZ以上說明文獻以及 其他本文所引述的參考文獻中進行說明。此外，為了減少全身給藥期間肽的降解，可以使用 改性的PEG將這些肽結(jié)合到小膠束或脂質(zhì)體上，或經(jīng)受末端修飾，例如C-端酰胺化或N端 乙?；?。在此考慮了兩種不同類型的結(jié)合。一種類型的結(jié)合可以是通過非共價的或吸引力結(jié)合例如用抗原和抗體或生物素或抗生物素蛋白。非共價結(jié)合是物質(zhì)之間通過離子鍵或氫 鍵或范德華力，和/或它們的疏水性或親水性特性進行結(jié)合。可替代地，結(jié)合可以是通過共 價鍵、電子對鍵或連接。用于共價結(jié)合(或交聯(lián))的多種方法和試劑是已知的并且在適當修 飾下可以用于將希望的物質(zhì)結(jié)合到該肽或多肽上。在此所述的肽或多肽可以在氨基端或羧基端亦或兩者上進一步結(jié)合到保護基團 上。保護基團可以是選自下組，其組成為乙?；?、酰胺、3至20個碳的烷基、Fmoc、9-芴乙 酰基、1-芴羧基、9-芴羧基、9-芴酮-1-羧基、芐氧基羰基、咕噸基(Xan)、三苯甲基(Trt)、 4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mint)、4-甲氧基_2，3，6-三甲基-苯磺酰 基(Mtr)、均三甲苯-2-磺?；?Mts)、4, 4- 二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、 2，2，5，7，8-五甲基色滿-6-磺酰基(Pmc)、4-甲芐基(MeBzl)、4_甲氧芐基(MeOBzl)、芐 氧基(BzlO)、芐基(Bzl)、苯甲?；?Bz)、3-硝基-2-吡啶次磺酸基(Npys)、l- (4，4 二甲 基-2，6- 二氧亞環(huán)己基)乙基(Dde)、2，6- 二氯芐基(2，6-DiCl_Bzl)、2_氯芐基氧基羰基 (2-C1-Z)、2-溴芐氧基羰基(2-Br-Z)、芐氧基甲基(Bom)、叔-丁氧基羰基(Boc)、環(huán)己氧基 (cHxO)、叔-丁氧甲基(Bum)、叔-丁氧基(tBuO)、叔-丁基(tBu)、丙基、丁基、戍基、己基、 以及三氟乙酰基(TFA)。在此所述的這些肽或多肽可以進一步共價地結(jié)合到包括選自下組的脂肪酸的磷 脂上，其組成為丙?；?、丁?；⑽祯；⒓乎；?、庚?；?、辛酰基、壬?；?、癸酰基、i^一烷 ?；?、月桂酰基、十三烷?；⑷舛罐觉；?、十五烷?；⒆貦磅；?、十七烷酰基、硬脂酰基、 十九烷酰基、花生?；?、二 i^一烷?；⑸綅ｕ；?、二十三烷?；⒍耐轷；⑷舛罐鞠??；?9-順式)、反肉豆蘧烯?；?9-反式)、棕櫚油酰基(9-順式)、以及反棕櫚油酰基(9-反 式)。可替代地或另外地，在此所述的肽或多肽可以與一種藥學(xué)上可接受的載體(或賦 形劑)結(jié)合用來形成一種藥用組合物。這類“載體”可以進一步幫助將在此所述的多肽或 肽遞送和靶向到它們自身上亦或與一個dat部分結(jié)合。這些藥學(xué)上可接受的載體可以包括 一種或多種生理學(xué)可接受的化合物，它們起作用例如用來穩(wěn)定該組合物或用來增加或減少 所希望的一種或多種活性劑的吸收。這些生理學(xué)可接受的化合物可以包括例如碳水化合物 類，例如葡萄糖、蔗糖、或葡聚糖，抗氧化劑類，例如抗壞血酸或谷胱甘肽，螯合劑類，低分子 量蛋白類，保護和吸收增強劑類，例如脂類，減少活性劑的清除或水解的組合物類、或賦形 劑類、或其他穩(wěn)定劑類和/或緩沖劑類。因此，在此所述的這些dat部分和載體之間可能存 在一些重疊。然而，總體上，在此所述的載體旨在包括潛在實體的較大基團，它們可以與特 異性地遞送或靶向在此所述的肽或多肽具有較小的或沒有關(guān)系并且可以僅僅幫助穩(wěn)定在 此所述的肽或多肽。結(jié)合到在此所述肽或多肽上的官能團可以是一個生物學(xué)遞送和靶向部分。為了本 發(fā)明的目的，生物遞送和靶向部分是結(jié)合到特異性生物物質(zhì)或位點上的那些。作為該遞送 和靶向部分預(yù)期目標的生物物質(zhì)或位點可以幫助將在此所述的肽或多肽遞送到感興趣的 組織或細胞中。下面說明生物遞送和靶向分子的實例。配體可以通過選擇性地結(jié)合或?qū)α硪环N物質(zhì)具有特異性親和力作為遞送和靶向 部分起作用。配體可以通過特異性結(jié)合體或結(jié)合配偶體，或受體來識別和結(jié)合。除其他事 項之外，適合于靶向的配體實例可以是選自抗原類、半抗原類、生物素、生物素衍生物類、凝集素類、半乳糖胺和巖藻糖胺部分類、受體類、底物類、輔酶類以及輔因子類。另ー種類型的遞送和靶向部分是抗體，該抗體被定義為包括所有類別的抗體，單 克隆抗體、嵌合抗體、Fab部分、片段以及它們的衍生物。其他遞送和靶向部分可以包括酶 類，尤其是細胞表面酶類例如神經(jīng)氨酸苷酶類、血漿蛋白類、抗生物素蛋白類、鏈親和素類、 抑素類、有空腔有機化合物類、甲狀腺球蛋白、內(nèi)因、球蛋白類、螯合劑類、表面活性劑類、有 機金屬物質(zhì)類、葡萄球菌A蛋白、G蛋白、細胞色素類、凝集素類、某些樹脂類、以及有機共聚 物類。遞送和靶向部分還可以包括不同物質(zhì)例如任何蛋白類、蛋白片段類或多肽類，它 們對于被在此所述的肽或多肽(即包括SEQ ID NO:1的分離的多肽，其中該多肽具有磷酸酶 和張カ蛋白同系物(PTEN)抑制活性)靶向的任何細胞或組織的表面具有親和力。這些蛋白 可以通過本領(lǐng)域已知的重組DNA、遺傳和分子工程技術(shù)來生產(chǎn)。具體使用的可以是任何適當 的膜轉(zhuǎn)移蛋白以便有助于將在此所述的肽或多肽轉(zhuǎn)移到靶細胞內(nèi)部(例如，如在此所述的 PTD) o這類遞送和靶向部分可以有助于將在此所述的肽或多肽運送到細胞內(nèi)部。ー個這 樣的實例是美國專利號6，204，054，它說明了轉(zhuǎn)胞吞作用運載體以及能夠?qū)⑸砘钚詣┻\ 送橫過包含GP60受體的上皮、內(nèi)皮以及間皮的增強子的用途。該GP60受體已經(jīng)隱含在白 蛋白橫過細胞屏蔽的受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)胞吞作用中。美國專利號6，204，054開發(fā)了 GP60受體 介導(dǎo)的轉(zhuǎn)胞吞作用用于運送生理學(xué)活性剤，這些試劑在自然情況下不通過GP60系統(tǒng)穿過 上皮、內(nèi)皮以及間皮。在此說明的肽或多肽可以結(jié)合到白蛋白、白蛋白片段、抗GP60多克隆 和單克隆抗體、抗-GP60多克隆和單克隆抗體片段、以及GP60肽片段上用來促進轉(zhuǎn)運到細 胞中。結(jié)合到官能團上還可以改善在此所述的肽或多肽的其他性質(zhì)。這類官能團通常稱 為藥物載體并且可以改善所攜帶藥物的穩(wěn)定性、溶解度、或生物相容性。例如，可以通過將在此所述的肽或多肽結(jié)合到一種肽聚合物上來改善在此所述肽 或多肽的溶解度。將這些多肽(包含谷氨酸和天冬氨酸，或谷氨酸/丙氨酸，或谷氨酸/天冬 酰胺，或谷氨酸/谷氨酰胺，或谷氨酸/甘氨酸)用于結(jié)合到藥物上用于作為載體起作用來 改善這些藥物的溶解度和/或它們的體內(nèi)療效(美國專利號7，067，494)。類似地，美國專利 號5，087，616說明了一種或多種細胞毒性分子例如道諾霉素結(jié)合到其上的生物可降解的 聚合物載體的用途。該生物可降解的聚合物載體被限定為是例如聚谷氨酸的一種均聚物。 此外，美國專利號4，960，790共價地結(jié)合到谷氨酸上?？商娲?，美國專利號5，420，105說 明了能夠結(jié)合一種藥物或多種藥物的多肽載體的用途。根據(jù)在此所述的實施方案，該多肽 載體可以進ー步結(jié)合到一個靶向或遞送部分上，例如能夠結(jié)合到體內(nèi)的希望的靶位點上的 ー種抗體或配體(例如，美國專利號5，420，105)。類似地，美國專利號6，127，349說明了磷脂類用于改善肽溶解度以及用于改善它 們的生物利用率的用途。類似地，脂肪酸可以結(jié)合到在此所述的肽或多肽上用來穩(wěn)定這些 抗血管形成物質(zhì)的活性。美國專利號6，380，253說明了抗血管形成物質(zhì)(蛋白-杭血管形 成素以及內(nèi)皮生長抑素等)結(jié)合到順式不飽和脂肪酸或多不飽和脂肪酸上用來增強和穩(wěn)定 這些抗血管形成物質(zhì)的活性。其他適合的藥物載體包括聚乙ニ醇(PEG)和相關(guān)的聚合物衍生物。這類藥物-PEG結(jié)合物已經(jīng)被描述為在該結(jié)合物水解分解之前改善了循環(huán)時間(延長了血清半衰期)并且 隨后釋放結(jié)合的分子因而增加了藥物療效。美國專利號6，214，966說明了 PEG和相關(guān)聚合 物衍生物的用途，它們將該聚合物反應(yīng)端附近弱的，水解地不穩(wěn)定的連接結(jié)合到藥物上，例 如蛋白類、酶類以及小分子類。其他生理學(xué)可接受的化合物可以包括濕潤劑類、乳化劑類、分散劑類或?qū)τ诜乐?微生物生長或活動特別有用的防腐劑類。不同的防腐劑是熟知的并且包括例如苯酚和抗壞 血酸。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當理解的是藥學(xué)上可接受的一種或多種載體(包括生理學(xué)可 接受的化合物)的選擇依賴于例如一種或多種活性劑的給藥途徑以及依賴于該一種或多種 活性劑的具體物理化學(xué)性質(zhì)。賦形劑優(yōu)選地是滅菌的并且通常不含有不希望的物質(zhì)。這些組合物可以通過常規(guī) 的已知的滅菌和純化技術(shù)來滅菌和純化。在治療應(yīng)用中，在此所述的組合物能夠以足以治療或至少部分防止或延遲該疾病 和/或它的并發(fā)癥或足以幫助減輕與其相關(guān)癥狀的一個數(shù)量施用到患有細胞毒性或刺激 毒性應(yīng)激相關(guān)疾病一種或多種癥狀的受試者體內(nèi)。足以完成這一項的數(shù)量被定義為“治療 有效劑量”或“治療有效數(shù)量”。對這種用途有效的數(shù)量將依賴于疾病的嚴重性以及受試者 健康的總體狀況?？梢允┯眠@些組合物的單次或多次給藥，這取決于病人所需要和耐受的 劑量和頻率。組合物通?？梢蕴峁┳銐驍?shù)量的在此所述的活性肽或多肽用來在受試者體內(nèi) 進行有效地治療(例如，用來至少改善一種或多種癥狀)。在此所述的肽或多肽的濃度可以廣泛地改變，并且可以主要地根據(jù)所選擇的具體 給藥方式以及受試者的需要基于流體體積、粘度、體重等進行選擇。然而，典型地可以選擇 多種濃度用來提供范圍從約0. 1或lmg/kg/天至約50mg/kg/天以及有時更高的劑量。典型 的劑量范圍從約3mg/kg/天至約3. 5mg/kg/天，優(yōu)選從約3. 5mg/kg/天至約7. 2mg/kg/天， 更優(yōu)選從約7. 2mg/kg/天至約11. Omg/kg/天，并且最優(yōu)選從約11. Omg/kg/天至約15. Omg/ kg/天。在某些優(yōu)選實施方案中，劑量范圍從約10mg/kg/天至約50mg/kg/天。在某些實施 方案中，劑量可以范圍從約20mg至約50mg，每日口服給藥兩次。應(yīng)當理解的是可以改變這 類劑量以便優(yōu)化一個具體受試者或一組受試者中的治療方案。在某些實施方案中，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的標準方法在此所述的肽或多 肽可以口服地(例如，通過片劑)或作為注射劑給藥。在其他實施方案中，在此所述的肽或多 肽還可以使用常規(guī)的經(jīng)皮藥物遞送系統(tǒng)(即經(jīng)皮“貼劑”)通過皮膚來遞送，其中該一種或多 種活性劑典型地包含在一個分層結(jié)構(gòu)中，該分層結(jié)構(gòu)用作附接到皮膚上的肽或多肽遞送裝 置。在這類結(jié)構(gòu)中，該組合物典型地包含在一個層，或“容器”中，在一個上部背襯層下面。 應(yīng)當理解的是在本發(fā)明上下文中術(shù)語“容器”是指最終可用于遞送到皮膚表面上的一定數(shù) 量的“一種或多種活性成分”。因此，例如，“容器”可以包括該貼劑的背襯層上粘合劑中或 本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的多種不同基質(zhì)配制品的任何一項中的一種或多種活性成分。該 貼劑可以包括一個單個容器，或它可以包括多個容器。用于局部藥物遞送的其他配制品可以包括但不限于軟膏和乳膏。軟膏是半固體制 劑，它們典型地是基于凡士林或其他石油衍生物。包含選擇的活性劑的乳膏典型地是粘性 液體或半固體乳液，通常是水包油亦或油包水。乳膏基質(zhì)典型地是可水洗的，并且包含一種 油相、一種乳化劑以及一種水相。該油相(有時也稱為“內(nèi)”相)通常包括凡士林以及一種脂肪醇例如鯨蠟醇或硬脂醇；該水相通常(雖然不必要)在體積上超過油相，并且通常包含 一種濕潤劑。乳膏配制品中的乳化劑通常地是一種非離子、陰離子、陽離子或兩性表面活性 劑。如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當理解的，有待使用的特異性軟膏或乳膏基質(zhì)是可以提供最 佳藥物遞送的那種。對于其他載體或運載體，軟膏基質(zhì)可以是惰性的、穩(wěn)定的、無刺激性的 以及非致敏性的。在此所述的肽或多肽可以口服給藥?？梢酝ㄟ^使用保護性賦形劑來增強肽或多肽 的遞送。這典型地通過將該多肽與一種組合物復(fù)合從而給予它對于酸性和酶水解抗性亦或 通過將該多肽包裝到適當?shù)哪褪苄暂d體中例如脂質(zhì)體來實現(xiàn)。保護多肽用于口服遞送的手 段是本領(lǐng)域熟知的。通過使用持續(xù)釋放的蛋白“包裝”系統(tǒng)可以維持升高的血清半衰期。這類持續(xù)釋 放系統(tǒng)是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的。用于蛋白類和肽類的ProLease -生物可降解的微 球遞送系統(tǒng)是已知的(例如，Tracy (1998)《生物技術(shù)過程》(Biotechnol. Prog. ) 14:108 ； Johnson 等人(1996),《自然藥物》(Nature Med. ) 2:795 ;Herbert 等人(1998),《藥學(xué)研 究》(Pharmaceut. Res. ) 15，357),其中干粉包括在聚合物基質(zhì)中包含該蛋白的生物可降解 的聚合物微球，使用或不使用其他試劑可以將該基質(zhì)化合為一種干配制品。這種系統(tǒng)被特 異性地設(shè)計成實現(xiàn)高蛋白封裝效率同時維持蛋白完整性。得到的粉末包含該肽或多肽的固 體形式，該肽或多肽被均勻地并且剛性地分散到多孔聚合物顆粒中。該過程中最通常用的 聚合物，聚丙交酯乙交酯共聚物(PLG)是生物相容性的并且是生物可降解的。封裝可以在低溫下(例如，-40° C)實現(xiàn)。在封裝過程中，在缺少水下可以將該肽 或多肽維持在固態(tài)，因此將該肽或多肽的水誘導(dǎo)的構(gòu)象移動性降至最低，防止該肽或多肽 降解反應(yīng)(這些反應(yīng)包括水作為一種反應(yīng)物)，并且避免有機物-水界面(其中蛋白可能經(jīng)歷 變性)。在某些實施方案中，可以使這些肽或多肽結(jié)合一種或多種脂類來施用?？梢詫⑦@ 些脂類配制成一種賦形劑用來保護和/或增強該肽或多肽的轉(zhuǎn)運/吸收或可以將它們分開 給藥?？梢詫⑦@些脂類形成為封裝在此所述肽或多肽的脂質(zhì)體中，和/或可以使它 們與肽或多肽化合/混合和/或可以使它們共價地結(jié)合到在此所述的肽或多肽上。制 造脂質(zhì)體以及封裝試劑的方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的(參見，例如，Martin和 Papahadjopoulos (1982)《生物化學(xué)期刊》(J. Biol. Chem. ), 257:286-288 ；Papahadjopoulos 等人(1991)《美國國家科學(xué)院院刊》(Proc. Natl. Acad Sci. USA), 88:11460-11464 ；Huang 等人(1992)《癌癥研究》(Cancer Res. )，52:6774-6781 ;Lasic 等人(1992)《FEBS 通訊》 (FEBS Lett. )，312:255-258，等等)。上述配制品和給藥方法旨在是說明性的并且不是限制性的。應(yīng)當理解的是，使用 在此提供的傳授內(nèi)容，可以容易地設(shè)計其他適當?shù)呐渲莆锖徒o藥方法?？梢詫⒘硗獾乃幚韺W(xué)活性試劑連同主要活性劑(例如在此所述的肽或多肽)一起 遞送?？梢詫⒃撾幕蚨嚯慕Y(jié)合到另一種藥物活性劑上用來通過遞送具有類似或互補活性 的一種第二化合物來增強在靶細胞或組織上的療效。在一個實施方案中，這類試劑包括但 不限于降低中風或局部缺血損傷和/或它們的并發(fā)癥風險的試劑。這類試劑包括但不限 于抗凝劑類(例如，苊香豆醇、殺鼠萘、雙香豆素、雙香豆乙酯、苯丙香豆素、芐丙酮香豆素、氯茚二酮、二苯茚酮、苯茚二酮、噻氯香豆素、貝米肝素、舍托肝素、達肝素、依諾肝素、那曲肝素、帕肝素、瑞肝素、亭扎肝素、磺達肝素、艾屈肝素、達那肝素、舒洛地特、硫酸皮膚素、阿哌沙班、貝曲西班、依度沙班、奧米沙班、利伐沙班、水蛭素、比伐盧定、來匹盧定、地西盧定、阿加曲班、達比加群、美拉加群、希美加群、REG1、去纖苷、雷馬曲班、抗凝血酶III、以及屈曲克凝α)、抗血小板藥物(例如，阿昔單抗、依替巴肽、替羅非班、氯吡格雷、普拉格雷、噻氯匹 P定、替卡格雷、貝拉普羅、前列腺環(huán)素、伊洛前列素、曲前列環(huán)素、乙酰水楊酸/阿司匹林、阿洛普令、卡巴匹林鈣、吲哚布芬、三氟柳、雙嘧啶氨醇、吡考他胺、特魯曲班、西洛他唑、雙嘧啶氨醇、三氟柳、氯克羅孟、地他唑)、以及溶栓和溶纖維蛋白藥物(例如，組織纖溶酶原激活劑(tPA)或重組組織纖溶酶原激活劑(rtPA)例如,阿替普酶、瑞替普酶、替奈普酶、尿激酶、尿激酶原、溶栓酶、阿尼普酶、孟替普酶、安克洛酶、纖溶酶、以及纖維蛋白酶)、等等。在此未直接定義的任何術(shù)語應(yīng)當被理解為具有與它們在本發(fā)明領(lǐng)域中通常所理解的相關(guān)聯(lián)的含義。如貫穿本說明書使用的，下面術(shù)語，除非另外說明，應(yīng)當理解為具有下面含義。如在此使用的，“肽”或“多肽”可以互換地使用，并且通常地是指包括通過肽鍵或修飾的肽鍵共價連接的至少兩個氨基酸殘基的一種化合物。然而，當具體地與短語“如在此所述”或“包括SEQ ID NO: I的分離的多肽”一起使用時，它是指包括通過SEQ ID NO: I (即KEIVSRNKRRYQED)表示的PTEN K13干擾肽的一種氨基酸序列，其中該多肽具有磷酸酶和張力蛋白同系物(PTEN)抑制活性。修飾的肽鍵可以包括例如肽等排體(修飾的肽鍵)，它們可以為該肽提供額外希望的特性，例如增加的半衰期。該肽可以包括至少兩個氨基酸。包括在此所述肽或多肽的氨基酸還可以通過自然過程例如翻譯后加工亦或通過本領(lǐng)域熟知的化學(xué)修飾技術(shù)進行修飾。修飾可以發(fā)生在肽中任何地方，包括肽主鏈，氨基酸側(cè)鏈以及氨基或羧基末端。應(yīng)當理解的是相同類型的修飾能夠以相同或不同程度存在于給定肽的幾個位點處。如在此使用的“載體”是指用于將外源性或內(nèi)源性多核苷酸引入到宿主細胞中的多核苷酸化合物。載體包括一種核苷酸序列，它可以編碼一種或多種多肽分子。處于天然狀態(tài)或已經(jīng)經(jīng)歷重組工程化的質(zhì)粒、黏粒、病毒以及噬菌體是常用載體的非限制性實例用來提供包括至少一種希望的分離的多核苷酸分子的重組載體。在肽或蛋白的情況下，或在根據(jù)編碼的肽或蛋白定義核酸的情況下，對應(yīng)包括與限定的肽或多肽或蛋白或其部分具有至少約80%—致性，更優(yōu)選至少約90%—致性，甚至更優(yōu)選約95%并且最優(yōu)選至少約98-99% —致性的一種肽。在此所述的實施方案包括一種分離的多肽，該多肽包括與SEQ ID NO: I至少90%一致性，其條件是SEQ ID NO: I的位置8處或等效位置處(相對于全長PTEN蛋白也稱為K13-參見SEQ ID N0:7)的賴氨酸(K)未被改變用來保留泛素化位點。如在此使用的術(shù)語“一致性”是指測量兩個肽之間或兩個核酸分子之間序列的一致性。可以通過比較每個序列中的一個位置來確定一致性，出于比較的目的該位置可以是一個線。如果兩個氨基酸或核酸序列享有至少約85%序列一致性，或至少約86%序列一致性,或至少約87%序列一致性，或至少約88%序列一致性，或至少約89%序列一致性，或至少約90%序列一致性，它們被認為是基本上相同的?？商娲?，如果兩個氨基酸或核酸序列享有至少約91%序列一致性，或至少約92%序列一致性，或至少約93%序列一致性，或至少約94%序列一致性，或至少約95%序列一致性，或至少約96%序列一致性，或至少約97%序列一致性，或至少約98%序列一致性，或至少約99%序列一致性，它們被認為是基本上相同的。還可以通過目前使用的BLAST算法來確定序列一致性，該算法最初在Altschul等人(1990)《分子生物學(xué)期刊》(J. Mol. Biol. ) 215:403-410中進行說明。該BLAST算法可以與公開的默認設(shè)置一起使用。當比較的序列中一個位置被相同堿基或氨基酸占據(jù)時，這些分子被認為在該位置具有共享的一致性。序列之間的一致性程度是這些序列共有的匹配位置數(shù)量以及這些 序列之間重疊程度的函數(shù)。此外，當考慮與SEQ ID NO: I的一致性程度時，預(yù)期的是等效的14個氨基酸(例如，在位置8處賴氨酸(K)之前相應(yīng)的7個氨基酸以及在位置8處賴氨酸(K)之后的6個氨基酸與SEQ ID NO: I相比較)。當確定與SEQ ID NO: I的一致性程度時，另外的序列(即除了相應(yīng)于SEQ ID NO: I的14個氨基酸的那些)未預(yù)期進行考慮。此外，包括SEQ ID NO: I或包括與SEQ ID NO: I具有至少90% —致性的14個氨基酸的序列的分離的多肽可以具有小于或等于59個氨基酸?？商娲?，該分離的多肽可以具有55個氨基酸，或該分離的多肽可以具有54個氨基酸，或該分離的多肽可以具有53個氨基酸，或該分離的多肽可以具有52個氨基酸，或該分離的多肽可以具有51個氨基酸，或該分離的多肽可以具有50個氨基酸，或該分離的多肽可以具有49個氨基酸，或該分離的多肽可以具有48個氨基酸，或該分離的多肽可以具有47個氨基酸，或該分離的多肽可以具有46個氨基酸，或該分離的多肽可以具有45個氨基酸，或該分離的多肽可以具有44個氨基酸，或該分離的多肽可以具有43個氨基酸，或該分離的多肽可以具有42個氨基酸，或該分離的多肽可以具有41個氨基酸，或該分離的多肽可以具有40個氨基酸，或該分離的多肽可以具有39個氨基酸，或該分離的多肽可以具有38個氨基酸，或該分離的多肽可以具有37個氨基酸，或該分離的多肽可以具有36個氨基酸，或該分離的多肽可以具有35個氨基酸，或該分離的多肽可以具有34個氨基酸，或該分離的多肽可以具有33個氨基酸，或該分離的多肽可以具有32個氨基酸，或該分離的多肽可以具有31個氨基酸，或該分離的多肽可以具有30個氨基酸，或該分離的多肽可以具有29個氨基酸，或該分離的多肽可以具有28個氨基酸，或該分離的多肽可以具有27個氨基酸，或該分離的多肽可以具有26個氨基酸，或該分離的多肽可以具有25個氨基酸，或該分離的多肽可以具有24個氨基酸，或該分離的多肽可以具有23個氨基酸，或該分離的多肽可以具有22個氨基酸，或該分離的多肽可以具有21個氨基酸，或該分離的多肽可以具有20個氨基酸，或該分離的多肽可以具有19個氨基酸，或該分離的多肽可以具有18個氨基酸，或該分離的多肽可以具有17個氨基酸，或該分離的多肽可以具有16個氨基酸，或該分離的多肽可以具有15個氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個氨基酸，或該分離的多肽可以具有13個氨基酸，或該分離的多肽可以具有12個氨基酸，或該分離的多肽可以具有11個氨基酸，或該分離的多肽可以具有10個氨基酸。可替代地，該分離的多肽可以具有10個至50個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有11個至50個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有12個至50個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有13個至50個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至50個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有13個至45個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有13個至40個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有13個至35個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有13個至30個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有13個至25個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有13個至20個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至50個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至35個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至30個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至29個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至28個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至27個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至26個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至25個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至24個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至23個之間的氨基酸，或該分離的多肽 可以具有14個至22個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至21個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至20個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至19個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至18個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至17個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至16個之間的氨基酸，或該分離的多肽可以具有14個至15個之間的氨基酸。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當理解的是在此所述的肽或多肽中單獨氨基酸的多個方面可以被替代?？梢酝ㄟ^使用BLASTP和TBLASTN程序(它們使用BLAST (基礎(chǔ)局部比對檢索工具)2. O算法)計算出氨基酸序列一致性。用于計算氨基酸序列相似性或一致性的技術(shù)是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的，并且BLAST算法的用途在ALTSCHUL等人1990，《分子生物學(xué)期刊》(J Mol. Biol. ) 215:403-410 以及 ALTSCHUL 等人(1997)，《核酸研究》(NucleicAcids Res. ) 25:3389-3402 中進行說明。此外，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當理解的是某些取代更可能導(dǎo)致保留活性。例如，可以將氨基酸描述為例如極性、非極性、酸性、堿性、芳香族或中性。極性氨基酸是在生物的或接近中性pH下可以通過氫鍵與水相互作用的氨基酸。氨基酸的極性是在生物的或接近中性pH下氫鍵合程度的指示物。極性氨基酸的實例包括絲氨酸、脯氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、賴氨酸、組氨酸、精氨酸、天冬氨酸、酪氨酸以及谷氨酸。非極性氨基酸的實例包括甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、以及色氨酸。酸性氨基酸在中性PH下具有凈負電荷。酸性氨基酸的實例包括天冬氨酸和谷氨酸。堿性氨基酸在中性PH下具有凈正電荷。堿性氨基酸的實例包括精氨酸、賴氨酸以及組氨酸。芳香族氨基酸通常是非極性的，并且可以參與疏水性相互作用。芳香族氨基酸的實例包括苯丙氨酸、酪氨酸以及色氨酸。酪氨酸還可以通過芳香族側(cè)鏈上的羥基參與氫鍵合。中性、月旨肪族氨基酸通常地是非極性的以及疏水性的。中性氨基酸的實例包括丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸以及甲硫氨酸?？梢酝ㄟ^多于ー種說明性種類對氨基酸進行說明。享有共同說明性種類的氨基酸可以在肽中彼此取代。用于說明這些肽或多肽的命名法可以遵循常規(guī)實踐其中氨基顯示在左側(cè)并且羧基在每個氨基酸殘基的右側(cè)。在表示選擇的本發(fā)明特定實施方案的序列中，除非另外說明，氨基和羧基末端基團(雖然未具體顯示)應(yīng)當理解為是處于在生理PH值下它們應(yīng)當采取的形式。根據(jù)表I，在氨基酸結(jié)構(gòu)式中，相應(yīng)于氨基酸俗名，每個殘基通?？梢酝ㄟ^ー個字母或三個字母標識來表示。表I通常在天然發(fā)生的肽中發(fā)現(xiàn)的20種標準L-氨基酸的命名法和縮寫。
權(quán)利要求
1.一種包括SEQ ID NO: I的分離的多肽，或一種包括與SEQ ID NO: I具有至少90% —致性的14個氨基酸序列的多肽，其條件是SEQ ID NO: I的位置8是賴氨酸(K)，并且其中該多肽具有磷酸酶 和張力蛋白同系物(PTEN)抑制活性。
2.如權(quán)利要求I所述的分離的多肽 ，其中該分離的多肽進一步包括結(jié)合到該分離多肽上的一種遞送和祀向(dat)部分。
3.如權(quán)利要求I或2所述的分離的多肽，其中該dat部分是選自下面一項或多項配體類、受體類、蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域類(PTD)、或抗體類。
4.如權(quán)利要求1、2、或3所述的分離的多肽，其中該dat部分是一個PTD。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的分離的多肽，其中該分離的多肽包括選自SEQIDNO:2, SEQ ID NO:5 或 SEQ ID NO:6 的一種氨基酸序列。
6.如權(quán)利要求2-5中任一項所述的分離的多肽，其中SEQID NO:5或SEQ ID NO:6的dat部分是選自觸角足同源結(jié)構(gòu)域、白喉毒素的易位結(jié)構(gòu)域、炭疽毒素的易位結(jié)構(gòu)域、假單胞菌外毒素a的易位結(jié)構(gòu)域、皮抑菌肽s4、hsv-1 vp22、pep_l、以及聚_1_賴氨酸、和聚_d-賴氨酸。
7.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的分離的多肽，其中該多肽包括SEQID NO:2。
8.一種分離的多肽，包括對如權(quán)利要求1-7中任一項所述的多肽進行編碼的一種核苷酸序列。
9.一種組合物，包括如權(quán)利要求1-7中任一項所述的一種多肽以及一種載體。
10.一種組合物，包括一種多肽，該多肽包括選自下面的一種氨基酸序列SEQ IDNO: I、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:5、以及 SEQ ID NO:6。
11.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中該載體是選自下組一種固相支撐物、一種穩(wěn)定齊U、一種防腐劑、以及一種藥學(xué)上可接受的載體。
12.如權(quán)利要求1-7中任一項所述的分離的多肽，該多肽已經(jīng)被重組地生產(chǎn)并且從細胞中分離。
13.—種載體,包括如權(quán)利要求8所述的分離的多核苷酸。
14.一種細胞，包括如權(quán)利要求13所述的載體。
15.一種細胞，包括如權(quán)利要求8所述的多核苷酸，其中該核苷酸可操作地連接到一種表達控制序列上。
16.一種保護細胞避免細胞毒性應(yīng)激的方法，該方法包括將選自下面的一項或多項的一種多肽遞送至細胞中SEQ ID NO: I、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:5、以及 SEQ ID NO:6。
17.一種保護細胞避免細胞毒性應(yīng)激的方法，該方法包括 (a)將包括如權(quán)利要求13所述多肽的一種載體遞送到細胞中；以及 (b)表達由該載體攜帶的序列。
18.—種表達一種多肽的方法,該方法包括 (a)提供對該多肽進行編碼的一種表達載體，其中該多肽是選自下面的一項或多項SEQ ID NO:I、SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:6 ； (b)將該載體引入到細胞中；以及 (C)在允許表達的條件下維持該細胞。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中將該載體引入到細胞中是體內(nèi)進行的。
20.如權(quán)利要求18所述的方法，其中將該載體引入到細胞中是離體進行的。
21.如權(quán)利要求18所述的方法，其中將該載體引入到細胞中是體外進行的。
22.—種用于治療細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病的方法，包括將一個生物學(xué)有效量的PTEN抑制劑施用到需要它的受試者體內(nèi)，該抑制劑包括SEQ ID NO: I的一種分離的多肽，或包括與SEQ ID NO: I具有至少90% —致性的14個氨基酸序列的一種多肽，其條件是SEQ ID NO: I的位置8是賴氨酸(K)。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述生物學(xué)有效量是足以防止細胞死亡的一個量值。
24.如權(quán)利要求22或23所述的方法，其中該細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病是選自脊髓損傷、中風、創(chuàng)傷性腦損傷、多發(fā)性硬化癥、阿耳茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病、以及亨廷頓病。
25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中該細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病是中風。
26.如權(quán)利要求22-25中任一項所述的方法，其中該PTEN抑制劑是包括SEQID NO: I的一種多肽。
27.如權(quán)利要求22-26中任一項所述的方法，其中該分離的多肽進一步包括結(jié)合到該分離的多肽上的一個遞送和靶向(dat)部分。
28.如權(quán)利要求27所述的方法，其中該dat部分是選自下面一項或多項配體類、受體類、蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域類(PTD)、或抗體類。
29.如權(quán)利要求27或28所述的方法，其中該dat部分是一個PTD。
30.如權(quán)利要求22-29中任一項所述的方法，其中該PTEN抑制劑是一種多肽，該多肽包括選自SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6的一種氨基酸序列。
31.如權(quán)利要求27-30中任一項所述的方法，其中該dat部分是選自觸角足同源結(jié)構(gòu)域、白喉毒素的易位結(jié)構(gòu)域、炭疽毒素的易位結(jié)構(gòu)域、假單胞菌外毒素a的易位結(jié)構(gòu)域、皮抑菌肽s4、hsv-1 vp22、p印-I、以及聚-I-賴氨酸、和聚-d-賴氨酸。
32.一種用于在干細胞移植之后增強干細胞存活的方法，包括將一個生物學(xué)有效量的下面各項施用到需要它的受試者體內(nèi)包括SEQ ID NO: I的一種分離的多肽，或包括與SEQID NO: I具有至少90% —致性的14個氨基酸序列的一種多肽，其條件是SEQ ID NO: I的位置8是賴氨酸(K)。
33.一種用于治療細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病的藥用組合物，包括如權(quán)利要求1-6所述的一種多肽以及一種藥學(xué)上可接受的載體。
34.如權(quán)利要求33所述的藥用組合物，其中該細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病是選自脊髓損傷、中風、創(chuàng)傷性腦損傷、多發(fā)性硬化癥、阿耳茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病、以及亨廷頓病。
35.如權(quán)利要求1-6所述的多肽用于制備治療細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病藥物的用途。
36.如權(quán)利要求1-6所述的多肽用于治療細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病的用途。
37.包括如權(quán)利要求1-6所述的一種多肽以及一種藥學(xué)上可接受的載體的一種藥用組合物用于治療細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病的用途。
38.一種商用包，包括(a)如權(quán)利要求1-6所述的一種多肽；以及(b)它的用于治療細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病的使用說明書。
39.一種商用包,包括(a)如權(quán)利要求1-6所述的一種多肽和一種藥學(xué)上可接受的載體；以及(b)它的用于治療細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病的使用說明書。
40.一種商用包，包括(a)如權(quán)利要求33或34所述的一種藥用組合物；以及(b)它的用于治療細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病的使用說明書。
41.如權(quán)利要求35、36、或37所述的用途，其中該細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病是選自脊髓損傷、中風、創(chuàng)傷性腦損傷、多發(fā)性硬化癥、阿耳茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病、以及亨廷頓病。
42.如權(quán)利要求41所述的用途，其中該細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病是中風。
全文摘要
在此披露了具有磷酸酶和張力蛋白同系物(PTEN)抑制活性的分離的多肽，用于表達它們的載體和細胞以及它們用于治療細胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病的方法，例如脊髓損傷、中風、創(chuàng)傷性腦損傷、多發(fā)性硬化癥、阿耳茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病、以及亨廷頓病。
文檔編號C12N15/55GK102666845SQ201080052662
公開日2012年9月12日 申請日期2010年10月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月16日
發(fā)明者張舒, 昌基茲·塔基比格洛, 王玉田 申請人:不列顛哥倫比亞大學(xué)